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HPLC法测定益母草不同制剂中水苏碱严优芍1,李卫民1*,高 英1,李其凤2,伍淑华2X(1.广州中医药大学新药开发研究中心,广东广州 510405; 2.广州中医药大学科技产业园,广东广州 510445) 益母草为唇形科植物益母草L eonurus j ap o-nicus Ho utt.的干燥全草,是中医妇科常用药。
益母草中主要有效成分为水苏碱、益母草碱等生物碱类成分[1]。
含益母草制剂大多以水苏碱作为定量指标,其测定方法有雷氏盐剩余比色法(《中国药典》2005年版一部益母草项下)、雷氏盐沉淀溶解比色法(《中国药典》1977年版一部)、紫外分光光度法[2]、薄层扫描法[3]、HPLC法[4,5]等。
本实验采用HPLC法对含益母草制剂中的盐酸水苏碱进行测定,结果表明,该方法较其他方法精确可靠,从而为益母草及其制剂的质量控制提供了参考方法。
1 仪器与试药 W aters高效液相色谱系统:Waters2695泵, Waters2996二极管阵列检测器,Empow er色谱处理系统。
Aglient8453—E紫外分光光度计。
盐酸水苏碱对照品(批号110712—200306,中国药品生物制品检定所),益母草药材购于广州中医药大学大药房,各种益母草制剂均为市售,乙腈为色谱纯,其他试剂为分析纯,水为重蒸水。
2 方法与结果2.1 色谱条件:色谱柱为Water s-NH2色谱柱(250 mm×4.6m m,5L m),流动相为乙腈-水(80∶20),检测波长为202nm,体积流量为1.0mL/m in,柱温为25℃。
2.2 溶液的配制2.2.1 对照品溶液的制备:精密称取105℃干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品10mg,置10mL量瓶中,加甲醇使溶解,并加至刻度,摇匀,即得。
2.2.2 供试品溶液的制备:取一定量样品(益母草药材6g、益母草流浸膏10mL、益母草膏10g、益母草颗粒15g、益母草片0.6g、益母草胶囊1g、复方益母草膏4g、调经益母片6g、慈航片36g、抗宫炎片12g),除益母草流浸膏、益母草膏和复方益母草膏外,益母草药材粉末(过3号筛)、益母草颗粒(研细)、益母草胶囊内容物和益母草各种片剂(去包衣后研细),均置具塞锥形瓶中,精密加入10倍量乙醇,称定质量,超声处理30min,放冷,再称定质量,用乙醇补足减失的质量,摇匀,滤过,精密量取半量续滤液,回收溶剂,残渣加水溶解。
HPLC-ELSD测定益母颗粒中盐酸水苏碱的含量
冯旭;杜成智;梁臣艳;侯小涛;王胜波;覃洁萍
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】2008(030)005
【摘要】益母草为唇形科益母草属植物（Leonurus japonicu Houtt．）的地上
部分，始载于《神农本草经》，其味辛、微苦，性微寒，人心包肝经，具有活血调瘀、利尿消肿之功效，是中医妇科良药。
对益母草中化学成分进行大量研究后发现，其主要化学成分为生物碱类、二萜类、甾醇、黄酮类、有机酸、多种微量元素及脂肪酸类等。
【总页数】2页(P附2-附3)
【作者】冯旭;杜成智;梁臣艳;侯小涛;王胜波;覃洁萍
【作者单位】广西中医学院,广西,南宁,530001;广西中医学院,广西,南宁,530001;广西中医学院,广西,南宁,530001;广西中医学院,广西,南宁,530001;广西中医学院,广西,南宁,530001;广西中医学院,广西,南宁,530001
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.HPLC-ELSD测定八珍益母丸中水苏碱的含量 [J], 蒋歆;丁永辉;魏学冰;杨锡
2.高效液相色谱法测定益母颗粒中盐酸水苏碱含量 [J], 钟妍
3.薄层扫描法测定八珍益母膏中盐酸水苏碱的含量 [J], 林燕翔;樊春燕
4.HPLC法测定益母丸中盐酸水苏碱的含量 [J], 王艳华;冯翰;冯伟
5.HPLC-ELSD法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱的含量 [J], 王晓燕;王舒
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RP-HPLC法测定益母草不同药用部位中盐酸水苏碱的含量(1)【摘要】目的测定益母草不同药用部位中盐酸水苏碱的含量,以控制药材质量。
