放线菌的观察

实验一：丝状微生物的鉴定实验目的：1、观察常见放线菌的基本形态特征。

2、观察镰刀菌与木霉的基本形态。

3、掌握埋片培养法培养放线菌。

4、掌握载片培养法培养丝状真菌。

5、学会用显微镜观察未染色样品。

实验原理：放线菌的菌落早期绒状同细菌菌落月牙状相似，后期形成孢子菌落呈粉状、干燥，有各种颜色呈同心圆放射状。

放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可分为基内菌丝(营养菌丝)、气生菌丝或有孢子丝三种。

放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。

孢子丝形态多样，有直、波曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。

孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。

它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。

真菌的菌丝较放线菌粗，菌落疏松，主要用肉眼观察，必要时借助放大镜或显微镜。

利用显微镜主要观察孢子的着生状态，孢子形状及菌丝有无横隔等。

3材料3.1菌种链霉菌（Streptomyces sp.）；诺卡氏菌（Nocardia sp.）；尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)；绿色木霉（Trichoderma viride）3.2培养基高氏1号培养基，PDA培养基。

3.3器皿培养皿，载玻片、盖玻片、无菌滴管、镊子、接种环、小刀(或刀片)、水浴锅，显微镜，超净工作台，恒温培养箱。

4流程4.1埋片培养法: 倒琼脂→切槽→接种→埋片→培养→镜检→记录绘图。

4.2载片培养法：滴琼脂→凝固→边缘接种→盖盖玻片→培养→镜检→记录绘图。

5步骤埋片培养法：1 向每个培养皿倒约20毫升高氏一号琼脂培养基，待凝固。

2 用无菌手术刀在琼脂平板上平行开两条槽，取出其中的琼脂培养基。

3 在槽的外侧边缘接种待鉴定的放线菌菌株。

4 将无菌载玻片呈与槽垂直的方向盖在平板上面，用镊子轻轻压下，使载玻片与琼脂平板接触。

5 放于28℃培养3天。

6 将载玻片从平板上取下，直接在显微镜下观察。

载片培养法：1 将无菌载玻片放于洁净工作台。

实验四放线菌的形态观察一、目的要求1. 学习并掌握观察放线菌形态的基本方法。

2. 了解放线菌的形态特征和繁殖方式。

二、基本原理放线菌是由纤细的有分枝的菌丝构成，菌丝体为单细胞原核微生物。

大多数放线菌的菌丝分化为营养菌丝和气生菌丝两部分。

营养菌丝深入培养基中生长，气生菌丝则生长在培养基的表面，并向空中伸展。

因此用普通方法制片，往往很难观察到放线菌的整体形态。

必须采用适当的培养方法，以便将自然生长的放线菌直接置于显微镜下观察。

通常采用的方法有玻璃纸培养法、插片法和印片法。

三、材料及器材1. 菌种：细黄链霉菌(5406放线菌)2. 溶液和试剂：吕氏美蓝染液3. 仪器及其他用具：盖玻片，载玻片，擦镜纸，接种环，显微镜，剪刀，镊子，吸管，玻璃涂布棒，玻璃纸等。

四、方法与步骤（一）插片法1. 取一淀粉琼脂培养基平板，用接种环将菌种在琼脂平板上划线接种，然后用无菌镊子将灭菌的盖玻片以大约45°角插人琼脂内(插在接种线上，插片数量可根据需要而定。

2. 倒置培养，28℃，3～5天。

3. 用镊子小心取出盖玻片，擦去背面培养物，然后将有菌的一面朝上放在载玻片上，直接镜检。

（二）玻璃纸法1. 以无菌操作用镊子将已灭菌的小块玻璃纸片铺在琼脂淀粉培养基表面，用无菌涂布棒将玻璃纸压平，使其紧贴在琼脂表面，不留气泡，每个平板可铺5～10块玻璃纸。

