分子生物学重组DNA技术试题

分子生物学题库引言分子生物学是研究生物分子结构、功能、相互作用及其调控的学科。

在当今科学研究的前沿领域，分子生物学被广泛应用于生物医学、基因工程、农业科技和环境保护等领域。

为了能够更好地掌握分子生物学的知识和技能，我们需要不断学习和训练。

本文档将提供一系列分子生物学的题目，帮助读者进行练习和巩固知识。

1. DNA的结构和功能1.1. 描述DNA的结构，并解释其双螺旋结构的重要性。

1.2. DNA的复制是如何进行的？请详细描述DNA复制的步骤。

1.3. DNA修复是维护基因组稳定性的重要机制，请列举常见的DNA损伤和相应的修复机制。

2. RNA的结构和功能2.1. RNA与DNA的结构有何不同？请对比二者的差异。

2.2. mRNA是如何转录的？请描述转录的过程，并解释其重要性。

2.3. tRNA和rRNA在蛋白质合成中的作用是什么？请分别描述它们的功能。

3. 基因调控与表达3.1. 请解释什么是基因调控？列举常见的基因调控机制。

3.2. DNA甲基化是一种常见的基因调控方式，请解释DNA甲基化的作用和调控机制。

3.3. miRNA是一类重要的非编码RNA，请描述miRNA在基因表达调控中的作用。

4. 蛋白质结构与功能4.1. 描述蛋白质的级别结构，并解释其重要性。

4.2. 蛋白质的折叠是如何发生的？请解释蛋白质折叠的机制和重要性。

4.3. 请解释蛋白质与其他生物分子之间的相互作用，并列举常见的蛋白质相互作用类型。

5. 基因工程与基因组编辑5.1. 描述常见的基因工程技术，包括重组DNA技术和基因克隆技术。

5.2. CRISPR-Cas9技术是一种重要的基因组编辑技术，请解释CRISPR-Cas9技术的原理和应用。

5.3. 请描述基因组编辑在植物育种和医学研究中的应用。

结论分子生物学作为生物学的重要分支学科，研究了生物分子的结构、功能和相互作用。

理解分子生物学的知识对于从事生物医学研究、基因工程、农业科技和环境保护等领域的科学家和研究人员来说至关重要。

分子生物学习题库与参考答案一、单选题（共49题，每题1分，共49分）1.可以实现体细胞克隆的技术是:A、基因编辑B、聚合酶链式反应C、诱导多能干细胞D、体细胞核移植正确答案：D2.在PCR反应中,引物与模板的结合温度约为:A、37°CB、55°CC、72°CD、95°C正确答案：B3.大肠杆菌对于基因克隆的主要作用是:A、提供连接酶B、合成引物C、表达目的蛋白D、作为宿主正确答案：D4.将单链DNA合成双链的酶是:A、连接酶B、DNA聚合酶C、裂解酶D、RNA聚合酶正确答案：B5.可以增加靶标DNA拷贝数的技术是:A、PCRB、电泳C、测序D、印迹杂交正确答案：A6.在Southern杂交中起探针作用的是:A、DNAB、RNAC、载体D、引物正确答案：A7.编码氨基酸顺序信息的DNA序列称为:A、启动子B、基因C、外显子D、启动密码子正确答案：B8.可以自我复制的核酸是:A、mRNAB、rRNAC、tRNAD、miRNA正确答案：B9.DNA聚合酶在PCR反应过程中不需要的元素是:A、铜离子B、镁离子C、锰离子D、钾离子正确答案：A10.启动子序列通常位于:A、转录起始点上游B、编码区C、基因内含子D、终止子上游正确答案：A11.可以直接导入植物细胞的方法是:A、阳离子脂质体法B、农杆菌法C、微粒射击法D、电穿孔法正确答案：B12.DNA的组成单位是:A、氨基酸B、核苷酸C、核糖D、脱氧核糖正确答案：B13.