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分子生物学第7章 DNA的重组与转座

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DNA重组和转座

DNA重组和转座

第一节 DNA重组（recombination）一）、DNA重组1、概念：是指由于不同DNA链的断裂和连接而产生的DNA片段的交换和重新组合，形成新的DNA分子的过程。

2、意义：重组是遗传学的灵魂，没有重组就没有生物的进化；没有重组也就没有现代的分子克隆技术二）、DNA重组的类型1、同源重组（Homologous Recombination）2、位点特异性重组（Site-specific Recombination）3、DNA的转座（transposition）同源重组一、概述1、定义：两个DNA分子同源序列之间进行的重组2、条件：（1）两个DNA分子有同源序列（相关的酶可以用任何一对同源序列为底物）（2）两个DNA分子必须紧密接触3、发生：真核生物: 非姐妹染色单体交换相对应的区域。

原核生物: 依赖recA蛋白，并形成 Holliday 结构Holiday模型（1964年）二、大肠杆菌同源重组的分子基础（一）RecA1、作用：可促进单链同化或单链吸收RecA具有使DNA单链置换双链中同源链的能力2、单链同化发生的三个条件（1）其中一个DNA必须存在单链区（2）其中一个DNA必须有一个自由3’末端（3）此单链区和3’末端必须位于两分子之间互补的区域内（二）RecBCD复合体1、酶的活性：（1）核酸酶（2）解旋酶（3）ATPase2、作用：在CHi位点处产生含3`游离末端单链。

（三）CHi位点——RecBCD识别的靶位点5`GCTGGTGG3`3`CGACCACC5`是重组频率较高的部位E.coli每隔约5~10kb有一个拷贝，Holliday 结构的形成：1. 同源序列排列在一起；2. 酶切。

通过核酸酶和RecBCD蛋白复合体的作用在一对同源DNA上产生切口；3.入侵。

含有3’端切口的ssDNA被recA蛋白包裹形成recA蛋白-ssDNA细丝；RecA-ssDNA细丝寻找相对的DNA双螺旋上的相应序列。

分子生物学：重组和转座共35页

分子生物学：重组和转座共35页
45、法律的制定是为了保证每一个人 自由发 挥自己 的才能 ，而不 是为了 束缚他 的才能 。—— 罗伯斯 庇尔
46、我们若已接受最坏的，就再没有什么损失。——卡耐基 47、书到用时方恨少、事非经过不知难。——陆游 48、书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者。——史美尔斯 49、熟读唐诗三百首，不会作诗也会吟。——孙洙 50、谁和我一样用功，谁就会和我一样成功。—1、实际上，我们想要的不是针对犯 罪的法 律，而 是针对 疯狂的 法律。 ——马 克·吐温 42、法律的力量应当跟随着公民，就 像影子 跟随着 身体一 样。— —贝卡 利亚 43、法律和制度必须跟上人类思想进 步。— —杰弗 逊 44、人类受制于法律，法律受制于情 理。— —托·富 勒

第七章 DNA重组与转座

第七章 DNA重组与转座

转座作用的遗传学效应
① 转座引起插入突变 ② 转座产生新的基因 ③ 转座产生的染色体畸变 ④ 转座引起的生物进化.

转座子的转位特征 P204
7.4 逆转录病毒和逆转录转座子
以RNA介导的转座与逆转录病毒有关，被转移 的因子称为逆转录转座子。
逆转录转座子是真核生物转座子的重要类型。
逆转录病毒与逆转录转座子的区别：
来源于宿主dna普遍性转导generalizedtransduction局限性转导restrictedtransduction完全转导外源性dna片段与受体菌的染色体整合并随染色体而传代称完全转导流产转导外源性dna片段游离在胞质中既不能与受体菌染色体整合也不能自身复制称为流产转导局限性转导或特异性转导所转导的只限于供体菌染色体上特定的基因

