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组织培养存在的问题
组织培养是指企业或组织针对自身需要，通过一系列的培训、教育和经验传递等方式，提升员工的能力和素质，从而更好地适应企业或组织的发展，实现共同的目标。
然而，在实际操作中，组织培养也存在着不少问题。
首先，组织培养往往缺乏个性化。
有些企业或组织一味地采用通用的培训模式和课程，忽视了员工个性化的需求和差异，导致培训效果不佳，甚至是浪费资源。
其次，组织培养缺乏长期性。
很多企业或组织在进行培训时只注重短期效果，忽略了培养的长远价值，导致培训所得的技能无法持久和发挥价值。
第三，组织培养缺乏针对性。
有些企业或组织在进行培训时只注重技能的传授，忽略了员工的职业规划和发展需求，导致培训效果不尽如人意。
最后，组织培养缺乏反馈机制。
企业或组织在进行培养时，往往忽略了员工的反馈和意见，导致培训效果受到影响，同时也会降低员工的参与热情和积极性。
针对以上问题，企业或组织应该注重培养的个性化、长期性、针对性和反馈机制，开展有效的组织培养，以提高员工的综合素质和能力，推动企业或组织的发展。
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高考考点2 组织培养与克隆技术研究成果与分析Ⅰ热点知识简介1．组织培养(1)概念：组织培养是指在无菌条件下，在人工合成的培养基上培养离体的细胞、组织或器官的一种生物技术。
(2)原理：细胞的全能性，由于细胞中含有本物种的全套遗传信息，而具有发育形成新个体的潜能。
(3)应用植物组织培养：在植物的快速繁殖、培育无病毒植珠、花药离体培养、培育人工种子、生产中草药剂、植物体细胞杂交等过程中都要利用到植物组织培养技术。
动物细胞培养：单克隆抗体制备、病理药理研究、毒索检测等过程中也要使用到动物细胞培养技术。
2.克隆技术(1)概念克隆源于希腊文Klone，原意指幼草或小树枝以无性繁殖的方式发育成植物。
现随着时间的推移，克隆的内涵已经扩大。
在生物学领域中，克隆有以下三个水平的含义。
分子克隆：即DNA克隆，将某一DNA片段以质粒为载体导人细菌细胞中，使之随细菌分裂而大量复制的过程。
细胞克隆：由单一细胞经过细胞分裂形成的与亲代细胞基因相同的细胞群体。
个体克隆：形成基因型完全相同的两个或多个生物个体的过程。
如植物的分根、扦插和嫁接，动物的同卵双胞胎等都属于个体克隆。
(2)原理：细胞的全能性。
(3)应用遗传育种；通过花药离体培养进行单倍体育种，缩短育种年限；通过原生质体融合进行细胞杂交育种，克服远源杂交不亲和障碍。
胚胎分割移植：将优良品种家畜的早期胚胎分割后分别植入不同雌性动物体内，使之发育形成多个性状相同的个体，提高优良家畜的繁殖率。
保护濒危动物：对处于濒危灭绝的动物进行克隆，使之摆脱灭绝的边缘。
治疗性克隆：利用病人自身的细胞克隆器官，如皮肤、心脏、肝脏等，避免发生排斥反应等。
3．干细胞(1)概念干细胞是一种具有自我复制功能和多分化方向潜能的早期未分化细胞，它们是来源于胚胎的仍保持着一定分裂和分化能力的一类胚性细胞群。
动物的受精卵是一个全能性的细胞，具有发育成一个新生个体的潜能。
由受精卵分裂形成的胚泡(专指哺乳动物的囊胚)内部有一团细胞，称为内细胞团。
组织培养的分类
植物组织培养概念(广义)又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织。
器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
植物组织培养概念(狭义)指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。
按外植体分，植物组织培养可分以下几类：
1.胚胎培养植物的胚胎培养，包括胚培养、胚乳培养、胚珠和子房培养，以及离体受精的胚胎培养技术等。
2.器官和组织培养器官培养是指植物某一器官的全部或部分或器官原基的培养，包括茎段、茎尖、块茎、球茎、叶片、花序、花瓣、子房、花药、花托、果实、种子等。
组织培养有广义和狭义之分。
广义：包括各种类型外植体的培养。
狭义：包括形成层组织、分生组织、表皮组织、薄壁组织和各种器官组织，以及其培养产生的愈伤组织。