方法采用HPLC法,色谱柱为磺酸基键合硅胶,流动相为20 mmol/L磷酸二氢钠溶液(含有0.04%三乙胺和0.15%磷酸),柱温25 ℃；检测波长192 nm,比较益母草花、茎、叶中盐酸水苏碱的含量。
结果益母草中盐酸水苏碱的含量叶中最高,茎中最少。
结论购买益母草药材以叶(包括碎叶片)多者为佳。
【关键词】益母草；盐酸水苏碱；高效液相色谱法Key words：Herba Leonuri；stachydrine hydrochloride；HPLC益母草为唇形科植物益母草Leonurus japonicus Houtt.的新鲜或干燥地上部分。
鲜品春季幼苗期至初夏花前期采割；干品夏季茎叶茂盛、花未开或初开时采割,晒干,或切段晒干[1]。
经深入安徽亳州产地考察得知,在益母草的产地加工过程中,为使商业外观好看,均进行“风选”,即将破碎叶片及果穗筛去,以外观齐整、方茎为主出售,导致以盐酸水苏碱为代表的有效物质生物碱含量下降。
由于药用部位是影响药材质量的主要因素之一,因此,我们考察了益母草不同药用部位中盐酸水苏碱的含量,以控制药材的质量。
1 仪器与试药Angilent HP1100高效液相色谱仪；G1314A紫外检测器；KQ-500DE型超声仪。
益母草药材购于广州广弘药材有限公司,经南方医科大学中医药学院药用植物与鉴定教研室陈兴兴鉴定为益母草 Leonurus japonicus Houtt.的干燥地上部分。
盐酸水苏碱对照品(批号0722-200108,中国药品生物制品检定所)。
水为高纯水；磷酸二氢钠、磷酸(色谱级,北京仁凡红建商贸有限公司)；其余试剂均为分析纯。
2 方法及结果2.1 色谱条件色谱柱：Spherisorb SCX(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：20mmol/L磷酸二氢钠溶液(含有0.04%三乙胺和0.15%磷酸)；柱温：25 ℃；流速：1.0 mL/min；检测波长：192 nm；进样量：10 μL。
HPLC测定复方益母草流浸膏中盐酸水苏碱含量王英姿;韩春超;赵瑞东【期刊名称】《山东中医药大学学报》【年(卷),期】2009(33)2【摘要】目的:建立复方益母草流浸膏中盐酸水苏碱的含量测定方法,为其质量控制提供依据。
方法:采用高效液相色谱法对复方益母草流浸膏中盐酸水苏碱的含量进行测定,色谱柱:scx强阳离子柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:0.5 mol磷酸二氢钾-三乙胺(1 000∶1.5)(磷酸调pH值2.25～2.3);检测波长:192 nm;流速1.0 ml.min-1;柱温:25℃。
结果:水苏碱的浓度在0.2～2.0 mg.ml-1范围内线性关系良好,r=0.9995,平均回收率为98.63%,RSD=1.21%(n=5)。
结论:该法简便、灵敏、准确,可用于复方益母草流浸膏的质量控制。
【总页数】2页(P157-158)【关键词】复方益母草流浸膏;HPLC;盐酸水苏碱【作者】王英姿;韩春超;赵瑞东【作者单位】北京中医药大学中药学院;山东中医药大学;山东中医药大学附属医院【正文语种】中文【中图分类】R284.1【相关文献】1.HPLC法测定复方杜仲丸中盐酸水苏碱与黄芩苷的含量 [J], 赵磊;于丹;赵宾2.HPLC测定益母草流浸膏中水苏碱的含量 [J], 陈洪涛;蔡丹昭;林立波;李娜3.HPLC-ELSD法测定益母草流浸膏中盐酸水苏碱的含量 [J], 林冬杰;张会球4.RP-HPLC-ELSD同时测定复方益母草胶囊中阿魏酸、盐酸水苏碱、梓醇、麦角甾苷的含量 [J], 钟颖5.HPLC法测定复方益芪颗粒中盐酸水苏碱的含量 [J], 费广明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
HPLC测定益母草注射液中盐酸水苏碱含量
姜卫东;贺亚玲;何世芬;刘仲义
【期刊名称】《中国药品标准》
【年(卷),期】2007(8)5
【摘要】目的:建立益母草注射液中盐酸水苏碱的高效液相含量测定方法.方法:采用AlltechSCX 5μ(4.6×250mm)色谱柱,流动相为0.05mol/L磷酸二氢钾-三乙胺(100 :0.1)(以磷酸调pH值至2.3),检测波长为203nm.结果:线性范围1.64～13.12μg(r=0.9996).平均回收率98.0%,RSD=1.8%(n=5).结论:该法简便、灵敏、准确,可用于益母草注射泣的质量控制.
