小鼠肺血管平滑肌细胞使用说明

1.三类小鼠缺氧动物模型的复制方法和原理是什么？（1）组织性缺氧（氰化钾中毒性缺氧）方法：取小鼠1只，腹腔注射0.1％氰化钾0.3ml。

原理：CN-与细胞色素aa3铁原子中的配位键结合，形成氰化高铁cyt aa3，使细胞色素氧化酶不能还原，失去传递电子的功能，呼吸链中断，从而使生物氧化受阻，造成组织性缺氧。

（2）血液性缺氧一氧化碳中毒性缺氧方法：准备CO发生装置，将1只小鼠放入广口瓶中，观察其正常表现后，与CO发生装置连接。

用刻度吸管取甲酸3 ml放于试管内，沿试管壁缓慢加入浓硫酸2 ml，塞紧瓶塞。

原理：CO与血红蛋白的亲和力是氧的210倍。

吸入CO后，一方面，血红蛋白与之结合形成HbCO而失去携氧能力。

另一方面，当CO与Hb分子中的某个血红素结合后，将增加其余三个血红素对氧的亲和力，使Hb结合的氧不易释放。

同时，CO还可以抑制红细胞内糖酵解，使2,3-DPG生成减少，使氧离曲线左移，使Hb结合的氧不易释放。

亚硝酸钠中毒性缺氧方法：选体重相近的小鼠2只，观察正常指标；腹腔注射5％亚硝酸钠0.3ml，立即取其中1只小鼠腹腔内注入l％美蓝溶液0.3ml；另1只则注入生理盐水0.3 ml。

原理：亚硝酸盐可以将血红素中的二价铁氧化成三价铁，形成高铁血红蛋白。

高铁血红蛋白中的三价铁因为与羟基结合牢固，从而失去结合氧的能力。

同时当血红蛋白分子中的四个二价铁中有一部分被氧化成为三价铁以后，剩下的二价铁虽然能结合氧，但不易解离。

（3）乏氧性缺氧方法：广口瓶加入钠石灰少许，取小鼠1只放入瓶中，观察各项指标；塞紧瓶塞，每10min重复观察上述指标1次，如有其他变化，随时记录，直至动物死亡。

原理：钠石灰可以吸收空气中的氧气，当吸入气的氧分压过低时，肺泡气氧分压降低，弥散进入血液的氧气随之减少。

2.各类缺氧小鼠死亡后皮肤、黏膜和肝脏颜色是什么？为什么会有上述表现？（1）组织性缺氧（氰化钾中毒性缺氧）皮肤、黏膜、肝脏玫瑰红或红色。

大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的培养与鉴定徐索文肖平喜陈健文乐康沈晓燕黄河清刘培庆【摘要】目的建立大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的培养模型，为体外研究动脉粥样硬化的发病机制提供重要的实验手段。

方法采用改良的植块贴壁法，成功建立大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的培养模型;分别用倒置显微镜和SABC试剂盒对培养细胞进行形态学观察、免疫组织化学和免疫荧光鉴定(平滑肌细胞特异性的α- SM - actin)。

结果原代培养的血管平滑肌细胞在接种后3天开始从组织块周围游出，光镜下培养细胞呈梭形，放射状生长和典型的“峰谷”状生长;免疫组化和荧光染色显示胞浆内α平滑肌肌动蛋白阳性表达，证实培养的细胞为血管平滑肌细胞。

