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高产纳豆激酶地衣芽孢杆菌工程菌全合成培养基优化赵新宇;陈杨阳;陈敬帮;蔡冬波;魏雪团【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2016(037)007【摘要】以产纳豆激酶的地衣芽孢杆菌基因工程菌BL10 (pP43SNT-SsacC)为出发菌株,开展其全合成培养基的发酵优化研究.通过单因素试验和正交试验优化了全合成培养基成分,获得了最优的培养基组成(g/L):葡萄糖30、NaNO330、谷氨酸钠20、柠檬酸钠15、MgSO4·7H2O 0.5、K2HPO4·3H2O 1.5、CaCl20.5,pH 7.2.在优化的全合成培养基中,纳豆激酶最高酶活力达到25.59 FU/mL,相比于初始培养基发酵活性(4.27 FU/mL),提高了5倍.对比分析了全合成培养基和半合成培养基的发酵产物,结果表明,全合成培养基可显著提高纳豆激酶的纯度,与半合成培养基相比,纳豆激酶比活力提高了2倍.本研究获得了纳豆激酶的全合成培养基成分,显著提高了纳豆激酶发酵活性,并进一步提高了纳豆激酶发酵纯度.【总页数】6页(P140-145)【作者】赵新宇;陈杨阳;陈敬帮;蔡冬波;魏雪团【作者单位】华中农业大学食品科学技术学院,湖北武汉 430070;华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉 430070;华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉 430070;华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉430070;华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉 430070;华中农业大学食品科学技术学院,湖北武汉 430070;华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉 430070【正文语种】中文【中图分类】Q812【相关文献】1.地衣芽胞杆菌工程菌高产纳豆激酶的发酵罐工艺优化及中试放大 [J], 祝亚娇;宋嘉宾;陈杨阳;孙炳刚;陈敬帮;魏雪团2.地衣芽孢杆菌YTDY_01高产芽孢的培养基优化 [J], 解顺昌[1,2];刘扬科;胡国春;成鹏;路广亮;李林;3.高产地衣芽孢杆菌LB8培养基的优化研究 [J], 张晓晴;闵钟熳4.产纳豆激酶的枯草芽孢杆菌基因工程菌发酵条件的\r响应面优化 [J], 田莉;卢轶男;朱建;张佑红5.具群体感应淬灭作用地衣芽孢杆菌T-1株培养基及发酵条件的优化 [J], 童文涛; 陈彪; 彭孟凡; 赵祯; 肖翎; 宋增福; 张庆华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
地衣芽孢杆菌活化方法一、地衣芽孢杆菌的概况地衣芽孢杆菌是一种革兰氏阳性杆菌，能够产生芽孢，能够抵抗较高温度和低温度，对pH的适应能力也很强。
地衣芽孢杆菌广泛存在于土壤、河流、湖泊、经常消毒的食品包装纸上、食品加工厂等环境中，对环境和人体健康具有一定的影响。
地衣芽孢杆菌主要通过形成芽孢的方式来在恶劣环境中生存，当环境条件再度适宜时，芽孢会迅速萌发成为活跃的细菌细胞，进行繁殖。
地衣芽孢杆菌在生物防治、有机肥料生产、酶制剂生产等方面发挥着巨大作用，因此，地衣芽孢杆菌的活化方法变得尤为重要。
二、地衣芽孢杆菌活化的必要性地衣芽孢杆菌作为一种益生菌，在农业、饲料、水产养殖、环保等诸多领域有着广泛的应用前景。
但作为一种生物制剂，其存活能力和活性都会受到环境的限制，因此需要对其进行活化处理，以提高其活性和生物效果，从而增强其应用价值。
地衣芽孢杆菌在商业化生产过程中，会受到很多因素的影响，比如适宜的培养基、培养条件、发酵时间等因素，这些因素都会对地衣芽孢杆菌的活性产生影响。
