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枸橼酸坦度螺酮组合物通过抑制神经元氧化损伤和调节小胶质细胞活化发挥抗抑郁作用邓岚1，曾娟1，王征琴1，唐新新1，陈刚2，吴建明1，吴安国11.西南医科大学药学院（泸州646000）；2.四川科瑞德制药股份有限公司（泸州646000）【摘要】目的筛选不同组成的枸橼酸坦度螺酮组合物（tandospirone citrate compositions，TCCs ），以评估其改善小鼠抑郁症行为的效果，并探究枸橼酸坦度螺酮的神经保护作用。
方法采用动物行为实验和体外细胞实验的方法。
在动物实验中，通过强迫游泳测试（forced swim-ming test，FST ）和尾悬挂测试（tail suspension test，TST ），评估五种TCCs 对小鼠抑郁样行为的影响。
在体外细胞实验中，研究表现最佳的组合物TCC-4在抑制过氧化氢（hydrogen peroxide，H 2O 2）诱导的PC-12细胞损伤和脂多糖（lipopolysaccharide，LPS ）诱导的BV-2细胞神经炎症的作用。
结果在FST 和TST 实验中，TCCs 显著减少了小鼠的不动时间（P <0.05），显示出其抗抑郁样效果。
体外细胞实验中发现，表现最佳的TCC-4能有效抑制H 2O 2诱导的PC-12细胞死亡、活性氧（reactive oxygen species，ROS ）的产生及线粒体膜电位（mitochondrial membrane po-tential，MMP ）的降低（P <0.001），且减轻了LPS 诱导的BV-2细胞激活和吞噬作用（P <0.001）。
结论TCCs，尤其是TCC-4，显示出良好的抗抑郁效果。
其作用机制可能与抑制神经元的氧化损伤和调节小胶质细胞的活化有关。
这些发现为TCC-4作为新型抗抑郁药物的潜力提供了支持，并为其在临床应用的进一步研究奠定了理论基础。
【关键词】抑郁症；枸橼酸坦度螺酮组合物；氧化应激；神经炎症；小胶质细胞【中图分类号】R964文献标志码：A DOI ：10.3969/j.issn.2096-3351.2024.02.014Tandospirone citrate composition exerts antidepressant effects by inhibitingneuronal oxidative damage and microglial activationDENG Lan 1，ZENG Juan 1，WANG Zhengqin 1,TANG Xinxin 1,CHEN Gang 2,WU Jianming 1,WU Anguo 11.School of Pharmacy ，Southwest Medical Univisity ，Luzhou 646000，China ；2.Sichuan Credit Pharmaceutical CO.，Ltd.，Luzhou 646000，China【Abstract 】Objective Different tandospirone citrate compositions （TCCs ）were screened to assess their effectiveness in improv‑ing depressive behaviors in mice and to explore the neuroprotective effects of the most effective combinations.Methods Animal behav‑ioral experiments and in vitro cellular experiments were used.In animal experiments ，the effects of five TCCs on depression-like behav‑iors in mice were evaluated by the forced swim test （FST ）and tail suspension test （TST ）.In vitro experiments were conducted to inves‑tigate the effects of TCC-4，which exhibited the best performance ，on inhibiting hydrogen peroxide （H 2O 2）-induced damage in PC-12cells and lipopolysaccharide （LPS ）-induced neuroinflammation in BV-2cells.Results In FST and TST experiments ，TCCs signifi‑cantly reduced the resting time of mice （P <0.05），showing their antidepressant-like effects.In H 2O 2-induced PC-12cells ，the best-performing TCC-4was found to effectively inhibit cell death ，reactive oxygen species （ROS ）production ，and mitochondrial membrane potential （MMP ）reduction （P <0.001）.Additionally ，TCC-4could attenuate LPS-induced BV-2cell activation and phagocytosis （P <0.001）.Conclusion TCCs ，especially TCC-4，showed favorable antidepressant effects.The mechanism of action might be related to the inhibition of oxidative damage in neurons and the regulation of microglia activation.These findings provided support for the poten‑tial of TCC-4as a novel antidepressant drug and laid the foundation for further studies on its clinical application.【Key words 】Depression ；Tandospirone citrate compositions ；Oxidative stress ；Neuroinflammation ；Microglia基金项目:国家自然科学基金青年项目（81903829）通信作者:吴安国,E-mail:****************.cn引用本文：邓岚，曾娟，王征琴，等.枸橼酸坦度螺酮组合物通过抑制神经元氧化损伤和调节小胶质细胞活化发挥抗抑郁作用[J].西南医科大学学报，2024，47（2）：166-171.DOI：10.3969/j.issn.2096-3351.2024.02.014抑郁症作为全球性的公共卫生问题，严重影响数百万患者的生活质量，并对社会经济造成了沉重的负担[1]。
doi：10.3969/j.issn.1000-484X.2023.09.005IL-33调控NF-κB/Twist信号通路促进肺泡上皮细胞上皮-间质转分化的机制研究①高云星②付裕③陈晓李泽朋何晓伟李先伟（皖南医学院药学院药理学教研室，芜湖 241002）中图分类号R392.12 文献标志码 A 文章编号1000-484X（2023）09-1814-08［摘要］目的：探究IL-33是否通过激活NF-κB/Twist信号通路，进而诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞发生上皮-间质转分化（EMT）而促进肺纤维化（PF）的进程。
方法：C57BL/6小鼠48只，随机分成对照（CON）组、博莱霉素（BLM）组、BLM+IL-33 （30 μg/kg）组和BLM+抗IL-33抗体（Anti-IL-33 Ab）（100 μg/kg）组，每组12只。
气管注射BLM（5 000 U/kg）诱导PF小鼠模型。
造模后每隔1 d腹腔注射1次重组IL-33和抗IL-33抗体，连续注射3周。
HE和Masson染色观察肺组织病理变化及胶原沉积情况。
ELISA检测血浆IL-33的水平。
免疫组化检测肺组织IL-33跨膜受体ST2L的表达。
体外培养小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞，实验设Control组、IL-33（100 ng/ml）组、IL-33+二甲基亚砜（DMSO）组及IL-33+吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC， 100 μmol/L）组，每组设复孔6个。
细胞先用PDTC或DMSO预处理1 h，再用IL-33处理48 h。
RT-PCR检测肺组织或肺泡上皮细胞中Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、E钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）mRNA的表达。
Western blot检测肺组织和（或）肺泡上皮细胞IL-33、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、E-cadherin、Vimentin、α-SMA、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达及细胞核内NF-κB p65和Twist的蛋白水平。
Traditional Chinese Medicine 中医学, 2023, 12(6), 1343-1350 Published Online June 2023 in Hans. https:///journal/tcm https:///10.12677/tcm.2023.126201缩泉益肾方对高糖诱导的HK-2细胞炎症因子 影响的研究王 珏1，肖 曼2，谢毅强1*1贵州中医药大学中医学院，贵州 贵阳 2海南医学院生物技术学院，海南 海口收稿日期：2023年5月8日；录用日期：2023年6月20日；发布日期：2023年6月27日摘 要目的：观察缩泉益肾方对高糖(HG)诱导的HK-2细胞炎症因子的影响。
方法：将HK-2细胞分成N 组、HG 组、5% SQYSF + HG 组、10% SQYSF + HG 组、20% SQYSF + HG 组、Cana + HG 组。
经过细胞干预24 h 后，使用CCK8法检测细胞存活比率，流逝细胞仪检测细胞凋亡比率，ELISA 法检测细胞中TNF-α、IL-1β及IL-6炎症因子水平。
