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仙人掌多糖提取纯化及其抗凝血活性研究蔡为荣;顾小红;汤坚【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2010(031)006【摘要】对仙人掌多糖的提取、纯化及其抗凝血活性进行研究,并采用响应面分析法对提取工艺进行优化.结果表明:曲面回归方程拟合性好:优化工艺为提取温度75℃、提取时间3.63h,液料比3.42:1(mL/g),提取2次,粗多糖得率为0.655%(湿基);粗多糖经阴离子琼脂糖离子交换层析和凝胶层析分离纯化其得到3个多糖组分WSP1、WSP2a和WSP3,重均分子量分别为2.32×10~6、1.24×10~6和7.92×10~6.对氨基苯甲酸(PMP)衍生化高效液相色谱法检测表明:WSP1主要成分为半乳糖;WSP2a由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸组成,含量(质量分数)分别为6.3%、32.3%、12.9%、1.5%、4.8%、37.1%、0.7%、4.4%;WSP3成分主要有阿拉伯糖、半乳糖和木糖以及少量鼠李糖、甘露糖、糖醛酸.纤维蛋白原转化纤维蛋白的抑制实验初步表明,仙人掌多糖组分WSP2a和WSP3具有抗凝血活性.【总页数】6页(P131-136)【作者】蔡为荣;顾小红;汤坚【作者单位】安徽工程科技学院生化工程系,安徽,芜湖,241000;江南大学,食品科学与技术国家重点实验室,江苏,无锡,214122;江南大学测试中心,江苏,无锡,214122;江南大学,食品科学与技术国家重点实验室,江苏,无锡,214122;江南大学测试中心,江苏,无锡,214122【正文语种】中文【中图分类】Q946.3义献【相关文献】1.仙人掌多糖结构分析及抗凝血活性研究 [J], 蔡为荣;谢亮亮;汤坚2.仙人掌多糖结构分析及抗凝血活性研究（英文） [J], 蔡为荣;谢亮亮;陶鹏飞;崔武卫3.双歧杆菌RH胞外多糖提取纯化及体外抗凝血活性评价 [J], 李辉;宋居易;刘蕾;李平兰4.仙人掌多糖药理作用、提取纯化及剂型研究进展 [J], 袁清霞;赵龙岩;程杰;曾富华5.枸杞多糖的提取纯化及体内外抗氧化活性研究 [J], 邱树磊;胡国柱;陈玉库;刘月岗;吕凤霞;武彩红;陈晓兰;胡元亮因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
食用仙人掌多糖的分离纯化及无糖食品的研发的开题报告一、研究背景和意义食用仙人掌多糖（cactus polysaccharides，CP）是一种具有广泛生物活性的天然多糖，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、降血糖、降血脂等多种功效，是一种潜在的功能性食品和保健产品原料。
目前，国内外研究食用仙人掌多糖的研究主要集中于其药理作用和生物活性等方面，但对其分离纯化和应用开发却鲜有报道。
随着人们生活水平的提高，越来越多的消费者开始关注健康饮食，对低糖、高纤维、高活性成分的食品需求增加，从而推动了功能性食品和保健产品的发展。
因此，开发含食用仙人掌多糖的无糖食品，既可以满足消费者的健康需求，又能够拓展食品市场，具有广阔的市场前景和经济价值。
二、研究内容和方法本研究立足于食用仙人掌多糖的分离纯化和应用开发，包括以下两个方面内容：1. 食用仙人掌多糖的分离纯化采用水浸法或酸法从仙人掌中提取多糖，利用离子交换层析等方法进行多糖的分离纯化，得到纯度较高的食用仙人掌多糖。
2. 含食用仙人掌多糖的无糖食品的研发将食用仙人掌多糖加入无糖食品中，如饮料、果冻、口香糖、奶糖等，探究食用仙人掌多糖对无糖食品的稳定性、口感、感官等性质的影响，并进行产品的检测、分析和评价。
三、研究预期结果及意义本研究的预期结果如下：1. 成功从仙人掌中分离纯化得到食用仙人掌多糖，并对其进行性质表征和活性评价。
2. 基于食用仙人掌多糖开发了含食用仙人掌多糖的无糖食品，并对其食品性质和功能性进行评价。
本研究的意义在于：1. 丰富了食用仙人掌多糖的应用领域，开发了新型的功能性食品和保健产品原料。
2. 推动了仙人掌资源的开发和利用，并提高了其附加值和经济效益，具有重要的社会和经济意义。
3. 为进一步深入研究食用仙人掌多糖的生物活性、药理作用等方面奠定了基础。
