地衣芽孢杆菌发酵过程

地衣芽孢杆菌活化方法一、地衣芽孢杆菌的概况地衣芽孢杆菌是一种革兰氏阳性杆菌，能够产生芽孢，能够抵抗较高温度和低温度，对pH的适应能力也很强。

地衣芽孢杆菌广泛存在于土壤、河流、湖泊、经常消毒的食品包装纸上、食品加工厂等环境中，对环境和人体健康具有一定的影响。

地衣芽孢杆菌主要通过形成芽孢的方式来在恶劣环境中生存，当环境条件再度适宜时，芽孢会迅速萌发成为活跃的细菌细胞，进行繁殖。

地衣芽孢杆菌在生物防治、有机肥料生产、酶制剂生产等方面发挥着巨大作用，因此，地衣芽孢杆菌的活化方法变得尤为重要。

二、地衣芽孢杆菌活化的必要性地衣芽孢杆菌作为一种益生菌，在农业、饲料、水产养殖、环保等诸多领域有着广泛的应用前景。

但作为一种生物制剂，其存活能力和活性都会受到环境的限制，因此需要对其进行活化处理，以提高其活性和生物效果，从而增强其应用价值。

地衣芽孢杆菌在商业化生产过程中，会受到很多因素的影响，比如适宜的培养基、培养条件、发酵时间等因素，这些因素都会对地衣芽孢杆菌的活性产生影响。

通过合理的活化方法，可以有效提高地衣芽孢杆菌的活性和生物效果，使其在商业应用中更具竞争力。

三、地衣芽孢杆菌活化方法地衣芽孢杆菌的活化方法主要包括培养基优化、发酵条件优化、生长调节剂、基因工程等多种方式。

下面对这些方法进行详细介绍：1. 培养基优化培养基是影响地衣芽孢杆菌生长和活化的重要因素之一。

通过优化培养基的成分和比例，可以提高地衣芽孢杆菌的生长速度和代谢活性，从而增加其活性和生物效果。

常用的培养基成分包括碳源、氮源、磷源、微量元素、生长因子等。

在培养基中添加适量的有机物质以及一些可以促进地衣芽孢杆菌生长的元素，如氨基酸、维生素等，可以有效提高地衣芽孢杆菌的活性。

此外，还可以通过添加一些促进细菌生长和代谢的有机酸、氨基酸和细胞生长因子等来优化培养基成分，进一步提高地衣芽孢杆菌的活性和生物效果。

例如，研究表明在培养基中添加一定比例的蔗糖和脲，有助于地衣芽孢杆菌的生长和代谢，从而提高其活性。

传统白酒发酵过程中微生物种类及功能研究进展赵龙飞;周文和【摘要】The microbial species affected the formation of liquor quality and yield during the process of fermen-tation. Taking microbial four categories as clues, we discussed the effect of microorganisms on liquor quality for-mation. It provided ideas for using microbiology to improve liquor quality , laid the foundation for liquor practice production.%发酵过程中的微生物种类影响白酒品质的形成和产量高低,着重从四大类微生物(酵母菌、霉菌、细菌、放线菌)角度,探讨发酵过程中微生物对白酒品质形成的影响,旨在为利用微生物改良白酒品质提供思路,为白酒生产奠定基础.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2017(038)019【总页数】4页(P195-198)【关键词】白酒;发酵;微生物;酵母菌;霉菌;细菌;放线菌【作者】赵龙飞;周文和【作者单位】商丘师范学院生物与食品学院,河南商丘476000;河南林河酒业有限公司,河南商丘476000【正文语种】中文Abstract：The microbial species affected the formation of liquor quality and yield during the process of fermentation.Taking microbial fourcategories as clues，we discussed the effect of microorganisms on liquor quality formation.It provided ideas for using microbiology to improve liquor quality，laid the foundation for liquor practice production.Key words：liquor；fermentation；microorganisms；Saccharomycetes；Mould；Bacterium；Actinomycetes白酒酿造在我国具有悠久历史，传统白酒主要是蒸馏酒[1]，以高淀粉质原料为发酵基质，以传统酒曲为糖化剂，采用固态、半固态或液态发酵方式，经蒸馏、陈化和调勾而成含酒精的饮品，被列为世界著名蒸馏酒之一。

