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动物细胞融合和单克隆抗体(公开课)PPT课件

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人教版教学课件2.2.2 动物细胞融合

人教版教学课件2.2.2 动物细胞融合

二、单克隆抗体的制备
自主阅读P52：传统的抗体的生产方法 及缺陷是什么？ 传统的抗体生产方法是向动物体内反 复注射某种抗原，使动物产生抗体，然 后从动物血清中分离所需要的抗体。这 种生产抗体的方法产量和纯度都很低， 而且制备的抗体特异性差
二、单克隆抗体的制备 B淋巴细胞的特点：
１．B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗 体。 ２．动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种 以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异 性免疫作用。 ３．每一个B淋巴细胞只能产生一种特异性 抗体。
点击此处添加标题文字
2.哺乳动物感染抗原后，其体内会形成相应的B淋巴细 胞，B淋巴细胞能分泌相应的抗体以凝聚或杀死这些抗 原，动物在免疫反应的过程中，每一种B淋巴细胞能分 泌一种特异性抗体，要想获得大量的特异性抗体，必须 使能分泌单一抗体的B淋巴细胞大量增殖。B淋巴细胞具 有产生单一抗体的能力，但不能在体外增殖；骨髓瘤细 胞是一种癌细胞，它能在体外培养条件下无限增殖，但 不能产生抗体。因此，把一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞 进行细胞融合，产生杂交瘤细胞，它会兼有两个亲本细 胞的特性----在体外条件下能不断增殖，同时能产生出 某种特异性抗体
专题 专题一：
2
2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体
2.2.2
动物细胞融合与单克隆抗体
学习目标： 1、说出动物细胞融合原理、过程 和方法 2、单克隆抗体的原理和应用 重点和难点： 1.动物细胞融合的过程 2.单克隆抗体的制备和应用
2.2.2
动物细胞融合与单克隆抗体
• 复习回顾： 1、植物体细胞杂交的过程是怎样的？ 2、动物细胞和植物细胞有何不同 ？
一、动物细胞融合
5、过程：
动物细胞A
有丝分裂 诱导， 多核体 融合 （膜融合、质融合） （核融合）

公开课动物细胞融合与单克隆抗体ppt课件

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目的获：得产生
相应抗体的B 细胞
（二选）：选 能产生所需专
一抗体的杂 交瘤细胞
体外培养 小鼠腹腔内培养
ppt课件.
√ BB 、B瘤 、瘤瘤
（B、瘤）
（一选）选 择性培养基：
只有杂交 瘤细胞才
能存活
14
2.2单克隆抗体的应用 特异性强
单克隆抗体最主要的优点：灵敏度高
并能大量制备
诊断试剂——最广泛应用
细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接
细胞融合，形成杂交细胞
（细胞膜具有一定的流动性）
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8
1.2动物细胞融合过程
为什么灭活的 病毒能作诱导剂？
灭活丧失感染性 保留融合活性
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9
1.3动物细胞融合技术的意义和应用
意义：
Hale Waihona Puke 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交 成为可能
应用： 制备单克隆抗体（最主要的应用）
但是体外
怎样大量
？ 获得单一 抗体
培养的细胞 不能无限增
殖
癌细胞
既能产生特异性抗体，
又pp能t课件大. 量增殖的细胞 12
你的设想
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖
单克隆 动物细胞培养技术 杂交瘤细胞
抗体
动物细胞融合技术
既能产生特异性抗体， 又能大量增殖的细胞
ppt课件.
13
细胞继承了_双__亲__细__胞__的__遗__传__物__质____ ，因此不仅能分泌 特异__性__抗__体_____ ，还有 大量增殖 本领。
（3）该方案的目的是__制__备__单__克__隆__抗__体___________。

动物细胞融合和单克隆抗体公开课ppt课件

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8
二：动物细胞融合的成功应用
思 考
——单克隆抗体的制备
• 人们获得抗体的传统方法是?
– 将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取抗体
• 这种方法的缺点是什么?
– 效率低，产量有限，纯度低，动物抗体注入人体可能 产生严重的过敏反应。
• 运用已学知识，设想怎样获得单一类型的抗体？
• 能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来
ppt课件.
7
Hale Waihona Puke 结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合
比较项目
植物体细胞杂交
动物细胞融合
原理 融合前处理 诱 导方法
细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性
细胞膜的流动性
用纤维素酶、 果胶酶去壁
用胰蛋白酶 使细胞分散
物理、化学方法
物理、化学、 生物方法
用
途
获得部分 或完整植株
主要用于制备 单克隆抗体
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2）、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质， 不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的 本领，因而可以获得大量单克隆抗体
3）、为何要进行两次筛选？
第1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选得 到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。
4）、如何进行第2次筛选？ 培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。
ppt课件.
病毒颗粒黏 附细胞表面 细胞膜被 病毒颗粒穿通 细胞膜连接
细胞融合、形成杂种细胞 5
3、动物细胞融合技术的应用
• 细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使
远缘杂交成为可能。
• 利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。
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人教版教学课件8.动物细胞融合与单克隆抗体