通过合理的活化方法，可以有效提高地衣芽孢杆菌的活性和生物效果，使其在商业应用中更具竞争力。
三、地衣芽孢杆菌活化方法地衣芽孢杆菌的活化方法主要包括培养基优化、发酵条件优化、生长调节剂、基因工程等多种方式。
下面对这些方法进行详细介绍：1. 培养基优化培养基是影响地衣芽孢杆菌生长和活化的重要因素之一。
通过优化培养基的成分和比例，可以提高地衣芽孢杆菌的生长速度和代谢活性，从而增加其活性和生物效果。
常用的培养基成分包括碳源、氮源、磷源、微量元素、生长因子等。
在培养基中添加适量的有机物质以及一些可以促进地衣芽孢杆菌生长的元素，如氨基酸、维生素等，可以有效提高地衣芽孢杆菌的活性。
此外，还可以通过添加一些促进细菌生长和代谢的有机酸、氨基酸和细胞生长因子等来优化培养基成分，进一步提高地衣芽孢杆菌的活性和生物效果。
例如，研究表明在培养基中添加一定比例的蔗糖和脲，有助于地衣芽孢杆菌的生长和代谢，从而提高其活性。
地衣芽孢杆菌活化方法
1.菌种取出：
-从超低温冰箱中取出保存的地衣芽孢杆菌菌种，通常为冻干粉或者以斜面形式保存的菌株。
2.无菌操作：
-在无菌条件下，使用接种环或接种针将菌种接入到适宜的培养基上。
例如，可以将菌种接种到无菌斜面培养基上。
3.恢复培养：
-将接种了菌种的斜面置于恒温培养箱中进行活化，温度通常设定在37℃左右，培养时间一般为24小时，使菌体从休眠状态恢复至生长活跃状态。
4.液体活化培养（如适用）：
-对于需要大量菌液的情况，可能还需进一步将斜面上活化的菌种转接到液体培养基中，在适宜温度和时间内进行扩大培养，如采用含有红糖等碳源以及必要营养成分的液体培养基，并保证充足的氧气供应。
5.条件优化：
-根据具体应用需求和菌株特性，可能还需要调整活化过程中的条件，如有的资料提到按照一定的比例添加红糖和水进行浸泡，增加溶解氧并利于菌种的复苏与增殖。
6.环境因素控制：
-确保环境温度、湿度以及光照等条件适合地衣芽孢杆菌的生长，例如在晴天上午9-11点进行操作，利用自然光合作用产生的氧气有利于某些需氧型芽孢杆菌繁殖。
地衣芽孢杆菌发酵生产工艺1. 地衣芽孢杆菌生产工艺及流程简图 1.1 流程简图1.2 地衣芽孢杆菌发酵配方及技术参数 1) 发酵培养基配制序号 名称 规格 用量（g/L ）1 蔗糖 工业一级或以上 402 豆粕 饲料级或以上 403 (NH4)2SO4 饲料级或以上5 4 K 2HPO 4·3H 2O食用级或以上 8 5 KH 2PO 4 食用级或以上 1.8 6 MgSO 4 食用级或以上 0.5 7 MnSO4食用级或以上0.052) 主要技术参数：a) 接种量：1%。
b) 发酵温度：30~31℃。
c) 通气量0.8：1 ~1.0：1。
d) DO ：25%以上。
e) pH ：6.5-7.0。
f) 发酵时间：32~48h 。
发酵空罐灭菌配料接种发酵浓缩喷雾干燥发酵实罐灭菌g)液体菌数≥2.0×109cfu/mL.h)芽孢形成率98%。
i)喷干：进风160~170℃，出风80~85℃。
j)菌粉(以活菌数计，cfu/g)≥100亿。
3)工艺操作步骤a)种子制备要求：菌种鉴定符合特性，无变异，无杂菌。
b)培养基配置：称量：按配方准确称量。
溶解：蔗糖加适量水充分溶解；(NH4)2SO4，K2HPO4·3H2O，KH2PO4，MnSO4，MgSO4·7H2O，加适量水充分溶解。
消泡剂适量。
c)发酵发酵空罐灭菌：温度121~130℃，保持流通蒸汽，罐压0.09~0.15 Mpa，维持时间20~40分钟。
进料，加水调整总体积。
发酵实罐灭菌：温度121℃，罐压0.08~0.15 Mpa，通气量0.8~1.0，维持时间30分钟，保持流通蒸汽；最后降温至30℃。
接种：温度30℃，接种量1%。
培养：温度30~31℃, 时间32~48小时, 罐压0.05~0.08Mpa, pH 6.5~7.0，DO：25%以上。
芽孢形成率98%，培养终止，液体菌数≥2.0×109cfu/mL。
