实验三 组织分离法

食用菌原种筛选与扩繁实验原理食用菌原种筛选与扩繁实验原理「篇一」食用菌制种与栽培教案实验一食用菌形态结构的观察一、实验目的认识和掌握常见的栽培的食用菌形态特征二、实验原理常见的栽培的食用菌主要是担子亚门层菌纲和腹纲的一些种类，它们由双核菌丝分化形成子实体，子实体是有性孢子着生的器官，其孢子外生在担子上，并聚集成一层子实层，但它们的子实体形状因种类不同而有很大差别，是认识食用菌类别的主要标志。

三、实验器材1、新鲜的食用菌，浸、干制标本。

2、解剖刀。

四、实验方法识别香菇、双孢蘑菇、平菇、猴头、口蘑、木耳、竹荪、草菇、银耳、金针菇等形态特征。

取平菇、香菇，首先观察其子实体的组成部分及其形态特征。

再用解剖刀纵切子实体观察其菇盖组成。

菌肉的颜色、质地、菌褶形状和着生情况(离生、延生、直生、弯生)。

再观察其菌柄的组成，菌柄的质地，中空或中实。

五、作业绘制香菇子实体形态及纵剖面简图，并注明各部位名称。

实验二食用菌母种培养基的制备与灭菌一、实验目的1、掌握食用菌母种培养基的配制方法。

2、熟练掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法。

二、基本原理培养基是按照食用菌生长发育所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的营养基质。

其中含有碳源、氮源、矿质元素、生长因子和水分等物质。

由于食用菌在生长发育过程中，还必须在适宜的酸碱条件下，才能表现最大的生活力。

因此，对不同种类食用菌还须将培养基调节到一定的PH值范围。

食用菌的培养基可分为母种培养基、原种培养基和栽培种培养基。

对于母种培养基一般多采用固体培养基，因此需在培养基中加入一定量的凝固剂。

三、实验器材马铃薯(去皮)200g，琼脂16-18g，葡萄糖20g，大试管、棉塞、灭菌锅、漏斗、铁架台、胶管。

四、实验步骤1、选好马铃薯洗净去皮(挖去芽眼)，切成薄片，取200g放在铝锅中，加水1000mL，煮沸20分钟，双层纱布过滤，取滤液并补足水至1000mL，加琼脂，小火加热，玻璃棒搅拌至琼脂全部溶解，再加入葡萄糖使其溶化。

食用菌实验报告【篇一：食用菌组织分离法实验报告】食用菌母种的制作——组织分离法实验报告实验目的：学习和掌握食用菌的组织分离法；一、实验原理：食用菌的母种一般是采用孢子分离法或组织分离法得到的纯培养物。

利用食用菌子实体内部组织进行分离，是获得母种最简便的方法。

二、实验器材：1. 食用菌：香菇、平菇。

2. 培养基：pda培养基斜面。

3. 仪器或其他用具： 75%酒精棉球、接种针记号笔等。

三、实验方法：1. 选择种菇：选择肥壮菇体作种菇；2. 种菇消毒：取1张菇片，用 70%的酒精轻擦表面进行消毒；3.菇肉接种：将菇片纵向撕开，在每个裂面靠近菇柄与菌盖的交界处取一米粒大小的菇肉组织接于pda试管斜面上； 4. 培养：将试管斜面置于15～30℃下培养；五、注意事项1. 在整个操作过程中都要注意无菌操作，一切用具都要消毒。

2.要等刀片冷却后再切取组织块。

六、实验结果与记录第一次实验：10月16日上午进行接种，两试管都以肥壮的双孢菇为种菇，10月13日观察培养基结果分析：本次实验全班只有一人成功，大部分都被杂菌污染，最有可能的原因就是制作的pda培养杂菌没有菌落产生基本身受到污染，但是又有培养基根本没有菌落产生，那么一方面可以看做是空白对照，得到培养基本身没有问题而是我们操作都有问题，没有做到避免污染，规范的无菌操作，另一方面也有可能是在接种过程，接种针，试验刀酒精灯上灼烧后未冷却直接接触种菇，使待接种的菌块高温致死。

