免疫化学发光法基本原理

化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CL IA ) ,是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。

化学发光免疫分析仪包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。

化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hM) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。

免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。

化学发光免疫分析仪包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。

化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hM) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。

免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。

化学发光免疫分析仪器中核心探测器件为光电倍增管（PMT），由单光子检测并传输至放大器，并加高压电流放大，放大器将模拟电流转化为数字电流，数字电流将发光信号由R232数据线传输给电脑并加以计算，得出临床结果。

化学发光标记免疫分析法化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CL IA ) ,是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。

常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物——acridin ium ester (A E) ,是有效的发光标记物[ 3 ] , 其通过起动发光试剂(N aOH2H2O 2 ) 作用而发光, 强烈的直接发光在一秒钟内完成,为快速的闪烁发光(见图1)。

吖啶酯作为标记物用于免疫分析, 其化学反应简单、快速、无须催化剂; 检测小分子抗原采用竞争法 ,大分子抗原则采用夹心法 , 非特异性结合少, 本底低; 与大分子的结合不会减小所产生的光量, 从而增加灵敏度。

电化学发光免疫分析的原理电化学发光免疫分析（ELISA）是一种流行的抗体检测技术，可以检测和测定抗体或抗原。

ELISA最初由发明者迪卡贝尔（Dica Bell）于1970年发明，以前称为发光免疫分析法或发光免疫比色法。

它可以快速准确地检测抗原或抗体在生物样品中的浓度。

ELISA技术的基本原理是：首先将特定的抗原和发光探针分别固定到水凝胶的微孔平板上，然后将待测样品加入微孔平板，抗原识别抗体或抗原与它结合，抗体和发光探针之间形成免疫复合物。

然后，抗体免疫复合物结合到抗原，使抗体免疫复合物和发光探针之间形成发光免疫复合物。

最后，将产生的发光免疫复合物可以在发光分析仪上读取，从而实现抗原检测目的。

ELISA技术的预处理过程是：首先将特异性抗原固定到微孔平板上，然后将抗原固定物体洗涤干净，洗涤后，将含有实验样品的溶液加入。

抗原和实验抗体在抗原上结合，产生免疫复合物。

接下来，将发光探针加入该免疫复合物，使免疫复合物和发光探针形成发光免疫复合物，以发光的方式检测体外抗原的浓度。

ELISA技术的优点是快速、准确、可重复，可以用来检测各种抗原的抗体，如霍乱抗原、疱疹病毒抗原、轮状病毒、肝炎抗原等。

ELISA 技术也可以用来研究抗体的特异性、可稳定性和稳定性，从而为研究抗原提供重要的理论基础。

ELISA技术也有一些缺点，如测定样品抗体或抗原的反应强度不够准确。

此外，ELISA技术的准确性受到实验参数的影响，如反应温度、反应时间，以及抗原和抗体的浓度和稀释比例等。

ELISA技术具有快速、可靠和可重复性等特性，是当今最常用的免疫学检测方法。

它不仅能用于抗原抗体检测，还经常被用于临床检测，用于诊断疾病，如癌症、HIV等。

ELISA技术对对医学和科学领域都具有重要的意义，它可以准确、快速地检测抗原或抗体，为疾病的早期诊断和治疗提供有效的支持。

总之，电化学发光免疫分析（ELISA）技术是一种常见的抗体检测技术，也是当今最常用的免疫学检测方法，可以根据其特定的技术原理来进行抗原检测。

化学发光免疫分析法（CLIA）A、管式磁性微粒子化学发光免疫分析法：（竞争法：用标记抗原与待检抗原竞争性结合固相抗体，待检抗原与检测信号成反比）一、原理：本实验采用竞争法，酶标抗原与标准品抗原竞争抗体，标准品抗值越小。

例：A为一原浓度越大，结合到抗体上的酶标抗原越少，RLU越小，B/B种抗原小分子，有免疫反应性。

实验中采用竞争法对尿液中的A进行分析，使待测A、辣根过氧化物酶标记的A(A-HRP)在均相体系中与异硫氰酸荧光素（FITC）标记的兔抗A抗体（FITC-A抗体）发生竞争性免疫反应，再加入用羊抗FITC抗体包被的磁微粒，反应生成物结合在磁微粒上，在磁场经分离、洗涤后加发光底物，用冷光分析仪检测发光强度（RLU），测定尿液中A的含量。

