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大花惠兰、石斛兰的组织培养
大花惠兰、石斛兰的组织培养（1）材料与方法材料：大花蕙兰大花品种嫩芽。
将母株放在温室内盆栽培养,于2～5 月陆续从母株上取8 cm 左右的新芽,剥去最外几层叶片,去芽的上半段，然后在超净工作台上采用三步灭菌处理法处理:先在70 %的酒精中处理6 s ,立即投入10 %的次氯酸钠溶液中10 min ,稍加摇动,取出后用无菌水冲洗,剥去外层2～3 枚叶片;再放入5 %的次氯酸钠溶液中5 min ,取出后无菌水冲洗,剥至最后1 枚叶片;再放入1 %的次氯酸钠溶液中1 min ,取出后无菌水冲洗数次。
以上次氯酸钠溶液中均加入Tween20 以利杀菌剂更有效地发挥作用,在无菌条件下剥出约5 mm长地茎尖,以生长点为中心,用解剖刀把茎尖切成4 个小方块,分别接入已经准备好的培养基上。
培养基：原球茎诱导培养基配方: MS + 0. 5 mg/ L BA +1. 0 mg/ L KT + 2 g/ L 活性炭（active carbon，AC）。
原球茎增殖培养基配方为:MS + 0. 5 mg/ L BA + 0. 8 mg/ L2 ,42D +2 g/ L AC,。
幼苗分化及生根养基配方为:MS + KT 1 mg/ L + NAA 0. 5mg/ L +2 g/ L AC。
培养条件培养基pH 5. 4～5. 8 ,琼脂粉0. 6 %～0. 8 %,活性炭0. 2 %的,防止褐变,培养室温度22～25 ℃,相对湿度40 %,光照12 h/ d ,光照强度为2 000 lx。
（2）结果观察原球茎诱导：把茎尖切成的小块,接入圆球茎诱导培养基上，20天后（或更长时间）观察有无圆球茎出现。
结果调查:圆球茎的诱导率= 产生圆球茎的茎尖数/ 接种茎尖数×100 %。
原球茎增殖：将诱导形成的较大原球茎块切割成直径3～8 mm左右的小块,接种在圆球茎增殖培养基上。
1 个月后统计增殖量，结果调查:原球茎增殖率= 有新原球茎的块数/ 接种块数×100 %。
2017-2018学年高中生物 第五章 植物的组织培养技术 5.3 兰花工业(1)素材 中图版选修1
课外阅读：兰花工业——栽培技术分开的兰丛，不要拆得太零星，每丛至少有3—5苗，最好是一年生植株、二年生植株和三年生植株保留在同一丛中。
(1)垫盆。
盆底用—块瓦片盖住排水孔，再用砖块，瓦片或贝壳逐步填充，其中大隙缝填充以泥粒或豆石，一般约为盆内高度的1／2—1／3。
上余的净高约10—15厘米，留作培养土层。
其具体高度应根据兰花的种类及兰根的长短和盆的高矮而定。
铺垫物不要填得太密太实，应保留一点孔隙。
实践证明，有的新根能在铺垫层的孔隙中生长良好。
(2)栽植。
在铺垫层上，先填上2—3厘米的培养土，用手稍压实，即可将兰花正立摆布其上，根据植株与花盆大小，可以几个单株、2丛、3丛或更多丛种在一个盆里。
3丛宜栽成鼎足之势。
4丛可栽成四方形，五丛宜列成梅花形。
兰根要自然舒展，叶片要四方披拂。
要缓缓地将兰根放入盆内，使兰根自然舒展，尽量不与盆内壁碰擦。
兰株入盆后，就逐步固定兰株姿势。
—盆栽一丛的，应使老假鳞茎偏居一侧，使新芽有发展的余地。
一盆栽数丛的，每丛的老假鳞茎应相对地集于盆之中间，使新根新芽向外发展各有足够的空间。
(3)填土。
栽植时，一手扶叶，一手添加营养土，执住兰株基部稍往上提，以舒展根系，同时摇动兰盆。
让培养土深入根际；继续添土，并摇动兰盆，调整兰株的位置和高度。
用手沿盆边按压，但切勿过重而伤根，继续添土并挤压，直至盆面土壤高出盆口2—3厘米，略呈馒头形。
培养土应将全都兰根盖住，掩至假鳞茎基部，填土的深浅，传统认为：春兰宜浅，惠兰宜深，但一般以不埋及假鳞茎上的叶基为度。
新发兰花在山野里生长时，植株上留下了土表上下的明显标志，可以此标志为准。
花盆的大小也要和植株的大小、多少相称，既不要盆大而株小又少，也不宜盆小而株大又多。
一般植株的数量，以预计2—3年后刚好长满盆为原则。
植株大小与盆的高度相称。
既利于生长，又符合观赏要求。
(4)铺面。
栽植完毕后，可在盆土表面铺上一层小石粒或青苔，最好是林下优质苔藓，既美观、又可调节水分，还可保护叶面不被泥水污染，新芽也不致感染泥土中病菌而烂心；此外，还可减缓雨水对盆土的冲刷，保持盆土疏松。
国兰茎顶组织培养技术
