黑木耳多糖提取方法比较

银耳、木耳多糖清除羟自由基的比较实验张磊;徐皓;孟超;殷晓蕾;黄超;李明明;宫晓婷【摘要】目的研究银耳多糖羟自由基的清除作用.方法采用酶解法提取银耳多糖粗品,蒽酮-硫酸比色法测定银耳多糖的含量,并稀释成三个浓度梯度,与过氧化氢-亚铁离子-水杨酸反应体系中的羟自由基进行反应以测定羟基清除率,以黑木耳为对照.结果银耳多糖清除羟自由基的效果随着浓度增加而增强:在浓度为0.5 mg/mL、1.5 mg/mL、3 mg/mL时其清除率分别为10.36％、18.04％、35.74％.结论银耳多糖与木耳多糖对羟自由基均有清除作用.3 mg/mL的银耳多糖对羟自由基清除率最高为35.74％,木耳多糖在同等浓度范围内为52％,银耳多糖的清除率小于同浓度下黑木耳多糖对自由基的清除率.【期刊名称】《泰山医学院学报》【年(卷),期】2019(040)007【总页数】4页(P493-496)【关键词】多糖;羟自由基;清除率【作者】张磊;徐皓;孟超;殷晓蕾;黄超;李明明;宫晓婷【作者单位】生命科学学院,山东第一医科大学(山东省医学科学院),山东泰安271016;生命科学学院,山东第一医科大学(山东省医学科学院),山东泰安 271016;生命科学学院,山东第一医科大学(山东省医学科学院),山东泰安 271016;生命科学学院,山东第一医科大学(山东省医学科学院),山东泰安 271016;生命科学学院,山东第一医科大学(山东省医学科学院),山东泰安 271016;生命科学学院,山东第一医科大学(山东省医学科学院),山东泰安 271016;生命科学学院,山东第一医科大学(山东省医学科学院),山东泰安 271016【正文语种】中文【中图分类】Q-331银耳(Tremella)又名白木耳、雪耳，属于隔担子菌亚门银耳科。

银耳在我国具有悠久的食用和药用历史，含有碳水化合物、蛋白质、维生素和多种氨基酸等。

目前研究最多的是银耳多糖。

银耳多糖(Tremella polysaccharides，TP)是重要的生物活性物质，可以通过激活免疫细胞来提高机体的免疫功能,使吞噬细胞吞噬能力提升，增加淋巴细胞活性从而提高其功能[1-3]，抗肿瘤[4]、预防肠道疾病[5-7]等功效。

苯酚-硫酸法测多糖含量一、原理多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。

再以比色法测定。

二、试剂1、浓硫酸：分析纯，95.5%2、80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。

3、6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。

（每次测定均需现配）4、标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）或分析纯葡萄糖。

5、15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。

6、5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。

7、6mol/L 氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。

8、6mol/L 盐酸三、操作1、制作标准曲线准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml，各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml，摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。

2、样品含量测定1）取样品1克（湿样）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。

最后一次将残渣一起到入离心管。

注意：总的溶液不要超出10毫升。

（既不要超出离心管的容量）。

2）离心，转速3000转/分钟，共三次。

第一次15分钟，取上清液。

后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。

最后滤液保持18毫升左右。

3）水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。

4）定容取样。

水浴后，用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。

定容至25毫升的容量瓶中。

黑木耳多糖在食品工业中的应用第一章研究目的及意义第二章黑木耳多糖的理化性质及功能2.1黑木耳多糖的化学结构2.2黑木耳多糖的生理活性2.3黑木耳多糖的构效关系2.4黑木耳多糖的分子修饰第三章黑木耳多糖的提取纯化方法3.1提取方法3.2纯化方法第四章黑木耳多糖在食品中的应用第五章分析与讨论（全文总结加应用前景分析）第一章研究目的及意义黑木耳多糖作为一种生理活性物质，近年来日益受到人们的重视。

黑木耳（Auricularia Auricular）又称木耳、耳子、光木耳，属真菌门担子菌纲的食药用菌，它是生长在朽木上的一种腐生菌，由菌丝体和子实体两部分组成。