结论本法简便、可靠、经济、短期内可获大量高纯度、功能良好的血管平滑肌细胞，可作为研究动脉粥样硬化和移植血管再狭窄机制的有效模型。

【关键词】大鼠;胸主动脉;植块法;血管平滑肌细胞[Abstract]ObjectiveTo establish the culture model of rat aorta vascular smooth muscle cells (VSMCs) to provide important experimental method for the pathogenesis research of atherosclerosis in vitro. MethodsEmploying the explants technique, the primary and sub-culture were completed bymodified tissue-piece inoculation and trypsin digestion respectively. The cultured cells were identified by phase contrast microscopy and immunohistochemical and immunofluorescent staining.ResultsAfter 3 days of inoculation of tissue-pieces, VSMCs migrated from the vessel pieces. The cultured cells showed the typical “hills and valleys”morphological features under the microscope. Immunohistochemical and immunofluorescent staining with monoclonal antibody against mouse α-SM- actin demonstrated these cells were positive. ConculsionIt is a simple and reliable method for obtaining highly purified and satisfactory VSMCs in short term, providing a favorable experimental platform for research into the mechanism of vascular proliferous diseases such as atherosclerosis and restenosis.[Key words]rat;thoracic aorta;explants method;vascular smooth muscle cells血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)的异常增殖、迁移、泡沫化及凋亡与冠状动脉旁路移植术(CABG)和经皮冠脉腔内血管成形术(PTCA)术后血管再狭窄、颈动脉球囊损伤术致新生内膜形成(neointima formation)及动脉粥样硬化(atherosclerosis)密切相关[1~4]。

雷公藤甲素通过抑制细胞铁死亡减轻博来霉素诱发的小鼠肺纤维化*张致琴1， 吴洁2， 秦艺璐2， 梁舒2， 左淑飞2， 张超2，高晓2， 范文强2， 张志强1△（1新乡医学院第一附属医院，河南 新乡 453100；2新乡市中心医院，河南 新乡 453000）［摘要］ 目的：探讨雷公藤甲素（TPL ）对博来霉素（BLM ）诱导肺纤维化小鼠的改善效果，揭示铁死亡参与TPL 改善肺纤维化的潜在机制。

方法：选择SPF 级小鼠，随机分为3组：对照组、模型组（BLM 处理组）和实验组（BLM+TPL 处理组），每组10只。

Day 0，模型组和实验组小鼠气管灌注BLM 水溶液（50 μL ，5 mg/kg ），对照组小鼠接受等体积的生理盐水。

Day 1起，实验组小鼠开始灌胃TPL 悬液（200 μL ，0.25 mg/kg ），每3 d 一次，共7次，对照组和模型组分别接受等体积生理盐水。

Masson 染色检测肺组织纤维化，TUNEL 染色检测肺组织细胞凋亡；体外CCK8法检测细胞活力，流式细胞术及活死染色检测细胞凋亡，免疫荧光法检测细胞脂质过氧化，Western blot 检测肺组织及细胞中目的蛋白表达。

结果：TPL 处理通过下调肺组织中I 型胶原（Col I ）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA ）的表达（P <0.05），显著降低BLM 诱导小鼠肺部纤维化程度（P <0.01）；同时，TPL 处理可显著上调肺组织中谷胱甘肽过氧化酶4（GPX4）和铁死亡抑制蛋白1（FSP1）表达（P <0.05），下调转铁蛋白受体1（TfR1）表达（P <0.05），从而抑制BLM 诱导的肺部细胞铁死亡和凋亡（P <0.01）。

体外研究结果表明，TPL 处理可显著抑制肺上皮细胞凋亡（P <0.01），进一步检测发现TPL 处理可显著降低BLM 诱导的肺泡上皮细胞内脂质过氧化（P <0.01），显著上调细胞内GPX4和FSP1蛋白表达（P <0.01），下调TfR1蛋白表达（P <0.05），通过抑制细胞铁死亡来显著降低BLM 诱导的肺上皮细胞凋亡率。

•664•中华老年心脑血管病杂志2021 年6 月第23 卷第 6 期Chin J Geriatr Heart Brain Vessel Dis.Jun 202 1.Vol 23.No. 6•综述•血管平滑肌细胞在血管衰老发生发展过程中作用的研究现状李晶，谢文辉，柯一郎，洪华山关键词：肌，平滑，血管；肌细胞，平滑肌；衰老；细胞外基质；脉搏波分析2019年，L a u r e n t等1首次提出超常血管衰老（s u p e r­n o r m a l v a s c u l a r a g i n g’S U P E R N O V A)概念，S U P E R N O V A指不受危险因素影响，因颈-股动脉脉搏波传导速度（c a r o t i d-f e m o r a l p u l s e w a v e v e l o c i t y，c f P W V)值极低而生成一种保护表型。

U u r e n t等还依据c f P W V值将早发血管衰老（e a r l y v a s c u l a r a g i n g，E V A)和S U P E R N O V A作为血管衰老分布的2个极端来处理。