农杆菌可以将T-DNA转入植物细胞的原因是:A、具有连接酶B、具有限制性内切酶C、具有转座子D、可以与植物细胞膜融合正确答案：C14.DNA测序中的Sanger方法利用了:A、引物延伸终止B、核酸杂交C、蛋白质切割D、荧光标记正确答案：B15.可以用于克隆目的基因的载体是:A、慢病毒B、质粒C、线性DNA分子D、mRNA正确答案：B16.属于真核生物的模型生物是:A、小鼠B、酵母C、果蝇D、以上所有正确答案：D17.可以将质粒DNA转入宿主细胞的是:A、限制性内切酶B、DNA连接酶C、显微注射器D、电穿孔仪正确答案：C18.可以直接将外源基因导入植物细胞的是:A、电穿孔法B、微注射法C、生物炮法D、农杆菌法正确答案：D19.检测蛋白质的方法不是:A、Western印迹B、质谱C、Northern印迹D、免疫印迹正确答案：C20.对DNA进行切割的酶类包括:A、分裂酶B、连接酶C、制限酶D、聚合酶正确答案：C21.可以直接检测蛋白质的方法是:A、PCRB、Northern blotC、Western blotD、Southern blot正确答案：C22.提供能量驱动翻译反应的化学键是:A、糖苷键B、磷酸酯键C、硫磷键D、氢键正确答案：B23.编码线粒体蛋白质的基因主要位于:A、细胞质DNAB、线粒体DNAC、细胞核DNAD、质粒DNA正确答案：B24.下列DNA酶类能切断磷酸二酯键的是:A、连接酶B、DNA聚合酶C、替代酶D、制限酶正确答案：D25.在制备重组DNA时,使用琼脂糖的目的是:A、提供营养B、连接DNA段C、物理分离片段D、催化连接反应正确答案：C26.是mRNA而不是tRNA或rRNA的特征是:A、可翻译成蛋白质B、可与核糖体结合C、含有多肽链D、富含无义密码子正确答案：A27.对蛋白表达的后翻译调控方式是:A、剪接体B、RNA编辑C、蛋白质水解D、磷酸化正确答案：C28.编码tRNA的基因位于:A、线粒体B、核糖体C、细胞核D、细胞质正确答案：C29.单克隆抗体技术利用的真核细胞是:A、诱导的多能干细胞B、杆状病毒感染的淋巴细胞C、转化的肿瘤细胞D、融合瘤细胞正确答案：D30.原核生物基因组中不含有的序列是:A、终止子B、编码区C、启动子D、外显子正确答案：D31.制备cDNA文库常用的反转录酶来源于:A、大肠杆菌B、反刍动物C、艾滋病毒D、枯草杆菌正确答案：C32.编码氨基酸的三联密码所在的核酸是:A、mRNAB、rRNAC、tRNAD、盖帽RNA正确答案：C33.参与DNA复制的关键酶是:A、RNA聚合酶B、连接酶C、DNA聚合酶D、选择酶正确答案：C34.编码rRNA的基因通常组织成:A、基因簇B、可变剪接体C、假基因D、反义基因正确答案：A35.编码 rRNA 的基因位于:A、线粒体DNAB、质粒DNAC、细胞核DNAD、细胞质DNA正确答案：C36.将DNA上的遗传信息转录为RNA的过程称为:A、翻译B、转录C、复制D、修复正确答案：B37.PCR技术依赖的关键酶是:A、连接酶B、聚合酶C、裂解酶D、制限酶正确答案：B38.编码氨酰tRNA合成酶的RNA是:A、mRNAB、rRNAC、tRNAD、siRNA正确答案：B39.可以实现定点诱变的技术是:A、CRISPR/Cas9B、ZFNsC、TALENsD、以上均可正确答案：D40.利用生物信息学分析推测基因功能的方法是:A、突变分析B、蛋白质互作C、序列比对D、同源建模正确答案：C41.可以改变染色体DNA序列的技术是:A、基因敲除B、基因转染C、基因沉默D、基因编辑正确答案：D42.下列不属于PCR反应体系的组成部分是:A、DNA模板B、聚合酶C、dNTPD、琼脂糖正确答案：D43.