3.细胞培养细胞培养包括利用生物反应器进行的，旨在促进细胞生长和生物合成的大量培养系统和利用单细胞克隆技术促进细胞生长、分化直至形成完整植株的单细胞培养。
4.原生质体培养植物原生质体是被去掉细胞壁的由质膜包裹的、具有生活力的裸细胞。
组织培养存在的问题
组织培养是指企业、机构等组织为了提高员工的能力和素质，而对其进行的教育和训练。
然而，在实践中，组织培养也存在一些问题： 1. 缺乏科学性。
有些组织培养虽然有一定的培训计划和内容，但缺乏科学的指导和评估方法，难以评估培训效果。
2. 培训成本高。
组织培养需要耗费一定的时间和人力物力，而且员工在培训期间无法完成工作任务，会造成生产效率下降和成本增加。
3. 培训内容不实用。
有些组织培养只注重培训理论知识，而忽视实践操作，使得员工在实际工作中无法应用所学知识。
4. 学习动力不足。
有些员工对于组织培养缺乏足够的重视和学习热情，培训效果不理想。
为了解决这些问题，组织在培训前应制定科学的培训计划和评估方法，减少员工在培训期间的工作压力，注重实际操作和场景模拟，提高培训的实用性，同时，也需要通过激励机制等方式提高员工的学习动力，以达到更好的培养效果。
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组织培养的操作手段及注意事项一、操作手段1. 设定明确的目标：组织应该明确自己的目标，以及希望成员达到的目标。
这样可以帮助成员明确自己的方向，激发他们的动力和积极性。
2. 提供培训和学习机会：组织应该为成员提供培训和学习的机会，以提升他们的知识和技能。
可以通过组织内部的培训课程、外部的专业培训机构等途径来实现。
3. 分配适当的任务：组织可以根据成员的能力和兴趣，将适当的任务分配给他们。
这样可以让成员在实践中学习，提升自己的能力。
4. 提供反馈和指导：组织应该及时给予成员反馈和指导，帮助他们发现问题并改进。
可以通过定期的评估、个人辅导等方式来实现。
5. 激励和奖励机制：组织可以设立激励和奖励机制，鼓励成员积极参与和努力工作。
可以通过奖金、晋升、荣誉等方式来激励和奖励。
二、注意事项1. 了解成员的需求：组织应该了解成员的需求和期望，根据其需求来制定培养计划。
不同的成员可能有不同的需求，需要个性化的培养方案。
2. 适应个体差异：每个成员都有自己的特点和差异，组织应该根据个体差异来制定培养计划。
有些成员可能更适合团队合作，有些成员可能更适合独立工作。
3. 培养沟通和协作能力：组织应该培养成员的沟通和协作能力，这对于团队的协作和效率非常重要。
可以通过组织一些团队活动、训练等方式来提升成员的沟通和协作能力。
4. 培养领导力：组织应该培养成员的领导力，使其具备带领团队的能力。
可以通过培训、实践等方式来提升成员的领导力。
5. 培养创新意识：组织应该培养成员的创新意识，鼓励他们提出新的想法和解决问题的方法。
可以通过组织一些创新活动、讨论等方式来培养创新意识。
6. 培养自我学习能力：组织应该培养成员的自我学习能力，使其能够不断学习和提升自己。
可以通过鼓励成员参加学习活动、提供学习资源等方式来培养自我学习能力。
7. 培养专业知识和技能：组织应该注重培养成员的专业知识和技能，使其能够胜任自己的工作。
可以通过提供专业培训、实践机会等方式来培养专业知识和技能。
组织培养技术组织培养技术是一种在组织中促进员工发展和提升能力的方法。
它也是一种能够帮助企业实现长期发展和持续竞争优势的重要工具。
本文将介绍组织培养技术的定义和原理，并探讨其在企业中的应用。
一、组织培养技术的定义和原理组织培养技术是指组织在实施人才培养过程中采用的一系列方法和手段。
它旨在通过给予员工不同的机会和资源，激发他们的学习动机和潜力，提升他们的个人能力和组织效能。
组织培养技术的原理包括以下几个方面：1. 聚焦个体：组织培养技术将个体放在发展的核心位置，关注个体的职业规划和发展需求。
通过为员工提供学习和成长的机会，组织能够激发他们的积极性和主动性，促进他们的能力提升。
2. 创造学习氛围：组织培养技术注重创造积极的学习环境和氛围。
员工可以通过参与培训、学习小组、跨部门交流等方式，与他人分享知识和经验，提升自己的专业技能和管理能力。
3. 确定培养目标：组织培养技术需要明确员工的培养目标和发展路径。
通过制定明确的目标和计划，组织可以帮助员工更好地规划自己的职业发展，提供必要的资源和支持，使员工能够在工作中不断成长和进步。