四、参考文献1. 马静，王玉英，陈乃仁，等. 仙人掌多糖的提取分离及其生理活性[J]. 食品与发酵工业，2017，43（10）：208-211.2. Zhao L, Chen X, Cao W, et al. A polysaccharide from cactus activates AKT/FOXO1 pathway in liver and heart of type 2 diabeticrats[J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2018, 118(PtA): 144-153.3. Zhang Z, Li S, Li L, et al. Cactus polysaccharides protect against endotoxin shock by modulating the host inflammatory response[J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2015, 72: 1478-1486.。
多糖的提取和纯化多糖的提取和纯化摘要本文较详细地介绍了多糖的提取和纯化方法，为多糖的研究和生产提供参考依据。
关键词多糖；提取；纯化；活性炭多糖（polysacharides，PS），又称多聚糖，是由10个以上的单糖通过苷键连接而成的，具有广泛生物活性的天然大分子化合物。
它广泛分布于自然界高等植物、藻类、微生物（细菌和真菌）与动物体内。
20世纪60年代以来，人们逐渐发现多糖具有复杂的、多方面的生物活性和功能[1]：(1)多糖可作为广谱免疫促进剂，具有免疫调节功能，能治疗风湿病、慢性病毒性肝炎、癌症等免疫系统疾病，甚至能抗AIDS病毒[2]。
如甘草多糖具有明显的抗病毒和抗肿瘤作用[10]，黑木耳多糖、银杏外种皮多糖和芦荟多糖可抗肿瘤和增强人体免疫功能[3-5]。
(2)多糖具有抗感染、抗放射、抗凝血、降血糖、降血脂、促进核酸与蛋白质的生物合成作用。
如柴胡多糖具有抗辐射，增强免疫功能等生物学作用[6]，麦冬多糖具有降血糖及免疫增强作用[7-8]，动物黏多糖具有抗凝血、降血脂等功能[9]。
(3)多糖能控制细胞分裂和分化，调节细胞的生长与衰老。
如爬山虎多糖具有抗病毒和抗衰老作用[10]，银杏外种皮粗多糖具有抗衰老、抗过敏、降血脂、止咳祛痰、减肥等功能[11]。
另外，多糖作为药物，其毒性极小，因而多糖的研究已引起人们极大的兴趣。
由于多糖具有的生物活性与其结构紧密相关，而多糖的结构又是相当复杂的，所以在这一领域的研究相对缓慢。
但人们在多糖的分离提取与纯化方面已做出了不少工作。
1. 多糖的提取[12]1.1 热水浸提法：1.1.1多糖提取条件的优选根据文献报道[13]：影响热水浸提多糖的因素主要有提取时间、提取次数、溶剂体积、浸提温度、pH值、醇析浓度和植物颗粒大小等。
在试验前对上述多种因素利用正交实验法做出优选，才能选出最佳提取方案。
1.1.2其步骤为：原料→粉碎→脱脂→粗提（2－3次）→吸滤或离心→沉淀→洗涤→干燥首先除去表面脂肪。
1.多糖的提取方法生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3 大类。
多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位，决定在提取之前是否做预处理。
动物多糖和微生物多糖多有脂质包围，一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂，释放多糖。
植物多糖提取时需注意一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类，在提取前，应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理，目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。
1．1溶剂法1．1．1水提醇沉法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法。
多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂。
用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70 %左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5 h，多糖的质量分数和得率均较高。
影响多糖提取率的因素有：水的用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。