检测目的蛋白表达的方法不是:A、Southern blottingB、Western blottingC、Eastern blottingD、Northern blotting正确答案：A44.从cDNA库中可以获得的是:A、所有DNA片段B、编码区序列C、非编码区序列D、全部基因组序列正确答案：B45.可以直接克隆cDNA的是:A、质粒B、YACC、λ噬菌体D、人工染色体正确答案：A46.病毒载体导入宿主细胞的方法是:A、共转化B、显微注射C、电穿孔D、吸附感染正确答案：D47.可以识别启动子序列的转录因子是:A、β因子B、α 因子C、σ 因子D、Rho因子正确答案：C48.可以直接提取基因组DNA的方法是:A、PCRB、Northern blotC、Southern blotD、盐析法正确答案：D49.基因敲除实验中所用对照组应为:A、目的基因缺失组B、野生型组C、质粒载体组D、siRNA处理组正确答案：B二、多选题（共35题，每题1分，共35分）1.PCR反应的原料不包括:A、引物B、载体酶C、聚合酶D、dNTPE、模板DNAF、琼脂糖G、无橡皮管封闭正确答案：BFG2.对DNA序列进行PCR扩增需要以下原料:A、模板DNAB、载体酶C、引物D、连接酶E、脱氧核苷三磷酸F、DNA聚合酶G、以上ACF正确答案：G3.质粒载体应具有下列哪些特征:A、大片段插入区B、可自主复制C、含有筛选位点D、与宿主互作E、含有克隆位点F、编码病毒蛋白G、低拷贝数正确答案：BCE4.在制备cDNA文库时需要用到的关键酶包括:A、连接酶B、PCR酶C、限制性内切酶D、RNA聚合酶E、反转录酶F、RNase HG、链化酶正确答案：EF5.编码氨基酸序列的核酸为:A、rRNAB、mRNAC、tRNAD、mRNA前体E、单链RNAF、双链RNAG、环状RNA正确答案：B6.制备重组质粒的主要步骤是:A、载体线性化B、消化插入片段C、连接反应D、感受态细胞制备E、转化宿主细胞F、克隆鉴定G、所有以上步骤正确答案：G7.对肿瘤基因组的检测可以应用:A、Southern印迹B、Northern印迹C、Western印迹D、Eastern印迹E、基因检测F、测序G、基因芯片正确答案：AEFG8.基因表达调控的机制包括:A、转录水平调控B、RNA水平调控C、翻译水平调控D、蛋白活性调控E、基因增幅F、肽链释放G、以上AD均可正确答案：G9.参与翻译过程的RNA包括:A、mRNAB、rRNAC、tRNAD、siRNAE、snRNAF、反义RNAG、以上ABC均参与正确答案：G10.编码氨基酸序列的核酸为:A、rRNAB、mRNAC、tRNAD、cDNAE、基因F、反义链G、互补链正确答案：B11.PCR反应的原料组成包含:A、模板 DNAB、上游引物C、下游引物D、DNA聚合酶E、脱氧核苷三磷酸F、缓冲液G、以上ABDEF正确答案：G12.基因敲入的方法可以包括:A、siRNAB、基因敲除C、ZFNsD、TALENsE、CRISPR/Cas9F、Cre-Lox重组系统G、反义RNA抑制正确答案：CDEF13.编码脱氧核糖的DNA单链为:A、编码链B、反义链C、互补链D、下游链E、正义链F、上游链G、载体链正确答案：B14.基因编辑技术包括:A、ZFNs技术B、TALENs技术C、CRISPR/Cas技术D、基因敲除E、RNAi技术F、慢病毒介导G、以上所有正确答案：ABC15.制备重组DNA的步骤包括:A、载体选择B、插入DNA获得C、双酶切D、连接反应E、转化F、筛选G、以上全部正确答案：G16.参与制备cDNA文库的关键酶类有:A、连接酶B、限制性内切酶C、聚合酶D、反转录酶E、核酸酶F、RNase HG、以上DE正确答案：G17.