二、组织培养技术的应用组织培养技术在企业中有着广泛的应用。
以下是几个常见的应用场景：1. 岗位培训：组织可以通过为员工提供相关的岗位培训来帮助他们适应新岗位或提升工作能力。
这包括技术培训、操作培训、岗位熟悉等，旨在提高员工的工作效率和质量。
2. 职业规划：组织可以协助员工制定个人职业发展计划，并提供相应的培养机会和资源。
通过明确员工的职业目标和未来发展路径，组织可以激励员工的积极性和目标导向，促进其个人能力和组织价值的匹配。
3. 导师制度：组织可以建立导师制度，使员工受益于有经验和能力的导师的指导和支持。
导师可以分享自己的经验和知识，提供指导和反馈，帮助员工在工作中学习和成长。
4. 跨部门交流：组织可以安排员工在不同部门之间进行交流和轮岗。
这样的交流可以帮助员工了解企业的不同方面和业务流程，拓宽自己的眼界，提升自己的整体素质和综合能力。
植物组织培养的六大步骤植物组织培养是指通过体外不断培养植物细胞、组织和器官，以研究其发育过程和生物学特性，也包括人工繁殖植物和生产植物次生代谢产物。
在植物组织培养的过程中，需要进行一系列的步骤，下面将详细介绍植物组织培养的六大步骤。
第一步：选择适宜的材料植物组织培养需要选取适宜的材料作为起始材料，这通常是从植物体中选择健康、无病虫害并具有较高再生能力的组织部分，如茎、叶片、种子等。
同时，还应注意选择具有较高再生能力的植物品种或种质资源，以提高培养成功率。
第二步：消毒处理为了减少外界微生物的污染，必须对选取的材料进行消毒处理。
常用的消毒方法有酒精消毒、双氧水消毒、高温高压消毒等。
消毒后的材料在无菌操作下移到无菌培养室，准备进行下一步的操作。
第三步：组织分离和培养经过消毒处理的材料，可以通过组织分离的方法来获得组织的单个细胞或小块组织。
常用的组织分离方法有切割法、振荡法、酶解法等。
分离得到的组织或细胞可以直接进行培养，也可以在培养基中添加适当的生长调节剂，以促进组织的增殖和分化。
第四步：培养基的选择和配置培养基是植物组织培养中重要的因素之一，它为植物细胞提供养分和生长因子，同时调控其生长和分化。
培养基通常由无机盐、有机物质、糖类、维生素、生长调节剂等组成。
根据需要，培养基可以分为基础培养基和不同类型的专用培养基。
基础培养基通常为MS培养基或白培养基，而专用培养基则针对不同的组织和目的进行调配。
第五步：培养条件的调控和优化在植物组织培养的过程中，培养条件的调控和优化对细胞和组织的生长和分化起着至关重要的作用。
光照、温度、湿度、pH值以及培养物的搅拌等因素都需要合理控制和调节。
此外，根据不同类型的组织和目的，还需要添加适量的生长调节剂、抗生素和其他辅助因子。
第六步：再生植株的分离和繁殖最后一步是将培养的组织或细胞分离出来，得到再生植株。
这需要将培养物转移到含有较稀释生长因子的培养基上，以便干扰物的去除和适度延长培养时间。
简述植物组织培养的优势
植物组织培养是一种通过人工培养植物的组织来繁殖植物的方法。
相比传统的种子栽培和基因编辑技术,植物组织培养具有以下几个优势:
1. 快速繁殖:植物组织培养可以在短时间内培养出大量植物种群,加快了植物的繁殖速度,可以满足农业生产的需要。
2. 多样性:通过组织培养,可以培养出各种不同的植物,包括不同种类的花卉、蔬菜、果树等,可以增加农业生产的多样性。
3. 可控性:植物组织培养可以控制植物的遗传信息,通过基因编辑技术进行定向培养,生产出来的植物具有更高的品质,更适应当地和环境。
4. 成本较低:相比传统的种子栽培和基因编辑技术,植物组织培养的成本较低,有利于减轻农民的负担。
5. 应用范围广泛:植物组织培养的应用范围非常广泛,可以用于花卉、蔬菜、水果、药用植物等领域,还可以用于环境保护、生态建设等方面。
植物组织培养是一种高效、经济、环保的农业生产技术,具有广泛的应用前景和潜力。
植物组织培养实习报告篇一：植物组织培养实验报告植物组织培养实验报告一、实验目的1．掌握无菌操作的植物组织培养方法；2．通过配置ms培养基母液，掌握母液的配置和保存方法；3．通过诱导豌豆根、茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法；4．通过诱导豌豆茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法；5．了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育,最终长成完整再生植株的过程,加深对植物细胞的全能性的理解。
