组织分离法制备母种

食用菌菌种分离的方法和操作步骤以及注意事项食用菌菌种分离的方法和操作步骤菌种分离即是进行食用菌菌丝纯化的过程，它是制种工作的重要环节，通俗地讲就是把食用菌菌丝从自然中单独分离出来进行纯培养，从而获得纯食用菌菌丝的过程。

菌种分离是一项重要而又细致的工作，每个环节都必须严格按照无菌操作规程进行。

食用菌的分离方法很多，常用的有组织分离法、孢子分离法和基内菌丝分离法三种。

1.组织分离法组织分离法是将食用菌的部分组织移接到斜面培养基上获得纯培养的方法。

其特点：一是属于无性繁殖，能够保持原有菌种的优良特性，是生产中获得纯菌种的常用方法，且简单易行，取材广泛，菌丝萌发快。

二是组织分离操作简便，又不易带入杂菌，容易获得纯菌种。

但对银耳、黑木耳等胶质菌因其子实体种菌丝极少，如用组织分离培养，则往往不易成功。

1.1子实体分离种菇要选择朵大盖厚、柄短、八九分成熟的优良品种。

切去菇体基部，在超净工作台用75%的酒精棉球进行擦拭菌盖与菌柄两次，进行表面消毒。

接种时，只要将种菇撕开，用消毒后的小刀在菌柄与菌盖的交界处切取一小块组织，再用接种针将组织块放入PDA培养基的试管斜面中间。

置于24℃温度下培养3-5天就可以看到组织块上产生白色绒毛状菌丝，转管扩大即得到菌种。

如香菇、平菇等可以使用此方法。

1.2菌核组织分离茯苓、猪苓、雷丸等食用菌的子实体不易采集。

而常见的是它储藏营养的菌核。

用菌核分离，同样可以获得菌种。

方法是将菌核表面洗净，用酒精消毒，切开菌核，取中间组织一小块，约黄豆大小，接种在PDA培养基斜面上，在24℃下培养，产生菌丝后进行分离纯化。

应注意的是，菌核是储藏器官，大部分是多糖类杂质，只有少量的菌丝，因此挑选的组织块要大一些，如果组织块过小，则不易分离出菌种。

1.3菌索分离法菌索分离常用于蜜环菌分离。

方法是选新鲜的活菌索，用75%酒精棉球将菌索表面消毒后，去掉菌鞘，把白色菌髓部分用无菌剪刀切成小段，接入PDA斜面培养基上，在24℃下培养，有白色菌丝长出且无污染，即表明分离成功。

