高效液相色谱法测定单糖组成
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薄层色谱和高效液相色谱用于矮地茶多糖的单糖组成分析目的分析矮地茶多糖中的单糖组成及摩尔比值。
方法采用硫酸水解多糖,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生化高效液相色谱法和薄层色谱法同时分析矮地茶多糖的单糖组成和摩尔比,Agilent TC-C18色谱柱,流动相:乙腈-pH 为7.0的磷酸缓冲液(20∶80,0.1%),检测波长:250 nm,流速:1 mL/min;柱温:25℃。
结果薄层色谱法和高效液相色谱法结果皆表明矮地茶多糖由葡萄糖(Glu)和半乳糖(Gal)组成,高效液相色谱法显示矮地茶多糖中Glu和Gal 的摩尔比值约为1∶2.36。
结论薄层色谱法可用于矮地茶多糖的单糖组成的快速鉴别,方法快速、准确;高效液相色谱法可用于矮地茶多糖中单糖组成的鉴别和摩尔比值测量,方法简单、灵敏、分离效率高。
[Abstract] Objective To analyze the monosaccharide composition and the molar ratio of Ardisia japonica Polysaccharide (AJP). Methods Sulfuric acid was used to hydrolyze AJP. Pre-column 1-Phenyl-3-methyl-5-pyrazalone (PMP)derivation HPLC and TLC method were developed to determine the monosaccharide compositions and the molar ratio of AJP. The mobile phase was acetonitrile-pH 7.0 phosphate buffer (20∶80,0.1%)with Agilent TC-C18 column. The detection wavelength was 250 nm,the flow rate was 1 mL/min,and the column temperature was 25 ℃. Results The results of TLC and HPLC analysis showed that AJP were consisted of glucose (Glu)and galactose (Gal). Meanwhile,HPLC analysis showed that the molar ratio of AJP was 1∶2.36. Conclusion TLC which is fast and accurate,can be used for the rapid identification the monosaccharide composition in AJP. HPLC which is simple,sensitive and high separation efficiency,can be used for the quantitative analysis of the monosaccharide composition in AJP.[Key words] Ardisia Japonica;Polysaccharide;HPLC;TLC;Monosaccharide Composition矮地茶是紫金牛科植物Ardisia japonica(Thumb.)Blume的干燥全草,收錄于《中国药典》2015年版[1],具有止咳平喘、清利湿热、活血化瘀的功效。
柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成马定远 陈 君 李 萍3胡卓逸(中国药科大学生药药用植物教研室,南京210038)(中国药科大学生化研究室,南京210009)摘 要 报道了多糖中单糖组成的柱前衍生化高效液相色谱测定方法。
采用反向高效液相色谱250nm 紫外检测和使用梯度洗脱,6种还原单糖的12苯基232甲基252吡唑啉酮衍生实现了良好的分离并具有良好的峰形。
对单糖组成的定量测定进行了方法学考察,建立了单糖组成分析的数据分析方法,并用所建立方法对一个多糖中的单糖组成进行了分析,获得良好的重复性。
关键词 单糖,多糖,衍生化,高效液相色谱 2001207204收稿;2002201209接受1 引 言单糖的组成分析是糖分析中的一项重要内容。
已有的糖组成分析方法以气相色谱法和高效液相色谱法为主。
由于单糖分子的多样性,关于糖的分析方法仍在不断发展。
12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP )衍生化方法自运用以来,得到不断完善1~3。
Strydom 运用此法对中性、酸性和碱性醛糖进行了分析,可以使15种单糖得到很好的分离2。
本文首先建立了6种常见单糖(包括一种酸性糖)的分离模式,通过内标法对3种中性单糖的定量进行了方法学考察,并应用所建立的方法对多糖中的单糖进行了组成分析,为此法的更好运用提供了依据。
2 实验部分2.1 仪器与试剂HP1100型高效液相色谱系统,包括G 1312A 二元泵,G 1315A DAD 检测器,HP ChemStation 色谱工作站(Hewlett 2Packard )。
衍生化试剂12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP ,上海化学试剂采购供应站试剂厂),甲醇重结晶两次。
色谱用乙睛(T edia )、三氟乙酸(CP 级,上海化学试剂公司)。