菌丝体为无色透明，生长在朽木里面；子实体则生长在朽木的表面，为食用部分。

我国是世界上主要的黑木耳生产国，年产量占世界总产量的90%以上，它在我国多数地区都有生产，这就为黑木耳的开发应用提供了有利条件。

黑木耳脆嫩可口，营养极为丰富，有"素中之荤"的美誉。

吴瑞宪【1】对黑木耳的营养成分作了全面的分析，发现它富含大量的糖类和蛋白质，同时也是一种钙和铁含量较高的食品。

大量研究表明，黑木耳作为"生物应答效应物"（Biological Response Modifier，简称BRM）具有多种生理功能，而这些重要的生理功能都是与其多糖组分密切相关的。

因此，黑木耳多糖备受人们青睐，对其的研究也已成为近年来分子生物学、医药、食品科学等领域的研究和开发应用的热点。

第二章黑木耳多糖的理化性质及功能2.1黑木耳多糖的化学结构黑木耳多糖的结构分析包括单糖的组成、连接点类型、单糖与糖苷键的构型、分子量范围等。

M isaki.等从黑木耳子实体中分离得到了4种多糖：FⅠA、FⅠB、FⅡ和FⅢ，并指出FⅠA及FⅡ均为酸性杂多糖，二者均由D-木糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、D-葡萄糖醛酸组成。

FⅠA的组成摩尔比依次为1.0∶4.1∶1.3∶1.3，FⅡ依次为1.0∶2.1∶1.0∶0.6。

2.期刊论文 蔡小玲.章佩芬.何有明.邝旭.殷隆发 黑木耳多糖、红菇多糖的降胆固醇作用研究 -深圳中西医结合杂
志2002,12(3)
目的对黑木耳多糖和红菇多糖进行降胆固醇作用研究。方法给予大鼠高脂饲料1周，建立高脂血症大白鼠模型，用黑木耳多糖、红菇多糖对具高脂血 症的大白鼠进行股部肌肉注射1周，剂量为每日15mg／kg d，测定血清中总胆固醇含量。结果注射红菇多糖后大鼠总胆固醇含量比对照组降低了 45.2％，注射黑木耳多糖后大鼠的总胆固醇含量比对照组降低了42.2％，均达到了显著水平。结论黑木耳多糖、红菇多糖有显著的降低胆固醇作用。
４．６１。
２．３对比试验结果与分析 对比试验结果如表６所示。在所做对比试验中，
惟有超声波协同纤维素酶酶解超微粉碎后的样品的
提取方法（试验４）所测得的黑木耳粗多糖溶出率远 远高于其他提取方法，说明超声波协同纤维素酶酶 解经超微粉碎强化后效果明显提高。
Ｔａｂ．６
表６对比试验结果
ＲｅｓｕＩｔ ０ｆ ｃＯｍｐａｒｉｓｏｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
6.宁正祥 食品成分分析手册 1998 7.任露泉 试验优化设计 2001 8.张曼夫 生物化学 2002 9.何泽超 纤维素的酶水解及超声波对其加速作用的研究[学位论文] 2001
相似文献(10条)
1.会议论文 张钟.高智谋.章战华 野生黑木耳多糖的提取及特性研究 2006
本文在对野生黑木耳与栽培黑木耳的蛋白质、脂肪、总糖等营养成分及多糖含量分析比较的基础上,对野生黑木耳多糖的提取、纯化、理化性质、单 糖组分等进行了研究,并对野生黑木耳多糖对实验性高脂血症小鼠的降脂作用进行了实验观察。
参考文献
刘玉兰，汪学德，马传国，等．油脂制取与加工工艺学［Ｍ］．北京：科学出版社，２００３． ［苏］索柯罗大Ｂ １１．离心分离理论及设备［Ｍ］．汪尜临，孙启才，陈文梅，译．北京：机械工业出版社，１９８６． 袁志发，周挣节．试验设计与分析［Ｍ］．北京：高等教育出版社。２（）ｏ（）． 李少华，李树君，李子明，等．油料浸出湿粕脱溶技术的发展［Ｊ］．农业机械学报，２００６，３７（８）：２１４～２１７．

ｏ ｔｍａ ｅ ｈ ｏｏ ｏ ｄ ｔ ｎ ｗａ ｂａｎ ｄ ｐ ｉ ｌｔｃ ｎ ｌｇ ｃ ｎ ｉ ｏ ｓ ｏ ｔ ｉｅ ．Ｔｈ ｉ ｕｄ－ｓｌｄ ｒ ｔ ｓ７ ，ｔｅ ｅ ｔａ ｔ ｎ ｔ ｅ ｗａ ，ｔ ｅ ｙ ｉ ｅ ｌｑ ｉ ｏｉ ａ ｉ ｗａ ０ ｈ ｘ ｒ ｃｉ ｉ ｓ４ ｈ ｈ ｏ ｏ ｍ
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黑木耳多糖的提取及免疫调节活性研究进展
栗果;邵莉;毋瑞朋;王少康;薛蓓
【期刊名称】《轻工科技》
【年(卷),期】2024(40)3
【摘要】黑木耳是一种味道极其鲜美、含有大量糖类和膳食纤维的真菌,在我国已有上千年的栽培史。