人教版教学课件8.动物细胞融合与单克隆抗体

4.为什么不用两个而要用多个细胞进行动物细胞间的 融合？ 就目前常用的细胞融合方法来看，不管是用物理的、 化学的方法，还是生物的方法，其融合率都不可能是 100%。仅用两个细胞融合，其效率太低，不一定能得到 融合细胞。更重要的是，即使两个细胞已发生融合，但 并不一定是研究者期望得到的细胞类型。目前动物细胞 融合技术最有价值的应用就是单克隆抗体的制备。我们 以制备单克隆抗体为例来说明这一问题。我们知道，体 内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上，但是每一 个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，如果仅取一个脾细 胞（含B淋巴细胞）和一个瘤细胞杂交，我们不能确定该 脾细胞分泌的抗体是否正是我们所需要的；若用大量的 脾细胞和瘤细胞进行融合，就可以从融合细胞中筛选出 能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。
5.如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？ 融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞 就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需 抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细 胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个 ，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的 抗体（常用酶联免疫吸附试验法），那些上清液可与特定 抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证 是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释， 一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单 克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。
知识闯关
1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融 合，得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量的 单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是 A A.经过免疫的B淋巴细胞 恭喜你，答 不要灰心， 不要灰心， B B.不经过免疫的T淋巴细胞 对了！再接 再来一次！ 再来一次！ 再厉！ C C.经过免疫的T淋巴细胞 D D.不经过免疫的B淋巴细胞

动物细胞融合技术与单克隆抗体(课件)高二生物(人教版2019选择性必修3)

动物细胞融合技术与单克隆抗体(课件)高二生物(人教版2019选择性必修3)
B
A. B. C. 和17 D.无法确定
都有。已知只有同时具有 酶和 酶的融合细胞才可在 培养液中长期存活与繁殖，从图示结果来看，可以确定人的 酶基因位于( )号染色体上。
[解析] 从培养结果可以看出，培养获得的细胞中均具有小鼠的全部染色体，但是只有含人的17号染色体的细胞存活下来，由此可知，人的 酶基因位于17号染色体上，B符合题意。
应用
培育植物新品种
主要用于制备单克隆抗体
意义
突破远缘杂交不亲和的障碍，打破了生殖隔离，扩展了杂交的亲本组合
相同点
原生质体融合的原理相同，原生质体融合的方法相似
续表
例1 [2022·连云港期中] 下图为动物细胞融合技术过程图，相关叙述<zzd>错误</zzd>的是( )。
B
A.图中 为灭活的病毒，此外还可用 融合法诱导动物细胞融合B.图中①过程发生了细胞膜的融合，体现了细胞膜的选择透过性C.图中②过程表示细胞核融合形成杂种细胞D.动物细胞融合技术可用于制备单克隆抗体
4.单克隆抗体的应用
（1）作为⑩__________，在多种疾病的诊断和病原体鉴定中发挥重要的作用。
（2）用于运载药物和⑪__________。
诊断试剂
治疗疾病
任务 了解动物细胞融合技术及其应用
活动1 比较植物体细胞杂交和动物细胞融合
比较项目
植物体细胞杂交
动物细胞融合
原理
细胞膜的流动性、植物细胞的全能性
[2022·岳阳监测] 2020年诺贝尔生理学或医学奖授予发现丙肝病毒的三位科学家。丙肝病毒引起的丙型肝炎可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝癌。为研制丙肝病毒的单克隆抗体，某研究者以小鼠甲为