局限性转导或特异性转导， 所转导的只限于供体
菌染色体上特定的基因。如λ 噬菌体进入大肠埃希
菌。

4.细菌的细胞学机制
P193
7.2 位点专一性重组：导致DNA序列发生重排，不依赖于DNA 顺序的同源性，而依赖于能与某些酶相结合的特异DNA序列， 这些酶能催化DNA链的断裂和重接，引发位点专一性重组。
融合在一起，转录后形成一条即含病毒序列又含
C-onc的RNA，后者如含包装信号可被包装进
病毒颗粒中，形成含有一条融合RNA和一条正
常病毒RNA的二倍体病毒颗粒。 二者分子之间发生重组将会产生转化逆转录 病毒基因组。病毒携带V-onc，即具有转化能力。
逆转录病毒是具有感染能力的病毒颗粒，可以 在细胞之间转移。 逆转录转座子是宿主DNA基因组的组分，可以 在基因组内转座，但不能在细胞之间转移。
a）DNA转座子 DNA DNA 细菌转座子及插入序 列

分子生物学—同源重组、位点专一性重组、转座

分子生物学—同源重组、位点专一性重组、转座

分⼦⽣物学—同源重组、位点专⼀性重组、转座同源重组遗传交换、染⾊体上基因重排、断裂DNA的修复（1）同源重组的形式常发⽣在同源染⾊体之间（分⼦间重组）也可发⽣在同⼀DNA分⼦内（分⼦内重组）（2）Holliday 模型解释同源重组的⼀个经典模型基于重组过程中有⼗字形的中间产物（3）RecBCD重组途径存于E. coli中，需要RecBCD蛋⽩（RecBCD protein，recB、recC、recD基因的产物）参与DNA损伤造成的双链断裂以及外源DNA线性分⼦的DNA断端。

RecBCD是⼀种具多功能的酶，依赖于DNA的ATPase(⽔解ATP, 为DNA的解螺旋提供能量)；DNA helicase; DNA nuclease,可作⽤于单链或双链DNA, 切割χ位点（GCTGGTGG）χ(chi): crossover hotspot instigator RecBCD的切点与底物的序列有关，可在χ位点3’端4 ~ 6 ntRecA ：38 kD 的蛋⽩质，具多种功能，在重组中促进同源DNA单链的交换（主要是⼀单链与⼀双链中的同源单链交换）；交换过程需ATP。

RuvA和RuvB ：RuvA和RuvB均具DNA helicase活性，RuvB还有ATPase活性；RuvA特异性识别并结合到Holliday junction，并促使RuvB蛋⽩结合到这⼀位点；RuvB⽔解ATP，提供能量，促使分⽀迁移RuvC ：解开Holliday junction的核酸内切酶，特异地与Holliday junction结合，在特异位点切开Holliday junction。

RuvC是⼆聚体，有2个活性位点，能切开Holliday junction的两条链，切割位点有特异的序列，必须等branch migration 到达特异序列后，RuvC才能起作⽤，以何种⽅式解开Holliday junction取决于RuvC切割位点在两对同源单链上的频率。

DNA的重组与转座

DNA的重组与转座
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根据不同的机制，可将重组分成4类： • 同源性重组（homologous recombination） • 位点特异性重组（site-specific
recombination） • 异常重组（illegitimate recombination) • 转座重组（transposition recombination）
• Holliday连接体也能通过碱基之间氢键的断裂 和再连接而发生左右移动。这个过程称为支链 迁移（branch migration)。
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• Holliday认为在DNA分子上存在某些位点，特 殊的引发重组的酶能够识别这些位点，确保两 条链在相同的部位被切断。
• 目前还没有足够的证据证明这些位点的存在。
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• 一旦Holliday连接体形成后，它能进行重排从 而改变链的彼此关系。这种重排称为异构化， 因为在此过程中没有键的割裂。
• 一旦形成Holliday连接体后，就能被拆分。是 否发生重组依赖于拆分时Holliday连接体的构 象。
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• Holliday模型被称为双链侵入模型，因为由于 每一个DNA分子的一条链侵入到另一个DNA 分子，它解释了在重组时两个DNA分子的异源 双链是如何形成的。
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• 真核生物减数分裂时的染色体之间的交换， 某些低等真核生物及细菌的转化、转导、 接合，噬菌体的整合等都属于同源性重组 这一类型。
• 在整个基因组中，同源重组的频率并不恒 定，并且跟染色体的结构有关。例如在异 染色体附近遗传物质的交换要受到抑制。
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1. 进行同源重组的基本条件