二、实验原理（一）植物组织培养植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。
植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。
这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。
（二）植物细胞的全能性植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因，在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。
（三）组织的分化与器官建成外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。
有些情况下，外植体不经愈伤组织而直接诱导出芽、根。
（四）培养基的组成培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。
营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。
三、实验器材高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室镊子、记号笔、橡皮筋、玻璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、棉塞、绳子、牛皮纸、酒精灯、喷雾器等。
四、实验材料豌豆种子五、实验药品药品、70%酒精、0.1%升汞、ms培养基、蒸馏水、naoh、84消毒液、蔗糖、琼脂等。
体细胞胚胎发生及农杆菌介导转化 摘要：通过直接和间接的手段（介导的愈伤组织）为Bixa orellana的建立，维
护，再生，改造体细胞胚已经实现，Bixa orellana是一种热带植物，其种子生产市售食用红木色素，而食用红木色素主要构成apocarotenoid称作安必信。愈伤组织介导的方法被认为是短时间内生产大量细胞胚的最有效的方法。未成熟的合子胚接种在Murashige和斯库格（MS）培养基上，培养基中包含有0.44微莫的苄基腺嘌呤（BA）、0.054微莫α-萘乙酸（NAA）、2.89微莫赤霉素（GA3）、0.02微莫三碘苯甲酸（TRIA）。在生长到16-18周的时候有最多28个体细胞肧产生。愈伤组织通过下胚轴吸收MS培养基中的营养，培养基中加有4044UMBA，40UMAgNO3和0.011UMTRIA。体细胞胚在含有0.44-0.4UMBA，0.54-2.69NAA，4.96UM钙，0.21UM生物素，227.7UM一水半胱氨酸盐酸和108.6UM腺嘌呤硫酸盐。农杆菌GV3101含有PCAMBIA1305.2二元载体介导的稳定转化体。胚胎展示出了2.56%的转化率。由于体细胞胚在任何与商业化和科学性相关的多年生体系中都是非常有用的，基于这个体细胞胚的途径，对商业上重要的燃料高产的热带植物B²奥雷利亚纳进行基因工程改造是有用的。
关键词：农杆菌、红木素、再生、生根、三十烷醇 缩略词： BA：苄基腺嘌呤 GA3：赤霉素 IAA：生长素-3-吲哚乙酸 MS：Murashige-Skoog培养基 NAA：萘乙酸 PGR：植物生长调节剂 TIBA：2，3，5-三苯基甲酸 TRIA：三十烷醇 介绍 体细胞胚胎对任何植物转化来说都是主要的工具，不管是农杆菌介导还是基因枪这两种主要的植物转化方法，因为最初的是通过基因工程试验来改造农作物基因的 。相似的，植物组织学上，体细胞胚扮演者一个比任何其它器官部分都重要的角色。红木色素主要是构成安必信和norbixin种子上的假种皮部分。(2n = 2x = 14)。他们也被称为含氧的类胡萝卜素。这两个主要着色成分红木色素的脂溶性diapocarotenoid90顺安必信，一个norbixin的甲基酯，二元酸的水溶性90-norbixin顺。基于结构特征，他们被列为异戊二烯衍生物（哈日等，1994）。欧盟已批准作为食品添加剂43着色剂，被分配一个不同的'E的数量每个着色剂，其中17个是人工合成的，剩下的都是自然或自然衍生化合物（道纳姆和柯林斯2000年）。