制备重组质粒的关键步骤不包括:A、载体的选择B、消化载体及插入片段C、连接反应D、PCR扩增插入片段E、转化感受态细胞F、筛选重组克隆G、测序验证正确答案：D18.启动子序列的特征包括:A、定位于基因转录起始点上游B、通常为AT富集区C、具有内含子D、与编码区互补E、与编码区反向验配F、与编码区部分重叠G、保守性非常低正确答案：AB19.直接参与蛋白质翻译的分子包括:A、DNAB、mRNAC、rRNAD、tRNAE、RNA聚合酶F、释放因子G、所有以上分子正确答案：BCDF20.制备重组质粒需要下列步骤:A、载体选择B、消化载体和插入DNAC、连接反应D、感受态细胞制备E、转化宿主细胞F、克隆筛选G、以上全部正确答案：G21.检测mRNA的方法包括:A、Northern杂交B、Western印迹C、Southern印迹D、荧光in situ杂交E、实时定量PCRF、RNA序列表达谱分析G、以上ABDF正确答案：G22.启动子通常位于:A、翻译起始点上游B、转录终止点下游C、翻译终止点下游D、基因内含子E、编码区F、转录起始点上游G、终止子下游正确答案：F23.编码氨基酸序列信息的核酸为:A、DNAB、RNAC、mRNAD、tRNAE、rRNAF、cDNAG、质粒正确答案：C24.基因敲入的技术可以包括:A、siRNAB、基因敲除C、ZFNsD、TALENsE、CRISPR/Cas9系统F、Cre-Lox重组系统G、反义DNA正确答案：CDEF25.制备重组 DNA 需要以下技术:A、载体准备B、PCR 扩增插入片段C、引物设计D、双酶切连接E、宿主细胞转化F、筛选重组克隆G、以上全部正确答案：G26.编码氨基酸序列的核酸为:A、DNAB、mRNAC、rRNAD、tRNAE、miRNAF、cDNAG、基因正确答案：B27.编码mRNA的DNA单链被称为:A、编码链B、上游链C、下游链D、正义链E、反义链F、互补链G、载体链正确答案：E28.Polymerase Chain Reaction (PCR) 的关键步骤不包括:A、模板变性B、引物与模板杂交C、新链延伸合成D、反向转录E、新链变性F、产物检测G、增幅后转化正确答案：D29.Polymerase Chain Reaction (PCR) 的关键步骤包括:A、模板预变性B、引物与模板退火C、新链延伸合成D、产物检测E、反义链合成F、连接酶反应G、以上全部正确答案：ABCD30.编码氨基酸的三联密码存在于:A、DNA双链上B、mRNA分子上C、tRNA分子上D、rRNA上E、盖帽RNA上F、启动子区域G、终止子区域正确答案：C31.抑制基因在体细胞中的表达方法有:A、siRNAB、基因敲除C、反义RNAD、CRISPR/Cas9E、基因激活F、启动子激活G、剪切反应激活正确答案：ABD32.检测mRNA表达水平的技术是:A、北方印迹B、西方印迹C、南方印迹D、东方印迹E、In situ杂交F、免疫组化G、芯片杂交正确答案：AEG33.编码氨基酸的三联密码存在于:A、DNA双链上B、mRNA分子上C、tRNA分子上D、rRNA 上E、盖帽RNA上F、启动子区域G、终止子区域正确答案：C34.可以提高基因在异源表达载体中的表达水平的方法不包括:A、扩增子克隆B、终止子序列调控C、引入变位信号D、改良启动子序列E、引入选择标记F、优化文库构建方法G、优化编码序列正确答案：F35.可以提取基因组DNA的方法有:A、PCR扩增B、Northern印迹C、Southern印迹D、过滤法E、质谱法F、限制性酶切G、盐析法正确答案：CG三、判断题（共38题，每题1分，共38分）1.基因敲入可以使用双链DNA分子实现。