组织培养技术广泛应用于植物繁殖、品种改良、基因工程等领域。
国兰茎顶组织培养的特殊要求
国兰茎顶组织培养需要选择合 适的茎尖分生组织进行离体培
养，以获得无病毒植株。
国兰茎顶组织培养需要使用 适宜的培养基和激素配比， 以满足茎尖分生组织的生长
和分化需求。
国兰茎顶组织培养需要严格控 制培养条件，如温度、湿度、 光照等，以保证茎尖分生组织
通过茎顶组织培养技术实现濒危国兰的种质保存
目的
利用茎顶组织培养技术保存濒危国兰的种质资源 ，确保其遗传多样性和延续性。
结果
经过一定时间的培养和继代，成功保存了濒危国 兰的种质资源。通过对种质的分析和研究发现， 其具有较高的遗传变异性，且生物学特性稳定。
方法
收集濒危国兰的茎顶端组织，接种于培养基中。 在适宜的条件下进行培养，定期观察生长情况并 进行继代培养。同时，对保存的种质进行遗传变 异分析和生物学特性研究。
通过茎顶组织培养技术， 可以繁殖濒危的国兰品种 ，保护珍稀植物资源。
生态恢复
利用茎顶组织培养技术， 可以恢复被破坏的生态系 统，提高生态系统的稳定 性和生物多样性。
生态修复
通过茎顶组织培养技术， 可以修复受损的生态系统 ，如土壤污染、水体污染 等，改善生态环境质量。
05
国兰茎顶组织培养技术的挑战 与解决方案
生物防治
利用茎顶组织培养技术，可以繁殖具有生物防治作用的国兰品种 ，如杀虫、杀菌等，减少化学农药的使用。
生物农药
从国兰中提取具有生物活性的化合物，开发新型生物农药，用于防 治病虫害。
植物源农药
利用茎顶组织培养技术，可以生产具有农药活性的植物源物质，开 发新型植物源农药。
濒危植物的保护与恢复生态
国兰茎顶组织培养的特殊要求
国兰茎顶组织培养需要选择合 适的茎尖分生组织进行离体培
养，以获得无病毒植株。
国兰茎顶组织培养需要使用 适宜的培养基和激素配比， 以满足茎尖分生组织的生长
和分化需求。
国兰茎顶组织培养需要严格控 制培养条件，如温度、湿度、 光照等，以保证茎尖分生组织
通过茎顶组织培养技术实现濒危国兰的种质保存
目的
利用茎顶组织培养技术保存濒危国兰的种质资源 ，确保其遗传多样性和延续性。
结果
经过一定时间的培养和继代，成功保存了濒危国 兰的种质资源。通过对种质的分析和研究发现， 其具有较高的遗传变异性，且生物学特性稳定。
方法
收集濒危国兰的茎顶端组织，接种于培养基中。 在适宜的条件下进行培养，定期观察生长情况并 进行继代培养。同时，对保存的种质进行遗传变 异分析和生物学特性研究。
通过茎顶组织培养技术， 可以繁殖濒危的国兰品种 ，保护珍稀植物资源。
生态恢复
利用茎顶组织培养技术， 可以恢复被破坏的生态系 统，提高生态系统的稳定 性和生物多样性。
生态修复
通过茎顶组织培养技术， 可以修复受损的生态系统 ，如土壤污染、水体污染 等，改善生态环境质量。
05
国兰茎顶组织培养技术的挑战 与解决方案
生物防治
利用茎顶组织培养技术，可以繁殖具有生物防治作用的国兰品种 ，如杀虫、杀菌等，减少化学农药的使用。
生物农药
从国兰中提取具有生物活性的化合物，开发新型生物农药，用于防 治病虫害。
植物源农药
利用茎顶组织培养技术，可以生产具有农药活性的植物源物质，开 发新型植物源农药。
濒危植物的保护与恢复生态
兰花组培(1)
春兰组织培养春兰是地生兰常见的原种，多产于温带，主要分布在中国，是中国的特产。
以江苏、浙江所产春兰为贵，福建、广东、四川、云南、安徽、江西、甘肃、台湾等地亦有出产。
兰花是中国的名花之一，有悠久的栽培历史，多进行盆栽，作为室内观赏用，开花时有特别幽雅的香气，花期2到4月，为室内布置的佳品，其根、叶、花均可入药。
1植物名称春兰（大富贵）2材料带1-2个叶原基的茎原锥（中间部位侧芽成活率也高），茎尖适用于复轴生长类型的兰花3培养条件（1）茎原锥诱导培养基：1/2MS+6-BA 3.0mg/L+NAA0.5mg/L（2）丛生芽诱导及增殖培养基：MS+NAA 0.2mg/L +6-BA2.0 +椰汁100g/L，（3）壮苗培养基：1/2MS培养基+6-BA 0.5+NAA0.05+活性炭2g/L+椰汁100g/L（4）生根培养基：3g/l花宝3号+IBA0.5g/L+2g/l活性炭以上培养基，蔗糖浓度（1），（2），（3）为2.0%，（4）为5.0%，琼脂7.0g/L,PH 5.3,培养温度（26±2）℃，连续光照12h/d，光照度为2000lx。