红木色素的E-号码或EEC（欧洲经济共同体）数量E160b。体细胞胚胎发生的标准化有助于保持和增强乘法利益的精英克隆更高的生产率和经济效益，也为建立和实用工具转变为基因工程研究协议来调节生物合成途径（Kumar等，2006年，2007）。奥雷利亚纳在B，由于种子活力低（20％）和贫困发芽（5％），具有商业价值（D'Souza和沙龙2001），在体外研究。如2,4-D的一些植物生长调节剂，是众所周知的发挥重要作用，在众多的植物物种的体细胞胚的诱导和建立。诱导体细胞胚胎发生在少数几个物种，如咖啡树属（Giridhar等，2004），番木瓜（查亚和其他植物生长调节剂，如三十烷醇（TRIA）和2,3,4 - 三碘苯甲酸（TIBA）Bhattacharya 和 Khuspe2000年）。在这项研究中，其中一些植物生长调节剂诱导体细胞胚胎发生和红木再生的影响进行了研究。此外，体细胞胚胎用于发展中国家的红木农杆菌介导转化协议。 材料和方法 外植体的准备和体细胞胚胎的建立 B.，奥雷利亚纳研究（Bixaceae）未成熟的果实（50-60日龄）共收集2006年9月期间，从5岁的植物，在植物细胞生物技术系中央食品技术研究所（CFTRI），迈索尔，印度。收集水果，70％的乙醇浸泡5分钟，其余所有程序使用空气层流无菌条件下进行的。发展中国家的种子取出未成熟的水果，70％的乙醇冲洗1分钟，洗净，用无菌蒸馏水和干燥印迹两次。这些未成熟合子胚全部或胚胎的茎被用来作为单独作为主要的直接体细胞胚胎发生的诱导外植体。 初级细胞胚的诱导 外植体两种类型，即，未成熟合子胚和幼胚柄（缺乏子叶部分），分别接种到Murashige和斯库格（MS）辅以B5的维生素（Gamborg等1968），0.027-0.540.22-4.44 LM苄基腺嘌呤（BA），LM-萘乙酸（Murashige和斯库格1962）酸（NAA），2.89 LM赤霉素（GA3），0.02 LM三碘苯甲酸（TIBA）和0.011 LM烷醇（TRIA）的培养基上诱导初级的体细胞胚。除了MS培养基中生长调节剂，还包括蔗糖（3％W / V）和0.01％W /V肌醇，培养基的pH值调整到5.7，使用琼脂（0.68％）固化。40毫升到150毫升的烧瓶或玻璃瓶在1.21公斤/厘米-2的压力和121 C温度下灭菌20分钟。一百未成熟合子胚（每瓶10）和100不成熟的胚胎茎（每瓶10）被用于实验。 二次的体细胞胚的建立和维护 主体胚胎获得和二次的体细胞胚的生产分别接种在补充有BA（0.44 LM），萘乙酸（0.054 LM），赤霉素（2.89 LM），TIBA（0.02 LM），TRIA（0.011 LM）而不含琼脂的新鲜的固体和液体MS基本培养基中，分别为，此后，植物生长调节剂组合将简称为RBANGT。 间接体细胞胚胎发生 愈伤组织，辅以1.07-2.14 LM NAA和10.2 LM BA或0.45-0.90 LM 2，4-D和10.2 LM BA的MS培养基上提出建立从体外胚轴接种幼苗。如表2给出了用于本实验的50外植体（每盘10个）为每个植物生长调节剂组合。从1.07 LM NAA和10.2 LM BA的MS基本培养基中获得四个星期的软易碎愈伤组织培养进一步细分到相同培养基进行维护。因此，获得愈伤组织被用于介导的愈伤组织体细胞胚的生产。愈伤组织建立和维护上述次培养到MS基本液体培养基愈伤组织介导的体细胞胚胎发生与BA（0.44-4.44 LM），硝酸银（40LM），TRIA（0.011 LM）补充;这一媒介成分叫做BAT。 体细胞胚胎在体外培养生根 二次体细胞胚培养到MS基本培养基液体与BA（0.44 LM），萘乙酸（0.11 LM），赤霉素（2.89 LM），TIBA（0.02 LM），和TRIA（0.011 LM）。RBANGT和生根培养基之间的唯一的区别是，生长素（NAA）的浓度增加了一倍。五十胚胎的团块（* 4个胚胎丛生），用于在体外生根诱导。 从根再生体细胞胚植株 植根胚苗接种到MS基本固体和液体的媒体辅以BA（0.44-4.4 LM），萘乙酸（0.54-2.69 LM），2IP（4.92 LM），钙的D-泛酸钙（2.1 LM），生物素（0.21 LM），半胱氨酸盐酸盐一水合物（227.7 LM），腺嘌呤硫酸盐（108.6 LM）为他们的进一步增长。 