试验四放线菌和真菌形态的观察

实验4放线菌、酵母菌、霉菌形态观察.实验四放线菌、酵母菌、霉菌形态观察（一）放线菌的形态观察1 目的观察放线菌的基本形态特征掌握培养放线菌的几种方法2 原理放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可分为基内菌丝(营养菌丝)、气生菌丝或有孢子丝三种。

放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。

孢子丝形态多样，有直、波曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。

孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。

它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。

放线菌的菌落早期绒状同细菌菌落月牙状相似，后期形成孢子菌落呈粉状、干燥，有各种颜色呈同心圆放射状。

3 材料3.1 菌种灰色链霉菌(Str. griseus),天蓝色链霉菌(Str. coelicolor),细黄链霉菌（Str.microflavus）。

3.2 培养基高氏1号培养基。

3.3 器皿培养皿，载玻片、盖玻片、无菌滴管、镊子、接种环、小刀(或刀片)、水浴锅，显微镜，超净工作台，恒温培养箱。

4 流程4.1插片法: 倒平板→插片→接种→培养→镜检→记录绘图4.2压印法: 倒平板→划线接种→挑取菌落→加盖玻片→镜检→记录绘图4.3埋片法: 倒琼脂→切槽→接种→培养→镜检→记录绘图5 步骤5.1插片法5.1.1倒平板将高氏1号培养基熔化后，倒10~12毫升左右于灭菌培养皿内，凝固后使用.5.1.2插片将灭菌的盖玻片以45度角插入培养皿内的培养基中，插入深约为1/2或1/3(图5-1)。

5.1.3接种与培养用接种环将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线，放置28℃培养3～7天。

5.1.4观察培养后菌丝体生长在培养基及盖玻片上，小心用镊子将盖玻片抽出，轻轻擦去生长较差的一面的菌丝体，将生长良好的菌丝体面向的载玻片，压放于载玻片上。

直接在显微镜下观察。

5.2压印法5.2.1制备放线菌平板同5.1.1。

在凝固的高氏1号培养基平板上用划线分离法得到单一的放线菌菌落。

实验报告课程名称：环境微生物学实验实验类型：综合实验实验项目名称：微生物的分离与培养与菌落观察学生姓名：专业：环境工程学号：同组学生姓名：指导老师：实验地点：实验日期：2018 年 10月16日一、实验目的和要求1.掌握微生物接种培养技术2.掌握微生物分离纯化技术3.学习并掌握放菌落形态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。

二、实验内容和原理土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现具有重要价值微生物的主要菌源。

在不同土壤中，各类微生物的数量千差万别。

为了分离获得某种微生物,需要预先制备不同稀释度的菌悬液，并添加相应的抗生素抑制不需要的微生物，例如，添加链霉素25~50U/mL抑制细菌;添加0.5%重铬酸钾液或制霉素50 U/mL 抑制霉菌。

通过10倍稀释以及平板分离、平板涂布和平板划线等操作，微生物可在平板上分散成单个的个体，经过适宜条件培养，单个个体可形成单个菌落。

挑取单个菌落转接至新鲜平板上，即可使目的菌种纯化。

1.菌种的分离纯化：从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。

在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“单一性”，防止其他微生物的混入。

2.平板涂布法：因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。

用途上，一般多用于从菌种的纯化;优点是可以观察菌落特征，对混合菌进行分离;但不能计数3.平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。

划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。

用途一般多用于筛选菌株。

实验四放线菌的形态观察和酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别一、实验目的：1.了解放线菌和酵母菌的形态特征。