黑木耳多糖具有悠久的研究历史,且生物活性广泛,具有免疫调节、抗氧化、抗肿瘤、抗凝血、降血糖等多种生物活性功能,被广泛应用于生物学和临床研究中。

本综述通过对黑木耳多糖近年来多种提取方法的优缺点进行比对分析,对免疫调节活性等方面的研究进行详细阐述,为后续开发免疫调节药物和应用黑木耳多糖提供理论参考。

【总页数】5页(P22-26)
【作者】栗果;邵莉;毋瑞朋;王少康;薛蓓
【作者单位】西藏民族大学医学院;东南大学公共卫生学院
【正文语种】中文
【中图分类】TS201.1
【相关文献】
1.黑木耳多糖的提取方法及生物活性的研究进展
2.黑木耳多糖提取方法及生物活性的研究进展
3.富硒黑木耳菌丝体硒多糖的提取与抗氧化活性
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黑木 耳 （ ｕ ｉｕａ ｉ ｕ ｉｕａ Ａ ｒ ｌｒａａ ｒ ）是一种 药食 两 ｃ ｃ
获得 真菌 多糖 的方法 一般有 两种 ：一 是从 固体
用 大 型 真 菌 ，属 层 菌 纲 ，木 耳 目 ，木 耳 科 ，木 耳 培养 的子 实体 中提 取 ，二 是通 过深层 发酵 获得 。相 属 。 别名 光木 耳 、 云耳 、木 茸 、木 菌 等 。黑 木 耳 对于 从子 实体提取 多糖 ，深层 发酵具 有 以下优 势ｆ： ３ ］ 由菌丝 体和子 实体 两部 分构 成 。菌 丝体 生长 在朽木 （ １）生 产 周 期 大 大 缩 短 ； （ ２）能 有 目的地 获 取高 内部 ，子 实 体则 生 长 在 朽 木表 面 。
含 量 的 次 级 代谢 产 物 ； （ ３）液体 种 子 替 代 固体 种
黑 木耳 香嫩 可 口，铁 、糖 类 、蛋 白质等 含量 较 子 ，具 备 菌 龄 一 致 、 接 种 方便 的优 点 ；（ ４）劳 动
高 ，是 备 受 欢 迎 的食 品 。 黑木 耳性 平 ，味 甘 ，富 强 度小 ，且 不受 季 节 及地 域 的限制 。 含 多糖 ，具 有 一 定 的 生 物 活性 ，亦 可 人 药 ¨ 。 ］ 唐青涛等 Ｈ 对黑木 耳深层 发酵生产 多糖进 行了初 黑木 耳的生 物活性 主 要来 自其 多 糖成 分 ］ 黑 步 的探 索性研究 。从 ７ 。 种黑木耳菌株 中筛选 出生 长较 木耳 多糖 具 有 降血 脂 、降血 糖 、抗肿 瘤 、 抗凝 血 、 快并且 产胞外 多糖 量较大 的菌株作为 出发菌 ， 转接液 抗辐射 等 多种生 物活性 。 目前的研 究 主要集 中在 黑 体 种 ，摇瓶培 养 后作 为菌 种 ， 以正交试 验优 化深层 木 耳子 实体 多糖 的提取 工 艺方面 ，液态 深层 发酵 的 发酵 条件 。结果 表 明 ，葡 萄糖 ２％，酵母膏 ０３％， ． 研 究报 导较 少 。现对 黑木 耳多糖 液态 深层 发酵 及分 起始 ｐ ． Ｈ ６０为黑木 耳产 多糖较适 宜 的条 件 ，产量 最 子结构 和生物 活性 的研 究进展作 一 综述 。