农杆菌体外介导法 体细胞胚接种到含有不同浓度的潮霉素（2，4，6，8，10，12，14，16，18和20毫克的L-1）的RBANGT培养基用于药敏试验。过滤灭菌的潮霉素20毫克每毫升被用来准备RBANGT中潮霉素不同浓度（Duchefa，荷兰），培养保持在黑暗中的初期为1周。 细菌培养转化的准备 农杆菌GV3101中菌株含有的二元载体pCAMBIA1305.2用于标准化改造协议。隔夜生长培养物被用于接种25毫升含卡那霉素的LB，生长保持在28℃和120转速（Gyrotory振荡器SI-600R，Jeiotech，实验室助理，韩国），直到在600 nm处的吸光度为1.0OD值，这些培养物被用于改造与体细胞胚。 共培养体细胞胚胎 体细胞胚胎生长到1.0外径共培养，农杆菌GV3101中（25毫升的生长密度1.0 OD值）和乙酰丁香酮溶液与100 LM（30,50 - 二甲氧基-40-羟基 - 苯乙酮，Sigma-Aldrich公司，美国）一次震动45分钟，每次间隔10分钟。这些共同培育的体细胞胚印迹干燥下使用层流无菌滤纸，接种到含有10 LMOF乙酰丁香酮RBANGT介质和在黑暗中培养2天。后来，他们组织培养部分中提到的一个正常的光照下保存。一旦细菌过度生长成为可见的，它们分别洗净，用无菌dH2O含有500毫克L-1浓度的头孢噻肟（Duchefa，荷兰）。因此，洗净体细胞胚胎印迹干燥用无菌滤纸和接种RBANGT含有潮霉素（10毫克L-1）和头孢噻肟（250毫克L-1）的培养基上，培养的步骤，选择在生长室。 转化子的选择和确认 为转化确认，确认使用GUS和hptII的分子引物聚合酶链反应（PCR）的进行，同时，还组织化学GUS测定采用X-glcA确认转基因胚胎的性质。下一步的分子确认和组织化学确认的详细情况。 利用PCR和Southern分析分子转化确认 从二次体细胞的选择培养基中生长的胚胎的基因组DNA，用于PCR分析确认的T-DNA在植物genome.Forward和反向引物特定部分潮霉素磷酸转移酶（hptII）和葡萄糖醛酸酶（GUS）基因的存在Primer3软体（蔷薇和Skaletsky2000）设计和合成，美国Sigma-Aldrich公司。引物序列如下： HptII F: 5-GAT GTT GGC GAC CTC GTA TT-3ˊ HptII R: 5′-GTG TCA CGT TGC AAG ACC TG-3′ Gus F: 5′-CCG TCC CAA GCA GTT ACA AT-3′ Gus R: 5′-TTC GGA ATC TCC ACG TTA CC-3′ 扩增反应在量的为25.0 ll，每个含16.0 ll灭菌双蒸水，2.5ll 109缓冲液与15毫摩尔氯化镁，1.0ll的dNTP（dNTP混合液各2.5毫米），2.0ll向前反向引物，Taq聚合酶0.5 ll（* 2.5U）（班加罗尔阁内，班加罗尔，印度），1.0ll模板DNA，扩增反应使用0.2 ml PCR管（爱思进公司）进行一个Eppendorf Mastercycler个人编程的（Eppendorf公司，德国）30个周期进行放大，包括在94°C30s，在55°C 30s，在72°C 1分30秒30，分别称作变性，退火，延伸。这些周期进行之前在94 C有一个2min的初始变性。30个循环后的初始变性2分钟之前，有一个最后延伸72℃5分钟，然后保持在4℃直到电泳。解决扩增产物，其分子量的基础上，由1.0％琼脂糖凝胶基质上运行的产品，使用19 TAE缓冲潜艇电泳（E861康索特，德国），5伏/CM。3 kbp的梯形（MBI的Fermentas公司，德国）被用来确定存在的扩增所需的大小。凝胶染色，并认为在紫外透射。插层剂乙锭 溴（310-320纳米）紫外光照射后发出荧光的橙色。使用Herolab文件单位（Herolab易通442 K时，德国），凝胶图像已经被记录在案。 假定转化的基因组DNA（约40 LG数量），用EcoRI酶消化Southern blot分析见于Sambrook等人的报告（1989年）。BioBond-PLUS尼龙膜（美国Sigma公司）和600 bp的GUS基因探针杂交。GUS基因探针的制备用补骨脂生物素标记试剂盒（Ambion公司，美国）。杂交信号进行检测，使用非同位素BioDetect套件（Ambion公司，美国）。 使用GUS分析组织化学确认 二次体细胞选择培养基上生长的胚胎用于组织化学GUS测定。GUS检测解决方