4生长与分化情况4.1 原球茎诱导培养将大约3cm长且生长健壮的幼芽从母株上采下，自来水冲洗1h，去掉外部叶片，先用75%酒精消毒30s，再用零点0.1%升汞溶液，消毒10min，无菌水冲洗6到8次。
用消毒滤纸吸干表面水分，接种到培养基（1）中。
4.2 丛生芽诱导培养与增殖培养：将获得的原球茎转接入新鲜培养基（2）中培养，20d时由原球茎上长出绿色丛生芽，将从生芽转入新鲜培养基（2）中继续培养，30d为一个继代增殖周期。
4.3 幼苗的生长与生根将丛生芽接到新鲜培养基（3）中，丛生芽逐渐长大成苗，将其切割成单个苗接入培养基（4）中进行生根培养。
最佳切割方式为掰开。
4.4 炼苗与移栽移栽时特别注意要提前将瓶盖打开。
让组培苗适应一下外界的环境，两天后再将小苗取出，洗净根部琼脂，载入湿润，但拧不出水的水苔中，不需盖膜保湿，保持环境温度20到25摄氏度即可成活率达90%，待新根长出后再浇水。
国兰的组织培养技术
FORESTRY AND ECOLOGY >花美湖南国兰的组织培养技术香独具四清（气清、色清、神清、韵清），具有高洁、清雅的特点。
兰科植物多数生长在温暖、湿润、通风、排水良好、有散射阳光的环境。
中国是兰属分布中心之一，已知的兰属植物有31种，占全球兰属的一半以上，以地生兰为主。
国兰是兰属中观赏价值较高的地生兰，其品种十分丰富，多达上千种，包括春兰、蕙兰、建兰、墨兰、寒兰等。
在20世纪以前，中国兰花主要是靠无性繁殖和到原产地采集野生种植物来供应市场。
目前我国产兰山区的兰花资源受到很大破坏，容易到达的地方兰花基本绝迹，只有在人迹罕到之处的深山才有零星分布。
兰花的繁殖可分为无性繁殖和有性繁殖两类。
无性繁殖又称营养繁殖，包括分株繁殖、扦插繁殖等传统然条件下萌发率极低。
兰花种子以随采收随播种为好。
兰花种子的播种繁殖可分为有菌播种法和无菌播种法两种。
有菌播种法是指兰花种子在自然环境中与兰菌共生也称共生萌发。
真菌能促进种子的萌发，是由于菌丝为种子内的胚和基质构建了一个通道，菌丝吸收营养输送给种子，促进了种子的糖异生及营养物质的积累。
无菌播种法是利用组织培养的方法，为兰花种子提供所需要的营养和适宜的环境，促使其萌发的一种方法。
大部分兰花种子可通过无菌萌发方式发芽，在特定培养基上种子萌发生长。
兰花的组织培养始于20世纪60年代。
1960年, 法国人莫雷尔就利用大花蕙兰的茎尖，将其分生组织诱导形成原球茎并分化成植株，为实现兰花生产的工厂化奠定了基础。
我国在兰花组织培养方面起步较晚，但发展快，不少研究者都有研究组织培养，取得了很多成果。
目前常用组织培养方法批量生产小苗，特别是热带兰花的组织培养快速繁殖比较成功。
植物组织培养技术的应用和推广对其快速繁殖、品种复壮、加快优良品种的培育、挽救珍稀濒危种类等方面起到了重要作用，对国兰的快速繁殖和资源保存均具有重要意义。
下面介绍一下国兰的组织培养技术：外植体的处理。
一般而言，凡是生长健壮、具有活性的细胞组织都可以作为外植体。
兰花组织培养(课堂PPT)
.源自29.30
.
31
2）将震荡器或是试管中的花梗取出，置入无菌水中，摇晃瓶身， 可重覆此一动作2～3次，但需取出花梗，置入?有无菌水的新瓶中， 藉此洗净漂白水，洗净后，以镊子取出花梗，以酒精浓度75%的酒 精棉花擦拭花梗，以梗芽生长点向下，酒精棉花擦拭由上而下单一 方向擦拭，切勿以来回的方式擦拭梗芽生长点。
使用花梗生长点来诱发出新芽体，待新芽体诱发出后，将其切
下，移植至含有激素等药物的培养基瓶中，由于移植后的芽体受到 药物的刺激，造成新的芽体从旧芽体被大量的诱发出来，也会有从 被诱发出来的新芽体再配诱发芽体出来，当这些芽体数量多到需要 移植时，就需要进行 母瓶移植至子瓶的操作，由于这些芽体都是相 连的，移植时需以刀子将相连的芽体一个一个切分开来种植， 所以， 也有人将其称为切片苗。
观赏植物 组织培养之兰花
.
1
一、兰花组织培养常用于： 1、无性系快速繁殖； 2、茎尖培养脱毒； 3、培育新品种； 4、种质资源的保存； 5、次生代谢产物的生产。。
.
2
二、常见组织培养的兰花种类
.
3
.
4
.
5
.
6
三、兰花工业
兰科（Orchidaceae）是单子叶植物中最大的一个科，约有 450个属20000余种，在世界各地均有分布，特别是热带、 亚热带的一些国家和地区。兰花花色鲜艳，形态各异，珍 奇名贵，品位幽雅，价格昂贵，备受人们的喜爱。传统的 兰花栽培方法主要靠分株繁殖，繁殖速度慢。
.