动物细胞融合与单克隆抗体PPT

动物细胞融合与单克隆抗体PPT

跟踪训练
(2011年滦县高二检测)能使动物细胞融 )
合的特有的诱导因素是( A．离心
B．灭活的病毒
C．电激
答案：B
D．振动
单克隆抗体的制备 1．关键思路及操作依据 (1)关键思路
①克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。
②将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，获得杂交瘤细 胞。 (2)用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的原因
)
动物细胞工程 动物细胞培养和融合，单 克隆抗体的制备 胰蛋白酶处理，制作细胞 悬液 物理方法、化学方法、生 物方法 单克隆抗体的制备 动物血清不可缺少
A.1 C．3
B．2 D． 4
【尝试解答】
【解析】
B
选B。植物细胞工程常采用的技术手段
有植物组织培养和植物体细胞杂交。动物细胞工程
常采用的技术手段有动物细胞培养、细胞融合、单 克隆抗体的制备，还有胚胎移植、核移植等。动、
细胞。
远缘 杂交的不亲合性，成为研 4．意义：克服了______ 遗传 、_________ 细胞免疫 、肿瘤和生物_______ 新品种 培 究细胞_____
育的重要手段。
二、单克隆抗体
1．传统抗体的获得
抗原 ，使动 (1)方法：①向动物体内反复注射某种_____ 抗体 ；②从动物_____ 血清 中分离所需抗体。 物产生_____ 产量低 、纯度低、_______ 特异性 差。 (2)特点：_______
动物细胞融合 1．原理：膜的流动性。 2．诱导方法：物理法——离心、振动、电激；化 学法——聚乙二醇；生物方法——灭活的病毒。
3．动物细胞融合的过程
4．优点：动物细胞融合技术突破了有性杂交方法
的局限性，使远缘杂交成为可能。 特别提醒 灭活是指用物理或化学的手段使病毒或细菌失去感 染能力，但是并不破坏这些病原体的抗原结构。

细胞融合-与-单克隆抗体课件

第二十五页，共六十二页。
4.22 杂种 细胞 (zázhǒng)
在植物育种中的应用
杂种细胞是一条新的育种途径，
可以产生新经济性状的良种。 科学家已经在禾本科、茄科、豆
科、十字花科等植物中得到了杂 种再生植株。 一些近亲(jìnqīn)植物、有性不亲和 的组合，如马铃薯×番茄等都得 到了再生植株。
细胞融合-与-单克隆抗体
第十九页，共六十二页。
2）营养互补筛选系统：细胞在缺乏一种 或几种营养成分时，不能生长(shēngzhǎng)繁殖， 即营养缺陷型细胞。利用两种亲本细胞营 养互补作用原理可以筛选杂种细胞。
亲本A：色氨酸缺陷型
亲本B：苏氨酸缺陷型 杂种细胞可以在不含色氨酸和苏氨酸的培
细胞融合-与-单克隆抗体
第十页，共六十二页。
甜菜(tiáncài)原生质体电融合过程
1）在高频电流电场 下的相互接触(jiēchù)。 2）脉冲刺激后30s 3)50秒后 4）1.5分钟后 5）6分钟后 6）15分钟后，原生质
体融合完成。
细胞融合-与-单克隆抗体
第十一页，共六十二页。
注意事项
1）对介质要求高，一般用高纯度的蒸馏水 并选用(xuǎnyòng)适当的非电介质溶液，如甘露 醇等配制等渗性介质。
稳定区（C区）
细胞融合-与-单克隆抗体
第三十页，共六十二页。
人体内的五种 抗体 (wǔ zhǒnɡ)
细胞融合-与-单克隆抗体
第三十一页，共六十二页。
4.32单克隆抗体(kàngtǐ)的制备
单克隆抗体(monoclonal antibody，简称
McAb)：将能够产生抗体的B淋巴细胞和具 有无限增殖力的骨髓瘤细胞融合在一起， 形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能在体 外快速生长，又能持续分泌成分单一的 特异性抗体。这种单一类型的只针对(zhēnduì) 某一特定抗原决定簇的抗体分子，就是单 克隆抗体。

人教版教学课件动物细胞融合与单克隆抗体(共20张PPT)


培养液中或小鼠腹腔中培养 从培养液或小鼠腹水中提
如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？
融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的 细胞就是杂交瘤细胞。 但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞， 通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释， 用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个， 通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分 泌的抗体。那些上清液可与特定抗原结合的培养 孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单 个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一 般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为 单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。
产生相应的B淋巴细 效应B淋巴细胞 胞
融合
培养骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞
多种杂交细胞
（只考虑两两融合） 骨髓瘤细胞---骨髓瘤细 培养液中细胞有几 胞 种类型？融合细胞 在具有筛选作用的培养基上培养 几种类型？ B淋巴细胞--- B淋巴细胞
专一抗体检验阳性 B淋巴细胞---骨髓瘤细胞 克隆上述杂交细胞
注射到小鼠体内
设计方案：
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖
动物细胞融合技术 单克隆 动物细胞培养技术 杂交瘤细胞 抗体 既能产生特异性抗体， 又能大量繁殖的细胞
(1)、原理：杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能
迅速大量增殖，又能足够数量的单一抗体。
(2)、过程
1、单克隆抗体的制备过程
注射特定 抗原蛋白
5、动物细胞融合过程
不同DNA的两个细胞
灭活病毒诱导细胞融合
融合后的细胞 进行有丝分裂
6、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交 （种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 7、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物 新品种培育等的重要手段

