最新课件-单克隆抗体
- 格式：ppt
- 大小：1.75 MB
- 文档页数：70
下载文档原格式
合集下载
单克隆抗体PPT课件
单克隆抗体的应用领域
01
02
03
04
基础研究
用于研究生物分子结构和功能 ，探索生命现象的本质。
诊断
用于检测生物样本中的抗原、 抗体、激素等生物分子，用于
疾病的诊断和监测。
治疗
用于治疗肿瘤、自身免疫性疾 病、感染性疾病等，通过与靶 分子结合，发挥治疗作用。
免疫学检测
用于检测食品、环境、生物武 器等中的有害物质和病原微生
高特异性
总结词
单克隆抗体具有极高的特异性，能够精确地识别和结合特定的抗原，几乎不会 与其它物质发生交叉反应。
详细描述
单克隆抗体的特异性表现在它能够精确地识别和结合细胞、蛋白质、病毒等抗 原的特定表位，这种结合具有高度的选择性，避免了与其他物质的交叉反应， 提高了检测和治疗的准确性。
高灵敏度
总结词
单克隆抗体可以用于鉴别血型、 检测血红蛋白病和白细胞表面抗 原，有助于血液疾病的诊断和治 疗。
生物标记与示踪研究
1 2
细胞分型
利用单克隆抗体标记不同细胞表面抗原，对细胞 进行分型和鉴定，有助于研究细胞发育、分化及 功能。
示踪研究
将单克隆抗体与荧光、放射性同位素等标记物结 合，追踪生物体内的物质分布、代谢和排泄过程。
良好的重复性
总结词
单克隆抗体的生产和制备具有高度的一致性和重复性，保证了产品质量和实验结果的可靠性。
详细描述
通过采用适当的细胞培养技术，可以在实验室条件下实现单克隆抗体的规模化生产和制备。由于单克 隆抗体的克隆来源单一，其生产和制备过程具有高度的一致性和重复性，这使得单克隆抗体的质量稳 定可靠，实验结果的可重复性强。
提高单克隆抗体的生产效率与质量
优化细胞培养条件
《单克隆抗体技术》课件
单克隆抗体的制备与纯化
单克隆抗体是通过杂交瘤细胞在体外培养或注射到动物体内进行体内培养产生的，经过一系列的分离 和纯化过程，最终获得高纯度、高特异性的单克隆抗体。
制备过程中通常采用各种层析技术、沉淀技术等对抗体进行分离和纯化，以确保获得高质量的单克隆 抗体。
单克隆抗体的鉴定与质量控制
鉴定是通过对单克隆抗体的免疫学特 性、生物学活性和分子结构等方面进 行检测和评估，以确定其特异性和质 量。
总结实验过程和结果，分析存在的问题和改 进方向，为后续实验提供参考和依据。
感谢您的观看
THANKS
生物标记物
用于研究细胞生物学、分子生物学 等领域。
03
02
生物药物
用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病等 。
免疫分析
用于检测生物样品中的抗原、抗体 等。
04
02 单克隆抗体技术的原理
杂交瘤细胞系的建立
杂交瘤细胞系的建立是单克隆抗体技 术的核心步骤之一，通过将免疫脾细 胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细 胞。
通过抗原-抗体反应检测杂交瘤细胞产生的 抗体特异性。
克隆筛选
通过选择性培养基筛选出能够产生所需抗体 的杂交瘤细胞克隆。
细胞培养与抗体纯化
将筛选出的杂交瘤细胞进行培养，并采用蛋 白质纯化技术获得单克隆抗体。
实验结果分析与总结
结果分析
对实验结果进行统计分析，评估杂交瘤细胞 的抗体产生能力和特异性。
总结
这些杂交瘤细胞既具有脾细胞无限增 殖的能力，又具有产生特异性抗体的 能力，从而为单克隆抗体的制备提供 了稳定的细胞源。
杂交瘤细胞的筛选与克隆化
在筛选过程中，通过抗原-抗体反应检 测杂交瘤细胞产生的抗体，筛选出能 够产生所需特异性抗体的杂交瘤细胞 。
《单克隆抗体》课件
05
单克隆抗体的未来发展
新型单克隆抗体的研发
总结词
随着生物技术的不断发展，新型单克 隆抗体的研发将更加活跃，以满足更 多治疗需求。
详细描述
新型单克隆抗体将通过基因工程技术 、蛋白质工程技术等手段进行设计和 优化，以改善其疗效、降低副作用和 降低生产成本。
单克隆抗体与其他技术的结合应用
总结词
单克隆抗体将与其他治疗手段和技术相结合，以实现更有效的疾病治疗和诊断 。
03
类型
IgG、IgM、IgA等。
单克隆抗体的发现和发展历程
1901年
Ehrlich提出“侧链学说”，认为抗体是 由细胞产生的化学物质。
1986年
FDA批准第一个单克隆抗体药物上市， 用于治疗非霍奇金淋巴瘤。
1975年
Kohler和Milstein首次成功制备出单克隆 抗体。
2014年
FDA批准第一个全人源单克隆抗体药物 上市，用于治疗类风湿性关节炎。
生物治疗
总结词
单克隆抗体在生物治疗中具有显著疗效 ，可用于治疗癌症、自身免疫病等多种 疾病。
VS
详细描述
通过靶向肿瘤细胞表面抗原或免疫系统中 的特定分子，单克隆抗体能够发挥抗癌作 用。例如，针对某些癌症的单克隆抗体药 物能够抑制肿瘤生长、扩散和转移，提高 患者生存率和生活质量。此外，在自身免 疫病治疗中，单克隆抗体也具有良好疗效 ，能够调节免疫系统，缓解单克隆抗体的概述 • 单克隆抗体的制备 • 单克隆抗体的特性 • 单克隆抗体的应用实例 • 单克隆抗体的未来发展