2.学习区分细胞的死活状态。

二、实验原理：1.放线菌的形态特征：放线菌属于细菌的一种，具有很大的细胞大小差异，通常为革兰氏阳性菌。

放线菌的形态特征包括菌落形态、细胞形态、颜色、菌丝特征等。

放线菌的菌落形态多呈现出有规则的褶皱或丝状结构。

2.酵母菌的形态特征：酵母菌属于真菌的一种，单细胞有丝分裂生殖的真菌。

酵母菌的形态特征包括细胞形态、菌落形态、颜色等。

酵母菌的细胞呈球形或卵圆形，常以单细胞或成链形式存在。

3.死活细胞鉴别：通过酵母菌培养基中的亚甲基蓝染色来判断细胞的存活状态，活细胞吸收染料颜色比较浅，死细胞吸收染料颜色比较深。

三、实验材料与方法：1.材料：-放线菌菌种：已提前分离培养好的放线菌-放线菌培养基：含有葡萄糖、酵母提取物、氨基酸、无机盐等-培养皿、显微镜、镰刀、牛津杯、显微镜载玻片-无菌移液器、无菌吸管、火焰灭菌器-酵母菌培养基：含有葡萄糖、酵母提取物、氨基酸、无机盐等-亚甲基蓝染液：浓度为1%2.方法：a.取一小块放线菌菌落，用镰刀切下悬浮于牛津杯中的放线菌菌落。

b.用无菌吸管将放线菌菌液吸入无菌移液器中，将移液器染上菌液的一侧略吹气，使菌液沾附在显微镜载玻片上。

c.让菌液干燥后，用显微镜在高倍镜下观察放线菌的细胞形态和菌落特征。

d.取一小块酵母菌菌落，用镰刀切下悬浮于牛津杯中的酵母菌菌落。

e.用无菌吸管将酵母菌菌液吸入无菌移液器中，将移液器染上菌液的一侧略吹气，使菌液沾附在显微镜载玻片上。

f.将带有酵母菌菌液的显微镜载玻片倾斜，滴入一滴亚甲基蓝染液，静置5分钟。

g.用显微镜在高倍镜下观察染色后的酵母菌细胞，根据染色程度判断细胞的存活状态。

四、实验结果与分析：通过观察放线菌的细胞形态和菌落特征，可以发现放线菌的形态特征是不规则的菌落结构，内部有菌丝状结构。

放线菌的细胞形态多样，有圆形或椭圆形细胞。

04 实验四放线菌、酵母和霉菌形态的观察实验目的：1. 了解微生物的形态特征。

2. 熟悉显微镜的使用方法，学习普通染色技术。

3. 学习鉴别放线菌、酵母和霉菌的形态特征。

实验材料：1. 盐酸裂解液、甲醛定型液、碘酒、甲基橙、溴酚蓝等。

2. 放线菌、酵母和霉菌的培养物。

实验步骤：1. 取一小块培养物放在玻片上，滴上一滴生理盐水并用小棒子将其研磨均匀。

2. 放线菌培养物制片：将研磨好的放线菌制成薄片，滴上盐酸裂解液使其变成透明，定型液使其固定，并在空气中晾干。

然后，在火上加热定邦，再用碘酒染色，过后清水洗净，醋酸洗净并晾干或用吹风机吹干。

3. 酵母培养物制片：将研磨好的酵母制成薄片，滴上碘酒染色剂染色，过后清水洗净，醋酸洗净，晾干或用吹风机吹干。

4. 霉菌培养物制片：将研磨好的霉菌制成薄片，滴上甲基橙染色剂染色，过后清水洗净，醋酸洗净，晾干或用吹风机吹干。

5. 用显微镜观察制片。

实验结果：放线菌：放线菌为革兰阳性菌，细胞形状呈弯曲的短小棍形，光学显微镜下看到的细胞较长，一般在1-20微米之间，可以分枝，分枝形成的菌丝从外形上呈现出类似于蜘蛛网的形状。