基因组重组和转座子活动

基因组重组和转座子活动

基因组重组和转座子活动作为生命的基本单元，细胞在生长发育、适应环境等过程中需要不断地调控基因表达。

而基因组重组和转座子活动作为基因表达中的一个重要过程，也在细胞发育和进化过程中发挥着重要作用。

一、基因组重组基因组重组是指在细胞分裂过程中，染色体上一段DNA序列与另一段DNA序列交换位置的现象。

这一过程可以发生在减数分裂过程中，也可以发生在有丝分裂过程中。

在减数分裂过程中，有趣的是，同源染色体之间的互换过程可以促进基因的多样性，对在进化过程中的适应性有重要作用。

同样，在有丝分裂过程中，由于在细胞周期的S期复制中，丝粘连复合物的结构可以导致同源染色体之间的交叉而重组，从而形成新的基因组序列。

基因组重组既重要又复杂，因此，它需要细胞中的一些特殊酶来协助完成，包括重组酶、拼接酶和核酸酶等。

二、转座子活动转座子是指在基因组中具有自主转移能力和引起基因组重组的DNA片段。

插入到一个基因区域可以革命性地改变基因的表达，所以转座子的活动可以起着丰富、多样化物种基因组的作用。

然而，由于转座子的位置特异性和非特异性种族特异性的现象时有喜见，转座子也可以带来某些负面效应，如遗传疾病和基因突变。

转座子可以通过不同的机制来使它们移动和影响基因组。

其中，一种被称为复制粘贴转移机制。

这种机制涉及在高危核酸中逆转录酶的作用下，从转座子中复制DNA片段，并插入到宿主的相同或不同部位。

另一种机制被称为切-粘式转移机制，其中转座子内部的酶可以切除DNA，然后插入到宿主某个区域的特定位点。

三、基因组重组和转座子活动协同作用基因组重组和转座子活动是不可分割的。

转座子的运动和基因组的重新组合是一个复杂的动态过程，对于各种生命现象都有很大的影响，包括不同物种之间的进化、种群的遗传多样性、染色体数目的变化、疾病的产生等。

例如，转座子可以插入到调控基因的区域，导致这些基因的表达被调节。

基因组重组可以导致整个基因和调控区域之间的距离发生变化，从而影响基因组的整体表达。

分子生物学：DNA重组与转座


整合宿主因子
同源区域attP（）与attB（宿主）的重组
噬菌体从宿主基因组切除
Int、切除酶（Xis，的xis基因编码） IHF
整合的逆过程
附着（整合）位点（att sites）
attP与attB只在它们的中间区域有一小段同源序列（15 bp，称为O）
attP的必需序列为235 bp（从–152到+82,以O的中点为0），而attB 必需序列约为25 bp（从–12到+12 ）
A
G
B
A
A
B
a
C
b
a
T
b
A
G
b
A
A
b
a
C
B
a
T
B
Holliday 模型中，由于重组而产生的异源双链区存在 不配对碱基，可被细胞内的修复系统能够识别并以一条链 为模板进行切除修复：
(1). 两个杂种分子均未得到校正，有丝分裂后分离形成4:4 或 3:1:1:3的异常孢子分离比，属于半染色单体转变；
TNA家族
具有如下特征： （1）长度较长，2.5-20 kb； （2）两侧含有较长的反向重复序列；目标区域产生正向重复 （3）内部含有一个或几个结构基因。常见的结构基因有：转座 酶基因—tnpA，解离酶基因—tnpR和抗生素抗性基因。 （4）转座完成以后可导致约5 bp长的靶位点序列加倍，从而在 转座子两侧产生直接重复序列。
5 • 基因转换(conversion)发生的机率,随突变位点离DNA 交叉
点的距离增大，而表现逐渐变小的极性梯度的效应
酵母Arg4（ 1989年，JackSzostak ） 7 multip—alleles (非全同等位基因)
Nsph I,Acc-I, R-V, Bel-I, Dra-III,Aha-II, Bgl-II 在杂合二倍体中，基因转换频率从5’ 3’极性递减