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2、单克隆抗体的制备过程
杂交瘤细胞(多种)
克隆化培养
第二次筛选 抗体检测 (抗原-抗体杂交技术)
阳性细胞
能分泌所需抗体 的杂交瘤细胞
二 单克隆抗体及其应用
2、单克隆抗体的制备过程 能分泌所需抗体 的杂交瘤细胞
体内或体外培养
注射到小鼠腹腔
体外培养 单克隆抗体
二 单克隆抗体及其应用
筛选原理：
①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。 ②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但不能分裂增殖。 ③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但能不断分裂增殖。
张林琦教授团队
二 单克隆抗体及其应用
3、单克隆抗体的应用
3、运载药物 ADC通常由抗体、接头和药物（如细胞毒素）三部分组成。阅读教材50页
思考：ADC的抗体和药物各具有什么作用？ 抗体主要发挥靶向运输作用；药物发挥治疗效应，如杀伤靶细胞。
二 单克隆抗体及其应用
3、单克隆抗体的应用
对点训练
下列有关动物细胞融合与植物体细胞杂交比较的叙述，错误的是 （） A. 它们的原理都涉及细胞膜的流动性 B. 都可以用电融合法或PEG融合法诱导融合
克服远缘杂交不亲和障碍
物理方法、化学方法、灭活病毒 形成杂种细胞
二 单克隆抗体及其应用
抗体
1.定义：机体受抗原刺激后产生的，能与该抗原发 生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。
12）.抗每体个的B分淋布巴：细胞只分泌一种特异性的抗体
1）血清（主要） 22））体组内织产液生及的外特分异泌性液抗（体如种乳类汁多中达）百万种以上
二 单克隆抗体及其应用
2、单克隆抗体的制备过程 注射特定抗原
多种已免疫 B淋巴细胞

