逆流色谱法

水溶性天然产物的提取分离技术制药工程专业王俊20085257指导教师赵莉摘要：水溶性天然产物是药物研发中极具潜力的原料资源，分离纯化水溶性天然产物中具有独特生物活性的物质是中药研究的重要基础工作。

水溶性天然产物有效成分复杂，含量低，难于富集用传统的分离方法不仅步骤繁琐，能源及材料消耗大，而且产率及纯度不高，尤其难以分离结构和性质相似的组分。

随着中药现代化的发展高新技术不断在水溶性天然药物中推广应用。

现将近年水溶性天然产物提取分离纯化新技术的进展作一综述。

关键词：水溶性提取技术天然产物1、传统的提取分离方法1.1 热水浸提法热水浸提法即是煎煮法，是中药有效成分提取最早、最常用的方法之一。

中国药典1990年版一部和卫生部《药品标准》中药成方制剂1～9 册，共收载中成药1945种，其中采用热水浸提工艺的多达826 种。

但是热水浸提法基本上仍停留在经验水平上，热水浸提法的工艺参数，如浸泡时间、煎煮时间、煎出量(药液得量) 等均无最佳量控标准，往往导致产品质量和疗效的显著性差异。

一定程度上，应当组织力量从多层次、全方位进行系统研究，选择出适合于各种成药品种的热水浸提工艺的最佳条件和质量控制标准。

1.2 乙醇提取法乙醇浸提法原理与热水浸提法基本相同，不同之处是用乙醇作溶剂浸出中药有效成分，该法可以有效减少药材中水溶性杂质的浸出，对于这类杂质较多的药材尤为适宜。

乙醇浸提法分为冷浸法(渗漏法) 和热提法(回流法) 两种。

由于采用乙醇作为溶剂进行提取，某些溶解于乙醇的杂质(如树脂、油脂、色素等) 也会被提取出来。

对于这些杂质，可从醇提取液中回收乙醇，加水搅拌，冷藏一段时间，待完全沉淀后过滤除去。

冷浸法一般用于提取热敏性成分，但乙醇用量多，回收溶剂量大，生产周期长。

热提生产周期短，但杂质含量相对较高，给后继的分离工序增加了成本2综合提取分离技术。

2.1膜分离技术膜分离技术以选择性透过膜为分离递质，当膜两侧存在某种推动力（如压力差、浓度差、电位差等）时，原料侧组分选择性的透过膜，以达到分离，提纯目的。

麦角硫因的提取及纯化方法麦角硫因，又称麦角胺，是一种乙醇胺类化合物。

由于其具有很强的致幻作用和毒性，被禁止用于医学和化妆品领域。

但是，麦角硫因也具有广泛的研究价值和药用价值，因此其提取和纯化方法十分重要。

一、麦角硫因的提取方法1.传统方法传统的麦角硫因提取方法主要是采用麦角提取物作为原料，经过浸提、提纯和过滤等步骤，得到麦角硫因。

麦角提取物通常以苯为溶剂，将其与麦角粉末进行浸泡，然后进行过滤、还原、提纯等步骤，得到纯净的麦角硫因。

2.微生物发酵法近年来，微生物发酵法备受关注。

这种方法是采用麦角提取物为原料进行发酵，先采用放线菌和拟青霉菌等微生物进行转化，酵母菌和嗜热菌等微生物再将其转化为麦角硫因。

这种方法效率高，可同时得到多种相关产物。

二、麦角硫因的纯化方法1.柱层析法柱层析法是将提取出的物质在固定的柱子内进行波动，去除次要成分，留下纯净的麦角硫因。

常用的固定相包括硅胶、脱硅的硅胶、聚酰胺胶、氧化铝，可根据需要选择不同的固定相。

2.薄层色谱法薄层色谱法是将提取出的物质点滴在含有固定相的光滑玻片上，然后在温和的温度下进行传递，去除其他化合物，留下纯净的麦角硫因。

常用的固定相包括硅胶、脱硅硅胶和铝箔等。

3.逆流色谱法逆流色谱法是提取物在悬浮液的基础上进行，可以在室温下进行操作。

提取物在悬浮液中传递并在固定相上沉淀，去除其他杂质，留下纯净的麦角硫因。

常用的固定相包括活性炭、硅胶、脱硅硅胶或海藻糖。

4.凝胶过滤法凝胶过滤法是将提取物置于凝胶层中，随着发生的扩散，染料将在凝胶层中根据其分子量的不同而发生分化。

可以针对形态或生化制品进行高分辨率分析。

常用的固定相包括葡聚糖真菌和DEAE纤维素膜。

结论：总之，麦角硫因的分离和提纯方法在实际研究和应用中具有广泛的应用价值。

根据其实际需求，可以选择不同的提取和分离纯化方法来得到纯净的麦角硫因。

·药品检验·2012年9月第9卷第26期中国医药导报CHINA MEDICAL HERALD丁公藤，是旋花科植物丁公藤（Erycibe obtusifolia Benth.）或光叶丁公藤（Erycibe schmidtii Craib ）的干燥藤茎，全年均可采收，切段或片，晒干[1]，制成中药饮片，具有解表发汗、抗炎、疏风祛湿、舒筋活络、消肿止痛等功效。

