巯基化合物的色谱分析研究

硫化氢介导的S-巯基化修饰及其化学检测技术张珍;全心雨;唐志书【期刊名称】《中国生物化学与分子生物学报》【年(卷),期】2024(40)1【摘要】硫化氢(hydrogen sulfide, H_(2)S)是继一氧化氮和一氧化碳之后的第3种内源性气体信号分子,通过影响细胞信号通路调节机体各个系统,具有广泛的生理和病理作用。

近年的研究发现,H2S的作用主要通过对靶蛋白进行S-巯基化修饰,改变其结构,影响其活性、稳定性以及蛋白质之间互相作用,进而调控细胞内信号通路及相关生物学过程。

本文基于国内外对S-巯基化修饰的研究,主要综述了:S-巯基化修饰的研究现状,详细总结了目前已揭示S-巯基化修饰及其具体半胱氨酸(cysteine, Cys)位点的研究,并进一步总结了S-巯基化修饰与S-亚硝基修饰之间的关系;S-巯基化修饰的反应类型,3种化学检测(马来酰亚胺法、改良生物素转换法和标记转换法)方法的检测原理和特点,通过S-巯基化修饰检测的条件和应用范围,将这3种方法进行对比,并对各方法在检测过程中应注意的事项进行了讨论。

根据作者在S-巯基化修饰研究方面积累的经验,重点阐述马来酰亚胺法检测过程中,细胞和组织样品的制备及其较详细的实验步骤。

此外,本文还讨论了当前S-巯基化修饰检测方法存在的不足及该领域未来亟待解决的问题,为S-巯基化修饰的相关研究提供参考。

【总页数】10页(P44-53)【作者】张珍;全心雨;唐志书【作者单位】陕西中医药大学陕西省中药资源产业化协同创新中心;中国中医科学院研究生院【正文语种】中文【中图分类】Q67【相关文献】1.巯基丁二胺铜单层修饰金电极上HIV-p24抗原的电化学免疫检测2.亚微米铂粒子修饰电极液相色谱电化学检测巯基化合物的研究3.RhoA激酶的硫巯基化修饰在硫化氢抗大鼠神经细胞缺氧性损伤中的作用4.二茂铁巯基化合物/金纳米粒子/还原石墨烯修饰电化学传感器检测Cu^(2+)5.蛋白质巯基及其氧化性修饰的化学检测方法因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

附件1化妆品中巯基乙酸的检测方法（征求意见稿）1 范围本方法规定了离子色谱法测定化妆品中巯基乙酸的含量。

本方法适用于化妆品中巯基乙酸及其盐类和酯类含量的测定。

2 方法提要样品中的巯基乙酸经水溶解提取后，用离子色谱仪分离巯基乙酸根与无机离子，电导检测器检测，以保留时间定性，峰面积定量。

本方法巯基乙酸的检出限5.8ng，定量下限20ng。

取样量为0.5g时，检出浓度为46μg/g，最低定量浓度0.15mg/g。

3 试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯或以上规格，水为GB/T6682规定的一级水。

3.1 巯基乙酸，优级纯。

3.2 甲醇，优级纯。

3.3 三氯甲烷，分析纯。

3.4 氢氧化钠，分析纯。

3.5 硫酸溶液[φ（H2SO4）=10%]：取硫酸（ρ20=1.84g/ml）10mL，缓慢加入到90mL水中，混匀。

3.6 盐酸溶液[φ（HCl）=10%]：取盐酸（ρ20=1.19g/ml）10mL，加入90mL水中，混匀。

3.7 淀粉溶液（10g/L）：称可溶性淀粉1g，加水5mL调成溶液，再加入沸水95mL，煮沸，并加水杨酸0.1g或氯化锌0.4g防腐。

3.8 氢氧化钠溶液（500g/L）：称取氢氧化钠50g，加水适量使溶解并至100mL。

再量取一定量用经超声脱气的水稀释到淋洗液浓度。

3.9 重铬酸钾标准溶液[c(1/6K2Cr2O7)=0.1000mol/L]：准确称取已于120℃±2℃电烘箱中干燥至恒重的重铬酸钾基准物质4.9031g ，溶于水并转移至1000mL 量瓶中，定容至刻度，摇匀。