水提醇沉法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低，安全，适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。
但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后续的分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也不高。
1．1．2酸提法为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展了酸提取法。
如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH 值下难以溶解，可用乙酸或盐酸使提取液成酸性，再加乙醇使多糖沉淀析出，也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。
由于H＋的存在抑制了酸性杂质的溶出，稀酸提取法提取得到的多糖产品纯度相对较高，但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂，且酸会对容器造成腐蚀，除弱酸外，一般不宜采用。
因此酸提法也存在一定的不足之处。
1．1．3碱提法多糖在碱性溶液中稳定，碱有利于酸性多糖的浸出，可提高多糖的收率，缩短提取时间，但提取液中含有其它杂质，使粘度过大，过滤困难，且浸提液有较浓的碱味，溶液颜色呈黄色，这样会影响成品的风味和色泽。
高效凝胶渗透色谱法测定多糖纯度及分子量一、本文概述多糖作为一种重要的生物大分子，广泛存在于自然界中，具有多种生物活性，如免疫调节、抗病毒、抗肿瘤等。
因此，对多糖的纯度及分子量的准确测定对于其研究和应用具有重要意义。
高效凝胶渗透色谱法（High Performance Gel Permeation Chromatography，HPGPC）是一种常用的多糖纯度及分子量测定方法，具有操作简便、分辨率高、重现性好等优点。
本文旨在介绍HPGPC法测定多糖纯度及分子量的原理、实验步骤、数据处理及注意事项，以期为多糖的研究和应用提供参考。
二、实验材料与方法1 多糖样品：选择待测定的多糖样品，确保其来源清晰，无杂质污染。
2 高效凝胶渗透色谱（HPGPC）柱：选择适当型号的HPGPC柱，以适用于待测多糖样品的分子量范围。
3 流动相：通常选用适当的溶剂或缓冲液作为流动相，以保证多糖样品在色谱柱上的良好分离。
4 检测器：使用示差折光检测器（RI）或紫外检测器（UV）等，以监测多糖样品在色谱柱上的分离情况。
5 其他试剂与仪器：包括样品制备所需的试剂、色谱仪、注射器、进样针等。
1 样品制备：将多糖样品溶解在适当的溶剂中，制备成一定浓度的溶液，以便进行后续分析。
2 色谱条件优化：通过预实验，优化色谱条件，包括流动相的选择、流速、柱温等，以获得最佳的分离效果。
3 进样与分离：将制备好的多糖样品溶液通过注射器注入HPGPC 仪中，通过色谱柱进行分离。
在分离过程中，利用检测器监测多糖样品的分离情况。
4 数据收集与处理：收集分离过程中的数据，利用相应软件对数据进行处理和分析，包括分子量计算、纯度分析等。
5 结果评价：根据分析结果，评价多糖样品的纯度及分子量分布情况，为后续研究提供依据。
通过以上实验材料与方法，可以高效地进行多糖纯度及分子量的测定，为后续多糖的结构研究、质量控制等提供重要支持。
三、实验结果与讨论在本研究中，我们采用了高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）对多糖样品的纯度和分子量进行了测定。
仙人掌多糖提取工艺优化及其口服液的制备本文采用酶法处理优化了仙人掌多糖的提取工艺,研究了仙人掌多糖的分子量分布及各组分的生物活性。
制备了仙人掌多糖口服液,并对其稳定性进行了初步分析。
1.酶法制备仙人掌多糖以仙人掌多糖得率为考察指标,采用正交试验法分别研究了纤维素酶、果胶酶的作用温度、作用时间、溶液pH及酶浓度对仙人掌多糖得率的影响。
并与常温水提法进行了比较。
结果表明:纤维素酶提取的最佳条件为作用温度45℃、作用时间1.0 h、纤维素酶浓度0.4%、溶液pH 5.0;果胶酶提取的优化条件为作用温度45℃、作用时间2.0 h、果胶酶浓度0.6%、溶液pH 3.50。
其中果胶酶法提取增加仙人掌多糖得率更明显,最优组合得率高达13.85%。
与常温水提法（7.94%）相比增加了74.43%,果胶酶法提取具有提取时间短、得率高等优点。
