简述放线菌、霉菌的菌落形态特征。

注意：由于实验内容较多，所以我们只要把蓝色字体部分写在实验报告上即可，黑体字部分自己看一下。

由于11-13周为教学质量检查周，督导随时可能来查，所以预习报告还是要写。

细菌、酵母菌、放线菌和真菌接种方法和形态观察一、微生物的接种技术1 目的1.1学习掌握微生物的几种接种技术1.2 建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节2 基本原理将微生物培养物或含有微生物的样品在无菌条件下移植到培养基上的操作技术称为接种。

接种的关键是严格进行无菌操作。

常用的接种方法有斜面接种、液体接种、穿刺接种、平板接种和固体接种等。

3 实验材料3.1 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母、玫瑰暗黄链球菌、曲霉、荨麻青霉的斜面培养物3.2 培养基：营养琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基及高氏1号培养基的斜面和平板3.3 试剂：5ml无菌生理盐水试管3.4 仪器与其他用品酒精灯、记号笔、试管、橡胶塞、试管架、接种环、培养皿、超净台等。

4 操作步骤4.1 斜面接种法斜面接种法主要用于传代活化、纯化培养、鉴定或保存菌种。

通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，液体培养基中的纯培养物接种到斜面培养基上。

操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行。

4.1.1准备工作将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在外侧，接种管在内侧，斜面向上管口对齐，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。

4.1.2接种环灭菌右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。

镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍。

4.1.3拔管塞和烧烤试管口用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。

4.1.4接种环冷却和取菌将灼烧灭菌的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，待冷却后再从斜面上刮取少许菌苔取出。

实验4放线菌、酵母菌、霉菌形态观察.实验四放线菌、酵母菌、霉菌形态观察（一）放线菌的形态观察1 目的观察放线菌的基本形态特征掌握培养放线菌的几种方法2 原理放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可分为基内菌丝(营养菌丝)、气生菌丝或有孢子丝三种。

放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。

孢子丝形态多样，有直、波曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。

孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。

它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。

放线菌的菌落早期绒状同细菌菌落月牙状相似，后期形成孢子菌落呈粉状、干燥，有各种颜色呈同心圆放射状。

3 材料3.1 菌种灰色链霉菌(Str. griseus),天蓝色链霉菌(Str. coelicolor),细黄链霉菌（Str.microflavus）。

3.2 培养基高氏1号培养基。

3.3 器皿培养皿，载玻片、盖玻片、无菌滴管、镊子、接种环、小刀(或刀片)、水浴锅，显微镜，超净工作台，恒温培养箱。

4 流程4.1插片法: 倒平板→插片→接种→培养→镜检→记录绘图4.2压印法: 倒平板→划线接种→挑取菌落→加盖玻片→镜检→记录绘图4.3埋片法: 倒琼脂→切槽→接种→培养→镜检→记录绘图5 步骤5.1插片法5.1.1倒平板将高氏1号培养基熔化后，倒10~12毫升左右于灭菌培养皿内，凝固后使用.5.1.2插片将灭菌的盖玻片以45度角插入培养皿内的培养基中，插入深约为1/2或1/3(图5-1)。

5.1.3接种与培养用接种环将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线，放置28℃培养3～7天。

5.1.4观察培养后菌丝体生长在培养基及盖玻片上，小心用镊子将盖玻片抽出，轻轻擦去生长较差的一面的菌丝体，将生长良好的菌丝体面向的载玻片，压放于载玻片上。

直接在显微镜下观察。

5.2压印法5.2.1制备放线菌平板同5.1.1。

在凝固的高氏1号培养基平板上用划线分离法得到单一的放线菌菌落。

南京大学生物技术系实验报告题目放线菌、酵母菌和霉菌的形态观察【一、实验目的】1、通过菌落及细胞形态的观察和比较，掌握区分细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的要点。

2、掌握观察放线菌孢子的方法。

3、掌握观察霉菌孢子及根霉假根的方法。

4、了解酵母菌子囊孢子形成的方法。

【二、实验原理】1、三类微生物菌落形态特征：霉菌形态比细菌、酵母菌复杂，个体比较大，具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。