DNA的重组与转座

DNA的重组与转座第六章DNA的重组与转座1.简述DNA重组的概念与意义。

DNA重组：DNA分⼦内或分⼦间发⽣遗传信息的重新组合，称为遗传重组或基因重组。

重组产物称为重组体DNA。

DNA重组的意义：能迅速增加群体的遗传多样性2.细菌基因转移的机制有哪些？细菌的基因转移主要有四种机制：接合、转化、转导和细胞融合。

3.简述转座⼦的概念，转座⼦如何分类？什么是插⼊序列？转座⼦：是基因组中可以移动的⼀段DNA序列。

⼀个转座⼦由基因组的⼀个位置转移到另⼀个位置的过程称为转座或移位。

转座⼦的分类：①插⼊序列：只含有与转座有关的酶基因，不含有任何宿主基因（包括抗药性基因）②复合型转座⼦：是⼀类除了转座酶基因之外，还带有抗药性基因(或其他宿主基因)的标志，结构较⼤⽽且复杂。

插⼊序列：是最简单的转座⼦，只含有与转座有关的酶基因，不含有任何宿主基因（包括抗药性基因）。

4.复合转座⼦与IS因⼦有什么异同点？同：都含有有转座有关的酶基因异：IS因⼦结构简单，不含任何宿主基因；复合转座⼦结构较⼤⽽且复杂，含有抗药性基因或其他宿主基因的标志。

5.简述复制型转座与⾮复制型转座的机制。

复制型转座：在转座过程中，当形成靶位点与转座⼦连接的中间体后，转座⼦进⾏了复制，使原转座⼦位置与新的靶位点各存在⼀个转座⼦，因此转座过程伴随着转座⼦拷贝数的增加。

其过程涉及两种酶，⼀是转座酶，作⽤于原转座⼦的末端；另⼀中是解离酶，在转座过程中促使转座的中间产物接⼒，使转座⼦复制。

⾮复制型转座：①转座酶先识别转座⼦的IR，在两翼末端反向重复序列外沿切断；②宿主靶位点的双链交错切开，每侧9bp，交错形成单链；③转座⼦移动，靶位点的5’端与转座⼦的3’端连接，留下两个9bp的缺⼝；④缺⼝修复补齐。

6.转座⼦转座的特征有哪些？①转座不依赖RecA蛋⽩②转座后靶序列重复③转座⼦有插⼊选择性④区域性优先⑤转座具有排他性⑥转座有极性效应⑦活化邻近的沉默基因7.DNA转座引起了什么遗传学效应？①转座引起插⼊突变②转座产⽣新的基因③影响插⼊位置邻近基因的表达，使宿主表型改变④转座产⽣的染⾊体畸变⑤转座引起⽣物进化8.什么是逆转座⼦？逆转座⼦对基因组功能有哪些重要的影响？逆转座⼦：指通过RNA为中介，逆转录成DNA后进⾏转座的可移动元件。