勃林美细胞内有许多成熟的孢子，呈现为典型的链状。

常常在不规则的小菌落或黏液内生长。

酵母菌：酵母细胞直径一般在2-5微米之间，为单细胞生物，在将染好色的玻片放在光学显微镜下很容易看到直径3微米以上的球形，卵圆形等细胞结构，表面光滑。

细胞质软，柔软而透明。

霉菌：霉菌属真菌，具有多种形态，种类繁多，细胞直径1-5微米，长1-10微米，细胞呈现不规则形状，通常形成的是在菌丝基础上聚合并且扩展而成的菌落。

通过本次实验观察和比较放线菌、酵母和霉菌的形态特征，可以得出以下结论：1. 放线菌为分枝杆菌，细胞型态呈弯曲状，外观类似于蜘蛛网。

2. 酵母为单细胞生物，呈圆球形或卵圆形，表面光滑、整齐。

3. 霉菌属于真菌，细胞形态呈现不规则形状。

实验四酵母菌霉菌放线菌个体形态观察实验目的：通过对酵母菌、霉菌和放线菌的个体形态观察，了解它们的外部特征及区分方法。

实验器材：1.酵母菌：酵母菌培养基、显微镜、玻璃片、盖玻片；2.霉菌：霉菌培养基、显微镜、玻璃片、盖玻片；3.放线菌：放线菌培养基、显微镜、玻璃片、盖玻片。

实验步骤：1.酵母菌的观察：(1)取一片酵母菌培养基，用微量移液器吸取适量酵母菌悬浊液滴于盖玻片上；(2)将盖玻片放在显微镜上，用40倍镜下观察酵母菌的形态特征。

2.霉菌的观察：(1)取一片霉菌培养基，用微量移液器吸取适量霉菌悬浊液滴于盖玻片上；(2)将盖玻片放在显微镜上，用40倍镜下观察霉菌的形态特征。

3.放线菌的观察：(1)取一片放线菌培养基，用微量移液器吸取适量放线菌悬浊液滴于盖玻片上；(2)将盖玻片放在显微镜上，用40倍镜下观察放线菌的形态特征。

实验结果：1.酵母菌的形态特征：酵母菌是单细胞真菌，呈卵圆形或肾脏形状，大小约为5-10微米。

在显微镜下观察，可以看到酵母菌呈透明或微黄色，细胞表面光滑，没有菌丝或分枝。

在适宜的培养条件下，酵母菌可以通过分裂繁殖。

2.霉菌的形态特征：霉菌是多细胞真菌，细胞呈丝状或孢子状，构成了菌丝体。

在显微镜下观察，可以看到菌丝呈无规则分枝状，菌丝上有许多孢子。

菌丝和孢子的颜色和形状有所差异，根据这些特征可以区分不同种类的霉菌。

3.放线菌的形态特征：放线菌是革兰氏阳性菌，形态特征类似细菌。

在显微镜下观察，可以看到放线菌呈革兰氏阳性杆菌，有时菌体呈分枝状。

放线菌是严格需氧菌，所以通常在培养基的表面形成菌落。

放线菌的菌落通常呈灰黄色、红色或蓝绿色等，形状不规则。

放线菌还可以产生一种特殊的菌丝结构，孢子链，它们是放线菌繁殖和传播的主要方式。

实验结论：通过对酵母菌、霉菌和放线菌的个体形态观察，我们可以区分它们的外观特征。

酵母菌是单细胞真菌，没有菌丝或分枝，呈卵圆形或肾脏形状；霉菌是多细胞真菌，构成了分枝的菌丝体，菌丝上有多个孢子；放线菌是革兰氏阳性菌，菌体类似细菌，可产生分枝状的菌体和特殊的孢子链。

实验报告课程名称：环境微生物学实验实验类型：综合实验实验项目名称：微生物的分离与培养与菌落观察学生姓名：专业：环境工程学号：同组学生姓名：指导老师：实验地点：实验日期：2018 年 10月16日一、实验目的和要求1.掌握微生物接种培养技术2.掌握微生物分离纯化技术3.学习并掌握放菌落形态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。

二、实验内容和原理土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现具有重要价值微生物的主要菌源。

在不同土壤中，各类微生物的数量千差万别。

为了分离获得某种微生物,需要预先制备不同稀释度的菌悬液，并添加相应的抗生素抑制不需要的微生物，例如，添加链霉素25~50U/mL抑制细菌;添加0.5%重铬酸钾液或制霉素50 U/mL 抑制霉菌。