开题报告生物工程地衣芽孢杆菌变异株发酵工艺研究一、选题的背景与意义地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)属硬壁菌门（Firmicutes）、杆菌纲（Bacilli）、芽孢杆菌科（Bacillaceae）、芽孢杆菌属（Bacillus）。
由于地衣芽孢杆菌安全性高、生长快速、抗逆性强、有高效的产酶能力、在较高温度下仍可存活等特点而被人们所广泛应用。
近年来, 国内外对于地衣芽孢杆菌各方面应用的报道日益增多。
在发酵产酶、医药、饲料加工、农药等行业, 取得了较好的研究成果。
根据文献显示, 关于地衣芽孢杆菌的专利有: 用地衣芽孢杆菌生产生物农药的方法; 地衣芽孢杆菌新菌株及其微生态制剂; 地衣芽孢杆菌T1菌株的构建及其粗酶提取物的发酵生产; 利用基因突变技术, 改变地衣芽孢杆菌NCIB8061 a-淀粉酶的耐温性和耐酸性酶的性质等。
本实验室在经60Co照射后的东海香参中分离得到一株能高效分解东海香参的菌株A，对该菌进行形态学特征、生理生化指标、16S rDNA和MIDI全自动微生物鉴定等发现其为地衣芽孢杆菌。
该菌株为突变株，因此对其在医药和产酶等功能方面的研究具有重大的意义。
二、研究的基本内容与拟解决的主要问题（一）基本内容：1.碳源种类对地衣芽孢杆菌产蛋白酶发酵的影响2.碳源量对地衣芽孢杆菌产蛋白酶发酵的影响3.氮源种类对地衣芽孢杆菌产蛋白酶发酵的影响4.氮源量对地衣芽孢杆菌产蛋白酶发酵的影响5.金属离子对地衣芽孢杆菌产蛋白酶发酵的影响6.初始PH值对地衣芽孢杆菌产蛋白酶发酵的影响7.接种量对地衣芽孢杆菌产蛋白酶发酵的影响（二）拟解决的主要问题：浒苔水解最佳条件摸索，检测指标的选择将成为主要问题三、研究的方法与技术路线：（一）实验安排以碳源种类、碳源量、氮源种类、氮源量、金属离子、初始Ph值、接种量为变量进行单因素实验：1．碳源种类在基础培养基中分别添加浓度为7.5%的不同碳源：麦芽糖、蔗糖、环糊精、葡萄糖、可溶性淀粉和浒苔，培养后测定发酵液的蛋白酶比活力2. 碳源量在基础培养基中分别添加浓度为2.5%、3.5%、4.5%、5.5%、6.5%、7.5%、8.5%、9.5%不同浓度最佳碳源，培养后测定发酵液的蛋白酶比活力3. 氮源种类在基础培养基中分别添加浓度为3％的不同氮源:干酪素、牛肉膏、酵母浸膏、大豆蛋白、明胶、尿素、硫酸铵、蛋白胨，培养后测定发酵液的蛋白酶比活力4. 氮源量在基础培养基中分别添加浓度为1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%等不同浓度的最佳氮源，培养后测定发酵液的蛋白酶比活力5. 金属离子在基础培养基中分别添加浓度为0.002％的不同微量金属元素：Mg2+、Fe2+、Ca2+、Mn2+、Sn2+、Cu2+、Ba2+、Li+、Fe3+、Zn2+，培养后测定发酵液的蛋白酶比活力6. 初始pH值调节培养基初始pH分别为5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0 和12.0，培养后测定发酵液的蛋白酶比活力7. 接种量分别按照2%、4%、6%、8%、10%、12%、14%和16%的添加水平，接种培养12h的种子培养基于发酵培养基中，测定发酵液蛋白酶比活力（二）技术路线：样品采集—→富集分离纯种—→产碱性蛋白酶发酵培养基选择—→对不同培养基成分进行单因素实验—→运用响应面软件主效分析确定七个主要因素—→在根据响应面软件进行七因素七水平实验确定最优发酵培养基的配方—→运用最佳培养基配方对发酵各个条件进行单因素实验—→运用响应面软件根据上诉同样的方法确定出最佳发酵条件四、研究的总体安排与进度：2010.08——2010.091．实验前的准备工作：查找资料，文献综述的撰写，英文参考文献的翻译；2．文献整理，实验方案的确定；2010.09——2010.111. 开展实验；2．优化实验方案中的各条件；3．获得实验过程中的各类数据。