2.仙人掌多糖的分子量分布研究本文通过分级醇沉、分步醇沉和超滤法研究了仙人掌多糖的分子量分布。
结果表明:分级醇沉的浓度对应的得率随醇浓度的升高而呈增加趋势;糖的含量变化起伏较大,醇浓度为10%时所得多糖含量比较低,醇浓度为40%和80%时所得多糖含量较高;分步醇沉的醇浓度为20%时沉淀下来的多糖所占比例最大,醇浓度达到90%时大部分多糖都可以沉淀下来;而多糖含量除90%醇浓度时较低外,其余相差不大;超滤后仙人掌多糖大部分分布在10kDa以下（72.3%）;100 kDa 以上部分也较多,占24.5%,其余各部分含量很少。
仙人掌多糖生物活性以100 kDa 以上部分最高,对·OH的清除率为55.56%,为5 kDa以下部分的10.23倍。
5 kDa以下部分生物活性最低,其余各部分仙人掌多糖的生物活性,整体随分子量的增加有所提高。
3.仙人掌多糖口服液的研制以仙人掌多糖为原料,采用正交设计确定口服液中关键成分的配比及制备工艺条件;采用强光照射、高温、Rogers加温加速试验对口服液的稳定性进行了研究。
第1篇一、实验目的1. 学习多糖的提取、分离和纯化方法。
2. 掌握多糖的鉴定技术。
3. 了解多糖的化学性质和生物活性。
二、实验原理多糖是一类由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的生物大分子，广泛存在于植物、动物和微生物中。
多糖具有多种生物活性，如抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等。
本实验以某植物为原料，通过水提醇沉法提取多糖，采用离子交换层析和凝胶色谱法对多糖进行分离纯化，并对其结构进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：某植物、无水乙醇、蒸馏水、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氢氧化钠、硫酸铜、苯酚、硫酸、考马斯亮蓝G-250、氯化钡、明胶等。
2. 仪器：分析天平、电热恒温水浴锅、旋转蒸发仪、高效液相色谱仪、凝胶色谱仪、紫外-可见分光光度计、磁力搅拌器、离心机、层析柱等。
四、实验方法1. 多糖提取（1）将某植物样品干燥、粉碎，过60目筛。
（2）称取2g样品，加入50mL蒸馏水，在80℃水浴中提取2h。
（3）将提取液过滤，滤液浓缩至一定体积。
（4）加入无水乙醇，使溶液中多糖沉淀。
（5）离心分离，收集多糖沉淀。
2. 多糖分离纯化（1）将多糖沉淀溶解于蒸馏水中，加入一定量的氯化钠溶液，调节pH值至7.0。
（2）将溶液通过DEAE-Sepharose Fast Flow层析柱，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液。
（3）将洗脱液浓缩，加入一定量的无水乙醇，使多糖沉淀。
（4）离心分离，收集多糖沉淀。
（5）将多糖沉淀溶解于蒸馏水中，通过Sephadex G-100凝胶色谱柱，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液。
（6）将洗脱液浓缩，加入一定量的无水乙醇，使多糖沉淀。
（7）离心分离，收集多糖沉淀。
3. 多糖鉴定（1）采用苯酚-硫酸法测定多糖的糖含量。
（2）采用考马斯亮蓝G-250法测定多糖的蛋白质含量。
（3）采用硫酸-咔唑法和氯化钡-明胶法测定多糖中的糖醛酸和硫酸基含量。
（4）采用高效液相色谱法测定多糖的分子量。
五、实验结果与分析1. 多糖提取提取得到的粗多糖得率为5%。
文章篇号:1007-2764(2006)02-0138-044仙人掌多糖的提取、分离纯化及GPC法测定其分子量金鑫，赖凤英(华南理工大学轻工与食品学院,广东广州510640)摘要：研究了仙人掌多糖水提法的最佳工艺条件,以及仙人掌多糖的分离纯化。
试验结果表明,提取液用Savag法脱蛋白后，采用Sephacryl S-400柱层析纯化，得到仙人掌多糖OP，经过高效凝胶渗透色谱和常压凝胶柱色谱分析表明，OP为均一多糖，高效液相凝胶色谱法测定OP分子量(Mw)为172591Da。