DNA的重组与转座培训

DNA的重组与转座培训DNA的重组与转座培训DNA的重组与转座是生物学中一项重要的技术，用于改变生物体的基因组，以实现特定的目的。

在这篇文章中，我们将详细介绍DNA的重组与转座技术，并提供相关实验操作的培训。

1. DNA的重组DNA的重组是指将来自不同来源的DNA片段进行重新组合，形成新的DNA序列。

这种技术的应用非常广泛，可以用于产生具有特定功能的蛋白质、疫苗的研发以及疾病的基因治疗等领域。

实验操作：步骤1：准备工作- 准备试管、酶切体系、反应缓冲液和DNA片段等。

- 温度、时间和酶切酶的浓度都是影响DNA重组效率的重要因素，所以需要根据具体实验来确定。

步骤2：酶切反应- 将待重组的DNA片段用限制性内切酶切剪，产生可粘性末端。

- 确保酶切反应的温度和时间符合要求。

步骤3：连接反应- 将两个经酶切的DNA片段混合，在酶切缓冲液中加入连接酶。

- 反应温度和时间的选择与步骤2类似。

步骤4：DNA重组产物的分离与提取- 通过琼脂糖凝胶电泳分离连接反应产物，并使用Gel Extraction Kit提取感兴趣的目标DNA。

2. 转座转座是指某些特殊的DNA序列（转座子）具有自主移动性，可以在基因组内发生位置的改变。

这种现象在进化中起到重要作用，并且可以被利用于基因突变的研究和修饰。

实验操作：步骤1：获得转座子DNA- 转座子可以在细菌、真核生物或植物中找到。

根据实验需要，可以使用PCR扩增或基因组DNA提取方法获得转座子DNA。

步骤2：构建转座载体- 选择合适的载体，将转座子DNA连接到载体上，并转化到适当的宿主细胞中，以扩增转座子。

步骤3：转座实验操作- 将转座载体引入到目标细胞中。

- 通过选择合适的培养基和筛选条件，筛选出带有转座子的目标细胞。

3. 实验操作的注意事项- 实验室操作要根据具体的实验方案和操作手册进行，严格按照操作流程进行。

- 培养容器、试剂和仪器要经过严格消毒，在实验操作时保持无菌环境。

分子生物学技术-第七章 DNA的重组与转座

1、插入序列(Insertion sequences IS)
指不含任何结构基因的转座子，它是一种自主 的单位，仅带有介导自身移动所需要蛋白质的基 因,是最简单的转座子。
IS 一般由一段DNA序列（一个转座酶基因，不 带其它标记基因）和两端反向重复序列组成，重 复序列一般在15-25bp。
不同IS插入位点不同，但序列大多为5-9bp， 转位发生后插入位点成为IS两端的同向重复序列。
一、霍利迪结构(Holliday Structure)
霍利迪结构：它是DNA重组过程中的一个中间体， 重组时两个DNA双链体以四股DNA在连结点形成的十字 形DNA分子构象。
异源双链 (Hetero duplex)：指在重组部位，每条双 链中均有一段DNA链来自另一个双链中的相对链。
分支迁移（Branch migration）：一旦两个重组的 DNA分子形成霍利迪结构，交叉连接点很容易像拉链一 样移动，从而扩大异源双链体区域，这一过程叫分支迁 移。
2、复合式转座子
它是一类较复杂的转座子，由两个重复序列 夹着一个或多个结构基因组成。除了含有转位相 关的功能外，还带有一些其他基因，如抗药性基 因、抗重金属离子基因等。
它们都具有末端反向重复序列、可编码基因 和插入位点的正向重复序列
TnA转座子：
结构较复杂，长度约5000bp。两端没 有IS结构，仅含有两个末端反向重复序列， 一般约38bp。内部通常含有转位相关的基 因和抗药性基因等，插入位点约5bp。
第七章 DNA的重组与转座
重组分为4类：
同源重组：重组的DNA之间具有同源性 位点特异性重组：重组DNA之间不需要同源，但
是需要识别特异的DNA序列 转座重组：需要转座子
异常重组：不正常细胞加工的结果。
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Barbara McClintock 芭芭拉·麦克林托克) (芭芭拉 麦克林托克) 19021902-1992
C基因-Ds基因-Ac基因： Ac-Ds 控制系统 基因-Ds基因-Ac基因： Ac基因 基因 《玉米易突变位点的由来与行为》(1950)，《染色体结构和基 玉米易突变位点的由来与行为》(1950)， 因表达》 因表达》(1951)
7.2.2 细菌的特异位点重组
鼠伤寒沙门氏菌H1鞭毛蛋白和 鞭毛蛋 鼠伤寒沙门氏菌 鞭毛蛋白和H2鞭毛蛋 鞭毛蛋白和 白抗原表达的互变，称为鞭毛相转变， 白抗原表达的互变，称为鞭毛相转变， 这种转变是由H片段倒位决定的 片段倒位决定的， 这种转变是由 片段倒位决定的，此倒 位是由于特异重组位点hix发生重组后引 位是由于特异重组位点 发生重组后引 起的。 起的。