第二次实验：10月30日上午进行接种，记号笔标记的两支试管为双孢菇，标签纸标记的两只试管为香菇进行实验，10月9日观察实验基本成功，试管下端有少部分红棕色杂菌无杂菌，也无目的菌落实验成功，无杂菌，斜面上均为雪白的菌丝结果分析：培养基本身无污染，接种香菇菌块的过程中可能由于接种针和实验刀未完全冷却导致目的菌块高温致死，培养基上无菌落产生。

接种双孢菇菌块过程中基本做到了无菌操作，实验较为成功。

实验感想：本实验原理目的简单，操作过程方法在微生物学中也有接触，但是容易杂菌污染，第一次实验结果几乎全军覆没，几乎所有培养基都受到了污染，第二次实验在总结前一次的基础上，大部分做到了无菌操作，看到了培养基中雪白的菌落。

杏鲍菇组织分离实验方案实验目的1、通过新鲜杏鲍菇子实体的组织分离得到杏鲍菇纯菌种，学习其原种及栽培种的制备，并尝试性地进行出菇试验；2、学习并掌握珍稀食用菌——杏鲍菇菌种的制备过程，理论联系实际，同时为暑期到榕珍菌业实习做准备；3、通过亲身实践，发现自身存在的理论及实践方面的不足，为接下来的食用菌理论知识的系统学习指明方向，同时锻炼自己对食用菌菌种分离的操作及相关知识的熟悉，为以后独立实验打下坚实的基础。

实验内容1.杏鲍菇子实体的采集及预处理；2.杏鲍菇子实体的组织分离及纯化；3.杏鲍菇菌种的观察、鉴定、保藏；4.杏鲍菇原种、栽培种制备及出菇试验；实验原理1.杏鲍菇介绍杏鲍菇（Pleurotus eryngii)又名刺芹侧耳、雪茸，分类学上属于担子菌亚门（Basidiomycetes)，层菌纲(Hymenomycetes)，伞菌目(Agaricales)，侧耳科(Pleutotaceae)，侧耳属(Pleurotus)。

杏鲍菇菌肉肥厚，质地脆嫩，并且食之有一种特殊的杏仁香味，商品性状好，有“杏鲍菇王”、“干贝菇”等美称。

杏鲍菇干品含蛋白质21.44%，脂肪1.88%，还原糖2.17%，总糖36.78%，甘露醇2.27%，游离氨基酸2.36%，总碳水化合物57.35%，水溶性成分66.9%，灰分7.83%，水分11.56%。

杏鲍菇入药有降血压和降血脂的作用，杏鲍菇寡糖含量丰富，与双歧杆菌共用，有改善肠胃功能和美容的效果。

杏鲍菇被列为21世纪最具开发潜力的食用菌之一。

由于其生产周期短、见效快、效益相对较高，在农村种植结构调整中非常受欢迎，种植面积在不断扩大，是近几年深受国际市场欢迎的珍稀食用菌。

2.杏鲍菇生物学特性2.1形态特征子实体单生或群生，视基质营养和水分及菌丝生理度而异；菌盖幼时略呈弓形；后渐平展，成熟时其中央凹陷呈漏斗状，直径2～12cm不等，一般单生个体稍大，群生时偏小；菌盖幼时呈灰黑色，随着菇龄增加渐变浅，成熟后变为浅土黄、浅黄白色，中央周围有辐射状褐色条纹，并具丝状光泽；菌肉纯白色，杏仁味明显，破口处短时间变干黄；菌褶延生不齐、白色，与普通杏鲍菇相同；菌柄长2～8cm，直径0.5～3cm，不等粗，基部膨大，呈球茎体状；多侧生或偏生，中实，肉白色、纤维态，吸水性较强。