01
单克隆抗体的概述
单克隆抗体的定义
01
单克隆抗体
由单一B细胞克隆产生的具有 高度特异性识别抗原表位的抗
(培训课件)单克隆抗体PPT幻灯片
• 种类：氢氧化铝佐剂、短小棒状杆菌、脂多 糖、细胞因子、明矾等，其中弗氏不完全佐 剂（羊毛脂：石蜡油=1:5）和弗氏完全佐剂 （弗氏不完全佐剂＋灭活的分枝结核杆菌） 是目前动物实验中最常用佐剂。
4
• 抗体：机体免疫细胞被激活后，由分化成熟的 B淋巴细胞-浆细胞合成、分泌的免疫球蛋白。
5
6
脾脏与B淋巴细胞(B lymphocytes)
淀）。
18
（2）HAT培养基的筛选
融合后细胞混合液
HAT培养基
2 weeks later
HT培养基
1 week later
正常培养基
19
HAT培养基筛选
H, 次黄嘌呤; A, 氨基喋呤; T, 胸腺嘧啶
(Hypoxanthine guznine phosphoribosyl transferase)
骨髓瘤细胞 (myeloma cells)的选择原则
①克隆效应高，能在体外连续生长，倍增期短于24小时； ②缺乏HGPRT酶和TK酶； ③本身不合成Ig，且不抑制杂交瘤细胞中的Ig合成基因。 ④与小鼠淋巴细胞融合率相当高；
脾细胞的选择
由于目前常用的骨髓瘤细胞普遍来自Bal b/c小鼠，因此应尽 量选择同源的Bal b/c健康小鼠（8-12周）作为免疫动物。
死亡
20
3、阳性杂交瘤细胞的筛选（抗体的检测）
• 检测时间：杂交瘤细胞布满孔底1／10时开 始检测特异性抗体，进行筛选。
• 检测方法：最常用酶联免疫吸附法(ELISA) 间接免疫荧光法(IFA) 放射免疫法(RIA) 双相扩散法
3）离心，弃上清，加15mL HAT培养基，混匀，转入96孔 板（预先有HAT培养基培养的饲养细胞），每孔100 ul。
4
• 抗体：机体免疫细胞被激活后，由分化成熟的 B淋巴细胞-浆细胞合成、分泌的免疫球蛋白。
5
6
脾脏与B淋巴细胞(B lymphocytes)
淀）。
18
（2）HAT培养基的筛选
融合后细胞混合液
HAT培养基
2 weeks later
HT培养基
1 week later
正常培养基
19
HAT培养基筛选
H, 次黄嘌呤; A, 氨基喋呤; T, 胸腺嘧啶
(Hypoxanthine guznine phosphoribosyl transferase)
骨髓瘤细胞 (myeloma cells)的选择原则
①克隆效应高，能在体外连续生长，倍增期短于24小时； ②缺乏HGPRT酶和TK酶； ③本身不合成Ig，且不抑制杂交瘤细胞中的Ig合成基因。 ④与小鼠淋巴细胞融合率相当高；
脾细胞的选择
由于目前常用的骨髓瘤细胞普遍来自Bal b/c小鼠，因此应尽 量选择同源的Bal b/c健康小鼠（8-12周）作为免疫动物。
死亡
20
3、阳性杂交瘤细胞的筛选（抗体的检测）
• 检测时间：杂交瘤细胞布满孔底1／10时开 始检测特异性抗体，进行筛选。
• 检测方法：最常用酶联免疫吸附法(ELISA) 间接免疫荧光法(IFA) 放射免疫法(RIA) 双相扩散法
3）离心，弃上清，加15mL HAT培养基，混匀，转入96孔 板（预先有HAT培养基培养的饲养细胞），每孔100 ul。
单克隆抗体技术医学PPT
可溶性抗原：多糖、药物、激素、肽类等分子量小于 5000 Da 物质。
注意：可溶性抗原需与BSA、OA等载体交联后成颗粒性抗 原才能刺激动物产生可应用的高效价的抗体。
2、免疫动物
• （1）动物选择：一般采用与骨髓瘤细胞供体来源同一品 系的动物进行免疫（如：小鼠）。由于免疫动物品系与所 采用的骨髓瘤细胞差异较远，产生的杂交瘤细胞稳定性越 差。
（2）融合技术 一种是加入融合剂后直接离心使两种细胞紧密接触
（R<3000r/min），另一种是加入融合剂后轻轻搅动融 合。
• （3）提高融合频率的可能途径
•
融合过程中由于细胞特性、操作过程、PEG毒性等
多种因素都可能影响融合而减少融合频率。
•
方法：对亲本细胞预处理，改进融合技术，加入饲养
层细胞促进杂交瘤生长。
（1）体外制备
• 体外使用旋转培养瓶大量培养杂交瘤细胞，从上清 中获取单克隆抗体。但此方法产量低，一般培养液含量为 10～60μg／ ml。如果大量生产，费用较高。
• 随着大规模的生产，需大量血清而使成本增加，同 时血清会影响单抗的纯度，大量血清的存在干扰抗体活性。 1978年iscove用补充大豆类脂，牛血清蛋白，转铁蛋白等 添加成分的无血清培养基培养杂交瘤细胞成功。
• HAT选择性培养基： 培养基中加次黄嘌呤HyPoxanthine H，氨基喋呤
Aminoopterin A及胸腺嘧啶核苷Thymidine T。