【６ ． ｚａＤＫ ｙ ｏ ｙＣ ｔ ｒ， ａ． ｓｒｔ ｎｏ ｎｈｃａｉｓｆ ｍ １ 】ＧＭａｚ， ．ａ， ｎ ｏｔ ｌｅ １ ｏｐｉ ｆＡ ｔｏ ｙｎｎ ｒ Ｔ ｅ ｌ ｔ Ａｂ ｏ ｏ
２０ ， （ ： ８ ６８ ０６ ９ ）２－ ３． ３ ５６
【１ ｕ ｎ，ｈ ｎ Ｆ ｈ ｇ ｅｎ ｈ ｕ ｉＬｎ ｈｒ ｄ ｏｉ ｅ ｇ ２ 】Ｙ ｎ Ｄ ｎ， Ｃ ｎ Ｊ Ｃ Ｈｕ ｔ ｎ
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１ １ ＝ ８ ＝一
黑木耳多糖的研究进展
熊艳 。 车振 明
（ 西华大学生物工程学 院 ， 四川 成都 ６０３ ） １０９
摘
要： 黑木耳 多糖作为一种生理活性物质 ， 近年来 日益受到人们 的重视 。从 黑木耳 多糖 的提取 方 法、 分子结构 、 保
ｗｅｅｂ ｅ ｙｄ ｓ ｕ ｓ ｄ ｒ ｒ ｆ ｉｃ ｓ ｅ ． ｉ ｌ
Ｋ ｙ ｏ ｄ ： ｕｉ ｌ ｉＡ ｒ ｕａ ｌ ａｃ ａ ｄ （Ａ ）ｅｔ ｃ ｎ ｃｎ ｌ ； ｏｅｕａ ｒｃ ｒ；ｅ ｔ ｅ ｅｔ ｅ ｒｓＡ ｒ ｕａ ａ ｕ ｃｌ ｐ ｙ ｃｈｒ ｅＡ Ｐ；ｘ ａｔ ｇｅｈ ｏｏ ｍ ｌ ｌ ｓｕ ｔ ｅｈ ａ ｈ ｆ ｃ ｗ ｃ ｒ ｉ ｒｏｓ ｉ ｒ ｉ ｔ ｙ ｇ ｃｒｔ ｕ ｆ
黑木耳 （ ｕｉ ｌｉ Ａ ｒ ｕ ｒ又称木耳 、 Ａ ｒ ｕ ｒ ｕ ｃｌ ） ｃ ａａ ｉ ａ 耳子 、 光
利条件 。
木耳 ， 属真菌门担子菌纲的食、 药用菌 ， 它是生长在朽 木上的一种腐生菌 ， 由菌丝体和子实体两部分组成。 菌 丝体为无色透明， 生长在朽木里面 ； 子实体则生长在朽 木的表面， 为食用部分。 我国是世界上主要的黑木耳生

1.2 试剂与仪器
试剂：无水乙醇、氯仿、正丁醇、丙酮、正己烷、 亚硝酸钠等。
仪器：DS-1 型高速组织捣碎机；TD4A 型台式离 心机；723A 型分光光度计；Physica MCR301 型流变仪； 701-4 型电热干燥箱；RE-52A 旋转蒸发仪等。
1.3 数据处理及分析
运用 SPSS 软件和 Excel 对试验数据进行统计和分析。
工艺技术 Process Technology
doi:10.16736/41-1434/ts.2019.21.027
黑木耳理化性质的研究及其多糖的提取纯化
Physicochemical Properties of Auricularia auricula and Extraction and Purification of Its Polysaccharide
关键词：黑木耳；多糖；分离纯化；结构分析；流变学特性
Abstract：In this experiment, the black fungus fruit body was used as experimental material, and the black fungus fruit body was obtained by hot water extraction and ethanol precipitation to obtain water-soluble crude polysaccharide. The content of black fungus and its content were determined. The results showed that the polysaccharide content per g of black fungus was (72.07±5.42)%, protein content was (8.63±0.00)%, uronic acid was (5.27±0.66)%, ash was (4.39±0.03)%, moisture content was (9.62±0.00)%; black fungus polysaccharide solution viscosity was 0 ～ 300 s-1 Within the range of shear rate, the viscosity of polysaccharide decreased gradually with the increase of shear rate, and finally stabilized.