地衣芽孢杆菌固态发酵代谢产物分析王和玉;杨帆;林琳;王莉;杨代永;吕云怀;季克良【摘要】MTDB-02, was easily isolated from the production environment of Moutai Liquor. MTDB-02 was identified as Bacillus licheniformis by 16S rDNA identification. Then pure solid fermentation of MTDB-02 was carried out under starter-making conditions, stacking conditions, and facultative conditions respectively and GC-MS was applied to anlayze its metabolites. The results showed that MTDB-02 could produce more than 70 metabolites by pure solid fermentation. Most of these metabolites were flavoring compounds and flavoring precursors for food, and also an integral part of aroma-producing ＆ flavoring-producing substances in Maotai Liquor.%从茅台酒生产环境中分离纯化得到1株细菌MTDB-02，经16SrDNA测序比对，最终将MTDB-02定性为地衣芽孢杆菌。

将该菌在制曲工艺、堆积工艺以及兼性条件下分别进行纯种固态发酵，利用GC—MS对其代谢物进行检测解析。

结果表明，该菌纯种固态发酵能代谢产生70多种物质。

开题报告生物工程地衣芽孢杆菌变异株发酵工艺研究一、选题的背景与意义地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)属硬壁菌门（Firmicutes）、杆菌纲（Bacilli）、芽孢杆菌科（Bacillaceae）、芽孢杆菌属（Bacillus）。

由于地衣芽孢杆菌安全性高、生长快速、抗逆性强、有高效的产酶能力、在较高温度下仍可存活等特点而被人们所广泛应用。

近年来, 国内外对于地衣芽孢杆菌各方面应用的报道日益增多。

在发酵产酶、医药、饲料加工、农药等行业, 取得了较好的研究成果。

根据文献显示, 关于地衣芽孢杆菌的专利有: 用地衣芽孢杆菌生产生物农药的方法; 地衣芽孢杆菌新菌株及其微生态制剂; 地衣芽孢杆菌T1菌株的构建及其粗酶提取物的发酵生产; 利用基因突变技术, 改变地衣芽孢杆菌NCIB8061 a-淀粉酶的耐温性和耐酸性酶的性质等。

本实验室在经60Co照射后的东海香参中分离得到一株能高效分解东海香参的菌株A，对该菌进行形态学特征、生理生化指标、16S rDNA和MIDI全自动微生物鉴定等发现其为地衣芽孢杆菌。

该菌株为突变株，因此对其在医药和产酶等功能方面的研究具有重大的意义。

二、研究的基本内容与拟解决的主要问题（一）基本内容：1.碳源种类对地衣芽孢杆菌产蛋白酶发酵的影响2.碳源量对地衣芽孢杆菌产蛋白酶发酵的影响3.氮源种类对地衣芽孢杆菌产蛋白酶发酵的影响4.氮源量对地衣芽孢杆菌产蛋白酶发酵的影响5.金属离子对地衣芽孢杆菌产蛋白酶发酵的影响6.初始PH值对地衣芽孢杆菌产蛋白酶发酵的影响7.接种量对地衣芽孢杆菌产蛋白酶发酵的影响（二）拟解决的主要问题：浒苔水解最佳条件摸索，检测指标的选择将成为主要问题三、研究的方法与技术路线：（一）实验安排以碳源种类、碳源量、氮源种类、氮源量、金属离子、初始Ph值、接种量为变量进行单因素实验：1．碳源种类在基础培养基中分别添加浓度为7.5%的不同碳源：麦芽糖、蔗糖、环糊精、葡萄糖、可溶性淀粉和浒苔，培养后测定发酵液的蛋白酶比活力2. 碳源量在基础培养基中分别添加浓度为2.5%、3.5%、4.5%、5.5%、6.5%、7.5%、8.5%、9.5%不同浓度最佳碳源，培养后测定发酵液的蛋白酶比活力3. 氮源种类在基础培养基中分别添加浓度为3％的不同氮源:干酪素、牛肉膏、酵母浸膏、大豆蛋白、明胶、尿素、硫酸铵、蛋白胨，培养后测定发酵液的蛋白酶比活力4. 氮源量在基础培养基中分别添加浓度为1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%等不同浓度的最佳氮源，培养后测定发酵液的蛋白酶比活力5. 金属离子在基础培养基中分别添加浓度为0.002％的不同微量金属元素：Mg2+、Fe2+、Ca2+、Mn2+、Sn2+、Cu2+、Ba2+、Li+、Fe3+、Zn2+，培养后测定发酵液的蛋白酶比活力6. 初始pH值调节培养基初始pH分别为5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0 和12.0，培养后测定发酵液的蛋白酶比活力7. 接种量分别按照2%、4%、6%、8%、10%、12%、14%和16%的添加水平，接种培养12h的种子培养基于发酵培养基中，测定发酵液蛋白酶比活力（二）技术路线：样品采集—→富集分离纯种—→产碱性蛋白酶发酵培养基选择—→对不同培养基成分进行单因素实验—→运用响应面软件主效分析确定七个主要因素—→在根据响应面软件进行七因素七水平实验确定最优发酵培养基的配方—→运用最佳培养基配方对发酵各个条件进行单因素实验—→运用响应面软件根据上诉同样的方法确定出最佳发酵条件四、研究的总体安排与进度：2010.08——2010.091．实验前的准备工作：查找资料，文献综述的撰写，英文参考文献的翻译；2．文献整理，实验方案的确定；2010.09——2010.111. 开展实验；2．优化实验方案中的各条件；3．获得实验过程中的各类数据。