食用菌栽培学复习资料食用菌复习指导食用菌:是指具有肥大多肉的繁殖器官、木质化程度很低、可供人们食用的大型丝状真菌。

食用菌学研究的主要对象是大型真菌中可供食用的真菌，其主要任务是研究其生命活动规律、栽培技术和利用方法，目的是为了生产更多更好的食用菌产品来满足人民生活的需要。

食用菌的营养价值蛋白质、脂类、矿质元素、维生素。

食用菌是由菌丝体及子实体两部分构成的。

菌丝体是由大量纤细的菌丝组合而成的群体，菌丝体以生活基质中吸收营养，供给食用菌生长发育，它包括四种类型: <一>初生菌丝其为孢子萌发而产的单核菌丝。

<二> 次生菌丝指由初生菌丝以一定的方式结合而成的双核菌丝。

根据结合方式的不同，又可分为同宗结合和异宗结合。

1、同宗结合:由同一个孢子或同性孢子萌发后产生的初生菌丝,相互间配对结合而形成双核菌丝的方称之为同宗结合。

2、异宗结合:由不同性的孢子萌发后产生的初生菌丝相互间配对结合而形成双核菌丝的方式称之为异宗结合。

<三>三生菌丝即组织化的双核菌丝，菌丝有一定的排列，一定的结构，构成子实体的菌丝就是三生菌丝，它具有三种不同类型:生殖菌丝、联合菌丝、骨架菌丝。

<四> 特化菌丝有的子囊菌和担子菌在环境条件不良或繁殖时，菌丝体的菌丝相互紧密的缠结在一起，于是形成了特化的菌丝，常见的有菌核、菌索。

子实体是食用菌在一定条件下产生的繁殖器官，相当于绿色植物的花和果实，是产生孢子的结构，分为菌盖、菌褶、菌柄、菌环、菌托等几个部分。

菌褶与菌柄连接方式A弯生:菌褶与菌柄连接处稍微向上弯曲。

B离生:菌褶不与菌柄连接，其间有一定距离。

C直生: 菌褶直接与柄连接,不向上弯曲不向下延生。

D延生: 菌褶菌柄向下延生。

菌环是内菌幕的遗迹。

有些子实体在幼小时菌盖和菌柄之间有一层膜连结，这一层膜叫内菌幕或内菌膜，随着子实体的长大，内菌膜破裂，在菌柄上留下一个环状物称为菌环。

菌托是外菌幕的遗迹。

实验二武陵山野生食用菌母种的制作与培养一.目的1.了解食用菌菌种的来源，菌种的分离方法。

2.掌握PDA培养基的配制、分装、灭菌的方法和食用菌菌种的培养方法。

3.熟悉和掌握无菌操作的原理和操作方法。

二.原理首先是制作菌种，即通过孢子或组织分离出菌丝体，菌丝体扩大繁殖成为生产菌种；其次是将菌种接种于基质中，生产出食用菌的子实体。

食用菌菌种是食用菌菌种生产和科研工作的基本材料。

食用菌生产的菌种来源于野生食用菌资源，我国丰富的食用菌资源为我国食用菌产业的发展奠定了坚实的基础。

食用菌菌种的最初来源是来自于野生食用菌资源，采用孢子或组织分离法分离得到食用菌菌种，然后把该菌种进行人工驯化、菌种选育，得到具有生产价值的食用菌菌种。

母种是食用菌生产的经菌丝体，菌丝体扩大繁殖成为生产菌种；而该过程必须在无菌环境中以无菌操作进行，以防杂菌污染。

一般在接种箱，无菌室或超净工作台上进行接种。

接种前要对环境进行消毒，一般是用37%~40%甲醛溶液于接种前按5ml/m3 的量熏蒸半小时。

也可用紫外灯照射半小时，以杀死空气中的微生物。

适合食用菌生长繁殖的混合培养料称培养基，由于不同的食用菌生长繁殖需要相应的营养条件及适宜的酸碱度。

因此，在配制培养基时，还要根据所使用的配方，按次序配制培养基，并调节pH等。

在液体培养基中加入琼脂等凝固剂后，就可制成试管斜面或在培养皿内倒成平板，成为用途广泛的食用菌母种培养基。

三.实验材料1.野生食用菌标本。

2.量筒、试管、玻棒、铝锅、电炉、天平、高压灭菌锅、超净工作台、接种钩、酒精灯、火柴、蒸发皿、甲醛、高锰酸钾、70%酒精、无菌平皿3.培养基配方（1）PDA培养基马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18~25g 和水1000ml（2）完全培养基蛋白胨2.0g、酵母膏2.0g、葡萄糖20g 、MgSO4H2O 0.5g、K2HPO4 1.0g、KH2PO4 1.0g、琼脂20g、水1000ml 四.方法与步骤（一）培养基的配制1.把马铃薯洗干净，去皮，挖掉芽眼，切成大约1cm3 的小方块，在天平上称取200g。

黑灵芝的高产种植方法黑灵芝是灵芝中的一种，被称为灵芝中的极品，又名黑芝、玄芝、黑云芝，性味甘、平，有益肾、利尿、通九窍、聪察、消积的功效与作用，药用价值大，经济效益高。