黑木耳营养成分及生物活性研究进展作者：张燕燕刘新春王雪徐飞葛阳阳来源：《南方农业·中旬》2018年第10期摘要黑木耳中含有粗多糖、蛋白质、膳食纤维、矿物质和黑色素等多种营养成分，具有抗氧化、抑菌、抗凝血、降血糖及预防动脉粥样硬化等生理活性。

基于此，综述黑木耳营养成分及生物活性的研究进展，以期为后期研究提供借鉴。

关键词黑木耳；营养成分；生物活性中图分类号：S646.6 文献标志码：B DOI：10.19415/ki.1673-890x.2018.29.068黑木耳（Auricularia heimuer）隶属于担子菌门（Basidiomycota）伞菌纲（Agaricomycotina）木耳目（Agaricomycetes）木耳科（Auriculariales）木耳属（Auricularia）[1]，是世界上最重要的四大栽培食用菌之一[2]。

中国是世界上黑木耳栽培的起源地，距今已经有1 400多年的历史，我国黑木耳的生产量从1949年的4500 t到2016年的613.19万吨，目前已达世界总产量的90%以上[3]。

黑木耳中含有蛋白质、膳食纤维、多糖、氨基酸、黑色素、黄酮、多酚以及铁、锌、钙、锰等48种常量和微量元素[4-6]，是一种营养丰富的药食同源食用菌。

《本草纲目》中记载：木耳味甘、性平，主治益气不饥，轻身强志，并可治疗痔疮[7]。

现代医学研究发现，黑木耳具有抗氧化[8]、抑菌活性[9]及预防心血管疾病[10]等多种功效。

基于此，对黑木耳的基本营养成分及其生物活性的研究进行综述，以期为黑木耳的研究与开发提供借鉴。

1 黑木耳的营养成分1.1 粗多糖张彦龙等[11]采用苯酚-硫酸紫外比色法测定的西藏和东北东宁共6个黑木耳样品中粗多糖的含量在13.42～28.9 g/100 g，也有研究检测得到的粗多糖含量在5.59～9.52 g/100 g[4]，由此可见，不同的品种和产地的黑木耳中粗多糖含量有较大差异。

黑木耳多糖口服液制备工艺研究
范春艳
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2014(000)022
【摘要】以黑木耳多糖提取率为指标，采用正交试验法对黑木耳多糖口服液制备
工艺进行了研究。

结果表明：黑木耳多糖的最佳提取工艺为：加入50倍的蒸馏水，90℃恒温水浴加热提取2次，每次3 h，醇沉浓度为80%，4℃静置24 h，过滤
得沉淀，将沉淀复溶于水，再向提取液中加入蔗糖3.5%、蜂蜜1%、柠檬酸
0.06%，经过滤，灌装，灭菌得黑木耳多糖口服液成品。

经硫酸-蒽酮法检测，制
备的黑木耳多糖口服液产品中黑木耳多糖含量为8.0 mg/mL，该定量方法准确可靠，重现性好，可作为黑木耳多糖口服液的质量控制方法。

【总页数】4页(P53-56)
【作者】范春艳
【作者单位】大兴安岭职业学院，黑龙江加格达奇165000
【正文语种】中文
【相关文献】
1.响应面法优化黑木耳多糖的制备工艺研究 [J], 唐旋;唐王裔;何伟峰;王革;张拥军;
朱丽云;王为民
2.黑木耳多糖-银离子螯合物的制备工艺研究 [J], 赵鑫;周芳;王振宇
3.黄精铁皮石斛口服液的制备工艺研究 [J], 黄天卫;龚敏丽;马妮;赵爱;周家明
4.加味茵陈蒿口服液制备工艺研究 [J], 吕一舟;范云鹏;张艳玲;马霞;郭振环;刘永录;
张国祖
5.党参多糖提取工艺研究及党参多糖口服液的制备 [J], 王艳萍;王瑞婕
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黑木耳多糖/壳聚糖可食性复合膜的制备及对鲜牛肉的保鲜效果秦丹丹，吴琼*，白洋，曹慧馨，刘梦林（长春大学食品科学与工程学院，吉林长春 130022）摘 要：为了开发具有优良保鲜效果的可食性复合膜，以黑木耳多糖（Auricularia auricular polysaccharide，AAP）和壳聚糖（chitosan，CS）为原料，通过测定复合膜理化指标、结构和抗氧化性，并将不同材料真空包装的冷鲜牛肉于4℃条件下贮藏10 d进行保鲜实验，研究不同AAP添加量对AAP/CS可食性复合膜理化性质和冷鲜牛肉保鲜效果的影响。

结果表明：AAP的添加可增加AAP/CS复合膜的厚度、密度、溶解度、溶胀度、抗拉强度和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率，并降低复合膜的水蒸气透过率和透明度；通过分析复合膜的傅里叶变换红外光谱，初步推测复合膜液中AAP和CS之间发生了相互作用。