清香大曲及酒醅中地衣芽孢杆菌的分离鉴定芽孢杆菌是大曲中常见微生物，也是重要类群之一。

地衣芽孢杆菌一直以来被认为是酱香型白酒高温大曲中特有的微生物，就我们研究发觉，在牛栏山酒厂生产用的多种幽香大曲、出池酒醅中同样存在地衣芽孢杆菌，对分离出23株芽孢杆菌进行生理生化实验，鉴定出12株地衣芽孢杆菌，鉴定结果与中国食品发酵工业研究院分子鉴定结果一致。

本文要紧介绍地衣芽孢杆菌的生理生化鉴定实验方法，为地衣芽孢杆菌的鉴定提供比较完备的一套方法。

1 地衣芽孢杆菌的分离1.1材料牛栏山酒厂生产用幽香大曲、酿酒车间酒醅1.2分离用培养基肉汁培养基：牛肉膏0.3％，蛋白胨1.0％，NaCl 0.5％，琼脂2.0％，pH 7.0-7.2，121℃，灭菌30min。

1.3分离方法取大曲干粉或酒醅0.5g，加入带有玻璃珠的无菌水三角瓶中，摇床培养30min，60℃水浴30min，然后用接种环蘸取，在肉汁培养基平板上划线分离。

挑取单菌落连续划线分离，直到得到单菌落纯菌株为止。

2 地衣芽孢杆菌生理生化鉴定实验依照上述分离培养基和分离方法，共计分离得到芽孢杆菌23株，编号分别为1＃、2＃、3＃、4＃……22＃、23＃，接下来通过实验对这些菌株进行选择和鉴定。

地衣芽孢杆菌鉴定参考«伯杰氏细菌鉴定手册»及«常见细菌系统鉴定手册»〔东秀珠，蔡妙英等编著〕的方法，有所改进，以下为具体的生理生化实验鉴定方法。

2.1柠檬酸盐与丙酸盐利用实验某些细菌能利用柠檬酸盐或丙酸盐作为唯独碳源，并利用磷酸铵作为氮源，将柠檬酸分解为二氧化碳，那么培养基中由于有游离钠离子存在而呈碱性。

培养基配方：柠檬酸钠〔或丙酸钠〕0.2％，NaC1 0.5％，MgSO4•7H2O 0.01％，(NH4)2HPO4 0.1％，K2HPO4•3H2O 0.1％，1%溴百里酚蓝水溶液10ml，琼脂2％。

以上成分除指示剂外其余加热溶解，调剂pH＝6.8-7.0，并加入指示剂，使培养基呈草绿色，分装试管，灭菌后摆斜面。

本技术提供一种地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)新菌株CLIMAX VBL，其保藏号为CGMCC No.12499。

本技术还提供含有地衣芽孢杆菌CLIMAX VBL的菌剂及其应用。

该菌能够显著提高农作物产量和抗逆能力，显著降低作物病害。

菌株CLIMAX VBL经过工业化生产，具有广阔应用前景，可以用于配置多种肥料产品，并可用于苗床、灌根、配肥(制作生物有机肥)等用途。

技术要求1.地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)新菌株CLIMAX-VBL，其保藏号为CGMCCNo.12499。

2.含有权利要求1所述地衣芽孢杆菌CLIMAX-VBL的菌剂。

3.权利要求2所述菌剂的制备方法，其特征在于，其中地衣芽孢杆菌CLIMAX-VBL的活菌数为10亿/克以上；制备方法如下：将保存于冻干管中的菌株CLIMAX-VBL接入到肉汤培养基的固体斜面中，在30-32℃下培养24-48小时；然后挑取菌落接入PDA固体斜面中，在30-32℃下培养3-7天；然后挑取菌落接入到经过灭菌的液体培养基中，在30-32℃、150-200r/min条件下培养36-48小时，获得菌株CLIMAX-VBL的发酵液；其中，所述液体培养基含有如下重量份的组分：蔗糖20份、氯化钠5份、蛋白胨20份、硫酸镁5份、磷酸二氢钾3份和水1000份。