分子生物学试题及答案(整理版)第一篇：DNA结构与特性1. DNA的全称是什么？DNA的全称是脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic acid）。

2. DNA是由哪些基本单元组成的？DNA由四种不同的碱基组成，称为腺嘌呤（A）、胸腺嘧啶（T）、鸟嘌呤（G）和胞嘧啶（C）。

3. DNA含有一条还是两条互补的链？DNA是由两条互补的链组成的，它们以双螺旋形式交织在一起。

4. DNA的双螺旋结构是由哪些部分组成的？DNA的双螺旋结构是由磷酸基团、脱氧核糖糖基和碱基三部分组成的。

5. DNA的碱基配对方式是什么？每个碱基都能与哪些其他碱基配对？DNA的碱基配对方式是A-T、C-G，即腺嘌呤与胸腺嘧啶互补，鸟嘌呤与胞嘧啶互补。

6. DNA的链方向是什么？DNA的两条链是相对方向相反的，即它们是“头对头”地排列在一起的。

7. DNA的复制方式是什么？该过程用哪种酶？DNA的复制方式是半保留复制，即每条新合成的DNA链都包含一个旧链和一个新链。

该过程用DNA聚合酶完成。

8. DNA序列编码的是什么？DNA序列编码的是生物体遗传信息的载体，包括基因和非编码区域。

9. DNA在哪些生物体中被发现？DNA存在于所有有细胞核和一些原核生物的细胞中。

10. DNA是如何被发现的？DNA是由克里克和沃森在1953年通过X射线晶体学研究得到的。

这项研究揭示了DNA的双螺旋结构，正式开启了分子生物学的新篇章。

第二篇：基因表达调控1. 什么是基因表达？基因表达是指基因信息从DNA转录为RNA，再转化为蛋白质的过程。

2. 基因表达是否受到调控？为什么？基因表达是受到调控的。

因为不同的细胞类型和不同的时期需要不同的基因表达模式来维持生命活动。

3. 给出三种调控基因表达的方式。

调控基因表达的方式有：转录水平调控、RNA后转录水平调节和转化水平调控。

4. 什么是启动子？在哪里找到它？启动子是一段DNA序列，位于转录开始位点上游，通常是几百个碱基对。

第八章重组DNA技术一、选择单选1、下列哪项不属于生物工程？A. PCR技术B.重组DNA技术C.蛋白质工程D.酶工程E.细胞工程2、重组DNA技术中所用的限制酶是哪类？A.Ⅰ型限制酶B.Ⅱ型限制酶C.Ⅲ型限制酶D.Ⅳ型限制酶E.Ⅴ型限制酶3、可以利用蓝白筛选法筛选用pUC转化的重组DNA克隆，是因为pUC包含以下哪种元件？A.复制起点B. amp RC.acZ'D.多克隆位点MCSE.调节基因lacI4、关于λ噬菌体，以下叙述错误的是A.基因组DNA的部分序列并非溶原性生长所必需B.基因组DNA感染大肠杆菌后形成闭环结构C.在溶原性生长时进行滚环复制D.复制时形成多联体结构E.其转化的细菌经过培养形成噬菌斑5、pBR322质粒包含两个抗性基因：氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，据此可以利用哪种方法筛选重组DNA克隆？A.α互补B. PCRC.插入失活D.核酸分子杂交E.蓝白筛选6、制备重组DNA首先要制备目的DNA，要保证目的DNA的量和纯度能满足重组要求。

常用的制备方法不包括A.PCR扩增B.从组织细胞分离基因组DNAC.化学合成D.逆转录合成cDNAE.限制酶截取7、第一种应用于临床的重组蛋白是A.基因工程疫苗B.基因工程抗体C.激素D. 生长因子E.细胞因子8、在重组DNA技术中，目的DNA与载体在体外连接的过程称为DNA的体外重组。

体外重组的方法不包括：A.加人工接头连接B.加同聚物尾连接C.互补黏端连接D.连接E.平移连接9、重组DNA的宿主细胞有原核细胞和真核细胞。

用于制备基因文库的宿主细胞主要是A.哺乳动物细胞B.大肠杆菌C.酵母D.枯草杆菌E.昆虫细胞10、哪种方法要求宿主细胞必须是感受态细胞？A.CaCl2法B.病毒感染法C.脂质体载体法D.显微注射法E.穿刺法11、蓝白筛选属于筛选重组DNA克隆方法的哪种？A.PCR分析B.插入失活分析C.核酸分子杂交分析D.酶切分析E.免疫分析12、重组DNA技术领域常用的质粒DNA是A. T病毒基因组DNA的一部分B. 细菌染色体外的独立遗传单位C. 细菌染色体DNA的一部分D. 真核细胞染色体外的独立遗传单位E. 真核细胞染色体DNA的一部分13、某限制性内切核酸酶切割5’…GGGGGG▼AATTCC…3’序列后产生A. 5’突出末端B. 5’或3’突出末端C. 5’及3’突出末端D. 3’突出末端E. 平末端14、“克隆”某一目的DNA的过程不包括A. 重组DNA分子导人受体细胞B. 外源基因与载体的拼接C. 基因载体的选择与构建D. 筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞E. 表达目的基因编码的蛋白质15、关于基因文库及其构建，以下叙述错误的是A.基因文库包括基因组文库和cDNA文库B.构建基因组文库常用的克隆载体是λ噬菌体、粘粒和酵母人工染色体系统C.目前构建的cDNA文库可以包含一种生物基因组所含的全部编码序列D.真核生物cDNA文库中的目的基因可以在原核细胞内表达活性产物E.构建cDNA文库要用到逆转录酶多选：1、用目的DNA和质粒制备重组DNA，下列哪些工具酶是必需的？A.DNA聚合酶B.核酸酶C.连接酶D.限制酶E.修饰酶2、影响限制酶切割效率的因素有那些？A.底物纯度B.底物甲基化程度C.底物结构D.反应温度E.反应体系组成3、哪些因素会降低限制酶的特异性?A.高浓度限制酶B.高浓度甘油C.低离子强度D.用Mn2+取代Mg2+E.高pH值4、限制酶的应用非常广泛，包括:A.DNA重组B.质粒改造C. DNA杂交D.探针制备E.基因定位5、关于重组DNA技术使用的DNA 连接酶A.用以将目的DNA与载体共价连接成重组DNAB.包括大肠杆菌DNA连接酶和T4 DNA连接酶C.大肠杆菌DNA连接酶需要NAD，而T4 DNA连接酶需要ATPD.大肠杆菌DNA连接酶用于连接切口或互补黏端E.T4 DNA连接酶用于连接互补黏端或平端6、重组DNA技术常用的DNA聚合酶有A.DNA聚合酶ⅠB. Klenow片段C. Taq DNA聚合酶D. 逆转录酶E. T4 DNA聚合酶7、载体分为克隆载体和表达载体两类。

