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放线菌的形态观察

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【实验题目】
放线菌的形态观察
【实验目的】
1、掌握放线菌观察方法—插片法
2、了解放线菌的基本形态
【实验器材】
1、菌种：青色链霉菌、弗氏链霉菌
o 严去甘・
2、培养基：
灭菌的高氏I号琼脂培养基
3、仪器和用具：显微镜、酒精灯、载玻片、盖玻片、接种环、镊子、培养皿等
【实验原理】
1．高氏I 号培养基
高氏I 号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。

此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作用而产生沉淀。

因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将二种或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。

此外，合成培养基有的还要补加微量元素，如高氏I 号培养基中，需要加入FeSO4。

2．放线菌放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。

常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝，基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝，并进一步分化产生孢子丝及孢子。

有的放线菌只产生基内菌丝而无气生菌丝。

在显微镜下直接观察时，气生菌丝在上层、基内菌丝在下层，且气生菌丝较暗，基内菌丝较透明。

孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。

在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。

能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。

固体基质
图1链霉菌一般形态和构造（模式图）
1-直形，交叉分枝
2-丛生，波曲
3-顶端形成大螺旋
4-松螺旋
5,6-紧螺旋
7-短而直，轮生
图2:链霉菌属抱子丝的主要类型
3.插片法
将放线菌接种在琼脂平板上，插上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与
盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。

观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。

这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。

1- 盖玻
片
2- 琼脂层
图3
【实验内容及步骤】
1、高氏I号培养基的制备（100ml ）
1）根据配方按照一定比例称取可溶性溶粉、及其他成分溶解。

2）待将所有药品溶解后，补充水分到所需的总体积，进行pH调节到7.2〜7.4
3）材料灭菌：将所配溶液装在三角烧瓶中并加棉塞，棉塞外包一层牛皮纸，并用麻绳捆好，
用记号笔标记组号。

取4个平皿，包好并标记。

同理盖玻片也用牛皮纸包好，10片一包，准
备
4包。

将上述物品放入密封的加压灭菌锅中进行高压蒸汽灭菌121 °C、20分钟。

2、插片法进行链霉菌的观察
1）倒平板：取融化并冷至大约50C的高氏I号培养基分装到4个培养皿中，倒平板时尽量使
培养基厚一些，凝固待用。

（可用记号笔在培养基底部画好方向）
2）接种：待培养基冷却凝固后，无菌操作，用接种环挑取菌种在平板上密集划线接种。

（沿着之前用记号笔标注的方向进行划线接种）
3）插片：以无菌操作用镊子将灭菌的盖玻片以大约与培养基成45°角插入平板内，并与划线
垂直（即与记号笔标注的方向垂直），每个平板至少插入3个盖玻片。

4）培养：将平板倒置，28C下培养7天。

5）镜检：用镊子小心拔出盖玻片，擦去背面培养物，将无菌面朝上放在载玻片上，直接镜检。

观察时，宜用略暗光线；先用低倍镜找到适当视野，再换高倍镜观察，必要时可用油镜观察。

【实验结果】
、链霉菌形态观察记录表
菌种基内菌丝气生菌丝抱子丝青色链霉菌菌丝较长，较疏松，多
分枝
毛状螺旋状，末端有
弗氏链霉菌困丝直或折曲，较密，多
分枝厚絮状
直链状，末端有圆形抱子
、镜检结果
/ 抱子丝
（颗粒图5:弗氏链霉菌局部放大图
图4:弗氏链霉菌（10*40）
/
气
生
菌
幷
暗
图7:青色链霉菌（10*40）图&青色链霉菌局部放大图图9:青色链霉菌抱子丝
【实验小结】
1、链霉菌的菌落特征：经过镜检，可观察到放线菌菌丝呈分枝丝状，且多交错在一起，由基
内菌丝、气生菌丝和抱子丝三部分组成，基内菌丝透明，有较多的分枝，而气生菌丝较暗。

两种菌丝在不同的焦平面上，可通过调节细准焦螺旋分别进行观察。

放线菌有与细菌不同的
菌落特征：干燥、不透明，表面呈紧密的丝绒状，菌落和培养基的连接紧密，难以挑取菌落。

2、为何采用插片观察法：放线菌菌落小，与培养基结合较紧密，不易用接种钩挑取，因而难
以直接观察。

而采用插片法，在接种放线菌的培养基一侧，以45°角插入无菌盖玻片，使放
线菌沿培养基与盖玻片交界处生长，并附着于盖玻片上，待菌丝生长一段时间后，可直接取
下盖玻片进行染色观察。

该方法可以进行放线菌营养菌丝、气生菌丝和抱子丝的比较观察。

3、为何采用高氏一号培养基：这是一种半合成培养基，采用可溶性淀粉为碳源、KNO3为氮源。

因为缺乏速效的碳源和氮源，该培养基的营养较为匮乏，有利于放线菌产生抱子。

同时，由于链霉菌生长较慢，因此用来培养链霉菌的培养基平板要比培养细菌的要厚一些。

4、实验操作时应注意哪些：
倒平板要稍厚一些，接种时划线要密，最好用记号笔标好划线方向，插片时与划线方向相
垂直，这样可防止插到划线的空隙上，较容易使菌丝长在盖玻片上。