血管平滑肌细胞（v a s c u l a r s m o o t h m u s­cle cell.s，V S M C)作为 血管的重要组成部分，在血管衰老中扮演重要的角色。

现将血管衰老分为E V A，正常血管衰老(n o r m a l v a s c u l a r a g i n g，N V A)以及S U P E R N O V A 3 种类型，对V S M C在血管衰老及其不同类型发生发展的作用和机制的研究进展进行综述。

1细胞衰老与V S M C1.1细胞衰老细胞衰老也称为H a y f l i c k极限，指永久性细胞生长停滞。

细胞衰老可分为复制性衰老及应激性衰老，前者与端粒缩短有关，后者与D N A损伤、染色质扰动、癌基因诱导、应激等其他因素相关。

血管平滑肌细胞中钙库操纵性钙通道的作用研究进展郭瑞威;黄岚【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2009(38)10【摘要】Ca2＋是细胞信号传导过程中最常见的第二信使，许多蛋白质直接或间接与之结合后被活化，对机体正常生理功能有十分重要的意义。

机体有一套周密的调节机制用于严格控制细胞内、外钙离子浓度的瞬间变化。

细胞浆自由钙离子浓度的调节依赖两种方式：（1）细胞内外Ca2＋的交换；（2）细胞内钙库的调节。

在细胞膜控制细胞内外Ca2＋交换有3种通道：（1）电压操纵性通道；（2）受体操纵性通道；（3）钙库操纵性通道（store-operated channels，SOC）。

SOC是近来发现新的Ca2＋通道，对SOC的研究正成为生理、药理等学科的新兴课题。

【总页数】3页(P1249-1251)【作者】郭瑞威;黄岚【作者单位】第三军医大学新桥医院全军心血管疾病研究所,重庆,400037;第三军医大学新桥医院全军心血管疾病研究所,重庆,400037【正文语种】中文【中图分类】Q26【相关文献】1.钙库操纵性钙通道在人循环纤维细胞中的表达及功能 [J], 钟金男;兰兰;何光珍;黄革;杨炯;高亚东2.血小板钙库操纵性钙通道蛋白与冠状动脉斑块易损性的相关性研究 [J], 袁楚婷;葛长江;宋现涛;张闽;苑飞;许锋3.钙库操纵性钙通道在介导低氧诱导性肺动脉高压形成中的作用及影响因素 [J], 朱雄;李娜;何庆4.散结通脉方对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化主动脉钙库操纵性钙通道信号分子及血清炎症因子的影响 [J], 丁云录;李驰坤;欧喜燕;李晓兵;成光宇;刘爱东5.钙库操纵性钙通道蛋白在心血管疾病中的研究进展 [J], 费舒扬;葛长江因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

[1] 。

大鼠血管平滑肌细胞的原代培养及鉴定血管平滑肌细胞（VSMC 的异常增殖是许多心血管疾病的共同病理基础， 在高血压、 动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄等 许多血管性疾病中，都涉及到血管平滑肌细胞的异常增殖 血管由 3 个部分组成，自内向外依次是内膜层、 中膜层和外膜层，内膜层主要由血管内皮细胞和少量的平滑肌细胞组成， 外膜层由要收缩调节机体的血流和血压， 其功能障碍在心血管疾病中起着 非常重要的作用， 因此， 对血管平滑肌细胞的生物学特性进行深 入研究，才能探明上述血管疾病的发病机制。

在VSMC 勺研究中， 组织块贴壁法培养 VSM （和胶原酶消化法是目前采用的非常广泛的技术。

本实验采用组织块贴壁法进行大鼠胸主动脉平滑肌细胞 的培养，并采用平滑肌细胞的3种标记分子（SMASM22Calponin ） 进行免疫细胞化学鉴定。

1 材料与方法成纤维细胞组成， 中膜层由血管平滑肌细胞组成， 平滑肌细胞主1.1 材料。

动物来源：健康 Wistar 大鼠，由第三军大学实验动物中心提供，雌雄不限，体重180 〜200g 。

DM EMS 糖培养 基 （美国 Gibco 公司） ， Hepes 索莱宝） ， 优质胎牛血清 （原 代培养浓度 20%，传代培养浓度 10%，美国 Hyclone ），胰蛋白酶，鼠单抗肌动蛋白 SMA 、SM22、Calponin 北京博奥森生物），DAB 显色试剂盒，通用型免疫组化检测试剂盒北京中杉金桥生物技术XX公司）其余试剂均为国产分析纯。