单糖对照品:葡萄糖(G lc ,上海化学试剂公司)、甘露糖(Man ,Sigma 公司)、半乳糖(G al ,Sigma 公司)、鼠李糖(Rham 公司)、葡萄糖醛酸(G lcUA )和木糖(Xyl )(上海化学试剂二厂产品)。
柱前衍生化高效液相色谱法分析9种多糖中的单糖组成王媛媛;张晖;杨俊松;宗智慧【摘要】Objective To establish a precolumnderivatization procedure with 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone ( PMP )-high performance liquid chromatography ( HPLC ) method for the determination of the monosaccharide composition of nine polysaccharides.Methods The nine polysaccharides were hydrolyzed, derivatized by PMP and analyzed by HPLC with the Inertsil ODS-SP C18 column(260mm ×4.6mm,5μm).The mobile phase was the 20%triethylamine-buffer solution withKH2PO4(pH=6.9),and the flow rate was 1.0 ml/min.The UV absorbance was detected at a wavelength of 254 nm,and the injection volume was 10μl with the column temperature 30℃.Results The method was successful in the separation of the mixture monosac-charide standards.The calibration line of each monosaccharide had a good relationship.And the precision, stability and reproducibility were also good.The nine polysaccharides were composed of different monosac-charide and the contents had some difference.Conclusion The method was accurate and stable for the deter-mination of the monosaccharide composition and content of nine polysaccharides.%目的:建立1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮( PMP)柱前衍生化-高效液相色谱法( HPLC)对甘草多糖等9种多糖的单糖组成成分进行分析。
枸杞多糖组成及含量测定方法的改进1. 方法原理该研究旨在改进枸杞多糖组成及含量的测定方法。
将枸杞多糖进行水解衍生化处理,然后利用气相色谱法(GC)和高效液相色谱法(HPLC)测定单糖组成。
通过分析单糖组成结果,可以判断枸杞多糖的真伪。
在此基础上,根据各单糖组成物质的量比,配制单糖混合溶液,并使用苯酚硫酸比色法绘制标准曲线,从而建立枸杞多糖含量的测定方法。
通过该方法测定的枸杞多糖含量为30,而仅以葡萄糖作为标准溶液,使用硫酸苯酚法绘制标准曲线时,枸杞多糖含量仅为14。
这种改进的方法可以更准确地测定枸杞多糖的含量,并区分真伪枸杞多糖。
2. 实验材料和仪器枸杞样本:选用宁夏枸杞(Lycium barbarum L.)为实验材料,购买自当地市场,经鉴定为优质品种。
试剂:包括但不限于葡萄糖、硫酸、苯酚、盐酸、乙醇等,均为分析纯。
高效液相色谱仪(HPLC):配备示差折光检测器,用于枸杞多糖的定性和定量分析。
多糖纯化:通过Sevage法去除蛋白质,然后用透析法去除小分子杂质。
多糖含量测定:采用改进的苯酚硫酸法,通过紫外可见分光光度计测定多糖含量。
这个段落详细列出了实验所需的材料和仪器,并简要介绍了实验方法,为后续实验结果的准确性和可靠性提供了基础。
3. 实验步骤本实验选用宁夏枸杞(Lycium barbarum L.)为原料。
将枸杞样品在40下烘干至恒重,粉碎后过80目筛。
准确称取0g枸杞粉末,置于圆底烧瓶中。
采用改进的超声波辅助水提法提取枸杞多糖。
将枸杞粉末加入100mL去离子水中,在功率为200W、频率为40kHz的超声波辅助下提取30分钟。
提取完成后,离心(4000 rpm, 10 min)取上清液,残渣重复提取两次,合并上清液。
在上清液中加入Sevage试剂(三氯甲烷正丁醇 51,vv),剧烈振荡后静置分层,重复此步骤至无蛋白层出现,收集上清液。
将上清液减压浓缩至原体积的15,加入4倍体积的无水乙醇,置于4冰箱中醇沉过夜。
PMP柱前衍生化HPLC法测定地参多糖的单糖组成一、本文概述Overview of this article本文旨在介绍一种采用PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)柱前衍生化结合高效液相色谱法(HPLC)测定地参多糖中单糖组成的方法。
地参作为一种具有丰富营养价值和药用价值的植物,其多糖成分具有显著的生物活性,如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用。