DNA复制、修复及重组作业题一、名词解释1．中心法则2．半保留复制3．单链DNA结合蛋白4．复制叉5复制眼6.前导链7．冈崎片段8.后随链9.半不连续复制10．逆转录11．突变12.转录13．内含子14.外显子15复制子16滚环复制二、简答题1．描述大肠杆菌DNA聚合酶I在DNA生物合成过程中的作用。

2．试述DNA复制基本过程，总结DNA复制的基本规律。

3．什么是逆转录?病毒中的单链RNA如何利用逆转录酶合成双链DNA，并整合到寄主细胞的基因组中?4．DNA的损伤原因是什么?5.已知人类细胞基因组的大小约30亿bp，试计算一个二倍体细胞中DNA的总长度，这么长的DNA分子是如何装配到直径只有几微米的细胞核内的?6.试将下列DNA复制的有关步骤按正确的顺序排列①DNA指导的RNA聚合酶合成RNA引物②解旋蛋白打开DNA双链③DNA指导的DNA聚合酶合成的DNA互补链④DNA连接酶连接DNA片段⑤核酸内切酶切除RNA引物7.如何知道DNA复制中先要有RNA引物合成？8.参加DNA半保留复制的酶和蛋白质有哪些？简述其作用。

9.怎样知道DNA的复制是半保留式而不是全保留式的？请解释Meselson和Stahl关于大肠杆菌DNA复制实验的结果。

三、填空题1．Meselson-Stahl的DNA半保留复制证实试验中，区别不同DNA用_______方法。

分离不同DNA用_______方法，测定DNA含量用_______方法。

2．DNA聚合酶I(E．coli)的生物功能有_______、_______和_______作用。

用蛋白水解酶作用DNA聚合酶I，可将其分为大、小两个片段，其中_______片段叫Klenow片段，具有_______和_______作用，另外一个片段具有_______活性。

3．在E．coli中，使DNA链延长的主要聚合酶是_______，它由_______亚基组成。

DNA 聚合酶Ⅱ主要负责DNA的_______作用。

第一章1、概念：分子生物学DNA重组技术结构分子生物学“基因”的分子生物学定义：产生一条功能多肽链或功能RNA所必需的全部核甘酸序列。

2、用你现有的知识解释DNA为什么是遗传信息的载体。

3、关注了解近几年诺贝尔奖获得者及其科学发现。

第二章名词解释:DNA的C值：C值是一种生物的单倍体基因组DNA的总量。

C值矛盾（C Value paradox）：C值一般随生物进化而增加，研究发现某些两栖类的C值甚至比哺乳动物还大，而在两栖类中C值变化也很大，这种C值与生物进化（结构和组织的复杂性）矛盾的现象称为C值矛盾。

冈崎片段DNA的半保留复制（semi-conservative replication）：由亲代DNA生成子代DNA时，每个新形成的子代DNA中，一条链来自亲代DNA，而另一条链则是新合成的，这种复制方式称半保留复制。

半不连续复制（semi-conservative replication）：DNA复制时其中一条子链的合成是连续的，而另一条子链的合成是不连续的，故称半不连续复制。

复制子(Replicon)：从复制原点到终点，组成一个复制单位，叫复制子。

转座子（transposon）：存在于染色体DNA上可自主复制和位移的基本单位。

反转录转座子（retrotransposon）：指通过RNA为中介，反转录成DNA后进行转座的可动元件。

单链结合蛋白(SSBP-single-strand binding protein)：在DNA复制过程中，稳定已被解开的DNA单链，阻止复性和保护单链不被核酸酶降解。

DNA连接酶: 双链DNA中一条链有切口，一端是3ˊ-OH，另一端是5ˊ-磷酸基，连接酶可催化这两端形成磷酸二酯键，而使切口连接，不能将两条游离的DNA单链连接起来。