霉菌营养体的基本形态单位是菌丝，包括有隔菌丝和无隔菌丝。

营养菌丝分布在营养基质的内部，气生菌丝伸展到空气中。

营养菌丝体除基本结构以外，有的霉菌还有一些特化形态，例如假根、匍匐菌丝、吸器等。

霉菌的繁殖体不仅包括无性繁殖体，例如分生孢子，孢子囊等，包裹其内或附着其上的有各类无性孢子；还包括有性繁殖结构，例如子囊果，其内形成有性孢子。

在观察时要注意细胞的大小，菌丝构造和繁殖方式。

放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可分为基内菌丝(营养菌丝)、气生菌丝或有孢子丝三种。

放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。

孢子丝形态多样，有直、波曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。

孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。

它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。

酵母菌是单细胞的真核微生物，细胞核和细胞质有明且分化，个体比细菌大得多。

酵母菌的形态通常有球状、卵园状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。

酵母菌的无性繁殖有芽殖、裂殖和产生掷孢子；酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢子。

酵母菌母细胞在一系列的芽殖后，如果长大的子细胞与母细胞并不分离，就会形成藕节状的假菌丝。

2、三点接种法与霉菌菌落形态的观察霉菌的菌落形态是分类鉴定的重要依据。

为便于观察，通常用接种针挑取极少量霉菌孢子点接于平板中央，使其形成单个菌落；或在平板上接三点，即在等边三角形的三个顶点上接种，经培养后同一菌种可形成三个重复的单菌落。

后一方法称为三点接种法。

菌落特征比较菌落特征比较：细菌：湿润，粘稠，易挑起放线菌：干燥，多皱，难挑起，菌落较小，多有色素酵母菌：湿润，粘稠，易挑起，表面光华，比细菌的菌落大而厚霉菌：菌丝细长，菌落疏松，成绒毛状、蜘蛛网状、棉絮状，无固定大小，多有光泽，不易挑起细菌：一般形成较小的圆形菌落，颜色有白色、黄色等，表面光滑或不光滑放线菌：菌落背面有同心圆形纹路。

这点可以和细菌菌落区分。

酵母菌：菌落为淡黄色，光滑，半透明，比细菌菌落大。

霉菌：菌落大型，肉眼可见许多毛状物，棕色、青色等，可见黑色的分生孢子群。

对于科学实践中鉴别微生物种类有重要意义。

微生物菌落形态图片金黄色葡萄球菌在BP琼脂上典型特征金黄色葡萄球菌呈圆形 , 表面光滑、凸起、湿润 , 直径 2 ～ 3mm 。

灰黑色至黑色 , 有光泽 , 常有浅色 ( 非白色 ) 的边缘 , 周围绕以不透明圈 ( 沉淀 ), 其外常有一清晰带 ( 卵磷脂环 ) 。

当用接种针触及菌落时具有黄油样粘稠感。

有时可见到不分解脂肪的菌株 , 除没有不透明圈和清晰带外 , 其他外观基本相同。

从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落 , 其黑色常较典型菌落浅些 , 且外观可能较粗糙 , 质地较干燥。

金黄色葡萄球菌在海博金黄色葡萄球菌显色培养基上典型特征典型的金黄色葡萄球菌为灰黑色菌落，其外围有一不透明圈。

本培养基用于直接鉴定金黄色葡萄球菌，如果在 18-24 小时没有出现典型菌落，需再培养 18-24 小时。

有时金黄色葡萄球菌不显灰黑色，但其外围有一不透明圈。

金黄色葡萄球在甘露醇高盐琼脂培养基上典型特征典型特征：金黄色葡萄球菌显黄色，其外围有一黄色的晕环。

大肠杆菌在海博大肠杆菌/大肠杆菌典型菌落为蓝色至紫色，大肠菌群为粉红色菌落，其它细菌为无色菌落。

大肠菌群显色培养基上典型特征大肠菌群在去氧胆酸盐琼脂典型菌落为红色 , 菌落周围有红色的胆盐沉淀环。

菌落直径为 2-3mm 或更大。

(DC)上典型特征大肠菌群在结晶紫中性红琼典型菌落为紫红色 , 菌落周围有红色的胆盐沉淀环。

实验报告课程名称：环境微生物学实验实验类型：综合实验实验项目名称：微生物的分离与培养与菌落观察学生姓名：专业：环境工程学号：同组学生姓名：指导老师：实验地点：实验日期：2018 年 10月16日一、实验目的和要求1.掌握微生物接种培养技术2.掌握微生物分离纯化技术3.学习并掌握放菌落形态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。