使用GraphPad Prism 9.5对实验数据进行统计处理。
结果：与N 组相比，HG 组细胞存活率明显降低、细胞凋亡率和炎性因子浓度显著增加(P < 0.05)；且HG 组与5% SQYSF + HG 组(简称SL 组)、10% SQYSF + HG 组(简称SM 组)、20% SQYSF + HG 组(简称SH 组)及Cana + HG 组(简称Cana 组)相比，差异具有统计学意义(P < 0.05)。
与HG 组比较，Cana 组、SL 组、SM 组、SH 组HK-2细胞存活率明显升高(P < 0.05)。
对于TNF-α、IL-6、IL-1β炎症因子水平的影响，HG 组与SL 组、SM 组、SH 组及Cana 组差异明显(P < 0.05)。
miR-25通过调节TGF-β信号传导通路促进胃癌细胞增殖和转移作者：宋钉町马博曹博威来比江·吾斯曼张文斌来源：《中国医学创新》2023年第35期【摘要】目的：探究miR-25对人胃癌细胞SGC-7901增殖、侵袭、迁移、凋亡的作用及其分子机制。
方法：构建miR-25干扰慢病毒，并将研究目的细胞分为正常组、miR-25干扰慢病毒组和miR-25干扰慢病毒空载组，利用现代医学生物学技术，检测转染效果、细胞增殖能力、侵袭能力、迁移能力、细胞凋亡情况，以及各组细胞中转化生长因子-β（TGF-β）蛋白的表达情况。
结果：与正常组相比，miR-25在miR-25干扰慢病毒组中的表达明显更低（P<0.05）；与正常组相比，miR-25干扰慢病毒组的细胞存活率、迁移率、增殖率、侵袭能力均显著降低，凋亡率明显更高，差异均有统计学意义（P<0.05）。
与正常组相比，TGF-β蛋白在miR-25干扰慢病毒组中的表达量增加，差异有统计学意义（P<0.05）。
结论：miR-25在人胃癌细胞SGC-7901中的表达被抑制后，TGF-β蛋白在胃癌细胞中的表达显著增加，且明显降低了胃癌细胞的侵袭转移能力，并促进了肿瘤细胞的凋亡。
【关键词】胃癌 miR-25 转化生长因子-β 信号通路miR-25 Promotes Proliferation and Transfer of Gastric Cancer Cell by Regulating TGF-β Signaling Pathway/SONG Dingding， MA Bo， CAO Bowei， Laibijiang·Wusiman， ZHANG Wenbin. //Medical Innovation of China， 2023， 20（35）： 0-029[Abstract] Objective： To explore the effects of miR-25 on proliferation， invasion， migration and apoptosis of human gastric cancer cell SGC-7901 and its molecular mechanism. Method： miR-25 interfering lentivirus was constructed， and the cells for study were divided into normal group，miR-25 interfering lentivirus group and miR-25 interfering lentivirus no-load group. Modern medical biology technology was used to detect transfection efficiency， cell proliferation ability， invasion ability， migration ability， apoptosis situation， and the expression of transforming growth factor-β （TGF-β） protein in each group. Result： Compared with the normal group， the expression of miR-25 in miR-25 interfering lentivirus group was significantly lower （P<0.05）. Compared with the normal group， the survival rate， migration rate， proliferation rate and invasion ability of cell in miR-25 interfering lentivirus group were significantly decreased， and the apoptosis rate in miR-25 interfering lentivirus group was significantly higher， the differences were statistically significant （P<0.05）. Compared with the normal group， the expression level of TGF-β protein in miR-25 interfering lentivirus group was increased， the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion： After the expression of miR-25 was inhibited in human gastric cancer cell SGC-7901，the expression of TGF-β protein in gastric cancer cell was significantly increased， and the invasion and metastasis ability of gastric cancer cell were significantly reduced， and the apoptosis of tumor cells was promoted.