冻干条件下地衣芽孢杆菌微胶囊的制备工艺优化及在模拟肠胃液中的生存能力程梦;王梓腾;杨文革;胡永红【期刊名称】《生物加工过程》【年(卷),期】2022(20)6【摘要】益生菌作为抗生素的替代品被广泛用于肠胃疾病的治疗,但是益生菌容易受到胃肠液环境的破坏,不能有效发挥其药效。
为了提高地衣芽孢杆菌在胃肠液的存活率,以结冷胶、β-环糊精和酪朊酸钠为复合壁材,在冻干条件下将地衣芽孢杆菌包埋为微胶囊,以冻干微胶囊的包埋率为响应值,设计正交试验考察3种壁材间的最佳配比。
在复合壁材最佳配比条件下,进行壁材浓度、反应转速和地衣芽孢杆菌添加量单因素实验,再根据单因素实验结果进行正交试验,优化微胶囊制备工艺,测定地衣芽孢杆菌冻干微胶囊的理化性质以及在模拟胃肠液(SGJ)中的存活率。
结果表明,地衣芽孢杆菌微胶囊完全暴露在模拟胃液(simulated gastric fluid,SGF)环境中180 min后,微胶囊的活菌数平均为6.87 lg(CFU/g),比未包埋的芽孢杆菌高3.14 lg(CFU/g);地衣芽孢杆菌微胶囊完全暴露在模拟肠液(simulated intestinal fluid,SIF)环境中180 min后,微胶囊的活菌数平均为10.36 lg(CFU/g),比未包埋的芽孢杆菌高2.34 lg(CFU/g)。
实验为微囊化的地衣芽孢杆菌在肠胃疾病防治方面提供一定的参考。
【总页数】8页(P678-685)【作者】程梦;王梓腾;杨文革;胡永红【作者单位】南京工业大学药学院;南京工业大学食品与轻工学院【正文语种】中文【中图分类】TS201.3;Q819【相关文献】1.罗伊氏乳杆菌冻干保护剂的优选及高密度冻干工艺优化2.嗜酸乳杆菌-地衣芽孢杆菌融合子的制备工艺优化3.维生素C冻干球活性成分筛选及冻干工艺优化4.维生素C冻干球活性成分筛选及冻干工艺优化5.地衣芽孢杆菌几丁质酶在枯草芽孢杆菌中的重组表达及其制备氨基寡糖的研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
地衣芽孢杆菌发酵过程的优化
吴俊罡阎英凯刘吉华王梅雪
(大连开发区松岚街11号,大连翔大生物技术有限公司）
本文通过对培养基配方的调整和发酵培养过程中对发酵工艺的调整，从而节约生产中成本，提高了产量，通过实验所得的工艺条件不但大大降低了成本而且使产量在原有的基础上有了大幅度的提高，极大的提高了产品的市场竞争力。
关键词：地衣芽孢杆菌发酵
抗生素作为饲料添加剂，在畜禽防疫方面虽起到积极的作用，但近10多年来由于科学水平的提高，国外饲料业和饲养业中很多人反对用抗菌素做饲料添加，这是因为抗菌素在预防性应用时，其化学残留污染肉、蛋、奶；另外，抗菌素会抑制和杀死肠道内的有益菌群，造成肠道正常菌群生态失调，导致疫病的发生，出现二重感染，有害于人畜健康。
鉴于此，国内外专家学者对研究开发微生态制剂用于畜禽养殖日趋关注，从而也促进了这一产业的迅猛发展，国内用于制作微生态添加剂的主要是一些芽孢菌类和乳酸菌类，但长期以来生产成本一直居高不下，对企业的发展造成了障碍，本文阐述了如何通过对地衣芽孢菌发酵过程进行优化，来提高产量，降低生产成本。
１材料与方法
１.1材料
１.1.1菌种
地衣芽孢杆菌（Bacillus lichenniformis），大连翔大生物技术研究中心保存。
１.1.2主要试剂：淀粉、豆汁、硫酸锰、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾等。
１.1.3主要设备：控温摇床、蒸汽消毒器、托盘式扭力天平、显微镜、发酵罐等。
１.２方法
１.2.1检测方法
活菌计数采用平皿活菌计数法，芽孢率采用芽孢染色后显微镜下计算。
１.2.2 摇瓶正交实验
１.2.2.1 以一适合生产的经验培养基为基础进行正交试验
经验培养基为：淀粉1.0％尿素0.2％磷酸氢二钾0.6％磷酸二氢钾0.3％酵母膏0.04％硫酸镁0.1％硫酸锰0.02％豆汁1.0％
1 0.5 0.5 0.01 0.02
2 0.5 1.0 0.02 0.04
3 0.5 1.5 0.03 0.06
4 1.0 0.