7
• 贮藏和运输困难，易带病毒，严重阻碍了在世界范围内的 流通。用兰花的种子也可以进行繁殖，但发芽率及低，仅 5%左右，很难满足生产需要。组织培养用于兰花的快繁 已取得了快速进展。从20世界60年代开始用茎尖培养方 法繁殖兰花，到70年代就基本解决了兰属组织培养快速 繁殖的关键技术，并很快发展成为从20世界60年代开始 用茎尖培养方法繁殖兰花，到70年代就基本解决了兰属 组织培养快速繁殖的关键技术，并很快发展成为现代化兰 花工业。目前已有进70个属数百种兰花可用组织培养方 法进行繁殖，兰花生产工厂也分布在世界各地。
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2）将震荡器或是试管中的花梗取出，置入无菌水中，摇晃瓶身， 可重覆此一动作2～3次，但需取出花梗，置入?有无菌水的新瓶中， 藉此洗净漂白水，洗净后，以镊子取出花梗，以酒精浓度75%的酒 精棉花擦拭花梗，以梗芽生长点向下，酒精棉花擦拭由上而下单一 方向擦拭，切勿以来回的方式擦拭梗芽生长点。
使用花梗生长点来诱发出新芽体，待新芽体诱发出后，将其切
下，移植至含有激素等药物的培养基瓶中，由于移植后的芽体受到 药物的刺激，造成新的芽体从旧芽体被大量的诱发出来，也会有从 被诱发出来的新芽体再配诱发芽体出来，当这些芽体数量多到需要 移植时，就需要进行 母瓶移植至子瓶的操作，由于这些芽体都是相 连的，移植时需以刀子将相连的芽体一个一个切分开来种植， 所以， 也有人将其称为切片苗。
观赏植物 组织培养之兰花
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1
一、兰花组织培养常用于： 1、无性系快速繁殖； 2、茎尖培养脱毒； 3、培育新品种； 4、种质资源的保存； 5、次生代谢产物的生产。。
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二、常见组织培养的兰花种类
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三、兰花工业
兰科（Orchidaceae）是单子叶植物中最大的一个科，约有 450个属20000余种，在世界各地均有分布，特别是热带、 亚热带的一些国家和地区。兰花花色鲜艳，形态各异，珍 奇名贵，品位幽雅，价格昂贵，备受人们的喜爱。传统的 兰花栽培方法主要靠分株繁殖，繁殖速度慢。
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7
• 贮藏和运输困难，易带病毒，严重阻碍了在世界范围内的 流通。用兰花的种子也可以进行繁殖，但发芽率及低，仅 5%左右，很难满足生产需要。组织培养用于兰花的快繁 已取得了快速进展。从20世界60年代开始用茎尖培养方 法繁殖兰花，到70年代就基本解决了兰属组织培养快速 繁殖的关键技术，并很快发展成为从20世界60年代开始 用茎尖培养方法繁殖兰花，到70年代就基本解决了兰属 组织培养快速繁殖的关键技术，并很快发展成为现代化兰 花工业。目前已有进70个属数百种兰花可用组织培养方 法进行繁殖，兰花生产工厂也分布在世界各地。
兰花组织培养技术研究
• 周全，余平（2009)用素心春兰进 行实验，先用液体培养后转入固 体培养有利于春兰根状茎新生长 点的产生，采用固体培养的重量 增殖倍数最高，而用液体培养的 效果最差。
4植物生长调节剂对兰花组培的影响
• 常用的外源生长物质主要是生长素类（IAA、 IBA、NAA和2,4-D等）和细胞分裂素类 （BA、KT和ZT等）。
• 黄磊等（2004）用春兰和大花蕙兰（C. hybrids） 的杂交种子，经非共生萌发得到了无菌试管苗。
种子消毒的方法
• 先用镊子取出花粉块，轻轻放在柱头上。授粉成功后，子 房逐渐膨大，结果。剪下果实。用75%浸泡30S,倒人次 氯酸钠溶液消毒20MIN，蒸馏水洗净4次,切开果实,播在 培养基上，进行无菌繁殖，3-4个月就可发芽。
• 石乐娟（2006）以茎尖诱导产生的春兰‘绿 云’(Cymbidium goeringii‘Ltiyun’)腹轮艺品种的类原球 茎为材料进行实验。
培养基 Culture medium
根状茎增殖倍数 Muhiplication ratio
1／2MS(固体Solid 3．333±0．50 state)
茎尖消毒方法
• 先在栽培2、3年的兰株根部．切取2～3 cm的生 长芽。用流水冲洗20 min。在温度为22～25℃的 无菌组培室里。把最外面的l～2片苞叶去掉，放 在次氯酸钠溶液中浸泡l5 min，灭菌。然后剥离。 切割成2～5 mm的茎尖，接种到准备好的培养基 上，移至培养场所。3~4个月后发出根状茎。
种子成熟度对发芽的影响
• 郑 琪，赵虎等（2007年）用春兰（小打梅）×春兰（绿 壳素）、进行实验，发现未成熟种子的发芽速度最快， 快的30 d发芽，最慢的60 d发芽均比同组合的成熟种子 提早发芽。