[Key words] Gastric cancer miR-25 TGF-β Signaling pathwayFirst-author's address： The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University， Urumqi 830000， Chinadoi：10.3969/j.issn.1674-4985.2023.35.006胃癌（gastric cancer，GC）是胃肠道一种常见的恶性疾病，相关统计显示，胃癌已成为全球第五大癌症，是继肺癌、结直肠癌和肝癌的第四大死亡原因[1]。
LncRNA SNHG8对乳腺癌细胞MDA-MB-231的细胞生物学功能的影响通信作者：李杰华,1978年5月，男，博士学位，主任医师，普通外科*******************基金项目：Rab25通过转录因子Snail调控三阴性乳腺癌上皮间充质转化的研究（2018GXNSFAA281255）摘要目的：探讨长链非编码RNA（LncRNA）SNHG8对乳腺癌细胞MDA-MB-231的细胞生物学功能的影响。
方法：收集乳腺癌患者的癌及癌旁标本，提取组织中的总RNA，实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）技术检测乳腺癌组织和癌旁组织中SNHG8的相对表达量；体外培养乳腺癌细胞株MDA-MB-231，设置三组对照组，分别是不转入任何载体的正常对照组，转入空载慢病毒的阴性对照组，以及转入过表达慢病毒的SNHG8过表达组；CCK-8检测细胞增殖情况；划痕实验检测细胞迁移情况，transwell实验检测细胞侵袭情况，使用IBM SPSSStatitics25进行统计学分析。
结果：SNHG8在乳腺癌组织中表达量低于癌旁组织，差异具有统计学意义（P<0.05）；正常对照组和阴性对照组的细胞在OD 值，细胞迁移率和穿膜细胞数无明显差异（P>0.05），正常组的凋亡率要低于阴性对照组（P<0.05）；SNHG8过表达组的细胞OD值，细胞迁移率和穿膜细胞数明显低于空白对照组和阴性对照组（P<0.05）。
结论： LncRNA SNHG8抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增值，迁移和侵袭。
关键词乳腺癌;长链非编码RNA;SNHG8背景据2021年GLOBOCAN全球癌症统计数据显示，全球乳腺癌每年新发病例高达226万例，乳腺癌已取代肺癌成为全球第一大癌症[1]。
在我国，乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,发病率位居中国女性恶性肿瘤首位[2]。
乳腺在各种内外因素的作用和影响下，比如：激素[3]、遗传因素[4]、机体免疫功能下降[5]；病毒[6]、放射线[7]等发生发展为乳腺癌。
柴桂龙牡汤含药血清对人乳腺癌细胞MCF-7的抑制作用及对雌激素受体α表达的影响蔡琳琳;姚明江;郭全;吴显文;朱尧武;许云【摘要】目的观察柴桂龙牡汤(CGLM)含药血清对人乳腺癌MCF-7细胞株体外生长的抑制作用及对雌激素受体α9 ERα0表达的影响.方法将人乳腺癌MCF-7细胞株细胞分别加入相应(含药)培养基,对照组含有10%空白大鼠血清,给药组分别含有柴桂龙牡汤低、中、高剂量的10%含药血清.加药后,置37℃及5%CO2培养箱中继续培养48 h.噻唑蓝(MTT)法检测柴桂龙牡汤各组含药血清对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用.将10%的含药血清培养基加入MCF-7细胞中,孵育48 h,提取细胞总mRNA及蛋白,反转录合成cDNA,采用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞中ERαmRNA的表达水平,采用Western blot方法检测各组ERα蛋白表达水平.结果 MTT法检测结果显示,与对照组相比,低、中、高剂量柴桂龙牡汤均可抑制MCF-7细胞体外增殖,中、高剂量组的差异有统计学意义(P<0.01);PCR法检测结果显示,与对照组相比,柴桂龙牡汤低、中、高剂量组中ERαmRNA均有升高,其中高剂量组有显著差异(P<0.01);Western blot法检测结果显示,与对照组相比,低、中、高剂量柴桂龙牡汤均使ERα蛋白表达水平升高,中、高剂量组有显著差异(P<0.01).结论柴桂龙牡汤对MCF-7细胞的体外生长有抑制作用,并与剂量浓度呈正相关,其机制可能与提高ERαmRNA含量、上调ERα蛋白的表达水平有关.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2018(027)012【总页数】4页(P1-4)【关键词】柴桂龙牡汤;乳腺癌;人乳腺癌细胞系MCF-7细胞株;雌激素受体α【作者】蔡琳琳;姚明江;郭全;吴显文;朱尧武;许云【作者单位】中国中医科学院西苑医院肿瘤科,北京 100091;中国中医科学院西苑医院基础医学研究所,北京 100091;中药药理北京市重点实验室,北京 100091;中国中医科学院西苑医院肿瘤科,北京 100091;中国中医科学院西苑医院肿瘤科,北京100091;中国中医科学院西苑医院肿瘤科,北京 100091;中国中医科学院西苑医院肿瘤科,北京 100091【正文语种】中文【中图分类】R285.6;R273乳腺癌是女性常见恶性肿瘤，发病率逐年上升[1]。