因此,对地参多糖中单糖组成的准确分析对于揭示其生物活性机制、优化提取工艺以及质量控制具有重要意义。
This article aims to introduce a method for determining the monosaccharide composition in ginseng polysaccharides using PMP (1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone) pre column derivatization combined with high-performance liquid chromatography (HPLC). As a plant with rich nutritional and medicinal value, the polysaccharide components of ground ginseng have significant biological activities, such as antioxidant, anti-inflammatory, and anti-tumor effects. Therefore, accurate analysis of monosaccharide composition inginseng polysaccharides is of great significance for revealing their biological activity mechanisms, optimizing extraction processes, and quality control.PMP柱前衍生化是一种常用的单糖衍生化方法,通过与单糖上的羟基反应,将单糖转化为具有紫外吸收特性的衍生物,从而便于HPLC 检测。
高效液相色谱法测定糖苷类表面活性剂产品中糖类物质的含量张军;杨秀全;周媛;孙永强;李运玲【摘要】建立了同时测定糖苷类表面活性剂产品中单糖和多糖含量的高效液相色谱法.采用Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱(4.6 mm×100 mm,3.5μm)分离,甲醇-水梯度洗脱,流速1.0 mL/min,蒸发光散射检测器检测.用葡萄糖和麦芽三糖为对照品,外标两点法同时测定糖苷产品中单糖和多糖的含量.结果表明,单糖和多糖的检出限分别约为1.5和2.0μg/L,回收率分别为100.4%和99.1%.与既有方法相比,此方法可以同时分析产品中残留原料糖和副产物多糖的含量,且在分析非还原性单糖方面具有独特优势.%A HPLC method for simultaneous determination of contents of monose and polysaccharides in glucoside-based surfactant products was established. The method adopts evaporative light-scattering detector and Zorbax Eclipse Plus C18 column (4. 6 mm × 100 mm,3. 5μm)with methanol and water as the mobile phase at a rate of 1. 0 mL/min. The contents of saccharides were calculated by external standard two-point method using glucose and maltotriose as control samples. Results show that the detection limit of monose and polysaccharides is 1. 5 and 2.0 μg/L respectively while the recovery is 100. 4% and 99. 1% res pectively. As comparing with the conventional methods,this method displays unique superiority in determination of non -reducing monose and the residual glucose from raw material for preparation of glucoside-based surfactants as well as the by-products polysaccharides can be determined simultaneously.【期刊名称】《日用化学工业》【年(卷),期】2017(047)004【总页数】5页(P232-236)【关键词】糖基表面活性剂;单糖;多糖;高效液相色谱法【作者】张军;杨秀全;周媛;孙永强;李运玲【作者单位】中国日用化学工业研究院,山西太原 030001;中国日用化学工业研究院,山西太原 030001;中国日用化学工业研究院,山西太原 030001;中国日用化学工业研究院,山西太原 030001;中国日用化学工业研究院,山西太原 030001【正文语种】中文【中图分类】TQ423.2糖苷类表面活性剂以其安全绿色、生物相容性好的特性为人们所熟知,这类产品以葡萄糖作为亲水基团,主要生产原料都来自于可再生资源,是真正源自天然的绿色安全的新型表面活性剂品种,主要用于餐具洗涤剂、洗手液等密切接触人体的日化产品中,同时也是婴幼儿洗浴产品的首选原料之一,是21世纪以来真正称得上“世界级”的表面活性剂品种。