人卫6-脉络15MS 质谱法
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人体代谢物的质谱分析方法人体代谢物是指人体在生理代谢过程中产生的化合物,如蛋白质、核酸、糖、脂类等。
这些化合物可以反映人体内部的生理状态和代谢情况。
因此,分析人体代谢物可以为疾病的早期诊断、治疗和预防提供重要的参考依据。
人体代谢物的质谱分析方法是一种重要的分析手段,本文将对其进行介绍和分析。
一、人体代谢物的质谱分析方法概述质谱分析是分析化学中的一种重要手段,是指将样品分子离子化后,在加速电场中加速,撞击靶材后产生信号并进行分析的方法。
人体代谢物的质谱分析方法主要包括质谱仪的种类、代谢物分离、质谱数据的分析和解释等方面。
1、质谱仪的种类目前在代谢物分析中广泛使用的质谱仪种类主要有气相色谱质谱(GC-MS)、液相色谱质谱(LC-MS)、飞行时间质谱(TOF-MS)和串联质谱(MS/MS)等。
其中液相色谱质谱(LC-MS)在分析生物样品中具有高灵敏度、高分辨率、高鉴定准确性等优点,在代谢物分析中被广泛应用。
2、代谢物分离代谢物分离主要包括样品制备、代谢物提取和纯化等步骤。
样品制备是将生物样品(如血液、尿液和组织等)制备成易于质谱分析的形式,如液体、蒸发浓缩、固相萃取和微量化学反应等。
代谢物的提取是将生物样品中的目标化合物从复杂混合物中提取出来,如常用的液-液萃取、固-液萃取、固相微萃取和超声波萃取等。
代谢物的纯化是为了减少复杂混合物对质谱测量的干扰或衬底的影响,如利用透析、超滤、离子交换和凝胶层析等。
3、质谱数据的分析和解释质谱数据的分析和解释是质谱分析中的关键一环。
质谱图是代谢物分析结果的直接呈现,通过对质谱特征图的分析可以得到代谢物的分化和鉴定。
但由于生物样品繁多且代谢物本身具有多样性和复杂性,需要结合先前已知的代谢规律、代谢途径以及分子生物学等多方面因素进行综合分析,才可对代谢物进行准确、全面的鉴定和解释。
二、质谱分析方法在代谢物分析中的应用质谱分析方法在代谢物分析中得到广泛应用,主要包括疾病检测、疾病治疗、营养学及毒理学等方面。
质谱法质谱法是使待测化合物产生气态离子,再按质荷比(m/z)将离子分离、检测的分析方法,检测限可达10-15~10-12mol数量级。
质谱法课提供分子质量和结构的信息,定量测定可采用内标法或外标法。
质谱仪的主要组成如图所示。
在由泵维持的10-3~10-6Pa真空状态下,离子源产生的各种正离子(或负离子),经加速,进入质量分析器分离,再由检测器检测。
计算机系统用于控制仪器,记录、处理并储存数据,党配有标准谱库软件时,计算机系统可以将测得的质谱与标准谱库中图谱比较,获得可能化合物的组成和结构信息。
一、进样系统样品导入应不影响质谱仪的真空度。
进样方式的选择取决于样品的性质、纯度及所采用的离子化方式。
1、直接进样室温常压下,气态或液态化合物的中性分子通过可控漏孔系统,进入离子源。
吸附在固体上或溶解在液态中的挥发性待测化合物可采用顶空分析法提取和富集,程序升温解吸附,再经毛细管导入质谱仪。
挥发性固体样品可置于进样杆顶端小坩埚内,在接近离子源的高真空状态下加热、气化。
采用解吸离子化技术,可以使热不稳定的、难挥发的样品在气化的同时离子化。
多种分离技术已实现了与质谱的联用。
经分析后的各种待测成分,可以通过适当的接口导入质谱仪分析。
2气相色谱-质谱联用(GC-MS)在使用毛细管气相色谱柱及高容量质谱真空泵的情况下,色谱流出物可直接引入质谱仪。
3液相色谱-质谱联用(LC-MS)使待测化合物从色谱流出物中分离、形成适合于质谱分析的气态分子或离子需要特殊的接口。
离子束(PBI)、移动带(MBI)、大气压离子化(API)是可用的液相色谱-质谱联用接口。
为减少污染,避免化学噪声和电离抑制,流动性中所含的缓冲盐或添加剂通常应用具有挥发性,且用量也有一定的限制。