丁公藤的化学成分主要有东莨菪内酯、东莨菪苷、咖啡酸和氯原酸等[2-3]，其中东茛菪内酯具有祛风、抗炎、止痛、抗真菌和抗肿瘤作用[4]，因此建立东莨菪内酯的分离提纯方法具有重要意义。

高速逆流色谱（high-speed counter-current chromatogra -phy ，HSCCC ）是近年来发展起来的新型、不使用固态支撑体或载体的连续液-液分配色谱技术，具有分离速度快、样品吸附低、分离重现性好等优点[5-6]，已被广泛应用于天然药物成分的分析鉴定及分离制备。

东莨菪内酯为香豆素类化合物，目前香豆素的传统分离多采用柱色谱和薄层色谱法，操作繁琐，本实验采用半制备型高速逆流色谱仪从丁公藤粗提物中成功分离纯化出东莨菪内酯，经高效液相色谱峰面积归一化法分析，纯度达到98.04%，为香豆素类化合物的高效、方便和快速分离提供了有效借鉴。

1仪器与试剂1.1仪器TBE 300B 高速逆流色谱仪（上海同田生物技术有限公司），AKTA prime 泵及检测系统（美国通用电器医疗集团），LC-20AT 型高效液相色谱仪（日本岛津公司），HH-1型数显恒温水浴锅（江苏省荣华仪器制造有限公司），9312A 型电热恒温鼓风干燥箱（上海跃进医疗器械厂），DFT-100J 型手提式高速中药粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司），C3860型超声波清洗器（河南省巩义市英峪予华公司），Milli-Q Academic 超纯水器（法国密理博有限公司）。

1.2试剂东莨菪内酯标准品（购自中国药品生物制品检定所，批号：110768-200504），粗提物的制备及高速逆流所用的有机溶剂正己烷、乙酸乙酯和甲醇均为分析纯（天津市科密欧化学试剂有限公司），HPLC 分析用甲醇为色谱纯（美国Fisher 公司），实验室用水是自制的超纯水。

虾青素的提取一、引言虾青素是一种天然的类胡萝卜素，广泛存在于海洋生物中，如蝦、蟹、龙虾、鳕鱼等。

虾青素在人体内具有多种生理活性和保健作用，例如抗氧化、降血脂、抗炎等。

因此，虾青素的提取成为了近年来研究的热点之一。

二、虾青素的提取方法1.传统方法传统的虾青素提取方法主要包括有机溶剂提取法和超临界萃取法。

其中，有机溶剂提取法是将虾壳粉末与有机溶剂混合后进行浸提，然后使用旋转蒸发仪或氮气吹干浸出液得到纯化后的虾青素。

超临界萃取法则是利用超临界CO2作为萃取剂，在高温高压下将虾壳中的虾青素萃出。

2.新型方法随着科技进步和人们对环境友好型技术的需求不断增加，新型的虾青素提取方法逐渐兴起。

目前较为常见的新型方法包括微波辅助提取法、超声波辅助提取法、离子液体萃取法等。

这些方法具有操作简便、效率高、环保等优点。

三、虾青素的纯化方法1.硅胶柱层析法硅胶柱层析法是目前常用的虾青素纯化方法之一。

该方法将虾青素溶液通过硅胶柱，利用虾青素与硅胶之间的亲和性差异进行分离纯化，得到高纯度的虾青素。

2.逆流色谱法逆流色谱法是一种高效液相色谱技术，可用于虾青素的分离和纯化。

该方法通过改变溶剂组成和流速等条件来实现对虾青素的选择性吸附和分离。

四、虾青素提取过程中的注意事项1.原料质量虾壳作为提取原料，其质量直接影响到提取效果。

因此，在选择原料时应注意其来源和处理方式，尽可能选用新鲜无损伤的虾壳，并进行必要的清洗和消毒处理。

2.萃取条件不同的萃取条件会影响到虾青素的提取率和品质。

因此，在进行虾青素提取时，应根据不同的提取方法和实际情况，选择适宜的萃取条件，如溶剂种类、浸提时间、温度等。

3.纯化方法虾青素的纯化过程中，应注意保持操作环境的洁净和卫生，并严格控制各项操作参数，以保证纯化效果。

五、结论虾青素是一种具有广泛应用前景的天然保健成分。

虾青素的提取方法和纯化方法多种多样，选择适宜的方法能够提高虾青素的产量和品质。

在进行虾青素提取时，应注意原料质量、萃取条件和纯化过程中的细节问题，以确保最终产品达到预期效果。