单克隆抗体制备原理
• HAT培养基的选择原理：
• （1）氨基蝶呤(A)是叶酸拮抗剂，可阻断细胞利用正常途 径合成DNA，细胞在含有氨甲蝶呤的培养基中不能通过正 常途径合成DNA。
3. 骨髓瘤细胞的准备
• 细胞株处于良好的生长状态，本身不能分泌任何抗体或免疫 球蛋白； • 瘤细胞的来源应与制备脾细胞小鼠为同一品系，以便两者组 织相容性抗原一致； • 细胞株保持HGPRT缺陷状态或TK缺陷状态。
注意：可溶性抗原需与BSA、OA等载体交联后成颗粒性抗 原才能刺激动物产生可应用的高效价的抗体。
2、免疫动物
• （1）动物选择：一般采用与骨髓瘤细胞供体来源同一品 系的动物进行免疫（如：小鼠）。由于免疫动物品系与所 采用的骨髓瘤细胞差异较远，产生的杂交瘤细胞稳定性越 差。
（2）融合技术 一种是加入融合剂后直接离心使两种细胞紧密接触
（R<3000r/min），另一种是加入融合剂后轻轻搅动融 合。
• （3）提高融合频率的可能途径
•
融合过程中由于细胞特性、操作过程、PEG毒性等
多种因素都可能影响融合而减少融合频率。
•
方法：对亲本细胞预处理，改进融合技术，加入饲养
层细胞促进杂交瘤生长。
（1）体外制备
• 体外使用旋转培养瓶大量培养杂交瘤细胞，从上清 中获取单克隆抗体。但此方法产量低，一般培养液含量为 10～60μg／ ml。如果大量生产，费用较高。
• 随着大规模的生产，需大量血清而使成本增加，同 时血清会影响单抗的纯度，大量血清的存在干扰抗体活性。 1978年iscove用补充大豆类脂，牛血清蛋白，转铁蛋白等 添加成分的无血清培养基培养杂交瘤细胞成功。
• HAT选择性培养基： 培养基中加次黄嘌呤HyPoxanthine H，氨基喋呤
Aminoopterin A及胸腺嘧啶核苷Thymidine T。
单克隆抗体制备原理
• HAT培养基的选择原理：
• （1）氨基蝶呤(A)是叶酸拮抗剂，可阻断细胞利用正常途 径合成DNA，细胞在含有氨甲蝶呤的培养基中不能通过正 常途径合成DNA。
3. 骨髓瘤细胞的准备
• 细胞株处于良好的生长状态，本身不能分泌任何抗体或免疫 球蛋白； • 瘤细胞的来源应与制备脾细胞小鼠为同一品系，以便两者组 织相容性抗原一致； • 细胞株保持HGPRT缺陷状态或TK缺陷状态。
单克隆抗体的制备及应用ppt
免疫动物的选择：一般的杂交瘤生产都选用BALB/c小鼠或LOU/c大鼠作为免疫动物。但是，有时为了特殊目的而需进行种间杂交，则可免疫其他动物。就小鼠而言，初次免疫时以8-12周龄为宜，雌性鼠较便于操作。
免疫程序的确定：在设计免疫程序时，应考虑到抗原的性质和纯度、抗原量、免疫途径、免疫次数与间隔时间、佐剂的应用及动物对该抗原的应答能力等。没有一个免疫程序能适用于各种抗原。
病原微生物抗原、抗体的检测
作为检验医学实验室的诊断试剂，单克隆抗体以其特异性强、纯度高、均一性好等优点，广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、免疫组化和流式细胞仪等技术。并且单克隆抗体的应用，很大程度上促进了商品化试剂盒的发展。
农兽药快速检测
农兽药属于小分子物质，半抗原，无免疫原性，不 能刺激动物产生抗体，必须先将其制备成人工抗原， 以人工抗原免疫动物，使动物的免疫系统发生应答反 应，从而制备出对该农药具特异性的多或单克隆抗体 国外已制备多种农兽药单克隆抗体并应用于农药和兽 药残留的免疫分析。
1
2
作为免疫抑制剂
抗人T淋巴细胞单抗（McAb）作为一种新型免疫抑制剂，已广泛应用于临床治疗自身免疫疾病和抗器官移植的排斥反应，其作用机理有赖于McAb的种类及其免疫学特性。
例子：对于同种骨髓移植的供体骨髓，在体外经抗T细胞单抗加补体处理，能够减轻移植物抗宿主病的发生。
作为研究工作中的探针
利用单克隆抗体的特性可把它作为研究工作中的探针。此时，可以从分子、细胞和器官的不同水平上，研究抗原物质的结构与功能关系，进而可以从理论上阐明其机理。
这种杂交瘤，通过克隆化可得到来自单个杂交瘤细胞的单克隆系，即杂交瘤细胞系，它所产生的抗体是针对同一抗原决定簇的高度同质的抗体，即所谓单克隆抗体（ mAbs ），简称单抗。
单克隆抗体公开课课件
单克隆抗体公开课课件
• 单克隆抗体的基础知识 • 单克隆抗体的制备技术 • 单克隆抗体的应用实例 • 单克隆抗体的研究进展 • 单克隆抗体的未来展望
01
单克隆抗体的基础知识
单克隆抗体的定义
总结词
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的具有高度特异性的抗体 分子。
详细描述
单克隆抗体是由杂交瘤细胞产生的，这种杂交瘤细胞是由一 个单一的B细胞与骨髓瘤细胞融合而成。这种杂交瘤细胞能够 大量繁殖，并且只产生一种类型的抗体，因此这种抗体具有 高度特异性。
02
单克隆抗体的制备技术
杂交瘤技术
