单克隆抗体技术及其应用
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第四军医
大学学报 !
年第
期#
体温!∃
!℃
发育正
常营养中等心
肺未见
异
常上腹部饱满未见肠型
及蠕动波,全
腹
无压
痛剑突下
可们及!%&∋%
()∗“
大之
包
块质软光滑无压
痛活
动度
小肝
脾
未打+及
腹
水征阴
性肠
鸣音正
常
实验
室
检查,
血红蛋白!#
克红细
胞(
万
白
细胞(−∋∋
中性∃
肠淋
巴./
肠
血沉−
∗∗0
小时12
断层
扫描3图
4
中上
腹
部有一巨
大囊性包
块&5
&∋%
孔∗
大小
胃窦
和横结肠受压
向后上
移位十二指肠
水
平部受压
小肠
被包
块推移向两
侧和下
方移
位包块与肝
脾肾无
关入
院后诊
断,
肠系
膜囊肿于
&
年(
月&
日行剖腹探查
术术
中切开
腹膜即见
囊肿壁
与腹膜有膜状
粘连
囊肿与大网
膜连
续来源于大网
膜左
侧与
脾服下
极有致
密粘连右侧壁
与肝
脏右叶脏面
粘连
小肠推至左下后
方且与囊壁
粘连
分
离粘连随同大网
膜完整切
除囊肿放出
液体&∋∋
∗6
呈草黄色
囊腔
内有类脂肪
样组织
术后∃
天折
线伤口甲级愈
合∋
天出
院病理
诊断大网
膜结核性囊肿3图
&
!4
图&
滋天嘿》攀戴炭低倍镜显示部
分囊壁和囊腔
图
箭头所示为囊肿图!
高倍镜3∋5(−4
显示
囊臂的
郎罕氏细胞
单克隆抗体
技术及其应用
微生物
学教研
室江美先
杂交
瘤3工!
7.8
〔9:;飞<4合成单克隆抗
体3=:;:)6:;<6<;>8
7:?8
),
一≅Α7.
8?
:∗<
一
=ΒΧ7
4
是近
年来生物
医学
中一项重大突
破它和遗
传工程一
样被认为是具
有巨大生
命力和
发展
前途的
新技
术
单克隆抗体技
术是由
英国剑
桥大
学分子
生
物学研究室Δ:≅6Β.Ε
和=86/>)8;1
于
∃−
年发明的他们
在34∋年代发展起来的细
胞杂交
技术的
基础上
成功地把两
种细
胞融
合在一起一
种是
已
适应
体外培养的
小鼠骨
髓瘤细
胞和
一种经
绵羊红细胞免疫的
小鼠
脾
细
胞融合形成
杂交细
胞发现这种
融合的
杂交细
胞系
兼有两
个亲本细胞的
特征即既
有骨
髓瘤细胞无限生长的能
力又
有浆细
胞
合成
单一
抗体的能
力Φ“
。’
因此
这种
免疫
细
胞通
过克隆化
成为单
克隆系3单
一纯
化
的无
性繁
殖细
胞系4
就能
产生
大量
单一的
高纯
度抗体这种抗体就
叫做单克隆抗
体如果把杂交细胞再
种入
动物体内
可形
成杂交细胞
瘤该动物的腹水及血
清中
就含有大量
单克隆抗体把
这种
杂交细
胞在
体外培养培养液中也
有单克隆
抗体产生
可供实验研
究和临
床应用
最近
在探索用
于
融合的人骨
髓瘤方面
己获得成功3,
》为
单克隆抗
体直接用于
人类疾病的诊防
治以
及发病和免
疫机
制的研
究特别是人
类恶性
肿瘤的免
疫诊
断和免疫
治疗开辟了更为广
阂的前
景
一
单克隆抗
体技术的建立‘
从
细胞杂交融合3图!4
和
单克
隆抗体
实验流程
示意图3图(
4可
以
看出主
要关
键的
步骤是,
细
胞杂交
瘤融
合技术组织
培养技术的
基础 !检
测
筛选鉴
定技
术
免疫学检测技
术
建立本项技
术需要∀#。
孵箱
可调
节∀#
。
加
入量温
度及湿度
倒
置显
微镜
液氮罐及超
净过滤空
气工
作台等
主
要建备
外还需要一
般组织
培养与免疫学
检测的设
备条件即可开展
本项实验工作
一 细
胞杂交融
合
从细胞
融合开始直至
获得杂交
瘤细胞
系
产生一
定量的
单克
隆抗体要经过几个
月的一
系列
实验步骤既
要作艰
苦细致的
大量的
耐心工
作又要
采用正
确的
技术方法
当然也存在一
定的机遇下面
就细胞
融合的主要环节介绍如下
%
免渡动
物的选择
最好选择
与亲本
骨胸
瘤细
胞同一品系
常用的是∋(
)∋+∀
小
鼠和),−
大鼠实验证明
免疫
动物品系和骨
髓瘤细胞系种系越远
融合的
杂交瘤细
胞系
越不
稳定一
般采用雌性小鼠以.
一枪周
龄为宜
/
杭原
的选择抗原应注
意其纯
度
因为
有些显
性抗原”
只要极
微量
便能
激发
强烈的免疫应答0
而混杂的
抗原可
减低或干
扰
其免
疫应答所
激发产生的
特异
性抗体在
筛选和
检定时也可影响
检测和
增加工
作量
但应用抗原的纯
度也不是绝对的当应用不
易纯化的混
合抗原或进行
抗原分
析时需要
用混
杂抗原
制备
多种单克隆抗体进行分
析
和纯化
抗原这也是本技术的独
特之处
1
兔疾方案
的选择这是
决定细
胞融
合杂交
结果的重要环
节之一
要求选
择免疫
∋
淋
巴细
胞正
在对数生长期可
溶性抗原
可
先由腹腔注入/
只%23
灭活的百
日咳杆
菌经
明矾沉淀的%2微克
抗原
蛋白 进行
初次
免
疫%
一1
周后再腹腔注入同
样混
有灭
活百
日咳杆菌的%2微
克抗原的水溶液
或4
一5
周后由
腹腔或
静脉注入
含有%22
一/2
微
克
抗原的生理盐水液
作为加强注
射若用
完全
佐剂对
抗原液
作乳化处理
再进行免疫
也可收到同样
满意的
效果如为细
胞抗原
则
可由腹腔注入/
又%23
细胞/
一1
周后重
复一次1
周
后再以相同剂量注入腹腔或
扑脉加强免疫一次
至于∋
淋
巴细
胞最易与骨
髓瘤细
胞融合
的时期目前还不清
楚一些观察
表明加
强注
射后第1
天取脾细胞
迸行融合最好一
次
免疫1
只小鼠取混
合脾细
胞融合或各
取
一个脾脏分别进行
三个独立的
融合
实验
以弥
补单用一个
脾脏时可能出现不足之处
如果主要免
疫应答出现
在淋
巴
结则可用淋
巴细
胞进行融
合此外
可在体外以
抗原刺
激己接触过
抗原的脾细
胞或将此脾细
胞同