与市售聚对苯二甲酸乙二酯/聚乙烯复合真空包装组及CS 膜包装组相比，AAP/CS复合膜包装组牛肉感官得分和pH值更高，菌落总数和硫代巴比妥酸反应物值更低。

因此，AAP/CS可食性复合膜有望在食品抑菌保鲜等方面发挥积极作用。

关键词：黑木耳多糖；壳聚糖；可食性膜；鲜牛肉保鲜Preparation of Auricularia auricular Polysaccharide/Chitosan Edible Composite Film and Its PreservativeEffect on Fresh BeefQIN Dandan, WU Qiong*, BAI Yang, CAO Huixin, LIU Menglin(College of Food Science and Engineering, Changchun University, Changchun 130022, China) Abstract:Auricularia auricular polysaccharide (AAP) and chitosan (CS) were used as raw materials for preparing an edible composite film with good preservative effect. The impact of different AAP contents on the physicochemical properties, structure, antioxidation of AAP/CS composite films was studied as well as the influence on the preservative effect of AAP/CS composite films on fresh beef during 10 days of storage at 4 ℃. The results showed that the addition of AAP could increase the thickness, density, solubility, swelling degree, tensile strength and 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging capacity, and reduce the water vapor transmission rate and transparency of the AAP/CS composite film. From the Fourier transform infrared spectrum of the AAP/CS composite film, it was tentatively deduced that there was an interaction between AAP and CS in the mixed solution. Compared to polyethylene terephthalate/polyethylene (PET/PE) vacuu m packaging and CS film packaging, the sensory score and pH of AAP/CS packaged beef meat samples were increased, and the total number of colonies and thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) value were decreased.Therefore, the AAP/CS edible composite film holds promise for food preservation.Keywords: Auricularia auricular polysaccharide; chitosan; edible composite film; preservation of fresh beefDOI:10.7506/spkx1002-6630-20200312-195中图分类号：TS206.4 文献标志码：A 文章编号：1002-6630（2021）05-0246-06引文格式：秦丹丹, 吴琼, 白洋, 等. 黑木耳多糖/壳聚糖可食性复合膜的制备及对鲜牛肉的保鲜效果[J]. 食品科学, 2021, 42(5): 246-251. DOI:10.7506/spkx1002-6630-20200312-195. 收稿日期：2020-03-12基金项目：吉林省科技发展计划项目（20190301066NY）；吉林省教育厅计划项目（JJKH20200580KJ）；长春大学科研培育项目（ZKQ201910）；长春大学硕士研究生学术创新项目第一作者简介：秦丹丹（1994—）（ORCID: 0000-0002-1028-9720），女，硕士研究生，研究方向为天然产物与功能食品。