镜检时，宜用略暗光线，先用低倍镜找到适当视野，再换高倍镜观察。

低倍镜观察时，菌面应该朝上，不然菌体会被压扁，不好观察。

换用油镜观察，要把菌面
朝下，否则滴加香柏油后，菌体会滑动影响观察且会污染镜头。

【思考与讨论】
1.镜检时如何区分放线菌基内菌丝、气生菌丝及抱子丝？
答：在光学显微镜下观察，气生菌丝在上层、较明亮，基内菌丝在下层、颜色较暗，气生菌
丝较基内菌丝粗。

有些气生菌丝发育到一定阶段在菌丝末端分化形成抱子丝【附录】培养基配方
咼氏号培养基（培养放线菌用）。

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实验五放线菌、霉菌的形态观察

实验五放线菌、霉菌的形态观察


放线菌
放线菌的观察
霉菌可产生复杂分枝的菌丝体，分为营养菌丝体和气生菌丝体， 气生菌丝生长到一定阶段后分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生 孢子。
特化的营养菌丝：吸取养料： 假根、吸器
霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）其孢子的形态特征是分类的
重要依据。例如：青霉的繁殖菌丝无顶囊，经多次分枝，产生几
轮对称或不对称的小梗，小梗上着生成串的青色分生孢子，孢子

四、实验报告

1、绘图并说明放线菌基内菌丝、气生菌丝和孢子丝 的形态和结构特征。 2、绘图并说明你所观察到的霉菌的形态特征。 (1) 曲霉、青霉、根霉和毛霉的菌落颜色及特征。

(2) 绘制曲霉、青霉、根霉和毛霉的个体形态图，并 注明各部位名称。
五、思考题
1、你主要根据哪些形态特征来区分所观察的几 种霉菌？ 2、在平皿培养微生物时，为何要将平板倒置？ 3、 镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气 生菌丝？
实验五 放线菌、霉菌的形态观察
一、目的要求

1、观察和掌握放线菌、霉菌的形态结构 及其特征。

2．了解几类常见霉菌的基本形态特征。
二、基本原理

放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌.以链霉 属为例：细胞呈丝状分枝，菌丝直径很细（＜1μm，与细菌相似）。 在营养生长阶段，菌丝内无隔，故一般呈多核的单细胞状态。当其 孢子落在固体基质表面并发芽后，就不断伸长、分枝并以放射状向 基质表面和内层扩展，形成大量色浅、较细的具有吸收营养和排泄 代谢废物功能的基内菌丝（substrate mycelium，又称基质菌丝、 营养菌丝或一级菌丝），同时在其上又不断向空间方向分化出颜色 较深、直径较粗的分枝菌丝，这就是气生菌丝（aerial mycelium， 或称二级菌丝）。不久，大部分气生菌丝成熟，分化成孢子丝 （spore-bearing mycelium）,并通过横割分裂方式，产生成串的 分生孢子（conidia，spore）。在显微镜下直接观察时，孢子丝依 种类的不同，有直、波曲、钩状、各种螺旋形或轮生。在油镜下观察， 放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状．能否产生菌丝体及由菌丝 体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。
实验三 酵母菌、霉菌、放线菌的形态观察

实验三 酵母菌、霉菌、放线菌的形态观察

实验三酵母菌、霉菌、放线菌的形态观察一目的要求1.观察酵母菌的个体形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。

2.掌握酵母菌的菌落特征及其与细菌菌落的区别。

3．学会识别霉菌的菌落特征，掌握霉菌的乳酸石炭酸制片法。

4．学习观察霉菌个体形态及各种无性孢子的方法。

5．学会观察放线菌的菌落特征，个体形态及其繁殖方式。

二实验原理1．酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，多数是圆形或椭圆形，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍。

用美蓝对酵母菌的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的、而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。

2.霉菌形态比细菌、放线菌复杂，个体比较大，具有分支的菌丝体和分化的繁殖器官。

霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。

因此，在观察时要注意菌丝直径大小，菌丝体有无隔膜，营养菌丝有无假根，无性繁殖形成的孢子是那一种？孢子是怎样着生的？3.放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。

常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝，基内菌丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝，并进一步分化产生孢子丝及孢子。

孢子的表面光滑或粗糙、圆或椭圆，孢子有各种颜色，这些形态特点都是鉴定放线菌的重要依据。

三实验材料1．菌种（1）啤酒酵母、面包酵母、裂殖酵母、热带假丝酵母;（2）毛霉、黑根霉、青霉、黑曲霉;（3）白色链霉菌、红色链霉菌2. 0.1%的美蓝染色液，乳酸石炭酸溶液、乳酸石炭酸棉蓝溶液, 芽孢染色液、无菌水、盖玻片、载玻片，接种钩，接种铲。