那么，下面我们就一起来看看黑灵芝的高产种植方法吧!一、生长习性黑灵芝属高温型腐生真菌，菌丝生长适宜温度为24~30℃。

子实体生长适宜温度为24~28℃。

对光照要求有一定的散射光，孢子发芽及菌丝生长不需要光照有向阳性和好气性。

空气相对湿度要求85~95%。

黑灵芝喜偏酸、培养基ph值以4~6为宜。

二、制种1、母种培养基配方及制备马铃薯(去皮)200克、葡萄糖20克、琼脂20克、磷酸二氢钾3克、硫酸镁1.5克、维B1 1~2片、水1000克。

制备时，现将马铃薯切成薄片，放入1000克水中煮沸半个小时，用双层纱布过滤去渣的滤液，再将琼脂加入滤液中煮沸搅拌使其溶化。

溶化后加入葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、维B1片，并将水补充至1000毫升。

即成溶液体培养基。

然后将液体培养基趁热分装入试管，装量为试管长度的四分之一。

用棉赛堵住试管口，上面用双层牛皮纸包扎后，放入高压锅灭菌。

灭菌时，先在夹层内放入适量水，再将分装好培养基的试管放入锅内，盖紧密闭加热：先将冷空气排出，然后关闭排气阀，加热升压。

当气压达1.1公斤/厘米2 ,锅内温度121℃时，保持30分钟，即达灭菌效果。

停止加热，慢慢打开排气阀，待气压指针降到零时，即可取出试管，趁热将试管放置斜面，冷却凝固后，即成体斜面培养基。

2、纯菌种的分离有组织分离法和孢子分离法。

组织分离法在无菌条件下，选取新鲜成熟的灵芝，于菌盖或菌柄内部切取一块黄豆粒大小的组织。

接种到斜面培养基上。

然后放入24~26℃的室内培养7~10天，当白色菌丝布满斜面时，即得母种，再将母种转管扩大培养成原种和栽培种，即可进行灵芝生产。

孢子分离法在无菌条件下，取新鲜成熟的黑灵芝，放在液体培养基上，(上述配方去掉琼脂)在24~26℃温度下静止培养。

羊肚菌菌种分离和培养技术1、菌种分离目前可以纯人工栽培的羊肚菌品种有变红羊肚菌、梯纹羊肚菌、尖顶羊肚菌、六妹羊肚菌、七妹羊肚菌以及粗柄羊肚菌、普通羊肚菌。

当前我国的栽培品种主要以黑色品系为主，梯纹羊肚菌占总栽培面积的95％以上，产量及稳定性最好；六妹羊肚菌和七妹羊肚菌次之，产量稳定性与梯纹羊肚菌相当，开发潜力较大；黄色品系粗柄羊肚菌栽培规模较小，产量及稳定性有待进一步提高。

采用孢子分离、组织分离或基质分离法获得纯菌种。

分离物必须经过纯化鉴定，并经出菇试验方可大规模栽培使用。

通常情况下，分离物在20℃～25℃培养2d即可萌动，3d左右即可形成初生菌落，挑取萌发菌落的尖端进行纯化或扩大培养。

2、母种培养各种真菌培养基均适合羊肚菌菌丝的生长，通常情况下，菌丝在25％条件下培养4d～7d即可长满试管，5d～8d开始形成菌核。

母种培养基：PDA培养基，马铃薯200g(煮汁)、葡萄糖20g、琼脂18g～20g，自来水1000mL，pH值自然；CYM完全培养基：葡萄糖20g、蛋白胨2g、酵母膏2g、卧磷酸氢二钾1g、硫酸镁0.5g、磷酸二氢钾0.46g、琼脂粉20g，蒸馏水1000mL。

优良母种表现为菌丝生长均匀，初期菌丝密集洁白，粗壮，气生菌丝旺盛，爬壁力强，后期菌丝产生浅棕黄色色素，菌落浅棕色至棕色。

大部分羊肚菌菌株在培养4d～6d开始产生菌核，菌核初期白色，针尖大小，后期芝麻粒至绿豆粒大小，分散或凝集呈片状，菌核随着生长时间增长开始变黄，最终为棕黄色。

3、原种、栽培种培养基原种、栽培种培养基配方基本相同，常压或高压灭菌后使用，常用配方如下：杂木屑70％、麦麸20％、生石灰1％～2％、石膏1.5％、腐殖质土10％；杂木屑60％、小麦25％、生石灰l％～2％、石膏1.5％、腐殖质土15％。