通过10倍稀释以及平板分离、平板涂布和平板划线等操作，微生物可在平板上分散成单个的个体，经过适宜条件培养，单个个体可形成单个菌落。

挑取单个菌落转接至新鲜平板上，即可使目的菌种纯化。

1.菌种的分离纯化：从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。

在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“单一性”，防止其他微生物的混入。

2.平板涂布法：因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。

用途上，一般多用于从菌种的纯化;优点是可以观察菌落特征，对混合菌进行分离;但不能计数3.平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。

划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。

用途一般多用于筛选菌株。

实验4 放线菌和霉菌的形态观察实验时间：20 18年4月18日星期三第789节实验地点：13- 1331. 实验目的学习并掌握观察放线菌形态的基本方法，并观察放线菌的形态特征学习并掌握观察四类常见霉菌形态的基本方法，并观察其形态特征2. 实验原理放线菌原理放线菌是由不同长短、纤细的菌丝所形成的单细胞的菌丝体。

菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝(或称基内菌丝，简称基丝)和生长在培养基以上的气生菌丝。

有些气生菌丝分化成孢子丝，呈螺旋形、波浪形或分枝状等，孢子常呈圆形、椭圆形或杆状。

能否产生气生菌丝及孢子的形状和颜色常作为放线菌分类鉴定的重要依据。

放线菌的菌落形态特征为: 形成干燥、不透明、表面呈致密丝绒状，上有一层彩色“干粉”的菌落。

菌落与培养基连接紧密，难以挑取，菌落正反面颜色不一致，在菌落边缘的琼脂平板上有变形的现象，有泥腥味。

霉菌原理霉菌是一类可产生菌丝体的真核微生物的统称。

霉菌的菌落形态较大，质地疏松，外观干燥，不透明，菌落与培养基间连接紧密，不易挑取，菌落正反面，边缘与中心的颜色、构造通常不一致，有霉味。

霉菌的菌丝体分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。

霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。

菌丝的孢子较大，在低倍镜下即可清晰观察到有隔或无隔菌丝和孢子及巨大的孢子囊。

霉菌菌丝和孢子的宽度通常比放线菌粗的多，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍。

霉菌菌丝较粗大，细胞容易收缩变形，而且孢子很容易飞散、所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。

此染色液制成的霉菌标本片特点是: (a) 细胞不变形: (b)具有杀菌防腐作用，且不易干燥，能保持较长时间; (c) 溶液本身呈蓝色，有一定染色效果。

霉菌的菌丝、分生孢子梗和分生孢子的形态常作为分类的重要依据。

3. 材料仪器1、菌种: 放线菌划线平板28C,3-5 天后培养物;产黄青霉，黑曲霉，黑根霉，等斜面或平板划线菌种28C培养2~3 天。

注意：由于实验内容较多，所以我们只要把蓝色字体部分写在实验报告上即可，黑体字部分自己看一下。

由于11-13周为教学质量检查周，督导随时可能来查，所以预习报告还是要写。

细菌、酵母菌、放线菌和真菌接种方法和形态观察一、微生物的接种技术1 目的学习掌握微生物的几种接种技术建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节2 基本原理将微生物培养物或含有微生物的样品在无菌条件下移植到培养基上的操作技术称为接种。

接种的关键是严格进行无菌操作。

常用的接种方法有斜面接种、液体接种、穿刺接种、平板接种和固体接种等。

3 实验材料菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母、玫瑰暗黄链球菌、曲霉、荨麻青霉的斜面培养物培养基：营养琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基及高氏1号培养基的斜面和平板试剂：5ml无菌生理盐水试管仪器与其他用品酒精灯、记号笔、试管、橡胶塞、试管架、接种环、培养皿、超净台等。

4 操作步骤斜面接种法斜面接种法主要用于传代活化、纯化培养、鉴定或保存菌种。

通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，液体培养基中的纯培养物接种到斜面培养基上。

操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行。

准备工作将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在外侧，接种管在内侧，斜面向上管口对齐，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。

接种环灭菌右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。

镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍。

拔管塞和烧烤试管口用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。

接种环冷却和取菌将灼烧灭菌的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，待冷却后再从斜面上刮取少许菌苔取出。

接种接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管。