杂交瘤技术是制备单克隆抗体的经典方法，通过将免疫小 鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。
杂交瘤细胞既具有骨髓瘤细胞的无限增殖能力，又具有免 疫脾细胞的抗体产生能力，通过筛选和克隆化培养，可以 得到单一抗体分泌的杂交瘤细胞。
杂交瘤技术制备的单克隆抗体具有高度特异性，可用于诊 断和治疗疾病。
食品安全与环境监测
02
通过单克隆抗体检测食品和环境中的有害物质，保障公共卫生
安全。
生物恐怖袭击应对
03
针对生物恐怖袭击的威胁，利用单克隆抗体快速识别和清除生
物武器中的毒素和病原微生物。
TH疾病的重要手段。目前，已有多种单克隆抗体药物获得批
准上市，为患者提供了新的治疗选择。
02
单克隆抗体药物的靶点选择
靶点选择是单克隆抗体药物研发的关键环节，针对不同的靶点，可以设
计出具有不同作用机制的单克隆抗体药物。目前，针对肿瘤细胞表面抗
原、细胞内信号转导通路等靶点的研究较为广泛。
03
单克隆抗体药物的疗效评估
单克隆抗体的制备过程
总结词
单克隆抗体的制备过程包括免疫动物、杂交瘤细胞的制备、筛选和克隆化、抗体生产以 及纯化。
• 单克隆抗体的基础知识 • 单克隆抗体的制备技术 • 单克隆抗体的应用实例 • 单克隆抗体的研究进展 • 单克隆抗体的未来展望
01
单克隆抗体的基础知识
单克隆抗体的定义
总结词
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的具有高度特异性的抗体 分子。
详细描述
单克隆抗体是由杂交瘤细胞产生的，这种杂交瘤细胞是由一 个单一的B细胞与骨髓瘤细胞融合而成。这种杂交瘤细胞能够 大量繁殖，并且只产生一种类型的抗体，因此这种抗体具有 高度特异性。
02
单克隆抗体的制备技术
杂交瘤技术
杂交瘤技术是制备单克隆抗体的经典方法，通过将免疫小 鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。
杂交瘤细胞既具有骨髓瘤细胞的无限增殖能力，又具有免 疫脾细胞的抗体产生能力，通过筛选和克隆化培养，可以 得到单一抗体分泌的杂交瘤细胞。
杂交瘤技术制备的单克隆抗体具有高度特异性，可用于诊 断和治疗疾病。
食品安全与环境监测
02
通过单克隆抗体检测食品和环境中的有害物质，保障公共卫生
安全。
生物恐怖袭击应对
03
针对生物恐怖袭击的威胁，利用单克隆抗体快速识别和清除生
物武器中的毒素和病原微生物。
TH疾病的重要手段。目前，已有多种单克隆抗体药物获得批
准上市，为患者提供了新的治疗选择。
02
单克隆抗体药物的靶点选择
靶点选择是单克隆抗体药物研发的关键环节，针对不同的靶点，可以设
计出具有不同作用机制的单克隆抗体药物。目前，针对肿瘤细胞表面抗
原、细胞内信号转导通路等靶点的研究较为广泛。
03
单克隆抗体药物的疗效评估
单克隆抗体的制备过程
总结词
单克隆抗体的制备过程包括免疫动物、杂交瘤细胞的制备、筛选和克隆化、抗体生产以 及纯化。
单克隆抗体-公开课课件
B.不经过免疫的T淋巴细胞 D.不经过免疫的B淋 巴细胞
【例5】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的
（ D）
• B淋巴细胞
B．T淋巴细胞
C．骨髓瘤细胞
D．杂交瘤细胞
【例6】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下
列实验步骤中错误的是（ B ）
A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋 巴细胞
B．用纤维素酶×处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞
行常用__聚__乙__二__醇_____或___灭__活__的__病__毒__的诱导。
(3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成 3 种
类型的C细胞，因此需用____选__择__性__培养基筛选出D细 胞用于培养，D细胞的名称是 杂交瘤细胞 ，其特点
是___既__能__无__限__增__殖__又__能__产__生__特__异__性__抗__体__________。
二、单克隆抗体
1.抗体是由何种细胞产生的？ 效应B细胞（浆细胞）
2.一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分 泌多种抗体吗？
每一个Ｂ淋巴细胞只分泌一 种特异性抗体 3.一种抗原侵入机体之后，引起 机体免疫反应产生的抗体只有一 种吗？
动物在免疫反应过程中，体 内产生的特异性抗体种类可多达 百万种以上
Ø出现在抗原分子表面、决定 抗原特异性Байду номын сангаас特殊化学基团.