关键词：仙人掌多糖；提取；分离纯化；分子量测定Extraction、Isolation and Purification of Polysaccharides in Opuntia and Determination of its molecular weight by GPC methodJin Xin, Lai Feng-ying(College of light industry and Food, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China) Abstract The extraction technology、separation and purification of the polysaccharide from opuntia was studied in this paper. By using Savag method, almost all protein was removed from the extracted juice. Then the polysaccharide was purified by Sephacryl S-400 gelcolumn chromatography, and OP was gained. Its homogeneity is verified by HPGPC and Sephadex G-200 column chromatography. And the molecular weight of OP is 172591Da by the determination of HPGPC.Keywords: Opuntia; Polysaccharide; Extraction; Isolation; Purification; Determination of molecular weights仙人掌，别名仙巴掌、观音掌、霸王树、龙舌等，为仙人掌科仙人掌属植物，原产于美洲、墨西哥一带，广泛分布于非洲、亚洲、美洲等热带和亚热带地区[1]。
仙人掌属肉质植物，具有较强的药理活性，如抗炎作用、降血糖作用、保护细胞免受损伤作用等[2]。
为探明仙人掌的药理作用及药理活性的物质基础，实验对仙人掌多糖的提取工艺和分离纯化两方面进行研究。
1 材料和方法1.1 材料和试剂米邦塔仙人掌：购于海南省仙科农业开发有限公司，晒干，磨粉备用。
试验所用3，5－二硝基水杨酸，葡萄糖，苯酚，硫酸、氯仿、正丁醇、磷酸二氢钾等均为分析纯。
Sephacryl S-400 HR凝胶填料：Amersham公司。
Sephadex G-200凝胶填料：Pharmacia公司。
1.2试验仪器旋转蒸发仪，电热恒温水浴锅，Waters 2410示差折光检测器，Waters 717plus自动进样器，Waters15收稿日期:2005-12-02作者简介：金鑫，，在读研究生，天然产物提纯分离以活性研究 25 HPLC泵，柱温箱，S21-6型电子恒温水浴锅,80-2型离心机，HL-2A恒流泵,DBS-100电脑全自动部份收集器,Unico-UV21202PC紫外-可见分光光度计、层析记录仪。
1.3多糖含量分析方法多糖含量＝(总糖含量－还原糖含量)×100％；总糖：采用苯酚－硫酸法测定，以葡萄糖为标准；还原糖：采用3，5－二硝基水杨酸比色法测定。
1.4 多糖提取方法准确称取1g仙人掌干粉，加入一定量蒸馏水，置于烧杯，放入恒温水浴中提取多糖一定时间后，抽滤，取滤液 1ml，测量总糖、还原糖含量，计算多糖含量。
先做单因素试验，然后根据单因素试验结果进行正交试验。
1.5 仙人掌多糖提取工艺条件研究热水浸提工艺涉及三个关键条件：提取时间、提取温度和液料比。
在单因素实验的基础上，针对这些因素的影响规律，采用正交法确定水提法提取多糖的最佳提取条件。
1.5.1 提取时间的影响在确定固液比为1：50，提取温度为60℃不变的138条件下，比较不同提取时间对多糖提取率的影响，以选择最佳提取时间。
1.5.2 提取温度的影响固液比仍为1：50 ，浸提时间由上一实验确定，分别在不同温度条件下浸提，根据其多糖提取率确定最佳提取温度。
1.5.3 液固比的影响在上述实验确定的浸提时间及温度下，选择固液比分别为1：30、1：40、1：50 、1：60、1：70及1：80，根据其多糖提取率确定最佳固液比。
1.5.4 正交试验设计1.6 蛋白质的去除仙人掌浸提液中除了含有大量的多糖外,还含有一定量的蛋白质及其他非糖杂质。
目前用于多糖除蛋白的方法有Savag法、三氟三氯乙烷法、及三氯乙酸(TCA)法[3], 其中Savag法去蛋白虽然效率不高，但条件温和，不会引起多糖的降解。
因此，本实验采用Savag法反复除蛋白。
1.7 仙人掌多糖的凝胶柱层析纯化[4]上样量10mg,上样体积1mL,上样到已用0.2 moL/L的Nacl溶液平衡好的Sephacryl S-400 HR柱(1.6×30cm)上，用0.2moL/L的Nacl溶液洗脱, 流速为0.2ml/min ,用自动分部收集器收集洗脱液, 每管收集2ml，以苯酚-硫酸法跟踪检测。
