酶联免疫吸附法和化学发光法对甲胎蛋白检测功效的比较发表时间：2011-05-30T17:51:01.920Z 来源：《中外健康文摘》2011年第7期供稿 作者： 何彩华[导读] 肿瘤已成为当今世界严重危害人类的疾病，死亡率仅次于心血管疾病居全球第二。何彩华 （河源市妇幼保健院检验科 广东河源 517000） 【中图分类号】R446.1 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2011）7-0096-03 【摘要】 目的 比较ELISA (enzyme linked immuno-sorbent assay)和CL(chemi-luminescence)两种检测方法对AFP检测的稳定性、敏感性及重复性。 方法 对110名患者血标本同时采用ELISA和CL两种方法进行AFP检测，对同一标本连续测定20次进行批内变异的比较；同时对标本每天测定1次，连续测定20天进行批间变异比较。采用方差分析比较两种方法敏感性；并对两种方法进行线性回归分析，评价两种方法相关性。结果 CL批内变异系数和批间变异系数均较ELISA小，具有较好的重复性及稳定性；当AFP<400μg/L时，ELISA和CL法检测AFP敏感性相似，当AFP>400μg/L时，CL法敏感性高于ELISA（P<0.05）。结论 CL较ELISA稳定性好、敏感性高、重复性好，而ELISA具有经济、在AFP浓度值低于400μg/L时也具有较好的敏感性。 【关键词】 甲胎蛋白 酶联免疫吸附法 化学发光法 【Abstract】Object：To compare the stability,sensitivity and reproducibility of ELISA and CL on the detection of AFP. Method：Enrolled110 patients who were drawn blood samples to undertook ELISA and CL detections AFP totally 20 times to compare intra－assaycoefficient variation and once every day for 20 days to compare inter－assay coefficient variation;analysis of variance was used tocompare the sensitivity between these two methods，and we also used lineal regression analysis to compare the correlation betweenthese two methods. Result:Intra-assay and inter-assay coefficient variation of CL were smaller than ELISA which indicated that the CLhad a better reproducibility and stability. The sensitivity was similar between ELISA and CL when AFP <400μg/L whereas it was moresensitive in CL when AFP>400μg/L（P <0.05.）. Conclusion：CL was more stable ,more sensitive and better reproducibility than ELISAwhereas ELISA was less expensive and had a similar sensitivity with CL when AFP concentration was smaller than 400μg/L. 【Keywords】AFP (alpha fetal protein) ELISA (enzyme linked immuno-sorbent assay) CL (chemi-luminescence)
肿瘤已成为当今世界严重危害人类的疾病，死亡率仅次于心血管疾病居全球第二。每年有成千上万新诊断肿瘤患者，当中不少患者由于就诊时已出现远处转移或是已出现全身严重症状，导致治疗效果不佳、远期预后差[1,2]。随着近几十年来各种生化检测仪器的发展以及肿瘤标志物的发现，使得对肿瘤的早期筛查和诊断成为可能。肿瘤标志物（tumor markers,TM）是肿瘤组织和细胞由于其癌基因异常表达所分泌的、存在于肿瘤组织及全身血液和体液中的浓度明显高于正常值的一类物质。如甲胎蛋白（alpha fetal protein, AFP）和癌胚抗原（carcinoma antigen embryo，CEA）等，其中甲胎蛋白（AFP）被公认为是诊断原发性肝癌的重要肿瘤标志物[3]。甲胎蛋白(AFP)是胚胎发育早期的一种主要血清蛋白，由胚胎期肝脏卵黄囊合成的一种糖蛋白，分子量约70000，含糖40g/L，由96%蛋白质和4%的碳水化合物组成，正常人血清中AFP含量在2-8g/L之间，AFP正常值一般低于25g/L，AFP是诊断肝癌最特异的标志物，是目前最好的可实际用于早期诊断原发性肝癌的指标，可在症状出现之前作出诊断。目前临床检验中AFP的检测方法主要有放射免疫法(RIA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、荧光免疫法(FIA)、化学发光分析法(CLIA)等，本研究主要比较近几年来我院常用的ELISA和CL两种检测方法，分析两种方法对AFP诊断的稳定性、敏感性及重复性，现报道如下。 1 材料与方法 1.1材料 1.1.1标本采集 本研究收集了从2008年8月至2010年9月在我院住院及门诊患者110例的血清标本，男性9名，女性101名，年龄45.2±3.1岁。 1.1.2试剂 ELISA检测使用郑州博赛生物工程股份有限公司AFP诊断试剂盒，操作步聚均严格按照试剂盒操作说明书进行；CL法检测试剂从雅培公司购买并按照仪器的使用说明及操作规程进行。 1.1.3 实验仪器 采用芬兰雷勃全自动酶标仪、深圳雷杜全自动酶标洗板机进行ELISA检测；Axsym 高效能全自动化学发光免疫分析仪进行CL检测；质控品由雅培公司提供。