(1)离子束接口液相色谱的流出物在去溶剂室雾化、脱溶剂后,仅待测化合物的中性分子被引入质谱离子源。
离子束接口适用于分子量小于1000的弱极性化合物的分析,测得的质谱可用由电子轰击离子化或化学离子化产生。
维生素检测质谱
维生素检测是通过使用质谱技术来确定维生素的存在和含量。
质谱是一种分析方法,它能够确定化合物的质量和结构,并在维生素分析中起着关键作用。
质谱分析可以使用多种技术,其中最常用的是液相色谱质谱联用(Liquid Chromatography-Mass Spectrometry,LC-MS)和气相色谱质谱联用(Gas Chromatography-Mass Spectrometry,GC-MS)。
在维生素检测中,首先需要对样品进行适当的前处理。
这可能包括样品提取、净化和浓缩等步骤,以从复杂的基质中分离出维生素。
然后,将样品注入质谱仪进行分析。
在质谱分析中,样品中的维生素分子被离子化,并在质谱仪中进行分离和检测。
质谱仪通过测量离子的质量和相对丰度来确定维生素的存在和含量。
这些数据可以与已知的维生素标准进行比较,以确定维生素的种类和浓度。
质谱分析能够提供高灵敏度和选择性,使得能够准确测量维生素的含量,甚至在非常低的浓度下进行检测。
这对于食品和营养领域非常重要,因为维生素在食品中起着关键的营养作用。
维生素检测是确保食品安全和评估膳食质量的重要组成部分。
通过使用质谱技术,我们能够准确测量维生素的含量,提供有关膳食摄入和健康评估的重要信息。
这有助于确保人们获得足够的维生素,维持身体健康和营养平衡。
mass spectrometry 质谱法测蛋白质步骤和原理质谱(mass spectrometry,MS)法是检测生物体中蛋白质的主流技术之一,其能准确检测生物样品中蛋白质及多肽的相对分子质量、氨基酸序列及翻译后修饰。
因其具有高灵敏度、准确性和自动化程度而广泛应用于蛋白质分析领域,质谱法测蛋白质步骤和原理如下所述。
质谱法测蛋白质主要包括蛋白质样本制备、蛋白质酶解、质谱分析、数据库检索与蛋白质鉴定等检测步骤。
1.蛋白质样本制备:蛋白质样本包括简单和混合复杂蛋白质样本,简单样本包括双相电泳斑点或者纯化蛋白质(SDS-PAGE胶条或者蛋白质溶液,纯度>90%)等。
混合蛋白质样本包括混合蛋白质溶液,或者SDS-PAGE条带等。
2.蛋白酶水解:由于蛋白质质量较大不利于鉴定,需要在质谱鉴定之前使用蛋白酶将蛋白质消化为小片段肽段,通常情况下,将蛋白质酶解为6-20个氨基酸的多肽段用于蛋白质谱鉴定最为合适。
常用的酶为胰蛋白酶(trypsin),它于蛋白质的赖氨酸(lysine))和精氨酸(arginine)处将其切断。
3.质谱分析:通常可遵循简单蛋白质样本用串联质谱(MS/MS)检测,混合蛋白质样本用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测。
4.蛋白质数据库检索与蛋白质鉴定:利用数据库检索软件选择相应的蛋白质数据库对实际检测出的质谱数据进行分析鉴定,同时以打分的形式评判鉴定结果,当打分大于某个阈值时,即判定质谱鉴定成功,反之则鉴定失败。
蛋白质质谱鉴定的基本原理是用蛋白酶将蛋白质消化成肽段混合物,经MAILDI或ESI等软电离手段将肽段混合物离子化,然后通过质量分析器将具有特定质荷比的肽段离子分离开来。
通过实际谱图和理论上蛋白质经过蛋白酶消化后产生的一级质谱峰图和二级质谱峰图的比对,进行蛋白质鉴定。
百泰派克生物科技采用Orbitrap Fusion质谱平台,Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC,保证了低丰度肽段碎裂片段鉴定的灵敏度;同时在肽段碎裂过程中采取HCD与ETD结合的模式,保证肽段碎裂片段的完整性。