二、实验内容和原理土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现具有重要价值微生物的主要菌源。

在不同土壤中，各类微生物的数量千差万别。

为了分离获得某种微生物,需要预先制备不同稀释度的菌悬液，并添加相应的抗生素抑制不需要的微生物，例如，添加链霉素25~50U/mL抑制细菌;添加0.5%重铬酸钾液或制霉素50 U/mL 抑制霉菌。

通过10倍稀释以及平板分离、平板涂布和平板划线等操作，微生物可在平板上分散成单个的个体，经过适宜条件培养，单个个体可形成单个菌落。

挑取单个菌落转接至新鲜平板上，即可使目的菌种纯化。

1.菌种的分离纯化：从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。

在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“单一性”，防止其他微生物的混入。

2.平板涂布法：因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。

用途上，一般多用于从菌种的纯化;优点是可以观察菌落特征，对混合菌进行分离;但不能计数3.平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。

划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。

用途一般多用于筛选菌株。

放线菌菌落特征放线菌资料的总结放线菌菌落特征放线菌资料的总结放线菌的形态比细菌复杂些，但仍属于单细胞。

在显微镜下，放线菌呈分枝丝状，我们把这些细丝一样的结构叫做菌丝，菌丝直径与细菌相似，小于1微米。

菌丝细胞的结构与细菌基本相同。

根据菌丝形态和功能的不同，放线菌菌丝可分为基内菌丝、气生菌丝和孢子丝三种。

链霉菌属是放线菌中种类最多、分布最广、形态特征最典型的类群，其形态如下图所示。

下图:链霉菌的一般形态和构造(模式图)正文:放线菌是怎么生长的，需要什么条件，我指的不是培养基，而是在植物体内。

哪位做过植物内生菌，恳请指教!不胜感激!植物内生放线菌在植物的韧皮部、木质部和韧皮部之间的缝隙有生长，分离植物的内生菌通常在这两个部位可以分离到。

主要是靠植物组织提供营养，有很多内生菌能够分解纤维素作为炭源，无机盐和氮源可以由植物组织中的无机盐和含氮物质获得，他们在植物中生长很缓慢。

通常来说，植物或者植物的组织器官的生长时间越长内生菌的种类和数量越多，你如果要分离可以选择树龄在百年以上的树。

植物器官粉末中会有放线菌存在吗?干燥的，经辐射灭菌后的粉末会把放线菌杀死吗?适宜的条件还会长出菌吗?辐射灭菌和50-60度的干燥都不能杀死所有的放线菌。

另外植物当中不只有放线菌，植物的内生菌大多数是真菌，有的内生真菌产生孢子能够抵御不良环境，生存能力很强。

如果你是做植物组织化学可以采用高温处理，杀死植物当中的微生物，再分析植物组织的成分。

如果你要的成分不能高温处理，可以用容易挥发的消毒剂处理植物样品，杀死微生物然后，在无菌环境下使消毒剂挥发。

建议你采用75%乙醇。

如何分离内生菌?目前内生菌的分离主要还是表面消毒，建议你最好不要把植物组织研磨成粉末。

可以将组织用75%乙醇表面消毒，在无菌室中的超净台中将植物组织吹干，用消毒的手术刀，把植物组织切割成0.5*1cm的小块。

直接把组织块接入培养基，同时将组织小块在空培养基中滚动，然后取出，作为对照平板。

细菌、酵母菌、霉菌、放线菌的异同1细胞结构细胞结构群体特征繁殖方式细菌原核细胞菌落光滑，湿润有些透明二分裂放线菌原核细胞菌落表面丝绒状，干燥不透明孢子生殖霉菌真核细胞菌落较大，干燥不透明，有颜色孢子生殖酵母菌真核细胞与细菌菌落相似，出芽、孢子生殖原核生物没有成形的细胞核，细胞质中只有核糖体。

真核生物有细胞核。

2菌落特征比较：细菌：湿润，粘稠，易挑起放线菌：干燥，多皱，难挑起，菌落较小，多有色素酵母菌：湿润，粘稠，易挑起，表面光滑，比细菌的菌落大而厚霉菌：菌丝细长，菌落疏松，成绒毛状、蜘蛛网状、棉絮状，无固定大小，多有光泽，不易挑起3细胞壁成分的异同：细菌肽聚糖磷壁酸类脂质蛋白质G+ 含量高含量较高一般无不含G- 含量低不含含量较高含量高细菌分为G+和G-，G+肽聚糖含量高，G-含量低；G+磷壁酸含量较高，而G-不含磷壁酸；G+类脂质一般无，而G-含量较高；G+不含蛋白质，G-含量较高。