ＣＤＣ６，ａｎｄＭＣＭ５：ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅｂｉｏｍａｒｋｅｒｓｉｎｃｅｒｖｉｃａｌｐｒｅｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｏｐｌａｓｉａａｎｄｃｅｒｖｉｃａｌｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＪＣｌｉｎＰａｔｈｏｌ，２００５，５８（５）：５２５－５３４．［１４］ ＣＨＥＮＳ，ＣＨＥＮＸ，ＸＩＥＧ，ｅｔａｌ．Ｃｄｃ６ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓｔｏｃｉｓｐｌａｔｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｂｙａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＡＴＲ－Ｃｈｋ１ｐａｔｈｗａｙｉｎｂｌａｄｄｅｒｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，２０１６，７（２６）：４０３６２－４０３７６．［１５］ 罗金现，高训锋，温建燔．基于ＧＥＯ结直肠癌芯片数据的生物信息学分析［Ｊ］．国际医药卫生导报，２０１７，２３（８）：１１４２－１１４６．ＬＵＯＪＸ，ＧＡＯＸＦ，ＷＥＮＪＦ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｇｅｎｏｍｅｍｉｃｒｏａｒｒａｙｂａｓｅｄｏｎｄａｔｅｂａｓｅ［Ｊ］．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅａｎｄＨｅａｌｔｈＧｕｉｄａｎｃｅＮｅｗｓ，２０１７，２３（８）：１１４２－１１４６．［１６］ ＹＩＺＹ，ＭＥＮＧＴＧ，ＭＡＸＳ，ｅｔａｌ．ＣＤＣ６ｒｅｇｕｌａｔｅｓｂｏｔｈＧ２／Ｍｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｎｄｍｅｔａｐｈａｓｅ－ｔｏ－ａｎａｐｈａｓｅｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｄｕｒｉｎｇｔｈｅｆｉｒｓｔｍｅｉｏｓｉｓｏｆｍｏｕｓｅｏｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．ＪＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌ，２０２０，２３５（７－８）：５５４１－５５５４．［１７］ ＮＩＩＭＩＳ，ＡＲＡＫＡＷＡ－ＴＡＫＥＵＣＨＩＳ，ＵＲＡＮＢＩＬＥＧＢ，ｅｔａｌ．Ｃｄｃ６ｐｒｏｔｅｉｎｏｂｓｔｒｕｃｔｓａｐｏｐｔｏｓｏｍｅａｓｓｅｍｂｌｙａｎｄｃｏｎｓｅｑｕｅｎｔｃｅｌｌｄｅａｔｈｂｙｆｏｒｍｉｎｇｓｔａｂｌｅｃｏｍｐｌｅｘｅｓｗｉｔｈａｃｔｉｖａｔｅｄＡｐａｆ－１ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ［Ｊ］．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２０１２，２８７（２２）：１８５７３－１８５８３．［１８］ ＧＵＯＸ，ＹＡＮＧＹ，ＬＩＵＬ，ｅｔａｌ．ＰｉｒｆｅｎｉｄｏｎｅｉｎｄｕｃｅｓＧ１ａｒｒｅｓｔｉｎｈｕｍａｎｔｅｎｏｎ＇ｓｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｉｎｖｉｔｒｏｉｎｖｏｌｖｉｎｇＡＫＴａｎｄＭＡＰＫｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓ［Ｊ］．ＪＯｃｕｌＰｈａｒｍａｃｏｌＴｈｅｒ，２０１７，３３（５）：３６６－３７４．［１９］ ＳＯＮＧＭ，ＢＯＤＥＡＭ，ＤＯＮＧＺ，ｅｔａｌ．ＡＫＴａｓａｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔａｒｇｅｔｆｏｒｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２０１９，７９（６）：１０１９－１０３１．［２０］ ＷＡＮＧＨ，ＷＡＮＧＨＳ，ＺＨＯＵＢＨ，ｅｔａｌ．Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ（ＥＭＴ）ｉｎｄｕｃｅｄｂｙＴＮＦ－αｒｅｑｕｉｒｅｓＡＫＴ／ＧＳＫ－３β－ｍｅｄｉａｔｅｄｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＳｎａｉｌｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＰＬｏＳＯｎｅ，２０１３，８（２）：ｅ５６６６４－ｅ５６６６４．