（3）该方案的目的是__制__备__单__克__隆__抗__体___________。
3、治疗疾病和运载药物
主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗 癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。
“生物导弹” ＝单克隆抗体＋药物
单抗导向，药物为弹头
【例4】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融 合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单
人源化单克隆抗体PPT课件
解决方案
灵长目源抗体也是 一类嵌合抗体，通过免 疫短尾猿猴产生。由于 其抗体的可变区与人可 变区无差异，不至于发 生抗体反应。
鼠源抗体
嵌合抗体
2024/1/27
2.CDR移植抗体（CDR grafted antibody)
真正意义上的抗体人源化。抗体中除了3个互补决定区 （CDR）是鼠源的外，其余全部是人源结构，人源化程度可 达到95%以上，具有更高的安全性和更低的毒性。
核糖体展示技术由于在体外无细胞翻译体系中进行， 用mRNA的可复制性，使靶基因（蛋白）得到有效富集，且能够增加表达的蛋白质的溶 解度。
2024/1/27
4.2.转基因小鼠
通过基因敲除技术，使小鼠自身的基因失活，并导 入新基因，创造出携带人抗体重轻基因簇的转基因小 鼠。这种人抗体基因小鼠所携带的人DNA片段具有完善 的功能，可以有效地进行同型转换和亲和力成熟。任 何靶抗原均可被用来免疫该小鼠，使其产生高亲和力 的人抗体。 案例：
人源抗体在这种转基因小鼠的产量还比较低。
4.4.其他方法
XTL生物制药公司使用一种类似于人骨髓移植的方法， 用放射线破坏动物骨髓，然后注入人抗体生成细胞。该公 司已用此法生产出一种全人单抗。
人源化抗体的临床应用
• 近年来 ,人源化抗体和人抗体的出现为临床应 用带来了新的希望 ,当前正处于临床研究的多 种抗体中 , 嵌合抗体和 人 源 化 抗 体 所 占 比 例 大 于70 %。目前的人源化抗体 ,主要用于肿 瘤、 自身免疫性疾病和心血管疾病的治疗以 及抗移植排斥反应和抗病毒感染等方面。
(2) 鼠源性单抗在人体内生物活性降低力于人源性抗体的研究。
人源化治疗性单克隆抗体的研究进展
构建的基本思路
鼠抗体人源化就是通过基因改造，使其和人体内的抗体 分子具有极其相似的轮廓，从而逃避人免疫系统的识别，避 免诱导HAMA（人抗鼠抗体）反应。
灵长目源抗体也是 一类嵌合抗体，通过免 疫短尾猿猴产生。由于 其抗体的可变区与人可 变区无差异，不至于发 生抗体反应。
鼠源抗体
嵌合抗体
2024/1/27
2.CDR移植抗体（CDR grafted antibody)
真正意义上的抗体人源化。抗体中除了3个互补决定区 （CDR）是鼠源的外，其余全部是人源结构，人源化程度可 达到95%以上，具有更高的安全性和更低的毒性。
核糖体展示技术由于在体外无细胞翻译体系中进行， 用mRNA的可复制性，使靶基因（蛋白）得到有效富集，且能够增加表达的蛋白质的溶 解度。
2024/1/27
4.2.转基因小鼠
通过基因敲除技术，使小鼠自身的基因失活，并导 入新基因，创造出携带人抗体重轻基因簇的转基因小 鼠。这种人抗体基因小鼠所携带的人DNA片段具有完善 的功能，可以有效地进行同型转换和亲和力成熟。任 何靶抗原均可被用来免疫该小鼠，使其产生高亲和力 的人抗体。 案例：
人源抗体在这种转基因小鼠的产量还比较低。
4.4.其他方法
XTL生物制药公司使用一种类似于人骨髓移植的方法， 用放射线破坏动物骨髓，然后注入人抗体生成细胞。该公 司已用此法生产出一种全人单抗。
人源化抗体的临床应用
• 近年来 ,人源化抗体和人抗体的出现为临床应 用带来了新的希望 ,当前正处于临床研究的多 种抗体中 , 嵌合抗体和 人 源 化 抗 体 所 占 比 例 大 于70 %。目前的人源化抗体 ,主要用于肿 瘤、 自身免疫性疾病和心血管疾病的治疗以 及抗移植排斥反应和抗病毒感染等方面。
(2) 鼠源性单抗在人体内生物活性降低力于人源性抗体的研究。
人源化治疗性单克隆抗体的研究进展
构建的基本思路
鼠抗体人源化就是通过基因改造，使其和人体内的抗体 分子具有极其相似的轮廓，从而逃避人免疫系统的识别，避 免诱导HAMA（人抗鼠抗体）反应。
《单克隆抗体应用》课件
单克隆抗体的特性
总结词
单克隆抗体具有高度特异性、一致性和稳定性。
详细描述
由于单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的，因此它具有高度特异性，能够与特 定的抗原结合。此外，由于单克隆抗体的生产过程是高度控制的，因此其质量和 性能具有一致性和稳定性。
02
单克隆抗体的应用领域
生物医学研究
抗体标记技术
利用单克隆抗体与特定抗原的结 合特性，对生物样本中的抗原进 行标记，用于检测、定位和追踪 抗原的表达和分布。
利用单克隆抗体标记的免疫细胞对肿瘤进行攻击，提高肿瘤治疗的疗效和患者的生存率。
03
单克隆抗体的研究进展