哺乳类实验动物病理剖检方法一、基本要求（一）实验动物背景资料记录（1）实验动物来源、种类、年龄、性别、原编号、体重、临床症状等。

（2）剖检时间、地点，麻醉方法、时间、麻醉者，处死方法、解剖者、记录人、温度、湿度。

（3）其他指标：动物剖杀前禁食（不禁水）时间一致，为12h。

（二）体表检查一般用于组织学取材的实验动物剖杀前应先隔离检疫7~10d，用于实验组和对照组动物的病理剖检视不同动物实验的要求而定。

剖检前的体表检查项目如下：1．发育状态体格发育是否与年龄、品种相称，各部发育比例是否正常，有无畸形。

2．营养状态丰满还是消瘦，检查时可用手抚摸实验动物背、腰部，营养良好时，背腰部厚实，皮肤弹性好。

营养不良时，背腰部椎骨突出，肋骨明显。

3．精神状态实验动物的自主活动、运动情况，对外界的反应（迟钝或亢进）、步态如何。

4．感觉器官眼睛的瞳孔是否清晰等，有无分泌物，眼睑有无发炎及红肿，球结膜颜色变化，有否潮红、苍白、黄染或发绀。

5．呼吸系统呼吸动物如呼吸次数、节律、有无呼吸困难；上呼吸道检查如鼻腔分泌物多少、有无喷嚏和咳嗽；必要时可通过听诊检查肺部。

6．消化系统采食与饮水观察，包括食欲废绝、减退、亢进和异嗜，口腔黏膜颜色和气味。

有无呕吐、腹泻、便秘，肛周有无污物，粪便数量、硬度、颜色、气味等。

7．被毛和皮肤检查皮肤颜色、温度、弹性、有无创伤、脓疡、疥癣、湿疹，毛发色泽、疏密、有无脱落。

（三）病理取材基本要求（1）病理检查应分层次进行，先进行一般外观观察，然后剖检观察，再进行光镜详细检查。

（2）通常选择正常与病变交界处组织，即包括病变本身及病变周围组织。

（3）对照组动物相同器官取材时，选材部位应尽量一致。

（4）肉眼看不到的明显病变时，各试验组选取标本位置应一致。

（5）所选组织应包括脏器全部层次结构或重要结构，如肾应包括皮质、髓质和肾盂。

（6）体积大和分叶的器官，应视不同组织选取多个部位，小器官可整体取材并固定，如淋巴结、扁桃体、甲状腺等。

植物病理学实习总结报告学院：资源环境学院年级：2008级专业：植物保护微生物工程组别：第三小组姓名：***学号：************指导老师：李敏慧、刘琼光、周国辉、徐大高、杨媚、谢辉、何艺郡目录一、前言--------------------------------------------------------3二、实习目的与意义----------------------------------------3三、实习内容与方法----------------------------------------3实验一植物病害标本的采集和制作------------4实验二植物病原的分离与培养-------------------8实验三植物病原真菌玻片标本制作------------12 实验四植物病原线虫的分离及形态观察------14 实验五植物病毒（香蕉束顶病毒）检测------15四、实习（验）结果与分析------------------------------18五、收获与体会----------------------------------------------19六、参考文献-------------------------------------------------20植物病理学实习总结报告戴泽翰 200830200508 08植保微生物1班一、前言植物病理学是主要研究引起农作物病害发生的各种生物与非生物引子及其致病机制、病原物与寄主间相互关系和控制病害发生、减轻发病程度、减少病害所致损失的原理及具体措施的一个重要农业学科。

学习基本的植物病理学、流行学知识，掌握常见农业病害鉴别和病原物采集、分离等技能，是对作为高等农科院校植保专业学生提出的要求。

为巩固和印证所学的植物病理知识，增强学生对本地区主要作物及主要植物病害的直观认识，我校资环学院为植保专业安排了植物病理学课的实习，以加强学生理论结合实际，提高分析问题和解决问题的能力，二、实习目的与意义(一)巩固和印证所学植物病理学基础理论知识(二)熟练掌握植物病理学实验操作技能(三)通过室内外观察，认识本地区主要作物及主要植物病害的形态特征(四)加强理论联系实际，提高分析问题和解决问题的能力三、实习内容与方法(一) 植物病害标本的采集和制作及常见病害鉴定(二) 植物病原的分离与培养(三) 植物病原真菌玻片标本制作(四) 线虫病害标本的采集、分离与鉴定(五) 植物病毒（香蕉束顶病毒）检测实验一植物病害标本的采集和制作及常见病害鉴定一、实验目的植物病害标本是植物病害及其分布的事务性记载，有了标本即可在室外观察的基础上，开展室内各方面的工作，特别是病害诊断和病原物的分离鉴定工作，没有合格的标本更无从谈起。