4.权利要求2所述菌剂的制备方法，其特征在于，其中地衣芽孢杆菌CLIMAX-VBL的活菌数为2亿/克以上；制备方法如下：S11、按照权利要求3所述方法制备菌株CLIMAX-VBL的发酵液；S12、将发酵液与固体吸附剂按1:4-8的重量比混合，干燥后进行活菌数检测，即得；其中，所述固体吸附剂为草炭、沸石或碳酸钙中的至少一种。

5.权利要求2所述菌剂的制备方法，其特征在于，其中地衣芽孢杆菌CLIMAX-VBL的活菌数为100亿/克以上；制备方法如下：S21、按照权利要求3所述方法制备菌株CLIMAX-VBL的发酵液；S22、向发酵液中加入可湿性固形物，调整到含水量90％以内，采用离心喷雾干燥的方式蒸发水分，制成菌粉，然后进行活菌数检测，即得；其中，所述可湿性固形物包括麦芽糊粉、葡萄糖、环糊精。

地衣芽孢杆菌蔗糖发酵实验现象
Y聚谷氨酸是一种生物高分子载体材料，最早是由Ivanovic’s 等人在炭疽芽孢杆菌的夹膜中发现的，是芽孢杆菌属如枯草芽孢杆菌，地衣芽孢杆菌等在生命活动过程中产生的次级代谢产物，当前可以在实验室通过生物发酵的方法制备。

随着科技的进步与工业的发展，随之而来的环境污染问题也日益增多，因此各领域更倾向于发展和应用环境友好型材料。

而γ-聚谷氨酸作为一种可生物降解的“绿色”高分子材料，也越来越受人们的关注。

因其具有良好的吸水特性，并且无论在人体内部，还是在外界环境中其最终的分解代谢产物均为谷氨酸，对人体无毒副作用，对环境无污染，因此在许多领域都展现出其优越性。

目前已知，在化妆品行业，食品行业，医疗保健行业，农业方面均有广泛的应用。

生防地衣芽孢杆菌最佳发酵条件探究作者：徐亚英黄晓梅谢丽来源：《南方农业·中旬》2020年第03期摘要通过单因素试验对地衣芽孢杆菌发酵培养基配方及条件进行优化。

结果表明，该菌菌株培养基最佳配比为蛋白胨1%、酵母提取物0.5%、氯化钠1%，最佳培养条件是初始pH 值8.5、温度37 ℃、时间36 h、三角瓶装液量125 mL、接种量4%、转速200 r·min-1。

该研究为地衣芽孢杆菌的大规模工业化发酵培养提供了有益借鉴。

关键词地衣芽孢桿菌;发酵条件优化;单因子试验微生物制剂是现在各国竞相研究开发的新产品。

我国原农业部于2003年就公布了可用于生产微生态制剂的芽孢杆菌属菌种有地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌等。

地衣芽孢杆菌是一种益生菌，是革兰氏阳性好氧菌，化能异养，在一定条件下能产生抗逆性内生孢子[1-3]。

近年来，国内外对于地衣芽孢杆菌各方面应用的报道日益增多，是芽孢杆菌中具有较大应用前景的菌种之一，在医药、农药、饲料加工等行业中都取得了较好的研究成果[4-6]。

但该杆菌在动物微生态制剂及植物病虫害防治方面的应用仍处于发展阶段，发展潜力较大。

尤其是在植物微生态制剂上的应用，具有重要的发展意义。

地衣芽孢杆菌在自然界中分布十分广泛，是植物及土壤微生态的优势种群;能分泌抑制或者杀死病原菌的次级代谢产物，对许多植物的病原菌有较好的抑制作用，如对核盘菌、镰刀菌、水稻纹枯病病菌和稻瘟病病菌等均具有较好的抑菌作用，具有较好的生防潜力，已经成功用在植物病害的生物防治方面[7-10]。

目前，登记的相关农药制剂为地衣芽孢杆菌水剂，由广西金燕子农药有限公司研制，含80亿个/mL活芽孢，主要防治黄瓜保护地的霜霉病。

但在将地衣芽孢杆菌制成微生态制剂时，保证含有大量的细胞、芽孢且成本较低是一个重要前提[11]。

基于此，采用单因素试验研究不同发酵培养基及不同培养条件对地衣芽孢杆菌培养的影响，以期为降低地衣芽孢杆菌高密度培养的成本提供一定的理论依据，使其能够满足微生物菌剂的生产要求。