（编校：闫沛）ＨＩＦ－１α靶向ＳＰ１促进食管鳞状细胞癌转移及血管生成的机制研究王文然１，郭 瑞２，张 华１ＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＨＩＦ－１αｔａｒｇｅｔｉｎｇＳＰ１ｔｏｐｒｏｍｏｔｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓａｎｄａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｅｓｏｐｈ ａｇｅａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａＷＡＮＧＷｅｎｒａｎ１，ＧＵＯＲｕｉ２，ＺＨＡＮＧＨｕａ１１ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ，ｔｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＸｉｎｊｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＸｉｎｊｉａｎｇＵｒｕｍｑｉ８３００５４，Ｃｈｉｎａ；２ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ，ＨａｍｉＣｅｎｔｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｆｉｌｉａｔｅｄｔｏＸｉｎｊｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＸｉｎｊｉａｎｇＨａｍｉ８３９０００，Ｃｈｉｎａ．【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＨＩＦ－１αｏｎｍｅｔａｓｔａｓｉｓａｎｄａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｅｓｏｐｈａｇｅａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａａｎｄｉｔｓｐｏｓｓｉｂｌｅｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＲＴ－ＰＣＲｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔＨＩＦ－１αａｎｄＳＰ１ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｃｅｌｌｓ．ＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔＨＩＦ－１αａｎｄＳＰ１ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．ＣＣＫ－８ｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙ．Ｔｒａｎｓｗｅｌｌｔｅｓｔｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｃｅｌｌｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎ．ＡｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｔｅｓｔｉｎｖｉｔｒｏｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓａｂｉｌｉｔｙｏｆｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｖｅｉｎｂｌｏｏｄｖｅｓｓｅｌｓｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓＨＵＶＥＣ．ＣｈＩＰ－ＰＣＲｔｅｓｔｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｂｉｎｄｉｎｇｏｆＨＩＦ－１αａｎｄＳＰ１ｐｒｏｍｏｔｅｒ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｈｕｍａｎｅｓｏｐｈａｇｅａｌｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓＨＥＥＣ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＨＩＦ－１αａｎｄＳＰ１ｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄｉｎｅｓｏｐｈａｇｅａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓＥｃ１０９，ＫＹＳＥ３０，ＫＹＳＥ１５０，ａｎｄＫＹＳＥ４１０（Ｐ＜０．