【总页数】3页(P40-42)
【作者】姜卫东;贺亚玲;何世芬;刘仲义
【作者单位】四川省药品检验所,成都,610036;四川省药品检验所,成都,610036;四川省药品检验所,成都,610036;四川省药品检验所,成都,610036
【正文语种】中文
【中图分类】R921.2
【相关文献】
1.HPLC法测定蒙药材脓疮草中盐酸水苏碱的含量 [J], 王栋;丁宁;周雪梅
2.HPLC法测定复方杜仲丸中盐酸水苏碱与黄芩苷的含量 [J], 赵磊;于丹;赵宾
3.HPLC法测定慈航颗粒中盐酸水苏碱的含量 [J], 唐新;钟彩娜
4.HPLC-DAD法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱含量的方法 [J], 伍涛;肖裕章;李成
洪;邓余;唐达;陈诚;唐红梅
5.HPLC法测定云南白药瑶浴粉中盐酸水苏碱的含量 [J], 李黎仙;高鹰;陈邈;孔祥烨因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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HPLC法测定益母草片中盐酸水苏碱的含量作者：方慧祥谢桂芬
来源：《中国民族民间医药杂志》2013年第08期
益母草片由益母草水煎煮浓缩的稠膏与适宜药用辅料制成的剂型，其主要成分为盐酸水苏碱。
益母草片为子宫收缩药，用于调经及产后子宫出血，子宫复不全等，益母草片现行质量标准为国家药品监督管理局标准（试行）（YBZl5632005），其含量测定为加雷氏盐沉淀后称定其重量，该方法费时，检验周期长，抽滤较困难。
本实验选择盐酸水苏碱为指标，用HPLC法对益母草片进行含量测定，结果表明该方法方便、快捷、准确。
ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ法测定益母草流浸膏中盐酸水苏碱的含量摘要：目的：建立高效液相色谱-蒸发光散射（HPLC-ELSD）检测法测定益母草流浸膏中盐酸水苏碱含量的方法。
方法：采用高效液相色谱法，以蒸发光散射检测器检测，采用外标二点法对数方程计算含量。
色谱柱为KromasilNH 2(250mm×4.6mm，5μm，S/N:22N25110)，以甲醇-乙腈(50∶50)为流动相，流速:1.0mL/min，柱温：30℃，蒸发光散射检测器：雾化器温度:60℃，漂移管温度：90℃，气体（氮气）流速：1.0L/min。
结果：盐酸水苏碱进样量在0.16~1.6μg范围内呈良好的线性关系，r=0.9990，平均回收率为98.73％，RSD=0.93％(n=6)。
结论：本方法快速简便，结果准确可靠，重现性好，可用于益母草流浸膏的质量控制。
关键词：益母草流浸膏；盐酸水苏碱；HPLC-ELSD益母草流浸膏是2005年版《中国药典》一部收载的品种，其中以薄层扫描法测定益母草中盐酸水苏碱的含量，考虑到而薄层扫描法的影响因素较多，对益母草流浸膏中盐酸水苏碱的含量测定方法进行了探索。
用HPLC-ELSD法测定了益母草流浸膏中盐酸水苏碱的含量，该法操作更简便、灵敏度高、稳定性及重现性好，可作为母草流浸膏中盐酸水苏碱含量测定的新方法。
1 仪器与试药1.1 仪器美国Agilent 1200高效液相色谱仪，英国PL-ELS2100型蒸发光散射检测器，浙江大学N2010色谱数据工作站，日本GR-202电子分析天平(十万分之一)。
1.2 试药益母草流浸膏（广西医科大学制药厂，批号：20060701），盐酸水苏碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：11702-200508），流动相甲醇、乙腈为色谱纯（美国Scientific Fisher Technology），甲醇、乙醇均为分析纯（广东光华化学厂有限公司）。
2 实验方法与结果2.1 色谱及检测的条件色谱柱：KromasilNH 2(250mm×4.6mm，5μm，S/N:22N25110)，柱温：30℃，流动相：甲醇-乙腈（50∶50），流速：1.0mL/min。