实验四食用菌组织分离技术一、实验目的通过实验，熟悉食用菌组织分离原理，掌握通过组织分离技术获得食用菌纯菌种的方法。

二、实验原理组织分离法是指切取食用菌子实体或菌核、菌索的任何一部分组织接种到培养基上培养成纯菌丝体的方法。

组织分离是一种无性繁殖技术。

食用菌子实体或菌核等由双核菌丝体组成，在无菌条件下切取消毒后的组织小块，接种到制备好的斜面培养基上进行适温培养就可以获得纯菌丝体菌种。

三、方法步骤（一）种菇选择选择外观典型、中等大小、菌肉肥厚、无病虫害、七八分成熟（未开伞）的菇作种菇。

（二）种菇消毒切取菇体基部，放入已消毒灭菌好的超净工作台上。

用75%的酒精棉球对菇体进行表面消毒后再用无菌水冲洗2～3次，然后用无菌纱布或滤纸吸干菇体表面水分。

（三）组织块接种用灭菌后的解剖刀或手将消毒后的菇从中间切开或掰开为两半，用无菌镊子夹取菇柄与菇盖交接处绿豆大小的菌肉组织一块，接在斜面培养基的中央。

（四）菌种培养将接种后的斜面培养基放在25℃下培养，经过7～15天，菌丝即可长满斜面。

培养期间要经常检查，及时捡出感染试管。

以下事情找陈老师商量一下：1.本实验用双孢蘑菇或香菇做分离材料，因为目前平菇菇质较差，不适于进行组织分离，让他购买未开伞的双孢蘑菇或香菇。

菇要提前晾两天，以减少水分影响。

2.需要使用两个实验室的超精工作台同时进行实验。

3.给陈老师讲一下每个同学至少接种两只试管，预防感染。

4.75％酒精棉球、无菌水、解刨刀、镊子等工具要准备好。

5.最好做个预备实验，讲解时可以给学生做示范。

6.讲解时把超精工作台的紫外线灯打开，以节约时间。

平菇的组织分离和培养一、实验目的1、了解食用菌的基础知识。

2、了解、掌握食用菌培养基的配置原理。

3、通过平菇栽培实验，掌握食用菌代料栽培的一般方法。

二、实验原理（食用菌的组织分离法）食用菌的母种一般是采用孢子分离法或组织分离法得到的纯培养物。

利用食用菌子实体内部组织进行分离，是获得母种最简便的方法。

三、实验材料1、原种制作实验材料（1）食用菌：平菇。

（2）培养基：PDA培养基斜面。

（3）仪器或其他用具： 75%酒精棉球、接种针记号笔等。

2、食用菌的组织离2、食用菌的组织分离（1）试剂：棉籽壳、麸皮、蔗糖、CaCO3（2）仪器或其他用具：平菇菌种、香菇菌种、金针菇菌种、姬菇菌种、茶树菌种、台秤、盆子、聚丙烯塑料袋、颈圈、封口膜、橡皮筋、高压蒸气灭菌锅、pH试纸（pH 5.5—9.0）、记号笔、麻绳等四、实验步骤平菇组织分离的方法和步骤一、种菇选择：一般选择在适宜出菇期出菇早、出菇整齐、特征典型、无病虫害、产量高的栽培袋，从中选择菌肉肥厚、大小适中、颜色正常、尚未散孢、长至七八分成熟的优质菇作种菇二、种菇消毒：用0.1%升汞溶液或75%酒精浸泡或擦拭，无菌水冲洗，吸干表面的水分。

三、切块接种：将分离种菇沿菌柄中心纵向掰成两半，用解剖刀在菌盖和菌柄交界处划成田字形，取黄豆粒大一小块菌肉组织，接在PDA培养基上。

四、培养纯化：温度控制在22℃~25℃之间，培养1~2天，长出白色绒毛状菌丝体，4~5天通过筛选，挑出菌丝洁白、清晰、生长整齐、健壮的试管母种继续培养，将有杂菌、长势纤弱的淘汰。