合并主峰部位，透吸，减压浓缩，乙醇沉淀，冷冻干燥。
1.8 多糖纯度鉴定1.8.1 高效液相凝胶色谱（HPGPC）法将仙人掌多糖溶于0.02moL/L磷酸二氢钾溶液，制成1.0mg/ml的溶液，离心过滤，进样20µL，流动相为0.02moL/L磷酸二氢钾溶液，流速为0.6ml/min，Waters 2410示差折光检测器检测。
1.8.2 常压凝胶柱色谱法[5]上样量5mg,上样体积1mL,上样到已用0.1mol/L 的Nacl溶液平衡好的Sephadex G-200柱(1.0×50cm)上，用0.1moL/L的Nacl溶液洗脱, 流速为0.2mL/min,用自动分部收集器收集洗脱液, 每管收集1ml，以苯酚-硫酸法跟踪检测。
1.9 凝胶渗透色谱法（GPC）测定多糖分子量[6]色谱条件：TSK G-5000 PW×L凝胶柱，TSK G-3000 PW×L凝胶柱；流动相为0.02mol/LKH2PO4溶液，PH6.0；流速0.6mL/min；柱温40。
C；进样20µL；标样为已知分子量的葡聚糖标准品（Dextran，分子量为4400Da，21400Da，124000Da，196000Da，277000Da，401000Da，Sigma公司）；检测器为Waters 2410示差折光检测器。
测定方法：将已知分子量的葡聚糖标准品分别用流动相配制成1.0mg/ml的溶液，进样量为20µL，记录色谱图，用BreezeGPC软件以标准葡聚糖分子量的对数logM W对洗脱体积Elution V olume进行回归处理[7]。
将多糖样品用流动相配制成1.0mg/ml的溶液，进样20µL，测得多糖样品的保留时间，利用标准曲线求得多糖分子量。
2 结果与讨论2.1 正交试验确定最佳提取工艺条件影响水提法提取多糖提取得率的因素很多，如提取时间、温度、固液比等，在单因素实验的基础上，针对这些因素的影响规律，采用正交法确定水提法提取多糖的最佳提取条件，因素水平见表１，正交实验结果见表2和表3。
表１ 仙人掌多糖提取因素水平表水平时间（h）温度(。
C) 固液比Ⅰ0.5(A1) 70（B1）1:40(C1)Ⅱ 1 (A2) 80（B2）1:50(C2)Ⅲ 2 (A3) 90（B3）1:60(C3)表2 水提法提取仙人掌多糖提取正交结果 实验号 A B C 误差多糖得率(%)1 A1B1C11 3.472 A1B2C22 4.763 A1B3C33 5.404 A2B2C31 6.075 A2B3C12 5.786 A2B1C23 4.427 A3B3C21 5.418 A3B1C32 4.569 A3B2C13 5.30表3 正交实验结果方差分析表方差来源平方和自由度均方F值临界值A 1.19 2 0.6513.57B 2.27 2 1.1425.33F0.05(2,2)=19C 0.74 2 0.427.43F0.01(2,2)=99误差0.10 2 0.06从表3结果可知，影响多糖提取率得因素按影响程度大小排列分别为B＞A＞C。
且由F 值与临界值的比较知提取温度B 对提取率的影响是显著的。
因此，由以上数据可知，水提仙人掌多糖的最佳工艺是：A２B2C3，即提取温度为８０℃，提取时间为1小时，液固比为1：60时为最优的工艺条件。
但由C 因素（固液比因素）对提取率的影响并不明显，所以可以选取固液比较小的工艺条件，有利于后步骤的浓缩提取液，139另外提取时间也可以选择为0.5小时，最佳的工艺条件为A1B2C1。
2.2 蛋白质的去除采用Sevag法，即用氯仿：正丁醇=4：1混合液加至等体积的粗多糖水溶液中，充分振摇，样品中的游离杂蛋白与氯仿-正丁醇生成凝胶物，离心，分去水层与溶剂层交界处的变性蛋白，如此反复数次，直至溶剂层与水的界面无乳白色沉淀为止。
然后用乙醇沉淀，冷冻干燥。
2.3 Sephacryl S-400 HR凝胶柱层析纯化Sephacryl S-400 HR凝胶柱上层析，用0.2mol/L 的Nacl溶液进行洗脱, 用层析记录仪在280nm处直接检测洗脱液的蛋白质含量，以及苯酚-硫酸法在490nm 处跟踪检测每管洗脱液，以洗脱时间对吸光度值作图，为单一对称的洗脱峰，表明OP为均一多糖。
图2 OP的HPGPC色谱 图3 OP的Sephadex G-200柱洗脱曲线 2.5 分子量的测定Dextran系列标准品的GPC标准曲线图图5 OP的GPC色谱图及结果BreezeGPC软件处理，以标准葡聚糖分W对洗脱体积Elution V olume进行回Dextran系列标准品的GPC标准曲线图,程为logM W=1.03e+002−1.86e+001V+2 −2.51e−002V3(其中V表示洗脱体积。