1.2 方法1.2.1 取材：断颈法处死Wistar 大鼠，消毒胸腹部，大组织剪、组织镊剪开胸腹部皮肤，更换器械，切开胸腹部，并切除部分胸壁以利于暴露胸主动脉，用眼科弯镊和眼科剪分离胸腹主动脉并放入盛有无菌PBS的细胞培养皿中。

转入超净工作台上，眼科直镊和弯镊清除结缔组织和血块，剥除动脉外膜。

放入另一盛有PBS的细胞培养皿中，减去血管外的细小分支，并放入含10%台牛血清的DMEI中，眼科直剪纵向剖开血管腔，用眼科弯镊轻轻刮除内膜面，以去除内皮细胞，放入另一含10%台牛血清的DMEM中，用眼科弯剪反复剪切成1mm*1m大小的组织块。

低氧条件下急性肺损伤小鼠肺血管通透性变化张东冬;陈魁君;翁昌梅;王建民【摘要】目的:观察低氧环境下急性肺损伤(ALI)小鼠肺水含量、组织病理学及血管通透性变化,探讨低氧环境下ALI致死的可能机制.方法:280只昆明白小鼠,分为常氧+PBS组(CK组,n=35)、低氧+PBS组(HP组,n=35)、常氧+内毒素(LPS)组(NL 组,n=60)和低氧+LPS组(HL组,n=150).NL组和HL组采用LPS诱导致ALI模型,CK组和HP组给予等量PBS,随后按分组要求分别于常氧条件和低压氧仓中饲养,于造模后第1、3、7天观察各组小鼠肺水含量、肺组织病理学评分、肺血管通透性等指标变化,同时观察各组小鼠7天内的存活率,并比较分析各组差异.结果:与其它三组比较,HL组小鼠实验7天后死亡率明显增加(P＜0.05);在LPS所致ALI后,HL组肺水含量显著高于NL组(P＜0.05);肺组织HE染色结果显示,HL组出现较为严重的肺间质水肿、肺泡腔缩小、血管肥大、肺间质增厚等病理变化,且肺组织中伊文思蓝含量在第7天显著高于NL组(P＜0.01).结论:低氧条件下ALI死亡率增加可能与肺间质屏障功能受损及肺血管通透性增加有关.【期刊名称】《微循环学杂志》【年(卷),期】2018(028)002【总页数】6页(P1-6)【关键词】低氧;内毒素;急性肺损伤;血管通透性【作者】张东冬;陈魁君;翁昌梅;王建民【作者单位】陆军军医大学第三附属医院野战外科研究所,创伤烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400042;陆军军医大学第三附属医院野战外科研究所,创伤烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400042;陆军军医大学第三附属医院野战外科研究所,创伤烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400042;陆军军医大学第三附属医院野战外科研究所,创伤烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400042【正文语种】中文【中图分类】R563.9急性肺损伤(Acute Lung Injury，ALI)是各种致病因素作用下发生的一类严重综合症，致死的主要原因是肺泡腔充满蛋白类炎性渗出液，阻碍肺泡气体交换，从而引起动脉血氧不足以及呼吸窘迫,具有并发症多、死亡率高的特点(死亡率为30%-40%)[1，2]。

小鼠海马神经元细胞小鼠海马神经元细胞产品说明：为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。

派瑞金提供的小鼠海马神经元细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。

研发的小鼠海马神经元细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。

同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。

注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。

3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。

4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。

5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。

小鼠海马神经元细胞产品简介：产品名称：小鼠海马神经元细胞(Mouse hippocampal neuron cells)组织来源：小鼠海马组织区产品规格：5×105cells/25cm2 培养瓶小鼠海马神经元细胞简介：海马椎体神经元是海马区的主要成分，主要功能是参与近期记忆、情绪及内脏功能调节、是老年性痴呆、癫痫等疾病的主要病灶之一。