7~10天菌丝长满斜面。

五、注意事项1、在整个操作过程中都要注意无菌操作，一切用具都要消毒。

2、要等刀片冷却后再切取组织块。

3、栽培种在培养过程中，应经常检查，污染袋要及时检查出处理掉。

经过30—40天的培养，菌丝长满袋后即可使用。

若菌袋内长出原基，说明菌种已经老化。

若有黄、绿、黑等杂色斑点或连成片时，说明菌种已经污染，不可使用。

第1篇一、实验目的1. 熟悉外科手术的基本步骤和操作方法。

2. 掌握外科缝合技术，包括缝合材料的选择、缝合方法及注意事项。

3. 培养无菌操作意识和团队协作精神。

二、实验时间2023年X月X日三、实验地点外科实验室四、实验对象家兔一只（体重约2.5kg）五、实验器材1. 家兔解剖台2. 无菌手术器械一套（包括手术刀、手术剪、血管钳、持针钳、缝合针、缝合线等）3. 无菌手套、口罩、手术衣4. 生理盐水、消毒液、麻醉药物5. 计时器、记录本六、实验步骤1. 动物麻醉：采用吸入式麻醉，将家兔置于麻醉箱内，待家兔麻醉后，将其移至解剖台。

2. 皮肤消毒：用消毒液对家兔手术部位进行彻底消毒。

3. 皮肤切开：在消毒后的部位，用手术刀进行皮肤切开，切口长度约2cm。

4. 组织分离：用手术剪和血管钳分离皮下组织，暴露实验部位。

5. 缝合：- 缝线选择：选择适当粗细的缝合线，如3-0或4-0的肠线。

- 缝合方法：采用间断缝合法，先在切口一端将皮肤、皮下组织及肌肉层逐层缝合，再依次缝合深层组织。

- 注意事项：1. 缝合时保持针尖与皮肤垂直，避免缝合过深或过浅。

2. 缝合线不宜过紧，以免压迫组织。

3. 每层组织缝合完成后，需检查缝合处有无出血，如有出血，可用血管钳夹住出血点，进行结扎或压迫止血。

4. 缝合完成后，需检查缝合处是否平整，有无皱褶。

6. 皮肤缝合：将皮肤切口两侧的皮肤对合，采用间断缝合法进行缝合。

7. 皮肤消毒：缝合完成后，用消毒液对手术部位进行消毒。

8. 术后观察：将家兔置于安静的环境中，观察其术后反应，如呼吸、脉搏、活动等。

七、实验结果1. 家兔手术过程顺利，手术部位无感染迹象。

2. 缝合处组织愈合良好，无明显瘢痕。

3. 家兔术后恢复良好，呼吸、脉搏、活动等生命体征正常。

八、实验体会1. 本实验使我更加熟悉了外科手术的基本步骤和操作方法，提高了我的外科手术技能。

2. 通过实验，我深刻体会到无菌操作的重要性，避免了术后感染的发生。

应用微生物学实验————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：实验一、酸奶生产菌的分离纯化及应用一、实验目的和内容了解乳酸菌的生长特性，学习乳酸发酵和制作乳酸菌饮料的方法。

内容包括：1. 从新鲜酸乳中进行乳酸菌的分离纯化；2. 乳酸菌饮料制作；3. 自制乳酸饮料质量的品尝。

二、原理酸奶是采用优质纯鲜牛奶加入白糖均质，经超高温灭菌后接入乳酸菌发酵后制成的一种发酵型乳制品，具备鲜奶的全部营养成分，含有人体必需的蛋白质、脂肪、维生素、矿物质、乳糖酶和活性乳酸菌等。

在发酵过程中，鲜牛奶中的酪蛋白遇酸凝固，成为有弹性的凝块，颜色乳白、气味清香、酸甜可口，别具一番风味。

乳酸菌具有把奶类中的乳糖转化成乳酸的功能，称为乳酸发酵。

在形成乳酸的同时也产生其他一些酸类物质，从而导致了pH 值的下降，当达到乳类蛋白质的等电点时（如牛奶蛋白质的等电点约在pH4.5 左右），引起蛋白质的沉淀，使原来流动性较大的乳类，因凝固作用而变成类似果冻的胶状物，称之为“凝乳”。