新药研发
肿瘤免疫治疗
利用单克隆抗体作为肿瘤免疫治 疗的靶点，通过激活免疫系统来 攻击肿瘤细胞。
自身免疫性疾病治
疗
针对自身免疫性疾病，如类风湿 性关节炎、红斑狼疮等，单克隆 抗体可以抑制免疫反应，缓解症 状。
《单克隆抗体应用》ppt课件
CONTENTS
• 单克隆抗体的基础知识 • 单克隆抗体的应用领域 • 单克隆抗体的研究进展 • 单克隆抗体的挑战与前景 • 单克隆抗体的未来展望
01
单克隆抗体的基础知识
单克隆抗体的定义
总结词
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的具有高度特异性的免疫球蛋白。
详细描述
单克隆抗体是由杂交瘤细胞产生的，这种细胞是由免疫的B细胞和骨髓瘤细胞融 合而成。这种杂交瘤细胞能够大量繁殖，并且只产生一种类型的抗体。
免疫疗法
单克隆抗体可以与免疫疗法结合，通过调节免疫 反应来增强抗肿瘤效果。
基因治疗
通过将基因导入单克隆抗体，可以实现更精确的 靶向治ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ，提高治疗效果并降低副作用。
单克隆抗体(monoclonalantibody)PPT课件
稀释方法获得产特定单克隆抗体的克隆
克隆化是指将抗体阳性孔进行克隆，目的是将抗体 分泌细胞、抗体非分泌细胞、特异性抗体分泌细胞 和无关抗体分泌细胞分开
大量获得单克隆抗体的方法
3. 单克隆抗体的应用
3.1 作为生物治疗的导向武器
将针对某一肿瘤的单克隆抗体与化疗药物或放疗药物连接， 利用单抗的特异导向作用，将药物带到靶器官，直接杀伤 靶细胞 抗肿瘤细胞毒剂，化疗药物、细菌毒素、植物毒素或放射 同位素等
杂交瘤细胞的筛选：HAT培养基筛选 讨论：细胞融合后，体系中会存在哪些细胞？
HAT系次黄嘌呤（hypoxantin）、氨基蝶呤 （aminopterin）和胸腺嘧啶脱氧核苷（thymidin）三 种物质
单克隆抗体的选择及克隆化
杂交瘤细胞及阳性孔的筛选，用多孔细胞培养板筛选， 稀释度要保证每个孔不多于1个细胞，通过抗原抗体 杂交法检测阳性反应
由不同B细胞克隆产生的针对抗原物质中多种抗原决定簇的多种抗体混 合物。如:免疫血清（含多种特异性抗体）
Monoclonal antibody: 第二代抗体
由单一克隆B细胞杂交瘤产生的，只识别抗原分子某一特定抗原决定簇
的特异性抗体。特异性强、灵敏度高。 Genetic engineering antibody: 第三代抗体
在DNA水平对Ig基因进行切割、拼接或修饰，导入受体细胞表达的抗体。
思考题:
1. 单克隆抗体和普通抗体有何区别 2）作为一种新型免疫抑制 剂，治疗自身免疫疾病和抗器官移植排斥反应
3.4 作为研究工作的探针
利用单抗的特异性，将其作为探针，从分子、细胞和器官 等不同水平，研究抗原物质的结构与功能，从理论上阐明 机理 用荧光物质标记单抗作为探针，快速确定与其结合的相应 生物大分子在细胞中的位置和分布
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
体。高度均一、特异性强、效价高、少或无交叉反应性。
与多抗相比，单抗纯度高，专一性强、重复性好、且能持 续地无限量供应。
McAb and PcAb
杂交瘤技术的诞生 1975年8月7日，Kohler和Milstein在英国《自然
》杂志上发表了题为“分泌具有预定特异性抗体的 融合细胞的持续培养”（Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity ）
4 2 其后 4 其后“休息” 最后加强
间隔时 间
2-4周
2-4周 每月 2-3月
每月 每天
每月 10天 1-2月
单抗的特性 抗体滴度 亲和性
高
中等至强
中等或高 中等或强
中等
强
中等
中等
中等
中等或强
表6-1 不同免疫抗原的免疫程序 （引自刘秀梵，1994）
（三）细胞融合
培养液： RPM1640培养液 DMEM培养液
饲养细胞
。
融合方法
a、将1×108脾细胞与2×107-5×107骨髓瘤细胞SP2/0-Ag14混合于一支50ml融合管中 ，补加不完全培养基至30ml，充分混匀。
b、1000r/min离心5-10分钟，将上清尽量吸净。 c、在手掌上轻击融合管底，使沉淀细胞松散均匀;置40℃水浴中预热。 d、用1ml吸管在1分钟左右（最佳时间为45秒）加预热至40℃的50% PEG（PH 8.0 ）1ml，边加边轻轻搅拌。 e、用10ml吸管在90秒内加20-30ml预热至37℃的不完全培养基；20-37℃静置10分 钟。 f、1000r/min 5分钟；弃去上清。 g、加入5ml HAT培养基，轻轻吹吸沉淀细胞，使其悬浮并混匀，然后补加含腹腔 巨噬细胞的HAT培养基至80-100ml。 h、分装96孔细胞培养板，每孔0.10-0.15ml；分装24孔板，每孔1.0-1.5ml；然后将 培养板置37℃，6% CO2培养箱内培养。 i、5天后用HAT培养基换出1/2培养基。 j、7-10天后用HT培养基换出HAT培养基；（第14天后可用普通完全培养基）。 l、经常观察杂交瘤细胞生长情况，待其长至孔底面积1/10以上时吸出上清供抗体检 测。