整合位点---attB、attP ◘ 整合位点 切除位点---attL、attR 切除位点 整合过程需要λ整合酶 ◘ 整合过程需要 整合酶 （integrase Int）（ 编码） ）（λ编码） ）（ 编码 和寄主的整合宿主因子IHF 和寄主的整合宿主因子 （integration host factor） ） 共同作用 ◘ 整合后的附着位点为 attL（BOP’） （ ） attR（POB’） （ ）
Ⅰ型：两末端有相同的IS序列，或正向，或反向。 两末端有相同的IS序列，或正向，或反向。 IS序列 Ⅱ型：末端有反向重复序列。如TnA家族 末端有反向重复序列。 TnA家族
Tn A家族: A家族: 家族
TnA是复制型转座的转座子，长约5kb左右 TnA是复制型转座的转座子，长约5kb左右 。 是复制型转座的转座子 5kb 两端具有末端反向重复序列（而不是IS），长约38bp左右 IS），长约38bp左右， 两端具有末端反向重复序列（而不是IS），长约38bp左右， 任一个缺失都会阻止转座。 任一个缺失都会阻止转座。 中部的编码区编码三个基因：转座酶，解离酶和抗性基因， 中部的编码区编码三个基因：转座酶，解离酶和抗性基因， TnA家族都带有抗性标记 TnA家族都带有抗性标记 。 靶位点具有5bp的正向重复序列。 5bp的正向重复序列 靶位点具有5bp的正向重复序列。 解离位点（ TnA家族特有的内部位点 家族特有的内部位点。 解离位点（res）是TnA家族特有的内部位点。
b a
A B
A B
b (5) 5’ A 3’ 3’ 5’ a a (11) A B A
b a b
a (6) 5’ A 3’ 3’ 5’ a
b
a
B
A
B
A
b
(7)
a
b
a
B
片段重组体
a b
拼接重组体
图 23－8 Holiday 重组模型。
7.1.2 异源双链与基因转换
7.1.3.细菌的基因转移与重组 7.1.3.细菌的基因转移与重组
7.2.1 λ phage DNA的整合与切除 的整合与切除 1、实现机制： 、实现机制：
均是通过---细菌 均是通过 细菌DNA和λDNA上特定位点之间的重组 细菌 和 上特定位点之间的重组
2、特定位点-----附着位点（attachment site att） 、特定位点 附着位点（ 附着位点 ）
第七章
DNA的重组与转座 DNA recombination and transposition
DNA重组 重组
概念： 概念：DNA 分子内或分子间发生遗传信息 的重新重合称为遗传重组或基因重排。 的重新重合称为遗传重组或基因重排。
DNA重组的意义： 重组的意义 对生物进化起着关键作用。能迅速增加群体的 对生物进化起着关键作用。 遗传多样性(diversity)，使有利突变与不利突变 ， 遗传多样性 分开，通过优化组合积累有意义的遗传信息； 分开，通过优化组合积累有意义的遗传信息； 提供修复机制；调节基因表达等。 提供修复机制；调节基因表达等。
(2)
b 联会 B
3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’
(8)
A Байду номын сангаас 两臂 旋 转 b a
b 酶切 B
(9)
A B
(3)
5’ A 3’ 3’ 5’ a 5’ A 3’ 3’ 5’ a
(4)
3’ 5’ 5’ b 3’ 游 离端 移 动联 会 B 3’ (10) 5’ 5’ b 3’ 游 离 端交 叉 连 接 3’ 5’ 5’ b 3 形 成单 链 交叉 3’ 5’ 5 b 3’ 分支 点 移 动 A B B B
DNA的重组 的重组
序列和所需蛋白质因子的要求把重组分为4 从DNA序列和所需蛋白质因子的要求把重组分为 序列和所需蛋白质因子的要求把重组分为 类： 同源重组(homologous recombination) 同源重组 位点特异(专一 性重组 位点特异 专一)性重组 专一 性重组(site-specific recombination) 转座重组(transposition recombination) 转座重组 异常重组(illegitimate recombination) 异常重组
