单克隆抗体技术及其应用

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第四军医

大学学报󰀁󰀂 !

年第󰀁

期#󰀁

体温!∃

!℃

发育正

常营养中等心

肺未见

常上腹部饱满未见肠型

及蠕动波,全

无压

痛剑突下

可们及󰀁!%&∋%

()∗“

大之

块质软光滑无压

痛活

动度

小肝

未打+及

水征阴

性肠

鸣音正

实验

检查,

血红蛋白󰀁!#

克红细

胞(󰀂

细胞(−∋∋

中性∃󰀂

肠淋

巴./

血沉−

∗∗0

小时12

断层

扫描3图󰀁

4

中上

部有一巨

大囊性包

块󰀁&5

&∋%

孔∗

大小

胃窦

和横结肠受压

向后上

移位十二指肠

平部受压

小肠

被包

块推移向两

侧和下

方移

位包块与肝

脾肾无

关入

院后诊

断,

肠系

膜囊肿于󰀁󰀂

&

年(

月&󰀂

日行剖腹探查

术术

中切开

腹膜即见

囊肿壁

与腹膜有膜状

粘连

囊肿与大网

膜连

续来源于大网

膜左

侧与

脾服下

极有致

密粘连右侧壁

与肝

脏右叶脏面

粘连

小肠推至左下后

方且与囊壁

粘连

离粘连随同大网

膜完整切

除囊肿放出

液体󰀁&∋∋

∗6

呈草黄色

囊腔

内有类脂肪

样组织

术后∃

天折

线伤口甲级愈

合󰀁∋

天出

院病理

诊断大网

膜结核性囊肿3图

&

!4

图&

滋天嘿》攀戴炭低倍镜显示部

分囊壁和囊腔

图󰀁

箭头所示为囊肿图!

高倍镜3󰀁∋5(−4

显示

囊臂的

郎罕氏细胞

单克隆抗体

技术及其应用

微生物

学教研

室江美先

杂交

瘤3工󰀁!

7.8

〔9:;飞<4合成单克隆抗

体3=:;:)6:;<6<;>8

7:?8

),

一≅Α7.

8?

:∗<

=ΒΧ7

4

是近

年来生物

医学

中一项重大突

破它和遗

传工程一

样被认为是具

有巨大生

命力和

发展

前途的

新技

单克隆抗体技

术是由

英国剑

桥大

学分子

物学研究室Δ:≅6Β.Ε

和=86/>)8;1

󰀁󰀂

∃−

年发明的他们

在34∋年代发展起来的细

胞杂交

技术的

基础上

成功地把两

种细

胞融

合在一起一

种是

适应

体外培养的

小鼠骨

髓瘤细

胞和

一种经

绵羊红细胞免疫的

小鼠

胞融合形成

杂交细

胞发现这种

融合的

杂交细

胞系

兼有两

个亲本细胞的

特征即既

有骨

髓瘤细胞无限生长的能

力又

有浆细

合成

单一

抗体的能

力Φ“

。’

因此

这种

免疫

胞通

过克隆化

成为单

克隆系3单

一纯

的无

性繁

殖细

胞系4

就能

产生

大量

单一的

高纯

度抗体这种抗体就

叫做单克隆抗

体如果把杂交细胞再

种入

动物体内

可形

成杂交细胞

瘤该动物的腹水及血

清中

就含有大量

单克隆抗体把

这种

杂交细

胞在

体外培养培养液中也

有单克隆

抗体产生

可供实验研

究和临

床应用

最近

在探索用

融合的人骨

髓瘤方面

己获得成功3,

》为

单克隆抗

体直接用于

人类疾病的诊防

治以

及发病和免

疫机

制的研

究特别是人

类恶性

肿瘤的免

疫诊

断和免疫

治疗开辟了更为广

阂的前

单克隆抗

体技术的建立‘

细胞杂交融合3图!4

单克

隆抗体

实验流程

示意图3图(

4可

看出主

要关

键的

步骤是,󰀁

胞杂交

瘤融

合技术󰀂组织

培养技术的

基础 !检

筛选鉴

定技

󰀂

免疫学检测技

建立本项技

术需要∀#。

孵箱󰀂

可调

节∀#

入量温

度及湿度

置显

微镜

液氮罐及超

净过滤空

气工

作台等

要建备

外还需要一

般组织

培养与免疫学

检测的设

备条件即可开展

本项实验工作

󰀂

一 细

胞杂交融

从细胞

融合开始直至

获得杂交

瘤细胞

产生一

定量的

单克

隆抗体要经过几个

月的一

系列

实验步骤既

要作艰

苦细致的

大量的

耐心工

作又要

采用正

确的

技术方法

当然也存在一

定的机遇下面

就细胞

融合的主要环节介绍如下

%

免渡动

物的选择

最好选择

与亲本

骨胸

瘤细

胞同一品系

常用的是∋(

)∋+∀

鼠和),−

大鼠实验证明

免疫

动物品系和骨

髓瘤细胞系种系越远

融合的

杂交瘤细

胞系

越不

稳定一

般采用雌性小鼠以.

一枪周

龄为宜

/

杭原

的选择抗原应注

意其纯

因为

有些显

性抗原”

只要极

微量

便能

激发

强烈的免疫应答0

而混杂的

抗原可

减低或干

其免

疫应答所

激发产生的

特异

性抗体在

筛选和

检定时也可影响

检测和

增加工

作量

但应用抗原的纯

度也不是绝对的当应用不

易纯化的混

合抗原或进行

抗原分

析时需要

用混

杂抗原

制备

多种单克隆抗体进行分

和纯化

抗原这也是本技术的独

特之处

1

兔疾方案

的选择这是

决定细

胞融

合杂交

结果的重要环

节之一

要求选

择免疫

巴细

胞正

在对数生长期可

溶性抗原

先由腹腔注入/

只%23

灭活的百

日咳杆

菌经

明矾沉淀的%2微克

抗原󰀂

蛋白 进行

初次

疫%

一1

周后再腹腔注入同

样混

有灭

活百

日咳杆菌的%2微

克抗原的水溶液

或4

一5

周后由

腹腔或

静脉注入

含有%22

一/2

抗原的生理盐水液

作为加强注

射若用

完全

佐剂对

抗原液

作乳化处理

再进行免疫

也可收到同样

满意的

效果如为细

胞抗原

可由腹腔注入/

又%23

细胞/

一1

周后重

复一次1

后再以相同剂量注入腹腔或

扑脉加强免疫一次

至于∋

巴细

胞最易与骨

髓瘤细

胞融合

的时期目前还不清

楚一些观察

表明加

强注

射后第1

天取脾细胞

迸行融合最好一

免疫1

只小鼠取混

合脾细

胞融合或各

一个脾脏分别进行

三个独立的

融合

实验

以弥

补单用一个

脾脏时可能出现不足之处

如果主要免

疫应答出现

在淋

结则可用淋

巴细

胞进行融

合此外

可在体外以

抗原刺

激己接触过

抗原的脾细

胞或将此脾细

胞同