3.10 硫代硫酸钠标准溶液(0.1mol/L)：称取硫代硫酸钠（Na 2S 2O 3▪5H 2O ）26g （或无水硫代硫酸钠16g ）溶于1000mL 新煮沸放冷的水中，加入氢氧化钠0.4g 或无水碳酸钠0.2g ，摇匀，贮存于棕色瓶内，放置两周后过滤，用重铬酸钾标准溶液标定其浓度，标定方法如下：准确吸取重铬酸钾标准溶液（3.9）25.00mL 于500mL 碘量瓶中，加碘化钾2.0g 和硫酸溶液（10%）20mL ，立即密塞，摇匀，于暗处放置10min 。

巯基化合物在分析中的应用
巯基化合物是一类重要的有机化合物，因其与蛋白质结合特别紧密，在分析学有着广泛的应用。

一方面，巯基化合物能够增强谱线的显示效果，从而提高测量的精确度；另一方面，它可以用来检测蛋白质及其它有机物质在溶液中的含量。

近年来，随着巯基化合物技术的发展，在分析学中的应用日趋广泛。

首先，巯基化合物能够改进核磁共振（NMR）谱线的显示效果。

对于某一种结构复杂的有机物，如果直接用NMR测量，得到的信号太微弱，用肉眼看不到，但是使用巯基化合物可以激发这些微弱的信号，使其变得更易于测量，提高精确度。

其次，巯基化合物还可以用来检测蛋白质及其它有机物质在溶液中的含量。

巯基化合物具有易于连接到蛋白质以及其它有机物质的特点，因此可以用来追踪蛋白质或有机物质在溶液中的含量。

例如，可以用哪种巯基化合物与蛋白质结合，在特定时间点释放出，然后再测量它们在溶液中的含量，从而了解蛋白质的结构及动态变化。

此外，巯基化合物还用于体外和体内结构的测定。

例如，可以使用核磁共振谱来测定巯基化蛋白质的结构，从而研究蛋白质的结构及功能，进而了解蛋白质和药物之间的相互作用。

在体内，可以用巯基化合物来评价药物在体内的分布和代谢情况，从而更好地评价新药的活性和安全性。

总而言之，巯基化合物是一类重要的有机化合物，它具有非常好的显示效果，且能够检测蛋白质及其它有机物质在溶液中的含量，因
此在分析学有着极为广泛的应用。

进一步研究和改进巯基化合物技术，将有助于更好地了解蛋白质的结构和功能，以及如何更有效地利用其在分析学中的应用。

中国口岸科学技术发用类化妆品中籬基乙酸的测定-离子色谱法符灵梅I 纪少凡I 戴小丽1刘庆祺I摘 要 建立了抑制型电导离子色谱法测定发用类化妆品中疏基乙酸的方法。

样品用水溶解，超声萃取20 min,经Bond Elut C18 小柱除去提取液中的表面活性剂,以 Dionex lonpac™ AG19 ( 4 mm x 50 mm )保护柱和 Dionex lonpac™ AS19 ( 4mm x 250 mm )高柱容量分析柱.25mmol/L 氢氧化钾为淋洗液等度洗脱.用电导检测器测定。

在0.5 ~ 10.0 rng/L 的范围内线性关系良好，相关系数为0.9996,检出限(S/N=3)为40从蜒，相对标准偏差为0.8% ~ 4.4%,回收率在95.1% ~ 102.2% 之间。