饲养细胞：
在细胞融合后选择性培养过程中，由于大量骨髓瘤 细胞和脾细胞相继死亡，此时单个或少数分散的杂交瘤 细胞多半不易存活，通常必须加入其他活细胞使之繁殖， 这种被加入的活细胞称为饲养细胞（Feeder cells）。
常用的饲养细胞有胸腺细胞、正常脾细胞和腹腔巨 噬细胞 其中MQ还有清除死亡细胞的作用 饲养存活一般不超过2周，不影响杂交瘤细胞的纯化
隆抗体
流 程
（一）小鼠骨髓瘤细胞
小鼠骨髓瘤细胞系均来源于BALB/c小鼠，大鼠骨髓瘤细 胞都来源于LOU/c大鼠
建立的骨髓瘤细胞系 : SP2/0-Ag14， X63-Ag8.653 NSO/1
• 不产生Ig的重链和轻链 • HGPRT-;TK• 与提供淋巴细胞的动物品系相同
（二）免疫脾细胞
动 物：
淋巴细胞
。
浆细胞
。
抗原接种
。
免疫原特性 免疫原性强 （如细胞、细 菌和病毒等） 免疫原性中等
免疫原性弱
抗原量
接种次数
106-107个细 胞或1-10ug
2-4
10-100ug A.20-400ug
B.10-50ug 其后
200-400ug C.10-100ug
2-4
2-4 随后 2-3
2 其后
单克隆抗体
Monocolonal antibody
1、多克隆抗体（polyclonal antibody, pAb）： 用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物，可刺激
机体多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同抗体。 所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物。
2、单克隆抗体（monoclonal antibodies, mAb）： 由一个识别一种抗原表位的B细胞克隆产生的同源抗
培养骨髓瘤细胞： 选择对数生长期的细胞进行传代培养 细胞形态：浑圆、透亮、均一、排列整齐 避免细胞返祖：定期用8-AG处理细胞 注意事项：切忌过多传代培养，可将细胞分装冻存 于-80℃或液氮及干冰中
免疫脾细胞的制备： 1×108的淋巴细胞 无菌手术
➢取已经免疫的BALB/c小鼠，摘除眼球采血，并分离血 清作为抗体检测时的阳性对照血清。 ➢同时通过颈脱位致死小鼠，浸泡于75%酒精中5分钟 ➢通常每只小鼠1×108-2.5×108个脾细胞，每只大鼠脾脏 可得5×108-10×108脾细胞。
抗体种类：
第一代抗体 多克隆抗体 （polyclonal antibody)
第二代抗体 单克隆抗体 （monoclonal antibody)
第三代抗体 基因工程抗体 （genetic engineering antibody)
B淋巴细胞:寿命短,分泌特 异系性抗体 骨髓瘤细胞：寿命长 杂交瘤细胞：寿命长，单
1984年度荣获诺贝尔生理学和医学奖
一、 杂交瘤技术的基本原理
➢ 聚乙二醇（PEG）：细胞融合剂，使免疫的小鼠脾 细 胞与小鼠骨髓瘤细胞融合 ➢ HAT培养基的选择培养：反复的免疫学检测筛选克 隆化增殖的杂交瘤 细胞系 ➢ 单克隆抗体生成：接种杂交瘤 细胞于小鼠腹腔，腹 水中即可得到高效价的单克隆抗体
融合细胞的早期培养
10～20天出现克隆 HAT筛选杂交瘤细胞在融合后2周左右即可筛选， 即把分泌所需抗体的杂交瘤孔从众多的孔中选出 来，通常也称为抗体检测。
细胞融合剂：
PEG:分子量4000 的PEG是最常用的细胞融合剂 作用机理：诱导细胞膜上脂类物质结构重排，使细胞 膜易打开而有助于细胞融合 作用特点：随机发生的，不同厂商、批号、分子量的 PEG，其纯度与毒性有所不同
最早仙台病毒被用做融合剂，后来发现聚乙二醇（PEG）的融合效果更 好，且避免了病毒的污染问题
BALB/c小鼠 4～8周龄 20g～25g体重
免疫小鼠
细胞性抗原： （1~2）×107/只，不加佐剂，2~3周重复一次
可溶性抗原： 首次，完全福氏佐剂+100微克抗原，3~6周 100~200微克抗原，融合前3天原，对于 免疫原性很弱或对机体有害（如引起免疫抑制）的 抗原就不适用了
与多抗相比，单抗纯度高，专一性强、重复性好、且能持 续地无限量供应。
McAb and PcAb
杂交瘤技术的诞生 1975年8月7日，Kohler和Milstein在英国《自然
》杂志上发表了题为“分泌具有预定特异性抗体的 融合细胞的持续培养”（Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity ）
4 2 其后 4 其后“休息” 最后加强
间隔时 间
2-4周
2-4周 每月 2-3月
每月 每天
每月 10天 1-2月
单抗的特性 抗体滴度 亲和性
高
中等至强
中等或高 中等或强
中等
强
中等
中等
中等
中等或强
表6-1 不同免疫抗原的免疫程序 （引自刘秀梵，1994）
（三）细胞融合
培养液： RPM1640培养液 DMEM培养液
饲养细胞
。
融合方法
a、将1×108脾细胞与2×107-5×107骨髓瘤细胞SP2/0-Ag14混合于一支50ml融合管中 ，补加不完全培养基至30ml，充分混匀。