在DNA复制、损伤修复、重组等过程中起重要作用。

拓扑异构酶(DNA Topisomerase):拓扑异构酶І：使DNA一条链发生断裂和再连接，作用是松解（消除）负超螺旋。

生物化学dna重组试题及答案1. DNA重组技术中常用的载体有哪些？答：DNA重组技术中常用的载体包括质粒、噬菌体和人工染色体等。

2. 简述PCR技术的原理。

答：PCR技术（聚合酶链反应）是一种分子生物学方法，用于在体外快速扩增特定的DNA片段。

其原理是利用DNA聚合酶在体外进行DNA复制，通过反复的变性、退火和延伸三个步骤，实现DNA片段的指数级扩增。

3. 限制性内切酶在DNA重组中的作用是什么？答：限制性内切酶在DNA重组中的作用是识别并切割特定的DNA序列，产生具有黏性末端或平末端的DNA片段，便于将外源DNA插入载体中。

4. 什么是基因枪法？它在转基因植物中如何应用？答：基因枪法是一种将DNA直接导入植物细胞的方法，通过高速微粒子将DNA射入细胞。

在转基因植物中，基因枪法可用于将目标基因直接导入植物细胞，实现基因的稳定表达。

5. 描述DNA连接酶的作用。

答：DNA连接酶的作用是连接DNA片段的末端，形成磷酸二酯键，使两个DNA片段连接成一个完整的DNA分子。

6. 什么是Southern杂交技术？它在分子生物学研究中有何应用？答：Southern杂交技术是一种用于检测特定DNA序列的方法，通过将DNA样品转移到膜上，然后用标记的探针进行杂交，从而检测目标DNA序列的存在。

在分子生物学研究中，Southern杂交技术常用于基因克隆、基因表达分析和遗传疾病诊断等。

7. 简述DNA测序的基本原理。

答：DNA测序的基本原理是通过特定的化学或酶学方法，逐个确定DNA分子上的核苷酸序列。

常用的DNA测序方法包括Sanger测序法和下一代测序技术（NGS）。

8. 什么是基因编辑技术？请列举一种常用的基因编辑技术。

答：基因编辑技术是指通过特定的分子生物学手段，对生物体的基因序列进行精确的添加、删除或替换。

常用的基因编辑技术包括CRISPR-Cas9系统，它利用导向RNA（gRNA）引导Cas9酶识别并切割特定的DNA序列，实现基因的精确编辑。

第0章绪论一、名词解释1.分子生物学2.单克隆抗体二、填空1．分子生物学的研究内容主要包含（）、（）、（）三部分。

三、是非题1、20世纪60年代，Nirenberg建立了大肠杆菌无细胞蛋白合成体系。

研究结果发现poly(U)指导了多聚苯丙氨酸的合成，poly(G)指导甘氨酸的合成。

（×）四、简答题1. 分子生物学的概念是什么？2. 你对现代分子生物学的含义和包括的研究范围是怎么理解的？3. 分子生物学研究内容有哪些方面？4. 分子生物学发展前景如何？5. 人类基因组计划完成的社会意义和科学意义是什么？6．简述分子生物学发展史中的三大理论发现和三大技术发明。

7. 简述分子生物学的发展历程。

8. 二十一世纪生物学的新热点及领域是什么？9. 21世纪是生命科学的世纪。

20世纪后叶分子生物学的突破性成就，使生命科学在自然科学中的位置起了革命性的变化。

试阐述分子生物学研究领域的三大基本原则，三大支撑学科和研究的三大主要领域？答案：一、名词解释1.分子生物学：分子生物学就是研究生物大分子之间相互关系和作用的一门学科，而生物大分子主要是指基因和蛋白质两大类；分子生物学以遗传学、生物化学、细胞生物学等学科为基础，从分子水平上对生物体的多种生命现象进行研究。

2.单克隆抗体：只针对单一抗原决定簇起作用的抗体。

二、填空1.结构分子生物学，基因表达与调控，DNA重组技术三、是非题四、简答题1. 分子生物学的概念是什么？答案：有人把它定义得很广：从分子的形式来研究生物现象的学科。

但是这个定义使分子生物学难以和生物化学区分开来。

另一个定义要严格一些，因此更加有用：从分子水平来研究基因结构和功能。

从分子角度来解释基因的结构和活性是本书的主要内容。

2. 你对现代分子生物学的含义和包括的研究范围是怎么理解的？分子生物学是从分子水平研究生命本质的一门新兴边缘学科，它以核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息和细胞信息传递中的作用为研究对象，是当前生命科学中发展最快并正在与其它学科广泛交叉与渗透的重要前沿领域。