四内容与步骤1．酵母菌(1)菌落特征和菌苔特征的观察。

观察菌落表面干燥或湿润、隆起形状、边缘整齐度、大小、颜色等，并用接种环挑菌，注意与培养基结合是否紧密。

4.2放线菌形态观察技术

4.2放线菌形态观察技术

放线菌形态观察技术
回忆一下
细菌细胞有哪些特点？
6
DNA
1
鞭毛
2 3
5
细胞膜
保护
细胞质
运动
4细胞壁荚膜 Nhomakorabea概 念
是一类介于细菌和真菌之间的单细胞生物。因其菌落中的菌丝常从 一个中心向四周辐射状生长，因此称为放线菌。 细胞构造和细胞壁的化学组成与细菌相似，与细菌同属原核生物， 革兰氏染色呈阳性； 形态上具有分枝状菌丝，以孢子进行繁殖，菌落形态与霉菌相似。
4.2 诺卡氏菌属
属 名 主要特征 用 途
好氧，腐生；菌丝体发 产 生 利 达，基丝纤细，生长一段时 福霉素、间 间后形成横膈断裂，从而复 型霉素、瑞 诺 卡 氏 制形成新的菌丝体，少数形 斯托菌素等。 成孢子丝，多数无气生菌丝。 石油脱蜡、 菌属 菌落较小，表面多皱、干 烃类发酵； 燥、致密，一触即碎或如面 分解腈化物， 团，或平滑突出，成奶油状。 污水处理。
4.3 小单孢菌属
属 名 主要特征 用 途 好氧； 营养菌丝侵入培养基，分 支多、细，无膈、不断裂； 产生庆大 一般无气生菌丝； 霉素、利 孢子单生，着生在基丝伸 福霉素等， 出的短柄上。 分解纤维 素。 菌落较小，产色素； 表面覆盖一薄层孢子堆； 菌落与培养基结合在一起。
小单孢 菌属
PART 05
课后作业
1. 根据今天学到的知识,你能解释细菌几乎无处不在的原因吗? 2.放线菌的结构特点是什么？
1.3 孢子丝及孢子
孢子丝：
指当气生菌丝生长发育到一定阶段， 其上分化出的可形成孢子的繁殖菌丝。
特点：
形态多样，有直形、波曲、钩状、 螺旋状、一级轮生和二级轮生等多种， 是放线菌定种的重要标志之一。
1.3 孢子丝及孢子
04 实验四 放线菌、酵母和霉菌形态的观察

04 实验四 放线菌、酵母和霉菌形态的观察

04 实验四放线菌、酵母和霉菌形态的观察实验目的：1. 了解微生物的形态特征。

2. 熟悉显微镜的使用方法，学习普通染色技术。

3. 学习鉴别放线菌、酵母和霉菌的形态特征。

实验材料：1. 盐酸裂解液、甲醛定型液、碘酒、甲基橙、溴酚蓝等。

2. 放线菌、酵母和霉菌的培养物。

实验步骤：1. 取一小块培养物放在玻片上，滴上一滴生理盐水并用小棒子将其研磨均匀。

2. 放线菌培养物制片：将研磨好的放线菌制成薄片，滴上盐酸裂解液使其变成透明，定型液使其固定，并在空气中晾干。

然后，在火上加热定邦，再用碘酒染色，过后清水洗净，醋酸洗净并晾干或用吹风机吹干。

3. 酵母培养物制片：将研磨好的酵母制成薄片，滴上碘酒染色剂染色，过后清水洗净，醋酸洗净，晾干或用吹风机吹干。

4. 霉菌培养物制片：将研磨好的霉菌制成薄片，滴上甲基橙染色剂染色，过后清水洗净，醋酸洗净，晾干或用吹风机吹干。

5. 用显微镜观察制片。

实验结果：放线菌：放线菌为革兰阳性菌，细胞形状呈弯曲的短小棍形，光学显微镜下看到的细胞较长，一般在1-20微米之间，可以分枝，分枝形成的菌丝从外形上呈现出类似于蜘蛛网的形状。

勃林美细胞内有许多成熟的孢子，呈现为典型的链状。

常常在不规则的小菌落或黏液内生长。

酵母菌：酵母细胞直径一般在2-5微米之间，为单细胞生物，在将染好色的玻片放在光学显微镜下很容易看到直径3微米以上的球形，卵圆形等细胞结构，表面光滑。

细胞质软，柔软而透明。

霉菌：霉菌属真菌，具有多种形态，种类繁多，细胞直径1-5微米，长1-10微米，细胞呈现不规则形状，通常形成的是在菌丝基础上聚合并且扩展而成的菌落。

通过本次实验观察和比较放线菌、酵母和霉菌的形态特征，可以得出以下结论：1. 放线菌为分枝杆菌，细胞型态呈弯曲状，外观类似于蜘蛛网。

2. 酵母为单细胞生物，呈圆球形或卵圆形，表面光滑、整齐。

3. 霉菌属于真菌，细胞形态呈现不规则形状。