5 0.03 0.06
5 1.0 1.0 0.02 0.04
6 1.0 1.5 0.01 0.02
7 1.5 0.5 0.03 0.04
8 1.5 1.0 0.01 0.06
9 1.5 1.5 0.02 0.02
注：每种配方中再加：尿素0.2％磷酸氢二钾0.6％磷酸二氢钾0.3％硫酸镁0.1％
１.2.3发酵罐培养实验
１.2.3.1以常用细菌培养基作为对照培养基（牛肉膏0.3%蛋白胨1.0%氯化钠0.5%PH7.0～7.5）操作如下：
用蒸汽对培养基进行灭菌，121℃灭菌20分钟，然后换空气保压，同时进行冷却，当温度达到最适培养温度（37℃）时将通气比调至1:0.5，接入种子，开动搅拌为200rpm，开始进行发酵培养(培养期间罐压要保持在0.04~0.06Mpa)，随着菌体的不断生长溶氧值也逐渐发生变化，因此需调通气比和搅拌转数使溶氧值相对值不低于20％以下（由于设备限制一般调通气比不超过1:1）。
取样检测，当空形芽孢率达到80%以上时，发酵结束。
１.2.3.2按正交实验得出的培养基作为发酵罐培养基进行发酵培养，操作方法同3.2.3.1。
１.2.3.3发酵培养基同3.2.3.2，但发酵过程中控制PH，防止PH低于6.5,使地衣芽孢杆菌始终生长在相对较适宜的PH范围之内，其他培养条件同3.2.3.1。
２结果
1 0.5 0.5 0.01 0.0
2 11.
3 45
2 0.5 1.0 0.02 0.04 15.9 80
3 0.5 1.5 0.03 0.06 14.7 31
4 1.0 0.
5 0.03 0.0
6 14.1 0
5 1.0 1.0 0.02 0.04 13.2 5
6 1.0 1.5 0.01 0.02 12.9 0
7 1.5 0.5 0.03 0.04 12.6 0
8 1.5 1.0 0.01 0.06 12.4 0
9 1.5 1.5 0.02 0.02 14.3 0
Ij 41.9 38.0 36.6 38.5
IIj 40.2 41.5 43.4 41.7
IIIj 39.3 41.9 41.4 41.2
Kj 3 3 3 3
Ij/Kj 13.97 12.67 12.2 12.83
IIj/Kj 13.4 13.83 14.47 13.9
IIIj/Kj 13.1 13.97 13.8 13.73
Dj 0.3 1.3 2.27 1.07
影响因素：硫酸锰＞豆汁＞酵母膏＞淀粉
最适培养基为：
淀粉0.5％尿素0.2％磷酸氢二钾0.6％磷酸二氢钾0.3％酵母膏0.04％硫酸镁0.1％硫酸锰0.02％豆汁1.0％
２.2发酵罐实验结果
２.2.1以常用细菌培养基作为对照培养基配方上罐发酵结果
发酵周期：48小时 芽孢形成率为：80% 活菌数为：15.4亿/毫升 ２.2.2用摇瓶实验得出的培养基配方上罐发酵结果
发酵周期：36小时 芽孢形成率为： 85% 活菌数为：24亿/毫升 ２.2.3发酵过程中控制PH 的培养结果
发酵周期：32小时 芽孢形成率为：95 % 活菌数为：30亿/毫升 ３讨论
因为我们所生产的产品为活菌制剂，所以最重要的控制指标是含活菌数,而只有形成芽孢才能利于活菌保存，因而我们的实验主要围绕活菌数和芽孢率这两项展开，又根据生产实际，我们又着重将发酵周期列为一个很重要的实验指标，
因为缩短发酵周期就意味着降低能
204060801002
6
10
14
18
22263034