不管是何种酸奶，其共同的特点都是含有乳酸菌。

这些乳酸菌在人体的肠道内繁殖时会分泌对人体健康有益的物质，因此酸奶对人体有较多的好处：一是能将牛奶中的乳糖和蛋白质分解，使人体更易消化和吸收；二是酸奶有促进胃液分泌、提高食欲、加强消化的功效；三是乳酸菌能减少某些致癌物质的产生，因而有防癌作用；四是能抑制肠道内腐败菌的繁殖，并减弱腐败菌在肠道内产生的毒素；五是有降低胆固醇的作用，特别适宜高血脂的人饮用。

和普通牛奶相比，酸奶的最大特点是含有大量活着的微生物，是具有生命力“活”着的特殊食品。

酸奶中的微生物根据它们功能分为2大类：1．发酵用乳酸菌：是指那些起源于奶制品长期用于酸奶制造的乳酸菌。

2．生物活性用乳酸菌：是近年从人体分离、驯化而成具有特定生物活性的乳酸菌，基本都是后述的益生菌。

植物病原菌的分离培养是植物病理学实验最基本的操作技术之一，它对原害鉴定，病原形态观察、植物病害接种体的培养等方面都是经常使用的研究手段。

(一)分离材料的选择分离材料的选择对分离培养的成败有着决定的影响，因为在感病植物受害部位的内外，要有多种腐生菌，为减少腐生菌的污染，分离所用的病害材料应尽可能新鲜，并且最好在病、健交接处选材取样。

病、健交接处，除材料新鲜，污染的可能性小外，病原菌的生活力强、比较活跃，容易分离成功。

(二)分离方法病原菌分离的方法因材料不同而异，植病实验室最常见的方法有组织分离法和稀释分离法两种。

1.组织分离法：这种方法适用于大部分病菌的分离A:分离前的准备工作：1．工作环境的清洁和消毒分离培养一般在无菌室、无菌箱或无菌工作台（超净工作台）上进行，无菌室和无菌箱要经过喷雾除尘，并用药物或紫外线照射消毒（常用消毒药物为70%酒精，2%煤酚皂液，5%石炭酸液等喷雾。

若用紫外线灯照射则需20-30分钟）。

在没有上述设备条件时，在清洁房间里关闭门窗，避免空气流动，经过喷雾除去空气及地面灰尘后进行操作，也可获得较好的结果。

工作前擦净桌面，最好铺上湿纱布。

将所需用的物品按次序放在工作台上，避免工作时走动，工作人员最好穿上灭菌后的工作服，带上口罩，并用肥皂洗手，用70%酒精或0.1%新洁尔灭擦手。

2．分离用具的消毒凡是和分离材料接触的器皿（刀、剪、镊、针等）都要随时（至少在使用时）保持无菌，将这些用具浸于70%酒精中，使用时在灯焰上灭菌烧去酒精，如此2-3次（刀、剪、镊等不宜在灯焰上烧时过长，以防退火）。

再次使用时必须重复灭菌。

培养皿、试验等要经过干热灭菌。

培养基及洗涤或稀释用蒸馏水都需要事先经过高压蒸气灭菌。

3．分离材料的选择用新发病的植株、器官或组织做为分离材料，可以减少腐生菌的污染。

任何植物坏死部分的内部或表面，都可能有腐生微生物的孽生，所以一般斑点病害应从邻近健全组织，即从病、健组织交界处获得分离材料B、植物病原菌的分离1．叶斑类和枝杆病斑类（非维管束侵染）病原菌分离：首先选择具有典型症状的新鲜病叶作为分离材料，按下述步骤操作：①培养基平板制备：将PDA培养基在微波炉中加热熔化验，以无菌操作法将溶化过的培养基倾注入灭过菌的培养基中，每皿经12毫升，可形成2-3毫米厚的平板。