2. 用接种环挑取菌种斜面培养物在玻璃纸上划线接种。

3. 平板倒置，28℃，培养3～5天。

4. 镜检在载玻片上加一小滴水，用镊子小心取下玻璃纸片，菌面朝上放在玻片的水滴上，使玻璃纸平贴在玻片上，中间不要有气泡，直接镜检。

（三）印片法用一洁净盖玻片，平放在培养皿中放线菌的培养物上，轻轻按压一下，取出盖玻片，将印有放线菌的一面朝下，放置在加有一滴美蓝染液的载玻片上，观察孢子丝和孢子。

五、实验作业及实验报告（一）结果绘图说明你所观察到的放线菌的主要形态特征。

（二）思考题1. 试比较3种培养和观察放线菌方法的优缺点。

放线菌的形态观察实验报告放线菌的形态观察实验报告放线菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，具有丰富的多样性和重要的生物学功能。

本次实验旨在通过对放线菌的形态进行观察，了解其基本特征和生长习性。

以下是实验过程和观察结果的详细描述。

实验材料和方法：1. 实验材料：放线菌培养基、无菌培养皿、无菌匙、显微镜、石英片。

2. 实验方法：a. 取一块无菌培养皿，将放线菌培养基倒入培养皿中，待其凝固。

b. 使用无菌匙，将待观察的放线菌菌落划入培养基表面，尽量避免交叉污染。

c. 将培养皿盖好，放置在恒温箱中，温度设定为28摄氏度。

d. 每隔一段时间，取出培养皿进行观察，使用显微镜观察放线菌的形态特征，并用石英片进行取样。

实验观察结果：1. 放线菌的形态特征：a. 放线菌呈现为长而细的菌丝状，类似于细长的线状结构。

b. 放线菌的菌丝通常呈现分枝状，形成复杂的网络结构。

c. 放线菌的菌丝颜色多样，包括白色、黄色、红色等，具有一定的色彩变异性。

d. 放线菌的菌丝表面常常有颗粒状物质附着，形成颗粒状结构。

2. 放线菌的生长习性：a. 放线菌生长缓慢，通常需要较长时间才能形成可见的菌落。

b. 放线菌的菌落呈现不规则形状，边缘模糊不清，有时会形成分支状的菌落。

c. 放线菌的菌落表面通常光滑而湿润，有时会有微小的颗粒状结构。

d. 放线菌在培养基上生长的过程中，会逐渐扩散并形成新的菌落。

3. 放线菌的细胞结构：a. 放线菌的菌丝由一系列细胞组成，细胞间通过连接点相互连接。

b. 放线菌的细胞内含有细胞质和细胞核，细胞核通常位于细胞中央。

c. 放线菌的细胞质内含有丰富的有机物质和细胞器，包括线粒体、内质网等。

实验讨论和结论：通过对放线菌的形态进行观察，我们可以发现放线菌具有独特的细胞结构和生长习性。

放线菌的菌丝状结构和分枝状特征使其能够在土壤中广泛分布，并与其他微生物相互作用。

放线菌的色彩变异性可能与其生长环境和代谢产物有关，这也为进一步研究放线菌的生态功能提供了线索。

放线菌的培养和形态观察摘要本实验目的是学习并掌握放线菌的培养方法，初步了解放线菌的形态特征。

以青色链霉菌（Streptomyces glaucus）和弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae)为实验材料，利用高氏I号培养基进行培养，采用插片法制片，用高倍镜观察其菌丝及孢子丝形态。

【1】青色链霉菌（S.glaucus）的菌落呈青灰色，菌丝颜色较浅，孢子丝螺旋形；弗氏链霉菌(S.fradiae)菌落呈暗黄色，菌丝颜色较浅，孢子丝较菌丝粗且直。

关键词放线菌观察插片法菌丝孢子丝引言放线菌是能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌，其菌丝（包括基内菌丝和气生菌丝）及孢子丝有着各种不同的形态，以孢子进行繁殖。