实训十五 HPLC 测定益母草注射液中盐酸水苏碱含量
一、实训目的
1、掌握高效液相色谱法在中药制剂定量分析中的应用。
2、熟悉高效液相色谱仪的使用。
二、仪器与试药
1、仪器：高效液相色谱仪
2、试剂：盐酸水苏碱对照品，益母草注射液，纯净水，磷酸二氢钾，三乙胺
三、实训原理
益母草注射液为益母草加工制成的灭菌水溶液, 益母草为常用中药, 含盐酸水苏碱、益母草碱等生物碱类成分, 均为益母草中的主要有效成分。
因此本实验选用盐酸水苏碱作为本标准的控制指标, 用高效液相色谱法测定。
四、实训操作
1、色谱条件
反相键合相硅胶柱, 流动相为0.05mol/L磷酸二氢钾-三乙胺(100∶0.1) 色谱柱为C
18
(以磷酸调pH 值至2.3) , 检测波长为203nm , 流速0.18ml·m in- 1, 柱温30℃。
2、供试品溶液的制备
精密量取本品1ml, 置25ml 量瓶中, 用流动相稀释至刻度, 摇匀, 即得。
3、对照品溶液的制备
精密称取盐酸水苏碱对照品适量, 加流动相配制成每1ml含0.4mg的溶液, 即得。
4、测定
精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μL, 注入液相色谱仪，测定，即得。
分别进样3次，记录色谱峰面积。
五、实训结果
按外标法计算含量
六、思考题
1、影响理论塔板数的因素有哪些？
2、系统适应性试验包括哪些内容？
3、HPLC含量测定方法有哪些？。
![HPLC测定益母草流浸膏中盐酸水苏碱含量的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s1/m/c6c946a4767f5acfa0c7cdcf.png)
专利名称：HPLC测定益母草流浸膏中盐酸水苏碱含量的方法专利类型：发明专利
发明人：张云平,黄林杰,赖秀梅
申请号：CN201711369702.7
申请日：20171219
公开号：CN108152407A
公开日：
20180612
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种HPLC测定益母草流浸膏中盐酸水苏碱含量的方法，包括以下步骤：(1)制备对照品溶液：取盐酸水苏碱对照品与乙醇制成对照品溶液；(2)制备待测样品溶液：精密取益母草流浸膏样品加乙醇稀释，制得待测样品溶液；(3)取对照品溶液注入高效液相色谱仪及蒸发光散射检测器测定，建立盐酸水苏碱标准曲线；(4)取待测样品溶液注入高效液相色谱仪及蒸发光散射检测器测定，获得盐酸水苏碱的峰面积，从而根据标准曲线获得盐酸水苏碱含量。
本发明提供的方法简便，灵敏度高，高效省时，鉴定结果客观准确。
申请人：广西壮族自治区梧州食品药品检验所
地址：543000 广西壮族自治区梧州市万秀区西环路中段198号
国籍：CN
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![一种益母草中水苏碱含量的高效液相色谱检测方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s1/m/fcd939f055270722182ef7c1.png)
专利名称：一种益母草中水苏碱含量的高效液相色谱检测方法专利类型：发明专利
发明人：曾佳烽,潘俊芳,赵雪斌,姚帅
申请号：CN200510026656.1
申请日：20050610
公开号：CN1877322A
公开日：
20061213
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种益母草中水苏碱含量的高效液相色谱检测方法，该方法采用蒸发光散射检测器，灵敏度高、重现性良好，适用于益母草药材、益母草制剂及含益母草的保健食品的质量控制。
申请人：上海华拓医药科技发展有限公司
地址：201203 上海市张江高科技园区碧波路518号A座211室
国籍：CN
代理机构：上海开祺知识产权代理有限公司
代理人：张萍