每个18mm×l80mm母种块转接6瓶原种，每瓶原种转接50袋～55袋栽培种。

750mL菌种瓶生产原种，22℃～25℃暗室培育，15d～20d即可长满，25d可用于栽培种制作。

食用菌制种技术（五）人们采取无菌操作的方法，把某种食用菌从混杂的微生物中，单独地分离开来，这个过程叫做菌种分离。

从分离过程中得到的菌丝体纯化后，就是纯菌种。

在实验室条件下，以人工使纯菌种大量生长和繁殖的方法，叫做培养。

一、母种培养(一)菌种分离菌种分离通常采用的方法有孢子分离法、组织分离法和寄主分离三种方法，三种方法各有特点，可根据不同的菌类和生产条件选择使用。

1.孢子分离法孢子分离法，是利用成熟子实体的有性孢子能自动从子实体层中弹射出来的特性，在无菌条件下和适宜的培养基上，使孢子萌发成菌丝，而获得纯种的一种方法。

(1)孢子的采集①种菇的选择用作分离菌种的种菇，应选择出菇早、朵型好、个体肥大、生长健壮、无病虫害、八成熟的菇体。

一进入出菇期，就要注意观察选择，并作好标记。

不同的食用菌选择的具体要求是：香菇菇型圆整，菇体肥大，柄细而短，菌盖呈深褐色，出菇早，无病虫害，一般为八成熟的子实体。

双孢蘑菇菇型圆整，光滑直立，颜色洁白，柄粗盖厚，无病虫害，生长快而健壮的单生菇。

草菇菇型端正，肥大健壮，包被未破，无病虫害的单生菇。

平菇出菇早，菌盖厚实，重叠丛生，菌柄粗短，色泽鲜亮，尚未散发孢子，八成熟而无病虫害的子实体。

木耳选朵大、耳片厚、色黑、生长健壮、褶皱多、无病虫害的春耳。

银耳朵大肉肥、色泽洁白、展片良好、朵型美观、八成熟、无病虫害的子实体。

猴头形状正常、颜色洁白、出菇早、生长健壮、菌刺丰满、无病虫害的子实体。

金针菇出菇早而均匀、生长健壮、朵型正常、菌柄长短适中、无病虫害的子实体。

②种菇的消毒子实体采回后要及时切除基部，并进行表面消毒。

对子实体层未外露的种菇(如蘑菇等)，可浸入0.1%升汞溶液中消毒约1分钟，用镊子捏出后经无菌水冲洗数次，再用无菌纱布将表面水吸干；对于子实层裸露的种菇(如香菇等)，只能用75%酒精揩擦菌盖及菌柄表面；而对于银耳、木耳类子实体，却千万不能接触消毒剂，只能置于烧杯中用无菌水洗涤，然后捏起再经无菌水冲洗数次，同样用无菌纱布吸干表面水。

双孢菇种植中常犯的错误一、预湿不充分。

稻草应充分浸泡，以利发酵。

浸泡不充分的稻草翻堆时需大量补水，在二次翻堆之前不能补足水分的不但以后很难补足水分，而且还会影响菌丝的生长。

二、翻堆不匀。

翻堆时应按“生料放中间，熟料放两边；中间的放两头，两头的放中间”的原则。

但很多人翻堆时不遵循上述原则，以致培养料发酵不匀，达不到翻堆的目的。

三、采土不合要求。

有些种植户覆土时采用未经消毒处理的菜园土，有的则添加未充分腐熟的牛粪。

这样的营养土中带有大量病菌和虫卵，容易引发多种病害，给生产带来损失。

四、覆土时添加尿素。

新的种植户容易习惯性地把双孢菇种植和其他作物种植等同起来，覆土时添加尿素，造成氨味过重导致菌丝死亡。

五、喷施“关门水”。

在双孢菇种植前期高温时喷施“关门水”会造成高湿环境，引起冒菌丝结菌被及小菇死亡等现象，后期喷施“关门水”则容易使菌丝退化、早衰。

双孢菇追肥的种类和制法双孢菇在蘑菇生产中，当采收了二、三潮菇以后，原来培养料的营养消耗了很多，如不追加一些肥料，就会出现衰落现象；菇形小，菌蕾凋萎率高，产品质量降低。

为了补给营养、维持菌丝正常生长和提高产量，必须及时追肥。

追肥的种类和制法通常有如下几种：一、畜粪汁。

将腐熟的畜粪尿（牛粪尿或猪粪尿都可以），放少量水调成糊状，放在锅中煮至60 ℃～70 ℃维持30 分钟，挤出浓汁过滤，加入5 倍～6 倍水，可直接喷施，每平米喷0.5公斤。

注意煮时温度不要太高，时间不要太长，以免养分损失。

二、培养料浸出液。

在做培养料时就预先留下一部分，以浸出液作追肥。

这是一种完全追肥，不但含有氨、碳同时含有磷、钾、钙等各种盐类。

喷之前先将培养料放在缸里，用10 倍的开水浸泡，不断用力搅拌，加盖闷闭2 ～3 小时，冷却后其滤液即可喷施，每平米用0.6公斤。

三、黄豆浆水。

用黄豆浆水喷蘑菇，增产作用很显著，但是遇高温时常出现霉菌而降低产品质量，所以在温度高时，不宜使用。

黄豆浆水的制法，先将黄豆500 克在清水中浸 3 ～ 4 小时，待黄豆吸足后，磨成豆浆，过滤，加水25 千克，拌匀即可使用，每平米喷0.8公斤。