38
42
48
相对值
时间（h ）
表1 肉汤培养基发酵曲线
1020304050607080901002
6
10
14
182226
30
34
相对值
时间（h ）
表二正交实验所得配方发酵曲线
204060801002
4
6
8101214161820222426283032
相对值
时间（h ）
表3 正交实验所得配方控制pH 所得发酵曲线
耗，节约生产成本，月生产批次的增加,即月产量的提高。
３.1正交实验结果讨论
我们做正交实验所采用的基本培养基原材料成本低、普遍易得,且从相关资料中我们查到添加淀粉和硫酸锰有促进芽孢菌形成芽孢的作用,我们根据这些设计了正交实验,并以活菌数为研究对象,并将芽孢形成情况作为参照，对正交实验结果进行了方差分析，通过分析我们得出影响因素：影响因素：硫酸锰＞豆汁＞酵母膏＞淀粉最适培养基为：淀粉0.5％尿素0.2％磷酸氢二钾0.6％磷酸二氢钾0.3％酵母膏0.04％硫酸镁0.1％硫酸锰0.02％豆汁1.0％PH7.0~7.5。
由于摇瓶的培养条件远不如发酵罐的培养条件，所以发酵周期等指标不如发酵罐的指标。
３.2发酵实验结果讨论
发酵罐培养我们做了对比实验，采用了三种方案，方案一是用以常用细菌培养基作为发酵培养基培养；方案二是用摇瓶实验得出的培养基配方作为发酵培养基培养；方案三是发酵培养基与第二种方案相同，但在发酵过程中控制PH, 防止PH低于6.5,使地衣芽孢杆菌始终
通过方案三与方案一对比可以看出: 方案三比方案一活菌数提高了94.8%；芽孢形成情况提高了15个百分点；发酵周期缩短了33.3%；培养基成本节约了82.1%；在各个指标上都远远优于方案一。
方案三与方案二对比，虽然方案二的培养基成本节约了2.38%（方案三由于发酵过程中为了控制PH而补加碱液发生的成本计入培养基成本中），但活菌数方面方案二却比方案三减少了25%，并且由于方案二比方案三发酵周期增加了11.1%，考虑到动力等方面成本，方案三要远远优于方案二发酵条件。
４结论
通过发酵过程优化后，我们实验所得到的培养条件要远高于普遍用的培养条件，我们此次实验得到比较好的生产发酵条件是：
培养基为：淀粉0.5％尿素0.2％磷酸氢二钾0.6％磷酸二氢钾0.3％酵母膏0.04％硫酸镁0.1％硫酸锰0.02％豆汁1.0％PH7.0~7.5。
通气比起始为：1：0.5
培养温度：37℃
搅拌转数：200rpm
发酵过程中控制溶氧相对值不低于20％
发酵过程中控制PH不低于6.5
发酵培养过程中保持罐压为: 0.04~0.06Mpa
参考文献
１.《动物微生态进展》中国农业大学出版2000年3月主编：何明清甘孟侯王永坤蔡
辉益
２.《微生学教程》高等教育出版社出版1996年4月第一次印刷周德庆著
３.《微生物学》轻工业出版社1990年4月主编：张惠康
４.《微生态学杂志》中国农业大学出版社2001年第三期主编：康白
５.《微生物培养基的制造与应用》中国农业出版社出版1995年6月北京第一次印刷主编：陈天寿
６.《发酵过程优化原理与实践》化学工业出版社2002年3月第一版主编：陈坚、李寅７.《动物微生态学》中国农业出版社1994年8月第一版主编：何明清《现代工业发酵调控学》化学工业出版社2002年1月第一版主编：储炬、李友荣
８.《饲料广角》2003年11期《一株枯草芽孢杆菌发酵培养基的优化》作者：吴俊罡等９.《化工基础实验》化学工业出版社主编：冯亚云。