4植物生长调节剂对兰花组培的影响
• 常用的外源生长物质主要是生长素类（IAA、 IBA、NAA和2,4-D等）和细胞分裂素类 （BA、KT和ZT等）。
• 黄磊等（2004）用春兰和大花蕙兰（C. hybrids） 的杂交种子，经非共生萌发得到了无菌试管苗。
种子消毒的方法
• 先用镊子取出花粉块，轻轻放在柱头上。授粉成功后，子 房逐渐膨大，结果。剪下果实。用75%浸泡30S,倒人次 氯酸钠溶液消毒20MIN，蒸馏水洗净4次,切开果实,播在 培养基上，进行无菌繁殖，3-4个月就可发芽。
• 石乐娟（2006）以茎尖诱导产生的春兰‘绿 云’(Cymbidium goeringii‘Ltiyun’)腹轮艺品种的类原球 茎为材料进行实验。
培养基 Culture medium
根状茎增殖倍数 Muhiplication ratio
1／2MS(固体Solid 3．333±0．50 state)
茎尖消毒方法
• 先在栽培2、3年的兰株根部．切取2～3 cm的生 长芽。用流水冲洗20 min。在温度为22～25℃的 无菌组培室里。把最外面的l～2片苞叶去掉，放 在次氯酸钠溶液中浸泡l5 min，灭菌。然后剥离。 切割成2～5 mm的茎尖，接种到准备好的培养基 上，移至培养场所。3~4个月后发出根状茎。
种子成熟度对发芽的影响
• 郑 琪，赵虎等（2007年）用春兰（小打梅）×春兰（绿 壳素）、进行实验，发现未成熟种子的发芽速度最快， 快的30 d发芽，最慢的60 d发芽均比同组合的成熟种子 提早发芽。
墨兰新品种‘梦之兰’的组织培养技术
墨兰新品种‘梦之兰’的组织培养技术墨兰（兰科 Phalaenopsis）是一种受欢迎的兰花，因其华丽的花朵和长时间的开花期而备受喜爱。
‘梦之兰’是墨兰的一种新品种，具有更加绚丽多彩的花朵和更加强健的生长能力。
为了大规模繁育和推广‘梦之兰’，研究人员一直在努力发展适用的组织培养技术。
以下是‘梦之兰’的组织培养技术。
第一步是材料准备。
选择具有健康生长、无病虫害的‘梦之兰’母株作为组织培养的材料。
将母株的鲜活叶片剪下，并使用75%的酒精对其表面进行消毒。
然后将叶片切割成约1.0 cm × 1.0 cm大小的组织块。
第二步是组织培养基的准备。
使用MS培养基作为基础培养基，并添加适当的激素和营养物质来促进组织生长和分化。
常用的激素包括植物生长素（IAA）、激动素（BA）和香蕉素（KT）。
营养物质包括蔗糖、硝酸铵和磷酸二氢钾等。
第三步是组织培养。
将预处理过的叶片组织块分别放置在含有适当激素和营养物质的培养基上。
培养基中的植物生长素和激动素可以促进叶片的生长和分化，而香蕉素可以促进茎和根的生长。
将培养基培养瓶封闭，并置于光照强度适中的培养箱中进行培养。
第四步是愈伤组织的形成与分化。
在培养基中，‘梦之兰’的叶片组织块会快速生长和分化形成愈伤组织。
愈伤组织是一种未分化的植物细胞聚集体，可以通过再生植株的方式繁殖。
第六步是生根和移栽。
在培养基中，植株的茎和根会逐渐生长和分化。
当植株的根部生长到一定长度后，可以进行移栽。
将植株移植到含有适当营养物质的培养基中，继续促进植株的生长和发育，最终可以获得健康的‘梦之兰’植株。
‘梦之兰’的组织培养技术是一种重要的繁育和推广方法，可以提高‘梦之兰’的繁殖效率和品种纯度。
随着技术的进一步改进和研究的深入，相信‘梦之兰’的组织培养技术将在未来得到更广泛的应用。
兰花组织培养精编版共51页
兰花组织培养精编版
16、人民应该为法律而战斗，就像为 了城墙 而战斗 一样。 ——赫 拉克利 特 17、人类对于不公正的行为加以指责 ，并非 因为他 们愿意 做出这 种行为 ，而是 惟恐自 己会成 为这种 行为的 牺牲者 。—— 柏拉图 18、制定法律法令，就是为了不让强 者做什 么事都 横行霸 道。— —奥维 德 19、法律是社会的习惯和思想的结晶 。—— 托·伍·威尔逊 20、人们嘴上挂着的法律，其真实含 义是财 富。— —爱大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
16、人民应该为法律而战斗，就像为 了城墙 而战斗 一样。 ——赫 拉克利 特 17、人类对于不公正的行为加以指责 ，并非 因为他 们愿意 做出这 种行为 ，而是 惟恐自 己会成 为这种 行为的 牺牲者 。—— 柏拉图 18、制定法律法令，就是为了不让强 者做什 么事都 横行霸 道。— —奥维 德 19、法律是社会的习惯和思想的结晶 。—— 托·伍·威尔逊 20、人们嘴上挂着的法律，其真实含 义是财 富。— —爱大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
兰花的植物组织培养2
谢谢