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HPLC法测定复方益母口服液中水苏碱的含
量
【摘要】目的建立高效液相色谱法测定复方益母口服液中水苏碱的含量。
方法以Kromasil C18 (5 μm，250 mm×4.6 mm)为色谱柱，乙腈0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液（体积比18∶82，pH值5.5）为流动相，流速1.0 mL·min-1，柱温35 ℃，检测波长215 nm，以外标法进行检测。
结果水苏碱进样量在1.00～25. 00 μg范围内具有良好的线性关系，r=0.999 7，样品平均加样回收率为98.1% (n=9)，RSD为1. 17%。
结论本方法简便，结果准确可靠，重复性好，可作为控制该制剂质量的方法。
【关键词】水苏碱复方益母口服液高效液相色谱法
益母草是一种传统的妇科良药，性味辛、苦，微寒，具有活血化淤、调经利水之功效，常用于妇女月经不调、痛经、难产，以及跌打损伤、水肿和疮疡肿毒等症。
现代药理研究发现，益母草中益母草碱、水苏碱等多种活性生物碱也具有改善心肌缺血、增加冠状动脉血流、提高心功能，抑制血小板聚集、抗凝、抗血栓形成等多种作用，且作用持久［1］。
复方益母口服液是由益母丸（中国药典1977年版）改剂型而成，其中的主要有效成分水苏碱是益母草中生物碱类含量测定的指标
性成分，文献报道多采用紫外分光光度法、薄层扫描法和高效毛细管电泳法进行测定，不仅操作过程繁琐、所需时间长，而且水苏碱在湿度大时的稳定性不理想［2-5］。
本文应用高效液相色谱法测定复方益母口服液中主要有效成分水苏碱的含量，方法简便，结果准确可靠，重现性好，可作为控制该制剂质量的方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Agilengt 1200 系列高效液相色谱系统（Agilent Co. Ltd.，USA）：G1376A高效液相泵，G1367B自动进样器，G1316A柱温箱，G1365B 多波长UV检测器，Hystar色谱工作站。
1.2 试药
水苏碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110712 200508）；复方益母口服液（山东省临沂银雀山制药厂，10 mL·支-1，批号：2008211、2008423、2008512）；乙腈（色谱纯，江苏汉邦科技有限公司），水为二次重蒸水，其他试剂均为分析纯（山东禹王化学试剂有限公司）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:Kromasil C18 (5 μm，250 mm×4.6 mm，天津琛航科技仪器有限公司提供)；流动相:乙腈0. 05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液（体积比18∶82，pH值5.5），流速:1.0 mL·min-1，检测波长:215 nm，柱温:35 ℃，进样量:10 μL。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取105 ℃干燥至恒重的水苏碱适量，置5 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得0.5 mg·mL-1的对照品溶液［6］，摇匀，备用。
2.3 最大吸收波长的选择
采用岛津UV160紫外分光光度计，对甲醇配制的0.5 mL·min-1的对照品溶液在200～400 nm波长范围内进行扫描，于215 nm处有一个最大吸收特征峰，故选择为检测波长。
2.4 阴性对照溶液的制备
取不含益母草的阴性对照品，按生产厂家提供的生产工艺以及供试品溶液配制方法制备。
2.5 供试品溶液的制备与测定方法
各批号复方益母口服液以0.45 μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，分别精密量取续滤液2.0 mL，置10 mL容量瓶中，加入甲醇制成供试品溶液，进样10 μL。