与其他方法相比，该方法具有简便、快速、准确、所需试剂少及灵敏度高的优点。

关键词 离子色谱；化妆品；疏基乙酸Determination of Thioglycolic Acid in Hair Cosmetics-lon ChromatographyFU Ling-Mei *1 JI Shao-Fan 1 DAI Xiao-Li 1 LIU Qing-Qi 1第一作者：符灵梅(1985—),女.汉族.海南海口人，本科.工程师，主要从事食品中有毒有害残留检测的研究，E-mail ：****************1.海口海关技术中心 海口 5703111. The Technology Center of Haikou Customs, Haikou 570311Abstract A new method was developed for the determination of thioglycolic acid in hair cosmetics by suppressed conductivity ionchromatography. The samples were dissolved by water and extracted with ultrasonic for 20 min. The surfactant in the extract was removed byBond Elut C18 column. Using Dionex lonpac™ AG19 (4 mm x 50 mm) guard column, Dionex lonpac™ AS19 (4 mm x 250 mm) high-capacityanalytical column and 25 mmol/L of KOH solution as eluent, the content of thioglycolic acid in hair cosmetics could be determined. Under the optimized conditions, this method showed a good linear relationship from 0.5 mg/L to 10.0 mg/L, the correlation coefficient0.9996, the recoveries between 95.1% and 102.2% with relative standard deviations (RSDs) ranging from 0.8% to 4.4%, and the limit of detection (S/N=3) 40 jjl g/g. Compared with other methods, this method has the advantages of simplicity, rapidity, accuracy, less reagentsand high sensitivity.Keywords ion chromatography ； cosmetics ； thioglycolic acid疏基乙酸(Thioglycolic acid, TGA )又名硫代乙醇 酸(HSCH q COOH),分子式中既含有竣基，又含有 疏基极性基团无色透明有机化合物，具有强烈刺激性气味，在碱性条件下有较强的还原性，直接接触皮肤可致红斑、瘙痒，甚至产生急性红肿、渗岀、疼痛，诱发慢性皮炎，皮肤刺激试验中阳性率高达85%以79CHINA PORT SCIENCE AND TECHNOLOGY上X%根据不同使用量，可使头发柔软甚至断裂凶，乙酸的监测提供便利的检测方法:所以其广泛应用于发用类化妆品中。

5-巯基-1-甲基四唑紫外分光光度计吸收波长5-巯基-1-甲基四唑紫外分光光度计吸收波长1. 介绍5-巯基-1-甲基四唑是一种常用的有机化合物，具有多种应用，其中之一就是在紫外分光光度计中作为吸收试剂。

它具有很强的吸收特性，因此在光度计测定中有着重要的作用。

本文将从深度和广度两个方面对它的吸收波长进行全面评估和探讨。

2. 5-巯基-1-甲基四唑的基本特性5-巯基-1-甲基四唑是一种含硫杂环化合物，化学式为C2H3N3S，具有巯基和唑环结构。

它的分子结构简单，但却具有较强的吸收特性，这使得它在紫外分光光度计中被广泛应用。

接下来，我们将从其分子结构和化学性质两个方面来分析其吸收特性。

3. 分子结构对吸收波长的影响我们来看5-巯基-1-甲基四唑的分子结构。

它的唑环结构使得它在紫外光区有较强的吸收能力，而巯基的存在则能进一步增强其吸收特性。

这意味着它在紫外分光光度计中的吸收波长很可能处于较短的波段范围内。

我们可以初步推测，5-巯基-1-甲基四唑的吸收波长可能集中在200-300nm之间。

4. 化学性质对吸收波长的影响我们要考虑5-巯基-1-甲基四唑的化学性质对吸收波长的影响。

由于其含有巯基，它在不同溶剂中的吸收特性可能会有所不同。

在溶剂不同的情况下，分子间的相互作用会发生改变，从而影响其吸收波长。

在测定5-巯基-1-甲基四唑的吸收波长时，需考虑到溶剂的选择对吸收情况的影响。

5. 5-巯基-1-甲基四唑在紫外分光光度计中的应用5-巯基-1-甲基四唑具有较强的吸收特性，因此在紫外分光光度计中被广泛应用。

它可以作为吸收试剂，用于测定不同样品中的吸收特性。

通过测定样品在特定波长下的吸光度，可以得到样品的浓度、纯度、反应速率等信息，因此在分析化学领域有着重要的应用价值。

6. 个人观点和总结5-巯基-1-甲基四唑作为紫外分光光度计中的吸收试剂具有重要的意义。

通过对其分子结构和化学性质的分析，我们可以初步推测它的吸收波长可能集中在200-300nm范围内。

巯基化合物的色谱分析研究巯基化合物广泛地存在于生物体内，具有清除自由基、重金属解毒和拮抗电离辐射等作用。

此外，巯基化合物还与机体生长发育、延缓衰老及某些疾病（如白血病，关节炎和帕金森综合症）有关。

巯基类药物可用于许多种疾病的治疗。

因此，建立简单、快速、灵敏的巯基化合物的分析检测方法具有十分重要的意义。

本论文采用毛细管电泳-激光诱导荧光检测法（CE-LIF）和高效液相色谱-荧光检测法（HPLC-FL）分析测定生物样品中的巯基化合物。

研究内容主要包括以下三个部分：（1）建立了以BODIPY类荧光染料（1,3,5,7-四甲基-8-溴甲基-二氟化硼-二吡咯甲川，TMMB-Br）为柱前衍生试剂，采用毛细管电泳-激光诱导荧光检测法同时测定高半胱氨酸、半胱氨酸和谷胱甘肽三种巯基化合物的分析方法。