• 兰科(Orchidaceae) 是有花植物中最大的一个科, 约有800 属, 25 000～30 000 种, 广泛分布于全球 各地。兰花是整个兰科植物的总称, 常见的有 春兰、蕙兰、建兰、蝴蝶兰、石斛、卡特兰, 文心等, 其花具有极高的欣赏价值和经济价值。 有些种类如天麻等则具有极高的药用价值。兰 花的组织培养始于20世纪60 年代。Morel[1]采 用大花蕙兰的茎尖, 在含有细胞分裂素的KC 培 养基上进行培养, 茎尖分生组织膨大形成原球 茎, 并分化出根和叶, 首次获得兰花无病毒小植 株。目前大约已有60 余属数百种兰花可以用组 织培养的方法进行繁殖。
培养基与激素
• 适量的提取物，如在培养基中添加番茄汁、蛋 白胨、酵母提取液、水解蛋白、苹果汁、香蕉 汁等可促进兰花种子的萌发。附加香蕉泥对原 球茎的增殖有明显的促进作用。香蕉匀浆物在 KC培养基和White培养基是最适合原球茎增殖的 添加物。水解酪蛋白对于原球茎的增殖有明显 的促进作用。81。另外，胰蛋A胨、酵母提取 物和KC培养基一起使用对原球茎的增殖有促 进作用，但酵母提取物在White培养基上使用， 对原球茎的增殖却有抑制作用
另外胰蛋a胨酵母提取物和kc培养基一起使用对原球茎的增殖有促进作用但酵母提取物在white培养基上使用对原球茎的增殖却有抑制作用组织培养中常用的有机添加物如椰子汁香蕉和马铃薯等是一类含有氨基酸激素和酶等有机成分较为复杂的天然复合物
兰花的植物组织培养
中药10—1冯婷婷 国商10—1左芳
春兰
兰花的组织培养
பைடு நூலகம்
用于兰花组织培养的培养基 种类繁多, 常用培养基有: KC、 MS、VW、BM及改良型。
组织培养中常用的有机添加物如椰 子汁、香蕉和马铃薯等是一类含有 氨基酸、激素和酶等有机成分较为 复杂的天然复合物。多数研究证明, 它们对细胞和组织的增殖与分化有 明显的促进作用。
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❖ 1． 滋养阴液，生津润燥，治疗恶性肿瘤 放疗后致口干烦渴后遗症。
❖ 2． 清热凉血，养阴润肺，治干咳久嗽， 肺咯血。
❖ 3． 疏肝解郁，调和气血，治头晕目弦， 神经衰弱。
精品课件
生物学特性
❖ 1.热带兰不同属的兰花对温度要求不同，分 高温型、稍高温型、低温型三种类型。
❖ 2.地生兰比附生兰要求更多的水分，春夏要 求水分充足。
精品课件
外植体(培养部位)
种类
新芽芽尖 休眠芽
茎的隐芽
特点
成功率高，但分离技术高 成活率一般，分离技术简单， 易污染， 难分离，成活率同休眠芽
花梗
繁殖效率差，成本高
兰属植物的组织培养以茎尖为最
常用的材料。 精品课件
采取茎尖
❖ 茎尖是分生组织最为活跃的生长点。 ❖ 选择健壮植株，将外层的叶和鞘叶剥去，把
❖ 同样，再行分割；重新培养。在几个月之内， 就会获得大量的原球体。
精品课件
分化培养
❖ 把切割的原球体放在液体培养基中， 放在旋转培养床上进行旋转培养。
❖ 当其小块组织稍为长大后，转接在分 化的培养基上，让它分化根和芽。
精品课件
试管苗移植
❖ 当原球体组织分化根和芽，逐渐长大之后， 就成为幼小植株。
精品课件
兰 花 欣 赏
精品课件
兰 花 欣 赏
精品课件
兰花花语
兰花的花语：淡泊,高雅 。 兰花的品种有很多，据不完全统计， 全世界有2万多个兰花的品种，其中比 较出名的有蝴蝶兰、兰花、蕙兰等。 其实，它们各自有各自的花语，但是， 兰花总的花语就是淡泊，高雅
精品课件
兰花
❖ 兰花属兰科，是单子叶植物，为多年生草本，亦叫 胡姬花。由于地生兰大部分品种原产中国，因此兰 花又称中国兰，绍兴是兰花的故乡。
❖ 根长筒状，叶自茎部簇生，线状披针形， 2至3片 成一束。兰的根、叶、花朵、果、种子均有一定的 药用价值。
❖ 兰花是一种以香著称的花卉，具高洁、清雅的特点。 古今名人对它品价极高，被喻为花中君子。在古代 文人中常把诗文之美喻为“兰章”，把友谊之真喻 为“兰交”，把良友喻为“兰客”。
精品课件
兰花的药用
❖ Sugar蔗糖 2%
精品课❖件 琼脂（洋菜） l％
注意事项
❖ 配制培养基要在实验室内进行。 ❖ 各种用具、玻璃瓶或试管，都要严格消毒杀
菌。 ❖ 最后配成的培养液注入玻璃瓶或试管内，再
进行消毒，冷却后接入兰花外植体。 ❖ 接种工作应在无菌接种室或超净工作台上完
成。
精品课件
接种方法
❖一采取外植体 ❖二培养原球体 ❖三分化培养 ❖四试管苗移植
❖ 3.忌强光，喜阴。 ❖ 各种兰花需光强弱依次为：石斛属、卡特兰
属、菜丽兰、杓兰属。 ❖ 4.通风良好，发育健全。
精品课件
兰花的繁殖方法
❖ 兰花的繁殖方法：组织培养法 ❖ 组织培养法繁殖兰花的优点是：
后代可保持与亲本相同的优良性状。
精品课件
兰科花卉组织培养
目的要求： ❖ 掌握兰科植物组培的大致过程；
精品课件
（二）兰花的栽培养护管理
1.营养：肥料宜少不宜多，不能施 未腐熟的肥。可适当补给少量腐熟 肥料。换盆时不施底肥。
将豆饼加骨粉、鱼粉混合后，充分 腐熟，再加工成黄豆粒大小的颗粒 肥，每盆施2～3颗。或使用市场上 专制的兰花肥料。