海马神经元细胞培养是研究神经细胞生物学特性和外源干扰因素作用(细胞因子)的有效细胞模型,其在神经生物学,发育生物学体外实验研究中已被广泛应用。

本公司生产的小鼠海马神经元细胞采用胰酶消化制备而来，细胞总量约为 5×105 个/瓶，细胞纯度可达 80%以上，且不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

小鼠骨髓来源内皮祖细胞小鼠骨髓来源内皮祖细胞产品说明：为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。

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2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。

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小鼠骨髓来源内皮祖细胞产品简介：产品名称：小鼠内皮祖细胞组织来源：小鼠骨髓产品规格：5×105cells / 25cm2培养瓶小鼠骨髓来源内皮祖细胞简介：小鼠骨髓内皮祖细胞来源于成年大鼠骨髓组织，是血管内皮细胞的前体细胞，亦称为成血管细胞(angioblast)，在生理或病理因素刺激下，可从骨髓动员到外周血参与损伤血管的修复。

体外培养的小鼠骨髓来源的内皮祖细胞呈圆形、短梭形或不规则形，可向细胞密度低的方向伸出1至数个足突，细胞融合后呈铺路石状排列。

本公司生产的小鼠内皮祖细胞采用密度梯度离心后，流式筛选制备而，细胞总量约为5×105cells/瓶，DIL-acLDL免疫荧光鉴定细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

中南大学学报（医学版）J Cent South Univ (Med Sci)2021,46(8)血管平滑肌细胞凋亡对动脉粥样硬化作用的研究进展杨思琪，王健，童兰，齐灵垚，陈旭，蔡琳（西南交通大学附属医院，成都市第三人民医院心内科，成都610031）[摘要]血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells ，VSMCs)是血管壁中的主要细胞类型，其凋亡参与了动脉粥样硬化(atherosclerosis ，AS)的发生和发展。

在早期AS 中，VSMCs 凋亡可作为新生内膜增生和管腔狭窄的代偿机制，然而这一过程又会加速AS 斑块破裂，造成严重的心血管疾病并发症。

在AS 的发生和发展中，对VSMCs 凋亡的相关基因、RNA 及其诱导因素的研究可为不同时期AS 的预防和治疗提供科学依据。

[关键词]血管平滑肌细胞；动脉粥样硬化；凋亡Research progress in apoptosis of vascular smoothmuscle cells in atherosclerosisYANG Siqi,WANG Jian,TONG Lan,QI Lingyao,CHEN Xu,CAI Lin(Department of Cardiology,Affiliated Hospital of Southwest Jiaotong University;Third People's Hospital of Chengdu,Chengdu 610031,China)ABSTRACT Vascular smooth muscle cell (VSMC)is one of the main cell types in blood vessel wall,and the VSMC apoptosis is involved in the development of atherosclerosis (AS).In early AS,the apoptosis of VSMC is regarded as a compensatory mechanism for neointimal hyperplasia and lumen stenosis.However,this process will also accelerate the rupture of atherosclerotic plaques,resulting in serious cardiovascular complications.More studies on the related genes,RNA,and inducing factors of VSMCs apoptosis in occurrence and development of AS can provide scientific strategies for prevention and treatment of AS in different periods.KEY WORDS vascular smooth muscle cells;atherosclerosis;apoptosisDOI ：10.11817/j.issn.1672-7347.2021.200858/xbwk/fileup/PDF/202108872.pdf收稿日期(Date of reception)：2020-10-22第一作者(First author)：杨思琪,Email:554396467@,ORCID:0000-0001-8636-2181通信作者(Corresponding author)：蔡琳,Email:cailinwm@,ORCID:0000-0003-3146-2251基金项目(Foundation item)：四川省科技计划项目(2020YJ0483，2021YJ0215)。

血管平滑肌细胞表型转化及相关信号转导机制探讨①张　健　综述　蔡生业　审校(山东省医学科学院基础所,　山东　济南　250062)E x p l o r e o nP h e n o t y p e T r a n s f o r m i n g a n d R e l a t e dMe c h a n i s m s o f S i g n a l T r a n s d u c t i o ni n V a s c u l a r S m o o t hMu s c l e C e l lZ H A N G J i a n,　C A I S h e n g-y e(I n s t i t u t e o f B a s i c M e d i c i n e,S h a n g d o n gA c a d e m y o f M e d i c a l S c i e n c e s,　J i n a n　250062,　C h i n a)文章编号:1004-3934(2005)02-0185-05 中图分类号:Q813 文献标识码:A 摘要:　血管平滑肌细胞增殖是血管成形术后再狭窄、动脉粥样硬化斑块形成的病理基础。