Barbara McClintock (1902-1992), a geneticist who integrated classical genetics with microscopic observations of the behavior of chromosomes, was regarded as a genius, nearly incomprehensible thinker. In 1946, she discovered mobile genetic elements, which she called "controlling elements." Thirty-seven years later, she won a Noble Prize for this work, becoming the third woman to receive an unshared Nobel in science.
转座子在靶位置插入前后的结构
123456789 123456789 987654321 987654321
ATGCA TACGT
ATGCA123456789 TACGT 123456789
987654321 ATGCA 987654321 TACGT
转座子 倒置重复区 靶序列顺式重复区
2.复合转座子 )： 2.复合转座子 (Composite transposons )：
E.coli attB 以BOB`表示，由 23bp 表示， 表示
λ phage attP 以 POP`表示 表示 240bp ◘ 核心序列 “O”完全一致 完全一致 同源部分） （同源部分） ---位点特异性重组发生的地方 位点特异性重组发生的地方 ◘ B, B`, P, P`---臂 臂
3、整合过程 、
Int蛋白能切断DNA，并使它重新连接，近而使holliday结构拆分 Int蛋白能切断DNA，并使它重新连接，近而使holliday结构拆分 蛋白能切断DNA holliday 重组时attP和attB部位交叉断裂， 重组时attP和attB部位交叉断裂，互补单链末端进行交叉杂交 attP 部位交叉断裂
噬菌体基因组整合到细菌染色体基因组中属此种重组
2、特征： 特征：
在特定的结合序列部位，有专一的酶催化断裂重接---产生精确的DNA 在特定的结合序列部位，有专一的酶催化断裂重接---产生精确的DNA ---产生精确的 重排 都具有整合作用的两个基本特征 典型的保守性重组---交换是相互的和保存原先的DNA ---交换是相互的和保存原先的 a、 典型的保守性重组---交换是相互的和保存原先的DNA 发生在噬菌体和细菌DNA DNA短同源序列的专一性核苷酸上 b、 发生在噬菌体和细菌DNA短同源序列的专一性核苷酸上
int IHF
Xis
◘ 整合体及其作用 整合体（intasome） 整合体（intasome）--Int和IHF结合到attP时的复合物 Int和IHF结合到attP时的复合物 结合到attP 整合体捕获attB 说明----attB， ◘ 整合体捕获attB，说明----a、attB和attP的最初识别靠Int attB和attP的最初识别靠Int 的最初识别靠 识别两序列的能力 b、两序列的同源性在链交换时为重 要因素
细菌的基因转移的四种机制 结合(conjugation) 结合 转化(transformation) 转化 转导(transduction) 转导 细胞融合(cell fusion) 细胞融合
7.1.4 同源重组的酶学机制
细菌的接合、 细菌的接合、转化以及转导重组都是同源 重组， 重组，而且这种重组是发生在一个完整的环 状双螺旋DNA分子与一个双链或单链 分子与一个双链或单链DNA 状双螺旋 分子与一个双链或单链 分子片段之间的。且重组需要 分子片段之间的。且重组需要RecA和 和 RecBCD蛋白质。 蛋白质。 蛋白质 Recombination
沙门氏菌H片段倒位决定鞭毛相转变 沙门氏菌H
7.3 转座作用
转座子的概念： 7.3.1 转座子的概念：
转座子（transposon，Tn):是在基因组中可移动的 转座子（transposon，Tn):是在基因组中可移动的 一段DNA序列。 DNA序列 一段DNA序列。基因组内不必借助于同源序列就能 改变自身位置的一端DNA序列. DNA序列 改变自身位置的一端DNA序列. 转座：转座子由基因组的一个位置转移到另一个位置 转座：转座子由基因组的一个位置转移到另一个位置 的过程叫转座。转座过程有5大特点： 的过程叫转座。转座过程有5大特点：
7.2 位点特异性重组 site-specific recombination
recombination） 一、位点特异性重组（ site-specific recombination） 位点特异性重组（ site1、概念：发生在专一序列而顺序极少相同的DNA分子间 概念：发生在专一序列而顺序极少相同的DNA分子间 DNA 的重组