精品课件
兰花的栽培养护管理
2.浇水： ◇生长慢，浇水宜少。有球茎的卡特兰、兰
❖ 第二个关：试管苗移出瓶后，往往不适应外 界环境而大批死亡。
要创造良好条件，在精心管理之下，才能获得良好结果。
精品课件
二、兰花的栽培养护 （一）兰花的自然繁殖 （二）兰花的栽培养护
精品课件
（一）兰花的自然繁殖
1.分株繁殖 ⑴时⑵间作：法四：季均可进行，以春末夏初，花后为宜。 ①切2.割种大子丛繁殖植株，每丛留3株(含1 嫩株)，置半 阴凉处，浇透水，20天后浇营养液正常管理。 ② 有合生轴的(如卡特兰属、石斛属等)，可从成熟的 茎基部生出新芽，当生长出5～6枚新芽后即可分株。
❖ KI碘化钾 0.75
❖ IAA吲跺乙酸 2
❖ Kinetin激动素 0.04—0.2
❖ Thiamin维生素B1 0.1
❖ Nicotinicacid烟酸 0.5
❖ Pyridoxine维生素B6 0.5
❖ Glycine甘氯酸 2
❖ Myo—inositol肌醇 100
❖ Casein—hydrolysate水解酪蛋白 1000
整个茎尖切下。 ❖ 浸入 2.5％的漂白粉溶液或7％的次氯酸钠溶
液中15—20分钟。然后取出用蒸馏水冲洗5— 6次，将消毒液冲洗十净。 ❖ 在显微镜或扩大镜下将茎尖的生长点挑出， 并即刻接种到玻璃管培养基上。
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培养原球体
❖ 生长点一般经过4-6周的培养，产生出小而圆 的原球体。
❖ 将原球体取出，重新分切，l分为4，再入培 养基内培养，经l—2个月又可长出原球体。
❖ 兰花种类不同，培 养基的成分也有所 不同。
❖ 。大多数的培养基是 用固体或半固体的， 也有用液体培养的。
❖ 在液体中培养则需特 殊的通气方法，如常 用的离心机或转动机， 不停地将培养基转动。
精品课件
在实际中用得最多的是MS培养基，
或在此基础上加添少数激素。
❖ 成分 用量（mg） NH4NO3硝酸铵 400 Ca（NO3）2?4H2O硝酸钙 144 KNO3硝酸钾 80 KH2PO4磷酸二氢钾 125 MgSO4 ?7H2O硫酸镁 72 KCL氯化钾 65 NaFe—EDTA螫合铁 25 H3BO3硼酸 16 MnSO4 ?4H2O硫酸锰 65
❖ 了解兰花的栽培养护
精品课件
一、兰花组织培养技术
组织培养要有必要的设备和比 较高的精品课件
兰花组织培养
在培养时要 先配制培养基， 剥取外植体，然 后消毒、接种、 转移，最后试管 苗移植等.
精品课件
培养基的配置
❖ 培养基是用各种不 同成分和剂量的元 素，加上各种维生 素、激素等制成。
❖ 经一段培养，生长到一定程度就应该从玻璃 瓶或试管中取出，移植到土壤或基质中了。
❖ 移出试管后，用自来水将根上的培养基轻轻 冲洗干净。
❖ 栽培基质一般用水苔或蛭石。栽植后移入温 室内培养。
精品课件
组织培养的两个坎
❖ 第一个关：分化培养基的生长激素和剂量。 能否分化根和芽，完全取决于它。
用什么激素和什么剂量，每种兰花都不一样。
❖ 2． 清热凉血，养阴润肺，治干咳久嗽， 肺咯血。
❖ 3． 疏肝解郁，调和气血，治头晕目弦， 神经衰弱。
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生物学特性
❖ 1.热带兰不同属的兰花对温度要求不同，分 高温型、稍高温型、低温型三种类型。
❖ 2.地生兰比附生兰要求更多的水分，春夏要 求水分充足。
精品课件
外植体(培养部位)
种类
新芽芽尖 休眠芽
茎的隐芽
特点
成功率高，但分离技术高 成活率一般，分离技术简单， 易污染， 难分离，成活率同休眠芽
花梗
繁殖效率差，成本高
兰属植物的组织培养以茎尖为最
常用的材料。 精品课件
采取茎尖
❖ 茎尖是分生组织最为活跃的生长点。 ❖ 选择健壮植株，将外层的叶和鞘叶剥去，把
❖ 同样，再行分割；重新培养。在几个月之内， 就会获得大量的原球体。
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分化培养
❖ 把切割的原球体放在液体培养基中， 放在旋转培养床上进行旋转培养。
❖ 当其小块组织稍为长大后，转接在分 化的培养基上，让它分化根和芽。
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试管苗移植
❖ 当原球体组织分化根和芽，逐渐长大之后， 就成为幼小植株。
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兰花花语
兰花的花语：淡泊,高雅 。 兰花的品种有很多，据不完全统计， 全世界有2万多个兰花的品种，其中比 较出名的有蝴蝶兰、兰花、蕙兰等。 其实，它们各自有各自的花语，但是， 兰花总的花语就是淡泊，高雅