人教版高中生物学选择性必修3生物技术与工程精品课件 第2章 第2课时 动物细胞融合技术与单克隆抗体


解析 动物细胞培养中添加的有机碳源是葡萄糖,A项错误;动物细胞培养需 要在CO2培养箱中进行,以维持培养液pH的稳定,B项正确;贴附型细胞获得 悬液需用胰蛋白酶处理以获得单个细胞,C项正确;有限稀释和克隆化培养 可用于筛选出产生特定抗体的杂交瘤细胞,D项正确。
突破点 2单克隆抗体的应用 6.(2024福建莆田一中期中)抗体—药物偶联物(ADC)是将高特异性的单克 隆抗体和小分子细胞毒性药物,通过接头进行高活性结合而成,用以提高肿 瘤药物的靶向性,减少毒副作用。如图是ADC作用原理简图。下列有关 ADC的叙述,正确的是( A ) A.接头既要在内环境中保持稳定,又要 能在细胞内被断开 B.ADC中的单克隆抗体是杀伤肿瘤细胞的有效成分 C.ADC进入肿瘤细胞后会被溶酶体分解,从而丧失药物活性 D.ADC与肿瘤细胞识别后,被肿瘤细胞以主动运输的方式吸收进入细胞
学习目标
1.阐明动物细胞融合技术的概念,举例说出诱导动物细胞融合的方法。 2.建构单克隆抗体的制备流程。 3.说明单克隆抗体的特点及应用,认同单克隆抗体在临床上具有重要的应 用价值。
主题一 动物细胞融合技术
基础知识•落实
1.概念:使 两个或多个
动物细胞结合形成 一个细胞
的
技术。融合后形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞的 遗传信息 。
(3)解决方案 大量增殖
特定
(4)制备过程
B淋 巴细胞
杂 交细胞
杂交瘤
能分泌 所需抗体
3.单克隆抗体的优点 (1)能准确地识别 抗原 的细微差异。 (2)可以与特定抗原发生 特异性 结合。 (3)可以 大量 制备。 4.单克隆抗体的应用 (1)用作 诊断试剂 ,可定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病。 (2)运载药物,如抗体—药物偶联物(ADC)。 (3)用于治疗疾病。
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7
总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合
比较项目
植物体细胞杂交
动物细胞融合
原理 融合前处理 诱 导方法
细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性
细胞膜的流动性
用纤维素酶、 果胶酶去壁
用胰蛋白酶 使细胞分散
物理、化学方法
物理、化学、 生物方法
用
途
获得部分 或完整植株
-
主要用于制备 单克隆抗体
8
二：动物细胞融合的成功应用
-
10
经免疫的小鼠
提取
B淋巴细胞
小鼠骨髓瘤细胞
灭活的病毒等手段
杂交 细胞
用特定的选 第一次筛选
择性培养基
杂交瘤细胞 第二次筛选
能产生特定抗体、培养条件 下能无限增殖的杂交瘤细胞
注射到小鼠腹腔
体外培养
- 提取单克隆抗体
11
1. 动物特异性免疫
2. 分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细 胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn）
6.
选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔
内增殖。
1、单抗的制备过程要点：
-
12
问题强化：
1）、本过程利用了哪些原理？ 免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理
2）、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质， 不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的 本领，因而可以获得大量单克隆抗体
• 2、用于治疗疾病和运载药物：
• 主要用于癌症治疗。
• 生物导弹：抗癌细胞的单克隆抗体+放射性同位素+化学 药物或细胞毒素。（单克隆抗体：导向。准确找到癌细
胞位置，原位杀死癌ห้องสมุดไป่ตู้胞。）
-
14
下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤 风杆菌单克隆抗体的实验方案 A
1、该实验方案的目的是_制__备__单__克__隆_ 抗体 2、该方案能达到预期效果吗？为什么？
骨髓瘤细胞 B
杂交瘤细胞
3、A是从小鼠的脾脏中取得
C
__B_细__胞__,该细胞能够产生_抗__体___
4、图中B为_细__胞__融__合_过程，常用 足够数量的细胞群
_灭__活__病__毒__作为诱导剂，该细胞继
承__双__亲__细__胞___的遗传特性，既能 _分__泌__抗__体___,又能__无__限__增__殖___。
-
4
2、诱导融合的因素
• 生物法：灭活的病毒诱导融 合.(利用灭活仙台病毒是动物细
胞融合所特有的。 这是由于病毒 的磷脂外衣与动物细胞的膜十分 相似的缘故。病毒外壳上的某些 糖蛋白可能还有促进细胞融合的
功能。)
病毒颗粒黏 附细胞表面 细胞膜被 病毒颗粒穿通
• 化学法：聚乙二醇PEG诱导融 合.
细胞膜连接
3）、为何要进行两次筛选？
第1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选得 到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。
4）、如何进行第2次筛选？
培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。
-
13
2、单克隆抗体的优点：
特异性强，灵敏度高，可大量制备。 3、单克隆抗体的应用
• 1、作为诊断试剂：在临床生化诊断、病理组织定位、 体内肿瘤的定位等,与常规抗体相比,具有准确、高效、 简易、快速特点.
3. 细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG）
4. 第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞 （只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列： 如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。）
5. 第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ，每 孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并 进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂 交瘤细胞。
B淋巴细胞在体外不能无限- 增殖。
9
单克隆抗体的制备—极富创造性的方案
将能够产生特定抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖能 力的骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。杂交 瘤细胞既能在体外快速生长，又能持续分泌成分单一 的特异性抗体。这种单一类型的只针对某一特定抗原 决定簇的抗体分子，就是单克隆抗体。
• 米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝 尔奖。
思 考
——单克隆抗体的制备
• 人们获得抗体的传统方法是?
–将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取抗体
• 这种方法的缺点是什么?
–效率低，产量有限，纯度低，动物抗体注入人体可 能产生严重的过敏反应。
• 运用已学知识，设想怎样获得单一类型的抗体？
• 能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来 产生单一类型的抗体呢？
• 物理法：电激融合
-
细胞融合、形成杂种细胞5
3、动物细胞融合技术的应用
• 细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使 远缘杂交成为可能。
• 利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。
-
6
思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的 病毒需要灭活？不灭活行吗？
因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂 质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭 活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。
体外培养
注射到
5、C过程指细胞培养，该过程包括
小鼠腹腔
_原__代__培养和_传__代__培养两个阶段，其
中__5_0__代以内的的细胞属于- 细胞株。
15
-
1
一、动物细胞融合
1、定义：指用自然或人工方 法使两个或多个不同的细胞 融合成一个细胞的过程。
◆细胞杂交：不同基因型的细 胞之间的融合就是细胞杂交。
◆杂交细胞：融合后形成的具 有原来两个或多个细胞遗传 信息的单核细胞成为杂交细 胞。
-
2
细胞融合是正常的生命活动
受精作用
两个细胞正在融合
-
3
二.动物细胞融合