同时取对照品溶液10 μL进样，分别测定峰面积，按外标法计算样品的含量。
2.6 系统适用性试验
取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照液，分别进样，结果水苏碱的保留时间为6.075 min，理论塔板数为6 800，与相邻峰的分离度大于1.5，符合中国药典的规定。
阴性对照图谱在水苏碱色谱峰的保留时间处无明显吸收峰，表明处方中其他成分对水苏碱的测定无干扰，见图1。
A.对照品溶液;
B.阴性对照溶液;
C.供试品溶液
图1 HPLC色谱图（略）
Figure 1 HPLC chromatograms
2.7 标准曲线与线性范围
取对照品溶液，分别进样2.0、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0 μL，记录其色谱峰的峰面积。
以峰面积对进样量作图，绘制标准曲线，结果水苏碱回归方程：Y=978.2 X+21.4，r=0.9997，线性范围：1.00～25.00 μg。
2.8 稳定性试验
取同一批供试品溶液（批号2008423），分别于0、2、4、8、12、24 h测定水苏碱含量，结果其RSD值为0. 23%，说明供试品溶液在本实验条件下24 h内稳定。
2.9 精密度试验
取1份对照品溶液，重复进样5次，测定峰面积,结果其RSD 值为1.23%，表明实验精密度良好。
2.10 重复性试验
取同一批供试品溶液（批号2008423）5份，分别进样测定水
苏碱峰含量，结果其RSD值为1. 72%，表明重复性良好。
2.11 回收率试验
精密量取已知含量的复方益母草口服液（批号2008423）适量，按80%、100%和120%的比例，精密加入水苏碱对照品溶液适量，摇匀，进样测定，计算得平均回收率为98.1%，RSD=1.17%，见表1。
表1 水苏碱加样回收率试验结果（略）
Table 1 Recovery experiments
2.12 样品测定分别精密量取对照品溶液和供试品溶液进样测定，按外标法以峰面积分别计算得3批口服液样品中水苏碱的含量分别为0.69、0.71、0. 72 g·mL-1。
3 讨论
3.1 复方益母口服液中含水苏碱、益母草碱、益母草啶和益母草宁等多种生物碱，其中水苏碱为主要的活性成分，具有扩张外周血管、增加血流量、抗血小板凝集等作用，选择测定制剂中的水苏碱具有代表性。
3.2 生物碱类成分使用C18反相柱进行分析时，由于反相柱的封尾不完全，残存的微酸性硅醇基团会与生物碱类成分发生化学吸附而导致拖尾现象，而流动相中微量的酸能使生物碱类成分预先达到“酸饱合”的效果，减少了生物碱类成分与反相柱硅醇基的吸附，改善拖尾。
经过比较发现，本文所采用的乙腈0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液（体积比18∶83，pH 5.5），分离效果好，保留时间适当。
3.3 采用高效液相色谱法对复方益母口服液中的主要成分水苏碱进行含量测定，回收率高，操作简单，稳定性和重现性好，可以作为该制剂质量控制的方法。
【参考文献】
［1］刘新华，辛宏，朱依谆.不仅是“益母”草：益母草的心脏保护作用［J］.生理学报，2007，59(5): 578-584.
［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典2005年版：一部［S］.北京：化学工业出版社，2005：576.
［3］唐盈，王晓强.四种含益母草中成药中水苏碱的含量测定［J］.药物分析杂志，1989，9(1): 22-24.
［4］张玲，时延增，于宗渊,等.双波长薄层扫描法测定益母口服液中水苏碱的含量［J］.中国药科大学学报，1996，27(1): 16-18.
［5］姜舜尧，黄晓强，陆蕴如.几种中药生物碱的毛细管区带电泳分析［C］.香港:世界医药出版社，1999:28.
［6］戚建中.产复康颗粒中水苏碱的HPLC分析［J］.中成药，2001，23(1): 16-18.。