放线菌为G-，其细胞壁具有G-所具有的特点。

酵母菌的细胞壁外层为甘露聚糖，内层为葡聚糖；霉菌的细胞壁成分为几丁质、蛋白质、葡聚糖。

原生质体制备方法：G+菌原生质体获得：青霉素、溶菌酶G-菌原生质体获得：EDTA鳌合剂处理，溶菌酶、肽酶放线菌原生质体获得：青霉素、溶菌酶、肽酶霉菌原生质体获得：纤维素酶。

酵母菌原生质体获得：蜗牛消化酶。

原生质体（protoplast）：脱去细胞壁的细胞叫原生质体，是一生物工程学的概念。

动物细胞也可算做原生质体。

原生质体由原生质分化形成，具体包括细胞膜和膜内细胞质及其他具有生命活性的细胞器。

植物和动物的如细胞核、线粒体和高尔基体等，而细菌如核糖体、拟核等。

病原生物学意义严格地说，原生质体指在人为条件下，去除原有细胞壁或抑制新生细胞壁后所得到的仅有一层细胞膜包裹着的圆球状对渗透敏感的细菌。

革兰阳性菌最易形成原生质体。

原生质球指革兰阴性菌肽聚糖层受损后尚保留有外膜的原生质体。

原生质体，它是细胞进行各类代谢的主要场所，是细胞中重要的部分。

微生物菌落特征形态总结大全(带图片)菌落特征比较：细菌：湿润，粘稠，易挑起放线菌：干燥，多皱，难挑起，菌落较小，多有色素酵母菌：湿润，粘稠，易挑起，表面光华，比细菌的菌落大而厚霉菌：菌丝细长，菌落疏松，成绒毛状、蜘蛛网状、棉絮状，无固定大小，多有光泽，不易挑起细菌：一般形成较小的圆形菌落，颜色有白色、黄色等，表面光滑或不光滑放线菌：菌落背面有同心圆形纹路。

这点可以和细菌菌落区分。

酵母菌：菌落为淡黄色，光滑，半透明，比细菌菌落大。

霉菌：菌落大型，肉眼可见许多毛状物，棕色、青色等，可见黑色的分生孢子群。

对于科学实践中鉴别微生物种类有重要意义。

微生物菌落形态图片菌落特征比较总结菌落特征比较：细菌：湿润，粘稠，易挑起放线菌：干燥，多皱，难挑起，菌落较小，多有色素酵母菌：湿润，粘稠，易挑起，表面光华，比细菌的菌落大而厚霉菌：菌丝细长，菌落疏松，成绒毛状、蜘蛛网状、棉絮状，无固定大小，多有光泽，不易挑起细菌：一般形成较小的圆形菌落，颜色有白色、黄色等，表面光滑或不光滑放线菌：菌落背面有同心圆形纹路。

这点可以和细菌菌落区分。

酵母菌：菌落为淡黄色，光滑，半透明，比细菌菌落大。

霉菌：菌落大型，肉眼可见许多毛状物，棕色、青色等，可见黑色的分生孢子群。

对于科学实践中鉴别微生物种类有重要意义。

微生物菌落形态图片菌落特征比较菌落特征比较：细菌：湿润，粘稠，易挑起放线菌：干燥，多皱，难挑起，菌落较小，多有色素酵母菌：湿润，粘稠，易挑起，表面光华，比细菌的菌落大而厚霉菌：菌丝细长，菌落疏松，成绒毛状、蜘蛛网状、棉絮状，无固定大小，多有光泽，不易挑起细菌：一般形成较小的圆形菌落，颜色有白色、黄色等，表面光滑或不光滑放线菌：菌落背面有同心圆形纹路。

这点可以和细菌菌落区分。

酵母菌：菌落为淡黄色，光滑，半透明，比细菌菌落大。

霉菌：菌落大型，肉眼可见许多毛状物，棕色、青色等，可见黑色的分生孢子群。

对于科学实践中鉴别微生物种类有重要意义。