具体考察了电泳背景电解质的种类、浓度和pH值、分离电压、进样时间对分离的影响；研究了衍生缓冲溶液的组成及pH值、衍生试剂浓度、反应温度和时间对衍生效率的影响。

在优化的条件下，高半胱氨酸、半胱氨酸和谷胱甘肽的检出限（S/N=3）分别为0.73nmol/L，0.72nmol/L和0.36nmol/L。

将该方法应用于人血清和尿液样品中的高半胱氨酸、半胱氨酸和谷胱甘肽的测定，回收率在92.6%-109.1%之间。

此外，尝试了TMMB-Br用于活细胞内的巯基化合物的荧光成像。

（2）同时建立了高效液相色谱-荧光检测法和毛细管电泳-激光诱导荧光检测法测定巯基类药物D-青霉胺和硫普罗宁的两种分析方法。

以TMMB-Br为荧光标记试剂，详细探讨了电泳及色谱分离条件，D-青霉胺和硫普罗宁的衍生条件，确定了方法的可行性。

在最优条件下，D-青霉胺和硫普罗宁均可在12min内达到基线分离，检出限分别为5.0nmol/L，2.0nmol/L和0.88nmol/L，0.47nmol/L。

将两种方法成功应用于人尿液和血清样品中D-青霉胺和硫普罗宁的测定，回收率分别在95.0%-106.7%和95.2%-104.3%之间。

用于检测巯基化合物的荧光探针的研究进展刘柳;马景川;盖冬玮;张妍;冯昕;马梦瑶;张明;武祥龙【摘要】Thiol compounds are playing vital physiological roles in human body,so the efficient detection of thiol compounds has very important applicable values in pathology and life sciences.According to the structure of fluorescent probes,the research progress of fluorescent probes for the detection of thiol compounds is re-viewed in this paper.%巯基化合物在生物体内有着重要的生理作用，它的有效检测在病理学和生命科学领域具有非常重要的应用价值。

依据荧光探针的结构，分类综述了可检测巯基化合物的荧光探针的研究进展。

【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2016(033)002【总页数】8页(P1-7,30)【关键词】巯基化合物;荧光探针;检测【作者】刘柳;马景川;盖冬玮;张妍;冯昕;马梦瑶;张明;武祥龙【作者单位】西北工业大学生命学院空间生物实验模拟技术重点实验室，陕西西安 710072;西北工业大学生命学院空间生物实验模拟技术重点实验室，陕西西安710072;西北工业大学生命学院空间生物实验模拟技术重点实验室，陕西西安710072;西北工业大学生命学院空间生物实验模拟技术重点实验室，陕西西安710072;西北工业大学生命学院空间生物实验模拟技术重点实验室，陕西西安710072;西北工业大学生命学院空间生物实验模拟技术重点实验室，陕西西安710072;西北工业大学生命学院空间生物实验模拟技术重点实验室，陕西西安710072;西北工业大学生命学院空间生物实验模拟技术重点实验室，陕西西安710072【正文语种】中文【中图分类】O625生物体内巯基化合物是构成蛋白质和某些大分子(如半胱氨酸、同型半胱氨酸、谷胱甘肽等)的主要物质，在人体生理活动中起着至关重要的作用，不仅参与了许多重要的细胞反应过程(包括氧化还原平衡和细胞生长)，还可以表征细胞内氧化还原状态以及蛋白质的高级有序结构[1]。