实验主要是观察其菌丝与孢子丝，为了保证菌丝与孢子丝的完整，实验采用插片法培养放线菌。

菌丝与孢子丝之间的区别比较明显，很容易区分，观察时需要注意的是它们的形态与位置关系。

1 材料和方法1.1材料1.1.1菌种青色链霉菌（S. glaucus），弗氏链霉菌（S. fradiae）。

1.1.2培养基髙氏I号培养基:可溶性淀粉2g KNO3 0.1g K2HPO4 0.05g MgSO4• 7H2O0.05g NaCl 0.05g FeSO4• 7H2O0.001g（母液）琼脂 2g 蒸馏水 100mL pH 7.2～7.41.1.3仪器和其他用品平板培养皿，盖玻片，镊子，酒精灯，显微镜，擦镜纸，接种环等。

1.2方法【1】1.2.1 配制培养基按配方配制100ml高氏I号培养基，并与培养皿一起高温灭菌30min。

1.2.2制作培养基平板1.2.3接种无菌操作分别在青色链霉菌和弗氏链霉菌高氏Ⅰ号培养基上挑取菌种在制备的高氏Ⅰ号培养基平板上密集划线接种。

1.2.4插片无菌操作用镊子取灭菌盖玻片以约45°角插入平板琼脂接种线上。

1.2.5 培养将平板倒置，于28℃培养7d。

1.2.6 菌落形态观察。

实验六放线菌的形态观察；霉菌子实体、分生孢子及菌落形态观察Ⅰ放线菌的形态观察一、目的要求1、学习并掌握观察放线菌的操作方法。

2、巩固掌握放线菌的形态特征。

二、实验原理放线菌是单细胞原核微生物。

菌丝无隔、分枝、纤细，分为生长于培养基内或匍匐于培养基表面的、从培养基吸取营养物质的基内菌丝，以及伸出培养基表面的气生菌丝。

气生菌丝的上部分化出孢子丝，呈螺旋状、波纹状，或分枝状等，孢子丝的着生方式因种而。

放线菌多可产生色素，菌丝呈各种颜色，有的放线菌能产生水溶性色素分泌至培养基中使培养基变色。

孢子丝长出各种形态的孢子，孢子有不同的颜色。

放线菌的菌落在培养基上着生牢固，与基质结合紧密，难以用接种针挑起。

而且由于有大量孢子存在，因而表面呈干粉状，使得易于与其他类型的微生物相区别。

放线菌的形态特征是其菌种鉴定与分类的重要依据。

三、实验器材1、菌种未鉴定放线菌菌株；2、仪器显微镜；3、材料玻璃纸、载玻片、盖玻片，镊子、盖玻片、接种环、香柏油、二甲苯。

4、染料石炭酸复红染色液。

四、操作步骤1、观察自然生长状态的放线菌用镊子小心取出用插片法培养的放线菌培养皿中的一张盖玻片，将其背面附着的菌丝体擦净。

然后将长有菌的一面向上放在洁净的载玻片上，用低倍镜、高倍镜观察。

找出3类菌丝及其分生孢子，并绘图。

注意放线菌的基内菌丝、气生菌丝的粗细和色泽差异。

2、水封片观察取石炭酸复红染色液一滴滴于载玻片中央，从培养皿中取出插片法培养放线菌的盖玻片，将无菌或菌较少的一面以擦镜纸擦净，并将有菌面朝下，放在载玻片上，浸在染色液中，制成水封片，用高倍镜观察其单个分生孢子及其基内菌丝，并绘图。

五、注意事项1、培养放线菌中要注意，放线菌的生长速度较慢，培养期较长，在操作中应特别注意无菌操作，严防杂菌污染。

并控制培养时间。

2、在镜检观察时，要仔细观察放线菌的营养菌丝、气生菌丝和孢子丝等。

六、实验报告1、绘图绘出观察的放线菌基内菌丝、气生菌丝和孢子丝的形态。