多糖的提取和纯化之杨若古兰创作多糖的提取和纯化多糖的提取和纯化摘要本文较具体地介绍了多糖的提取和纯化方法，为多糖的研讨和生产提供参考根据.关键词多糖；提取；纯化；活性炭多糖（polysacharides，PS），又称多聚糖，是由10个以上的单糖通过苷键连接而成的，具有广泛生物活性的天然大分子化合物.它广泛分布于天然界高等植物、藻类、微生物（细菌和真菌）与动物体内.20世纪60年代以来，人们逐步发现多糖具有复杂的、多方面的生物活性和功能[1]：(1)多糖可作为广谱免疫促进剂，具有免疫调节功能，能医治风湿病、慢性病毒性肝炎、癌症等免疫零碎疾病，甚至能抗AIDS病毒[2].如甘草多糖具有明显的抗病毒和抗肿瘤感化[10]，黑木耳多糖、银杏外种皮多糖和芦荟多糖可抗肿瘤和加强人体免疫功能[3-5].(2)多糖具有抗感染、抗放射、抗凝血、降血糖、降血脂、促进核酸与蛋白质的生物合成感化.如柴胡多糖具有抗辐射，加强免疫功能等生物学感化[6]，麦冬多糖具有降血糖及免疫加强感化[7-8]，动物黏多糖具有抗凝血、降血脂等功能[9].(3)多糖能控制细胞分裂和分化，调节细胞的生长与衰老.如爬山虎多糖具有抗病毒和抗衰老感化[10]，银杏外种皮粗多糖具有抗衰老、抗过敏、降血脂、止咳祛痰、减肥等功能[11].另外，多糖作为药物，其毒性极小，因此多糖的研讨已惹起人们极大的爱好. 因为多糖具有的生物活性与其结构紧密相干，而多糖的结构又是相当复杂的，所以在这一领域的研讨绝对缓慢.但人们在多糖的分离提取与纯化方面已做出了很多工作.1. 多糖的提取[12]1.1 热水浸提法：1.1.1多糖提取条件的优选根据文献报导[13]：影响热水浸提多糖的身分次要有提取时间、提取次数、溶剂体积、浸提温度、pH值、醇析浓度和植物颗粒大小等.在试验前对上述多种身分利用正交实验法做出优选，才干选出最好提取方案.1.1.2其步调为：原料→粉碎→脱脂→粗提（2－3次）→吸滤或离心→沉淀→洗濯→干燥首先除去概况脂肪.原料经粉碎后加入甲醇、乙醚、乙醇、丙酮或1：1的乙醇乙醚混合液，水浴加热搅拌或回流1－3小时，脱脂后过滤得到的残渣普通用水作溶剂（也有效氢氧化钾碱性水液、氯化钠水液、1％醋酸和1％苯酚或0.1－1M 氢氧化钠作为提取溶剂）提取多糖.温度控制在90－100℃，搅拌4－6小时，反复提取2－3次.得到的多糖提取液大多较黏稠，可进行吸滤.也可用离心法将不溶性杂质除去，将滤液或上清液混合（得到的多糖若为碱性则须要中和）.然后浓缩，再加入2－5倍低级醇（甲醇或乙醇）沉淀多糖；也可加入费林氏溶液或硫酸铵或溴化十六烷基三甲基铵等，与多糖物资结合生成不溶性络合物或盐类沉淀.然后顺次用乙醇、丙酮和乙醚洗濯.将洗干后疏松的多糖敏捷转入装有五氧化二磷和氢氧化钠的真空干燥器中减压干燥（若沉淀的多糖为胶状或具粘着性时，可直接冷冻干燥）.干燥后可得粉末状的粗多糖.1.2 微波辅助提取法：其道理为利用分歧极性的介质对微波能的分歧接收程度，使基体物资中的某些区域和萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使萃取物资从基体或体系平分离出来，进入到介电常数小，微波接收能力较差的萃取剂中[14].因为微波能极大加速细胞壁的破裂，因此利用于中草药中无效成分的提取能极大加快提取速度，添加提取产率.而且因为其选择性好，提取后基体能坚持良好的性状，提取液也较普通的提取方法澄清[15].聂金源等在柴胡多糖和黄酮化合物的提取[18]中对微波辅助提取法、超声辅助法和索氏提取法进行比较，发现微波辅助提取法所需时间最短（10min），多糖的提取率最高（28.46％）.1.3 超声辅助法：其道理是利用超声波的空化感化加速植物无效成分的浸出提取，另外超声波的次级效应，如机械振动、乳化、扩散、击碎、化学效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混合，利于提取[16].超声波辅助法与惯例提取法比拟，具有提取时间短、产率高、无需加热等长处[17].1.4 索氏提取法：将植物粉末置于索氏提取器中，加入石油醚，60℃-90℃条件下提取至无色（普通为6小时）.过滤，滤渣挥发干燥完溶媒后加入80%乙醇，再提取6小时，过滤，滤渣乙醇挥发干燥后加蒸馏水.回流提取2次，趁热过滤，滤液减压浓缩，再除蛋白，醇沉，除色素.60℃干燥，称重.1.5 醇提法：前后将90%和50%乙醇加入植物粉末中，振荡充分再抽滤.