二、仪器：1、Flash’n glow LB955 30 管全自动进样冷光分析仪(Berthold 公司);2、高速离心机(Beckman 公司), 转速13000 r/min3、磁性分离器(北京科美生物技术有限公司定制, 磁场强度2800 高斯)4、XW80 旋涡混合器(上海精科实业有限公司)5、试管12 × 60 mm(浙江拱东医用塑料厂)6、磁性微粒子(磁性分离剂, Adaltis 公司)三、试剂1、A标准品2、A单克隆抗体3、A-BSA结合物4、抗FITC抗体包被的磁性微粒子（5mg/mL）5、FITC标记的A单克隆抗体6、HRP标记的A7、PBST 洗涤液L PBS, 含% Tween-20)8、分析缓冲液 mol/L 的PBS 缓冲溶液, pH , 含%BSA、 %的水解明胶、%的Proclin-300)9、发光底物液(鲁米诺、过氧化氢和对碘苯酚溶液)实验用水为二次蒸馏水四、试剂处理1、用分析缓冲液为稀释液, 梯度稀释标准品；2、取A-BSA-HRP溶液, 以分析缓冲液为稀释液, 梯度稀释, 配制1:1000、1:2000、1:5000 的A-BSA-HRP 溶液,4 ℃保存. FITC-A单克隆抗体溶液的配制: 取FITC-A单克隆抗体溶液, 以分析缓冲液为稀释液,梯度稀释, 配制1:1000、1:2000、1:5000、1:10000、1:12000 的FITC-A单克隆抗体溶液, 4 ℃保存。

化学发光酶免疫测定法
化学发光酶免疫测定法是一种常用的生物学实验技术，用于检测目标物质的存在和浓度。

其原理基于酶免疫测定法，结合化学发光技术，通过酶与底物反应产生发光来间接测定目标物质。

具体步骤如下：
1. 将待测的样品（如血清或尿液）与特定抗体结合。

这个抗体通常是与目标物质特异性结合的抗体，比如病毒抗原或肿瘤标志物。

2. 加入过量的酶标记的第二抗体，这个第二抗体能够与特定抗原特异性结合，同时与酶（如辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶等）结合。

3. 清洗除去未结合的第二抗体。

4. 加入化学发光底物，底物与酶反应，产生化学发光。

发光的强度与目标物质的浓度成正相关。

5. 使用光学检测仪器测量发光强度，并根据标准曲线或对照样品的浓度来计算目标物质的浓度。

化学发光酶免疫测定法具有高灵敏度、广泛的线性范围和较低的检测限。

在临床诊断、生物学研究和药物发现等领域得到广泛应用。

化学发光免疫分析原理化学发光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，简称CLIA）是一种基于化学发光原理的免疫分析技术，广泛应用于临床诊断、生物医药、环境监测等领域。

它以化学发光信号作为检测信号，具有高灵敏度、高特异性、快速、简便等优点，成为现代生物医学领域中不可或缺的重要技术手段。

化学发光免疫分析的原理主要包括以下几个方面：1. 免疫反应。

免疫反应是化学发光免疫分析的基础。

它利用抗原与抗体之间的特异性结合作用，通过抗原-抗体反应来实现对待测物的定量或定性分析。

在化学发光免疫分析中，待测物与标记物（如酶标记物或荧光标记物）结合形成免疫复合物，这一步是整个分析过程中至关重要的一环。

2. 化学发光反应。

化学发光免疫分析的核心在于化学发光反应。

当免疫复合物形成后，引入化学发光底物，底物在催化剂的作用下发生化学反应，产生激发态的反应产物。

这些激发态的反应产物在退激发过程中释放出光子，产生化学发光信号。

这种化学发光反应具有高度特异性和灵敏度，能够实现对微量物质的检测。

3. 光信号检测。

光信号检测是化学发光免疫分析中的最后一步。

通过光电检测器对化学发光反应产生的光信号进行检测和测量，从而实现对待测物的定量分析。

光信号的强弱与待测物的浓度成正比，因此可以通过测量光信号的强度来确定待测物的浓度。

化学发光免疫分析技术在临床诊断中有着广泛的应用。

它可以用于检测肿瘤标志物、感染性疾病、激素水平等多种生物标志物，具有高灵敏度和高特异性，对于早期诊断和疾病监测具有重要意义。

此外，化学发光免疫分析技术还被广泛应用于生物医药研究、药物残留检测、环境监测等领域。

总的来说，化学发光免疫分析技术以其高灵敏度、高特异性、快速、简便等优点，成为现代生物医学领域中不可或缺的重要技术手段。

它的原理简单清晰，操作方便快捷，适用于各种生物样本的分析，为临床诊断和生物医学研究提供了有力的技术支持。

随着科学技术的不断发展，化学发光免疫分析技术必将在更多领域展现出其巨大的应用潜力。