巯基检测方法1. RP-HPLC法测定巯基含量采用色谱柱Kromasil-C18 (250×4.6mm, 5μm)，流动相A(0.1%TFA)和流动相B（甲醇）梯度洗脱：流动相B 40%~80%，0~10min，然后80% B保持5min，流速0.8mL/min，检测波长327nm，得到NTB标准曲线y=3.67059x+0.14123，回收率101.9%，RSD=l.17%，从而建立了一种高灵敏度巯基检测方法。

2. 采用分子荧光光谱法作为反应条件，用反相高效液相色谱梯度洗脱法测定巯基用OPA、丹酰氯、茚三酮与半胱氨酸反应，测其可见紫外吸收光谱及荧光光谱；在不同PH、温度、反应时间条件下，用OPA与半胱氨酸反应测其荧光度；分别吸收0.1mmol/L半胱氨酸溶液0、20、40、60、80、100 μl，各加入10 μlH2O2,室温下反应30min，然后加热蒸干，残渣用200μl OPA衍生液，定容至5 ml，4 min时测其荧光光谱。

取pH8.4的硼酸缓冲溶液 5μl，混合10次；加入OPA 衍生液2μl，混合进样走HPLC。

梯度条件：洗脱液B所占比例0min为0，17min 线性增加至60%，17.5min线性增加至100%，20min洗脱结束。

激发波长为340nm,荧光检测波长为450nm。

3.柱前衍生高效液相色谱-紫外检测法以tris(2-carboxylethyl) –phosphine (TCEP)为还原剂，7–fluorbenzo–2–oxa –1,3–diazole–4-sulfonate(SBD-F)为衍生剂，N-乙酰半胱氨酸为内标，C8色谱柱分离，流动相为甲醇 -磷酸盐缓冲液（pH =3. 0）,梯度洗脱 ,385 nm处检测。

线性范围为8. 3～1042. 6 μmol/L,最低检测限为 0. 42μmol/L,日内精密度为 1. 67%～1. 86%,日间精密度为 2. 08%～3. 06 %,平均回收率为 98. 1%～103. 2 %。

巯基化合物的色谱分析研究巯基化合物是一类含有巯基（-SH）结构的有机化合物，广泛存在于自然界中，也广泛应用于工业和生物化学领域。

巯基化合物的分析非常重要，因为它们具有不同的物理和化学性质，可以通过色谱分析方法来有效地鉴定和分离。

色谱分析是一种用于分离复杂混合物的有效技术。

巯基化合物的色谱分析主要包括气相色谱（GC）、液相色谱（LC）和薄层色谱（TLC）等几种方法。

下面将分别介绍它们的原理和应用。

气相色谱是一种基于化合物在气体载体中运动的分离技术。

它通常使用气相色谱仪作为分析仪器，将待分析的样品通过气相色谱柱进行分离。

巯基化合物在气相色谱柱中与载气发生物理吸附或化学反应，从而分离出来。

气相色谱对于巯基化合物的分析具有高效、高分离度和高灵敏度的优势，能够鉴定和分析复杂的样品。

液相色谱是一种基于化合物在液态载体中运动的分离技术。

它通常使用液相色谱仪作为分析仪器，将待分析的样品通过液相色谱柱进行分离。

巯基化合物在液相色谱柱中与液相发生物理吸附、化学反应或离子交换等作用，从而分离出来。

液相色谱对于巯基化合物的分析具有较好的分离能力和灵敏度，尤其适用于极性化合物的分析。

薄层色谱是一种基于化合物在薄层固体载体上运动的分离技术。

它通常使用薄层色谱板作为分析仪器，将待分析的样品通过薄层色谱板进行分离。

巯基化合物在薄层色谱板上通过物理吸附或化学反应与固相发生作用，从而分离出来。

薄层色谱对于巯基化合物的分析具有简单、快速、低成本的优势，可以进行快速筛查和定性分析。

巯基化合物的色谱分析在许多领域中具有广泛的应用。

在环境领域，可以用于分析水体或空气中的有机硫化物，比如环境中的硫化氢和二硫化碳等。

在食品和饮料工业中，可以用于分析巯基化合物作为添加剂或防腐剂的浓度和成分。

在生物医药领域，可以用于分析巯基化合物作为药物代谢产物的排泄和代谢途径。

综上所述，巯基化合物的色谱分析是一项重要的研究领域，可以通过气相色谱、液相色谱和薄层色谱等方法对巯基化合物进行鉴定和分离。