1.2 方法 对同一患者的血清分别用ELISA和CL法进行AFP检测，每份标本每天检测1次，连续检测20天，比较ELISA和CL在AFP检测上的重复性和稳定性，同时比较ELISA和CL检测AFP的敏感性。
1.3 数据分析和统计方法 1.3.1 AFP<20μg/L为阴性；AFP >20μg/L为阳性，阳性中分为20-400μg/L和>400μg/L为强阳性（原发性肝癌诊断界值）。 1.3.2 采用SPSS11.0统计软件进行数据统计与分析。采用x2检验对资料进行敏感性和稳定性比较，同时采用Pearson相关对ELISA和CL进行相关性分析。P<0.05具有统计学意义。 2 结果 2.1 敏感性比较： ELISA和CL对AFP检测敏感性比较见表1
由表1见当AFP<400μg/L时，ELISA和CL对AFP检测敏感性差别无统计学意义；当AFP>400μg/L时，CL（38例）检测敏感性高于ELISA（29例），差别具有统计学意义（P <0.05）。 2.2 重复性和稳定性测定：采用批内和批间差异进行确定。ELISA和CL两种检测方法分别对低、中、高值质控品进行精密度试验,每份标本连续测定20 次，计算均数和标准差,求批内变异系数（coefficient variable，CV）值。每份标本每日测定1 次，连续测定20 天，计算均数和标准差，求批间CV 值，结果见表2。由表2可见在AFP检测上，CL较ELISA重复性好、稳定性高。 2.3 ELISA和CL相关性分析：对110名患者分别同时采用ELISA和CL检测AFP，结果表明ELISA和CL两种检测方法在AFP<400μg/L相关性好（r=0.955，95％CI 0.943－0.968）；当AFP>400μg/L时，两种相关性差（r=0.401，95％CI 0.343－0.455）。
3 讨论
近几十年来由于环境污染以及不健康的生活方式，癌症发病率呈逐年上升趋势。目前对恶性肿瘤防治的首要原则为早发现、早诊断、早治疗。血清肿瘤标志物含量的检测是一项非侵袭性检查方法，日益受到医学界的广泛重视，成为肿瘤患者早期诊断的重要辅助检查手段之一，故肿瘤标志物测检方法的敏感性、稳定性和重复性对早期肿瘤的筛查和诊断至关重要。AFP是1956年由Bergstrandh和Czar在人胎儿血清中发现的一种甲种球蛋白, 它被认为是辅助诊断肝癌最好的肿瘤标志物。用化学发光免疫法检测AFP是公认的快速、精确、重复性好且安全无毒的方法；而ELISA法定量AFP试剂盒的线性及标准问题是测定结果准确性的关键，ELISA法的“钩状效应”，即测定显色随着待测标本中抗原浓度的增加而升高至一定程度后，测定吸光度随抗原浓度的增加而开始下降至不显色，容易造成假阴性结果；但ELISA以快速、简便实效的优势在基层广应用。
本研究比较了ELISA和CL对AFP检测的稳定性、敏感性、重复性及两者的相关性。两法比较，CL具有如下优点：
⑴CL具有较好的稳定性：CL 是一种特异性化学发光反应,，是当今国内外最新最先进的临床免疫技术的集中体现，根据待测物的不同灵活选择不同的分析技术、分析步骤和分析过程，以达到最佳的检测效果、最高的检测精密度，结果准确可靠，因此具有较好的稳定性。
⑵CL具有较高的敏感性：在AFP<400μg/L时，ELISA和CL检测法对AFP的检测敏感性的差别无统计学意义，并且两者相关性好（r＝0.9553）；当AFP>400μg/L时, CL敏感性好于ELISA，两者差别具有统计学意义（P <0.05）。近年来CL检测采用磁珠包被技术，由于磁珠体积小，可以吸附更多的抗体和抗原，使得CL的检测灵敏度得到进一步的提高。
⑶CL具有较好的重复性：由表2可见CL在质控品低、中、高三个级别中批内和批间变异系数均小于ELISA，提示CL与ELISA相比，具有较好的重复性。在临床检验中采用CL检测AFP，检测标准曲线可以稳定大约20天，无需如ELISA每批检测都需要重新制作检测标准曲线，且ELISA存在受人工操作影响大的问题[4]。
随着检验医学的快速发展，以及生化检测仪器和技术的更新，化学发光法的应用实现了免疫测定的自动化，具有结果稳定可靠、敏感性高、重复性好的优点，显示出具有良好的应用前景。本研究提示在早期原发性肝癌筛查时，可采用CL检测法，但是对于基层医院，在人体正常值参考范围内AFP的检测, ELISA法具有快速、简便、成本低廉的优点,及在健康体检, 人群普查, 良性肝病患者定期检查中起到很好筛查作用。因此对一时难以购买化学发光仪器的基层医疗机构, EL ISA法也是一个很好而实用的检测方法；但笔者认为对于临界值的标本要加以关注及随访, 或送血清至上级医院进一步检测确诊, 检测人员在工作中需加以把握。 参 考 文 献 [1]Okura H. [Usefulness of tumor marker in early diagnosis]. Nippon Naika Gakkai Zasshi,2005,94:2479-85. [2]Duffy MJ. Role of tumor markers in patients with solid cancers: A critical review. Eur J Intern Med, 2007,18:175-184. [3]Wiwanitkit V. Alpha fetoprotein for screening for hepatocellular cancer in populations with viral hepatitis B: an appraisal of Thai reports.Asian Pac J Cancer Prev, 2005,6:535-6. [4]林英,柳丽娟,林秀珍.荧光酶免定量测定甲胎蛋白的临床评价[J].国际检验医学杂志,2006,27（2）:182-184.