０５），ａｍｏｎｇｗｈｉｃｈＥｃ１０９ｃｅｌｌｓｈａｄｔｈｅｍｏｓｔｏｂｖｉｏｕｓｃｈａｎｇｅｓ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｓｈ－ＮＣｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｖｉａｂｉｌｉｔｙ，ｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎａｂｉｌｉｔｙｏｆＥｃ１０９ｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅｓｈ－ＨＩＦ－１αｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆＨＵＶＥＣｃｅｌｌｃｈａｎｎｅｌｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｏｅ－ＮＣｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙ，ｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎａｂｉｌｉｔｙ，ａｎｄｎｕｍｂｅｒｏｆＨＵＶＥＣｃｅｌｌｃｈａｎｎｅｌｓｏｆＥｃ１０９ｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅｏｅ－ＨＩＦ－１αｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５）．ＨＩＦ－１αｔａｒｇｅｔｓｔｈｅＳＰ１ｐｒｏｍｏｔｅｒｒｅｇｉｏｎ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｓｈ－ＮＣｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＳＰ１ｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎ，ｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙ，ｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎａｂｉｌｉｔｙ，ａｎｄＨＵＶＥＣｃｅｌｌｃｈａｎｎｅｌｓｏｆＥｃ１０９ｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅｓｈ－ＨＩＦ－１αｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｓｈ－ＨＩＦ－１α＋ｏｅｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＳＰ１ｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎ，ｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙ，ｍｉｇｒａｔｉｏｎ【收稿日期】 ２０２０－１１－１３ 【修回日期】 ２０２１－０２－０１【基金项目】 新疆维吾尔自治区自然科学基金（编号：２０１９Ｄ０１Ｃ２２６）【作者单位】 １新疆医科大学第一附属医院肿瘤二科，新疆 乌鲁木齐 ８３００５４２新疆医科大学附属哈密市中心医院肿瘤外科，新疆 哈密 ８３９０００【作者简介】 王文然（１９７５—），女，河南洛阳人，副主任医师，硕士研究生，主要从事恶性肿瘤的放化疗研究。
第 49 卷第 6 期2023年 11 月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.49 No.6Nov.2023DOI：10.13481/j.1671‑587X.20230603SOX17过表达慢病毒载体和稳定转染细胞系的构建黄少婷1,2, 李友1,2, 吴钊淳2, 何嘉文2, 廖科棋2, 李胜男1,2（1. 广东医科大学广东省衰老相关心脑疾病重点实验室，广东湛江524002；2. 广东医科大学附属医院神经病学研究所，广东湛江524002）［摘要］目的目的：构建性别决定区Y盒17（SOX17）过表达慢病毒载体，使用SOX17过表达慢病毒感染PC12细胞并建立稳定过表达SOX17的细胞系。
方法：在NCBI数据库中查找、设计并合成SOX17过表达序列，将其与经Bam HⅠ和AgeⅠ双酶切的慢病毒GV492载体连接，构建GV492-SOX17过表达重组质粒。
琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物，筛选携带GV492-SOX17过表达重组质粒的阳性菌，克隆后测序。
将GV492空载质粒和GV492-SOX17过表达重组质粒分别转染至人胚肾HEK 293T细胞中，转染48 h后收集GV492对照慢病毒和GV492-SOX17过表达慢病毒进行包装并测定病毒滴度。
将PC12细胞分为空白组、GV492对照组和GV492-SOX17组，空白组不作处理，GV492对照组和GV492-SOX17组分别采用相应慢病毒感染细胞（感染复数＝100），10 mg·L－1嘌呤霉素筛选成功感染慢病毒的PC12细胞，荧光显微镜观察各组PC12细胞生长状态及绿色荧光表达情况。
采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组PC12细胞中SOX17 mRNA表达水平，Western blotting 法检测各组PC12细胞中SOX17蛋白表达水平。
结果结果：GV492-SOX17过表达重组质粒的基因片段长度约为744 bp， GV492-SOX17过表达重组质粒基因序列与设计合成的SOX17过表达序列一致。