血管平滑肌细胞增殖能力与其表型转化密切相关。

对从血管平滑肌细胞表型转化的主要特征、标志物、信号转导机制进行了探讨。

关键词:　表型转化;信号转导;血管平滑肌细胞;M A P K级联途径;P I-3-K通路A b s t r a c t:　V a s c u l a r s m o o t hm u s c l e c e l l p r o l i f e r a t i o n i s ap a t h o l o g i c a l b a s i s o f r e s t e n o s i s a f t e r p e r c u t a n e o u s t r a n s l u m i n a l c o r o n a r ya n-g i o p l a s t y a n da t h e r o s c l e r o t i c l e s i o nf o r m a t i o n.V a s c u l a r s m o o t hm u s c l e c e l l p r o l i f e r a t i v ea b i l i t yi s s i g n i f i c a n t l ya s s o c i a t e dw i t hi t s p h e n o t y p e t r a n s f o r m i n g.T h i s a r t i c l e e x p l o r e s m a i n c h a r a c t e r,m a r k e r s,s i g n a l t r a n s d u c t i o nm e c h a n i s m o f p h e n o t y p e t r a n s f o r m i n g.K e yw o r d s:　P h e n o t y p e t r a n s f o r m i n g;S i g n a l t r a n s d u c t i o n;V a s c u l a r s m o o t h m u s l e c e l l;M A P Kc a s c a d e p a t h w a y;P I-3-Kp a t h w a y 血管平滑肌细胞(v a s c u l a r s m o o t hm u s l ec e l l, V S M C)在胚胎发生期来自中胚层,在以后的发育过程中,逐渐分化为不同的细胞群,并获得具有成年特征的分化表型。

人主动脉平滑肌细胞提取步骤提取人主动脉平滑肌细胞（HASMC）通常涉及以下几个步骤：1.取材与预处理：取得新鲜的人体胸主动脉组织，通常来自手术切除或其他医学程序中获得的废弃标本，并迅速放入含冰的Hanks液或其他生理盐水溶液中以维持组织活性并减少酶活性。

2.组织清洗与分离：1)在无菌条件下，将动脉移至冰上进行操作。

2)使用解剖剪和手术刀片沿着血管长轴方向剪开主动脉。

3)用手术刀片轻轻刮除内皮细胞层，以获取不含内皮细胞的中膜组织。

3.酶消化与组织分散：1)将分离出的中膜组织切成适当大小的片段（约1 cm²），然后将其置于含有胰蛋白酶和EDTA混合液的酶消化液中。

2)将此组织块放置在恒温振荡器中，在37°C下进行消化，时间根据组织情况调整，一般为45分钟至1小时左右，直至观察到组织变透明、结构松散。

3)定时检查消化程度，一旦达到适宜的消化状态（细胞开始脱离组织块），立即停止酶消化。

4.终止消化与洗涤：1)用含Ca2+、Mg2+的HBSS或无钙镁的PBS溶液冲洗中止酶的作用。

2)将分离出的细胞继续剪碎，转移到6孔板内加入复合酶液进行二次消化，期间适时轻微摇动培养皿促进细胞释放。

3)当细胞开始游离出来后，加入含有较高血清浓度（如10% FBS）的平滑肌细胞培养基终止消化过程。

5.细胞收集与纯化：1)将消化后的细胞悬浮液通过低速离心（如800-1000 rpm，几分钟）来沉淀细胞。

2)去除上清液，将细胞沉淀重悬于新鲜的平滑肌细胞培养基中。

3)过滤或使用移液管吹打混匀去除未消化的组织碎片，将细胞悬液接种到预处理过的培养皿或培养瓶中。

6.细胞培养：1)将细胞置于37°C、5% CO2的细胞培养箱中培养。

2)观察细胞贴壁及生长情况，当细胞汇合度到达一定程度时，根据需要进行传代或冻存。

以上步骤是基于实验室常规方法的一般流程，具体细节可能因实验条件和研究需求的不同而有所变化。