b、1000r/min离心5-10分钟，将上清尽量吸净。 c、在手掌上轻击融合管底，使沉淀细胞松散均匀;置40℃水浴中预热。 d、用1ml吸管在1分钟左右（最佳时间为45秒）加预热至40℃的50% PEG（PH 8.0 ）1ml，边加边轻轻搅拌。 e、用10ml吸管在90秒内加20-30ml预热至37℃的不完全培养基；20-37℃静置10分 钟。 f、1000r/min 5分钟；弃去上清。 g、加入5ml HAT培养基，轻轻吹吸沉淀细胞，使其悬浮并混匀，然后补加含腹腔 巨噬细胞的HAT培养基至80-100ml。 h、分装96孔细胞培养板，每孔0.10-0.15ml；分装24孔板，每孔1.0-1.5ml；然后将 培养板置37℃，6% CO2培养箱内培养。 i、5天后用HAT培养基换出1/2培养基。 j、7-10天后用HT培养基换出HAT培养基；（第14天后可用普通完全培养基）。 l、经常观察杂交瘤细胞生长情况，待其长至孔底面积1/10以上时吸出上清供抗体检 测。
饲养细胞：
在细胞融合后选择性培养过程中，由于大量骨髓瘤 细胞和脾细胞相继死亡，此时单个或少数分散的杂交瘤 细胞多半不易存活，通常必须加入其他活细胞使之繁殖， 这种被加入的活细胞称为饲养细胞（Feeder cells）。
常用的饲养细胞有胸腺细胞、正常脾细胞和腹腔巨 噬细胞 其中MQ还有清除死亡细胞的作用 饲养存活一般不超过2周，不影响杂交瘤细胞的纯化
隆抗体
流 程
（一）小鼠骨髓瘤细胞
小鼠骨髓瘤细胞系均来源于BALB/c小鼠，大鼠骨髓瘤细 胞都来源于LOU/c大鼠
建立的骨髓瘤细胞系 : SP2/0-Ag14， X63-Ag8.653 NSO/1
• 不产生Ig的重链和轻链 • HGPRT-;TK• 与提供淋巴细胞的动物品系相同
（二）免疫脾细胞
动 物：
淋巴细胞
。
浆细胞
。
抗原接种
。
免疫原特性 免疫原性强 （如细胞、细 菌和病毒等） 免疫原性中等
免疫原性弱
抗原量
接种次数
106-107个细 胞或1-10ug
2-4
10-100ug A.20-400ug
B.10-50ug 其后
200-400ug C.10-100ug
2-4
2-4 随后 2-3
2 其后
单克隆抗体
Monocolonal antibody
1、多克隆抗体（polyclonal antibody, pAb）： 用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物，可刺激
机体多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同抗体。 所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物。
2、单克隆抗体（monoclonal antibodies, mAb）： 由一个识别一种抗原表位的B细胞克隆产生的同源抗
培养骨髓瘤细胞： 选择对数生长期的细胞进行传代培养 细胞形态：浑圆、透亮、均一、排列整齐 避免细胞返祖：定期用8-AG处理细胞 注意事项：切忌过多传代培养，可将细胞分装冻存 于-80℃或液氮及干冰中
免疫脾细胞的制备： 1×108的淋巴细胞 无菌手术
➢取已经免疫的BALB/c小鼠，摘除眼球采血，并分离血 清作为抗体检测时的阳性对照血清。 ➢同时通过颈脱位致死小鼠，浸泡于75%酒精中5分钟 ➢通常每只小鼠1×108-2.5×108个脾细胞，每只大鼠脾脏 可得5×108-10×108脾细胞。
抗体种类：
第一代抗体 多克隆抗体 （polyclonal antibody)
第二代抗体 单克隆抗体 （monoclonal antibody)
第三代抗体 基因工程抗体 （genetic engineering antibody)
B淋巴细胞:寿命短,分泌特 异系性抗体 骨髓瘤细胞：寿命长 杂交瘤细胞：寿命长，单
1984年度荣获诺贝尔生理学和医学奖
一、 杂交瘤技术的基本原理
➢ 聚乙二醇（PEG）：细胞融合剂，使免疫的小鼠脾 细 胞与小鼠骨髓瘤细胞融合 ➢ HAT培养基的选择培养：反复的免疫学检测筛选克 隆化增殖的杂交瘤 细胞系 ➢ 单克隆抗体生成：接种杂交瘤 细胞于小鼠腹腔，腹 水中即可得到高效价的单克隆抗体
融合细胞的早期培养
10～20天出现克隆 HAT筛选杂交瘤细胞在融合后2周左右即可筛选， 即把分泌所需抗体的杂交瘤孔从众多的孔中选出 来，通常也称为抗体检测。
细胞融合剂：
PEG:分子量4000 的PEG是最常用的细胞融合剂 作用机理：诱导细胞膜上脂类物质结构重排，使细胞 膜易打开而有助于细胞融合 作用特点：随机发生的，不同厂商、批号、分子量的 PEG，其纯度与毒性有所不同
最早仙台病毒被用做融合剂，后来发现聚乙二醇（PEG）的融合效果更 好，且避免了病毒的污染问题
BALB/c小鼠 4～8周龄 20g～25g体重
免疫小鼠
细胞性抗原： （1~2）×107/只，不加佐剂，2~3周重复一次
可溶性抗原： 首次，完全福氏佐剂+100微克抗原，3~6周 100~200微克抗原，融合前3天原，对于 免疫原性很弱或对机体有害（如引起免疫抑制）的 抗原就不适用了