滤液中加入充足无水乙醇，至于4℃冰箱中过夜.减压抽滤，再除去色素，得多糖粗品，在60℃通风干燥箱中干燥，再置干燥皿中恒重保管.醇提法方法简单，易于操纵，但提取率较低，乙醇使用量大，不宜大规模提取使用.1.6 其它方法：多糖的提取方法还有稀碱液浸提法、稀酸液浸提法、酶法等.但因为稀酸、稀碱条件下，易使多糖发生糖苷键的断裂，部分多糖发生水解而使多糖的提取率减少，因此很多试验中防止采取稀碱液浸提法和稀酸液浸提法.2. 多糖的纯化2.1 多糖中杂质除去方法粗多糖中常常混杂着蛋白质、色素、低聚糖等杂质，必须分别除去.2.1.1 除蛋白质采取醇沉或其它溶剂沉淀所获得的多糖，常混有较多的蛋白质，脱去蛋白质的方法有多种：如选择能使蛋白质沉淀而不使多糖沉淀的酚、三氯甲烷、鞣质等试剂来处理，但用酸性试剂宜短，温度宜低，以避免多糖降解.经常使用的方法有[19]：2.1.1.1 沙维积法（Sevag法）[20]：根据蛋白质在氯仿等无机溶剂变性而不溶与水的特点，将多糖水溶液、氯仿、戊醇（或正丁醇）之比调为25:5:1或25:4:1，混合物剧烈振摇20到30分钟，蛋白质与氯仿－戊醇（或正丁醇）生成凝胶物而分离，然后离心，分去水层和溶剂层交界处的变性蛋白质.此种方法较暖和，在防止降解上有较好后果，但效力不高，如五味子多糖的提取实验中要反复处理达三十几次.而且每次除去蛋白量变性胶状物时，不成防止的溶有少量多糖，另外少量多糖与蛋白质结合的蛋白聚糖和糖蛋白，在处理时会沉淀上去，形成多糖的损失.如能配合加入一些蛋白质水解酶，再用Sevage法后果更佳.2.1.1.2 三氟三氯乙烷法[21]：多糖溶液与三氟三氯乙烷等体积混合，低温下搅拌10min摆布，离心得上面水层，水层继续用上述方法处理几次，即得无蛋白质的多糖溶液，此法效力高，但溶剂沸点较低，易挥发，不宜大量利用.2.1.1.3 三氯醋酸法：在多糖水溶液中滴加5％－30％三氯醋酸，直至溶液不再继续混浊为止，在5－10℃放置过夜，离心除去沉淀即得无蛋白质的多糖溶液.此法会惹起某些多糖的降解.Sevag法、三氟三氯乙烷法和三氯醋酸法三种方法均不适合糖肽，因糖肽也会像蛋白质那样沉淀出来.对于对碱波动的糖蛋白，在硼氢化钾存鄙人，用稀碱暖和处理，可以把这类结合蛋白质分开[1].2.1.1.4 酶解法[22]：在样品溶液中加入蛋白质水解酶，如胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、链霉蛋白酶等，使样品中的蛋白质降解.通常将其与Sevag法综合使用除蛋白质后果较好.2.1.1.5 盐酸法[23]：取样品浓缩液，用2mol/L盐酸调节其PH至3，放置过夜，在3000r/min条件下离心，弃去沉淀，即脱去蛋白质.另有李知敏[23]和叶将瑜[25]等人分别在植物多糖实验中证实：盐酸法、三氯乙酸法及Sevag法脱蛋白率分别为72.5％、46.1％和42.3％，多糖的损失率分别为15.1%、6.1％和14.3％.盐酸法脱蛋白率高，但多糖的损失率也较高;三氯乙酸法较暖和，但除蛋白效力不高；Sevag 法的脱蛋白后果不及前两种.2.1.1.6 其它方法：可以加入5%ZnSO4溶液和饱和Ba（OH）2溶液，振荡后离心去蛋白.此法除蛋白不敷完整，可结合Sevag法使用.还可在提取液中加入50%的TCA溶液至沉淀完整，在4000r/min的条件下离心10min，收集上清液，即为除蛋白液.还有人使用4:1的氯仿-乙醇溶液除蛋白，将混合液清摇，再静置，取上清液.此过程需反复多次方可除尽蛋白.除去蛋白质的样品用紫外分光光度计检验，观察在280mm处是否有接收，如果无接收则标明蛋白质曾经除尽[24].2.1.2 除色素2.1.2.1活性炭（activated carbon）除色素[12]：活性炭属于非极性吸附剂，有着较强的吸附能力，特别适合于水溶性物资的分离.它的来源充足，价格廉价，上柱量大，适用于大量制备性分离.目前用于色谱分离的活性炭次要分为粉末状活性炭、颗粒状活性炭、锦纶活性炭三种.普通情况下，尽量防止用活性炭处理，因为活性炭会吸附多糖，形成多糖的损失.2.1.2.2对于植物来源的多糖，可能含有酚型化合物而色彩较深，这类色素大多呈负性离子，不克不及用活性炭接收剂脱色，可用弱碱性树脂DEAE纤维素或DuoliteA－7来吸附色素.2.1.2.3若糖和色素时结合的，易被DEAE纤维素吸附，不克不及被水洗脱，这类色素可进行氧化脱色：以浓氨水或NaOH液调至PH8.0摆布，50℃。