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兰花
❖ 兰花属兰科，是单子叶植物，为多年生草本，亦叫 胡姬花。由于地生兰大部分品种原产中国，因此兰 花又称中国兰，绍兴是兰花的故乡。
❖ 根长筒状，叶自茎部簇生，线状披针形， 2至3片 成一束。兰的根、叶、花朵、果、种子均有一定的 药用价值。
❖ 兰花是一种以香著称的花卉，具高洁、清雅的特点。 古今名人对它品价极高，被喻为花中君子。在古代 文人中常把诗文之美喻为“兰章”，把友谊之真喻 为“兰交”，把良友喻为“兰客”。
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兰花的药用
❖ Sugar蔗糖 2%
精品课❖件 琼脂（洋菜） l％
注意事项
❖ 配制培养基要在实验室内进行。 ❖ 各种用具、玻璃瓶或试管，都要严格消毒杀
菌。 ❖ 最后配成的培养液注入玻璃瓶或试管内，再
进行消毒，冷却后接入兰花外植体。 ❖ 接种工作应在无菌接种室或超净工作台上完
成。
精品课件
接种方法
❖一采取外植体 ❖二培养原球体 ❖三分化培养 ❖四试管苗移植
❖ 3.忌强光，喜阴。 ❖ 各种兰花需光强弱依次为：石斛属、卡特兰
属、菜丽兰、杓兰属。 ❖ 4.通风良好，发育健全。
精品课件
兰花的繁殖方法
❖ 兰花的繁殖方法：组织培养法 ❖ 组织培养法繁殖兰花的优点是：
后代可保持与亲本相同的优良性状。
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兰科花卉组织培养
目的要求： ❖ 掌握兰科植物组培的大致过程；
精品课件
（二）兰花的栽培养护管理
1.营养：肥料宜少不宜多，不能施 未腐熟的肥。可适当补给少量腐熟 肥料。换盆时不施底肥。
将豆饼加骨粉、鱼粉混合后，充分 腐熟，再加工成黄豆粒大小的颗粒 肥，每盆施2～3颗。或使用市场上 专制的兰花肥料。
精品课件
兰花的栽培养护管理
2.浇水： ◇生长慢，浇水宜少。有球茎的卡特兰、兰
❖ 第二个关：试管苗移出瓶后，往往不适应外 界环境而大批死亡。
要创造良好条件，在精心管理之下，才能获得良好结果。
精品课件
二、兰花的栽培养护 （一）兰花的自然繁殖 （二）兰花的栽培养护
精品课件
（一）兰花的自然繁殖
1.分株繁殖 ⑴时⑵间作：法四：季均可进行，以春末夏初，花后为宜。 ①切2.割种大子丛繁殖植株，每丛留3株(含1 嫩株)，置半 阴凉处，浇透水，20天后浇营养液正常管理。 ② 有合生轴的(如卡特兰属、石斛属等)，可从成熟的 茎基部生出新芽，当生长出5～6枚新芽后即可分株。
❖ KI碘化钾 0.75
❖ IAA吲跺乙酸 2
❖ Kinetin激动素 0.04—0.2
❖ Thiamin维生素B1 0.1
❖ Nicotinicacid烟酸 0.5
❖ Pyridoxine维生素B6 0.5
❖ Glycine甘氯酸 2
❖ Myo—inositol肌醇 100
❖ Casein—hydrolysate水解酪蛋白 1000
整个茎尖切下。 ❖ 浸入 2.5％的漂白粉溶液或7％的次氯酸钠溶
液中15—20分钟。然后取出用蒸馏水冲洗5— 6次，将消毒液冲洗十净。 ❖ 在显微镜或扩大镜下将茎尖的生长点挑出， 并即刻接种到玻璃管培养基上。
精品课件
培养原球体
❖ 生长点一般经过4-6周的培养，产生出小而圆 的原球体。
❖ 将原球体取出，重新分切，l分为4，再入培 养基内培养，经l—2个月又可长出原球体。
❖ 兰花种类不同，培 养基的成分也有所 不同。
❖ 。大多数的培养基是 用固体或半固体的， 也有用液体培养的。
❖ 在液体中培养则需特 殊的通气方法，如常 用的离心机或转动机， 不停地将培养基转动。
精品课件
在实际中用得最多的是MS培养基，
或在此基础上加添少数激素。
❖ 成分 用量（mg） NH4NO3硝酸铵 400 Ca（NO3）2?4H2O硝酸钙 144 KNO3硝酸钾 80 KH2PO4磷酸二氢钾 125 MgSO4 ?7H2O硫酸镁 72 KCL氯化钾 65 NaFe—EDTA螫合铁 25 H3BO3硼酸 16 MnSO4 ?4H2O硫酸锰 65
❖ 了解兰花的栽培养护
精品课件
一、兰花组织培养技术
组织培养要有必要的设备和比 较高的精品课件
兰花组织培养
在培养时要 先配制培养基， 剥取外植体，然 后消毒、接种、 转移，最后试管 苗移植等.
精品课件
培养基的配置
❖ 培养基是用各种不 同成分和剂量的元 素，加上各种维生 素、激素等制成。
❖ 经一段培养，生长到一定程度就应该从玻璃 瓶或试管中取出，移植到土壤或基质中了。
❖ 移出试管后，用自来水将根上的培养基轻轻 冲洗干净。
❖ 栽培基质一般用水苔或蛭石。栽植后移入温 室内培养。
精品课件
组织培养的两个坎
❖ 第一个关：分化培养基的生长激素和剂量。 能否分化根和芽，完全取决于它。
用什么激素和什么剂量，每种兰花都不一样。