分⼦⽣物学问答题问答题第⼆章⼀、⽤于基因重组的载体需要具有哪些条件？1）具有⾃主复制能⼒，保证重组DNA分⼦可以在宿主细胞内得到扩增2）具有较多的拷贝数，易与宿主细胞的染⾊体DNA分开，便于分离提纯3）分⼦质量相对较⼩，易与操作，并能够容纳较⼤分⼦质量的⽬的基因4）具多个单⼀限制性内切酶位点，便于⽬的基因克隆5）有⼀个或多个筛选标记（如对抗⽣素的抗性、营养缺陷型或显⾊表型反应等）6）具有较⾼的遗传稳定性⼆、限制性内切酶主要分为⼏个类型？各有什么特点？限制性内切酶主要分为三种类型，即Ⅰ型酶、Ⅱ型酶和Ⅲ型酶。

Ⅰ型和Ⅲ型酶⼀般都是⼤的、多亚基的蛋⽩质复合物，同时具有内切酶活性和甲基化酶活性。

均需ATP ⽔解供能。

Ⅰ型酶能够识别特异的核苷酸序列，但是切割位点是随机的，Ⅲ型限制酶从距离识别位点⼀侧约25bq处单链切割DNA分⼦。

识别序列是⾮对称的，现在已知的酶数量相当少。

Ⅰ型和Ⅲ型酶在DNA重组技术中⽤处不⼤。

Ⅱ型限制性核酸内切酶只有⼀种多肽，通常以同源⼆聚体形式存在，核酸内切酶活性和甲基化作⽤活性是分开的。

⽆需ATP⽔解供能，仅需Mg2﹢参与。

具有序列特异性，可对靶DNA进⾏精确切割，在DNA 重组技术中有特别⼴泛的⽤途。

三、影响限制性内切酶作⽤的因素有哪些？DNA第底物的纯度、DNA的甲基化程度、DNA分⼦的结构、酶切反应的温度、酶切反应的时间、酶切反应的缓冲体系等四、DNA连接酶主要有哪些应⽤？1）作为DNA重组技术的重要⼯具酶，催化两个具有黏性末端或平末端的DNA⽚段5’-P和3’-OH之间形成磷酸⼆酯键，组成新的重组DNA分⼦。

2）在DNA复制中发挥接合缺⼝的作⽤，这种单链缺⼝是由复制叉上的不连续性所产⽣3）在DNA损伤修复、遗传重组、及DNA链的剪接中起缝合缺⼝的作⽤五、反转录病毒载体有哪些优点？1）具有⼴泛的哺乳动物细胞宿主2）可主动感染分裂细胞3）感染细胞后，病毒基因组反转录⽣成双链DNA，可整合到宿主染⾊体中，与染⾊体同时复制，持续表达外源基因4）基因组⾃⾝含有完整⾼效的调控元件六、腺病毒载体有哪些优点？1）可插⼊⼤⽚段外源基因，可达35kb2）宿主范围⼴，尤其⼈类是腺病毒的⾃然宿主3）不仅可感染分裂期细胞，也可感染⾮分裂细胞4）病毒滴度⾼，可达10^9-10^11pfu/ml5）可原位感染组织，如肺等6）重组载体进⼊细胞后并不整合到宿主染⾊体DNA上，⽽是游离于染⾊体外瞬时表达，安全性好七、腺病毒载体有哪些不⾜？①病毒基因组较⼤，构建载体较复杂②⼏乎可感染所有细胞，缺乏特异性③载体不发⽣整合，导致⽬的基因只能短暂表达，因此需要重复应⽤，可能诱发机体的免疫反应第三章①化学合成法已知⽬的基因的核苷酸序列，或根据基因产物的氨基酸序列推导出其核苷酸序列，可利⽤全⾃动DNA合成仪化学合成该⽬的基因。

现代分子生物学习题与答案一、填空题1．基因工程是70年代发展起来的遗传学的一个分支学科. 2．基因工程的两个基本特点是：<1>分子水平上的操作,<2>细胞水平上的表达3．基因克隆中三个基本要点是：克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择4．通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段,可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的限制性酶切图谱.5．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的,第一个大写字母取自属名的第一个字母,第二、三两个字母取自_种名的前两个字母,第四个字母则用株名表示.6．部分酶切可采取的措施有：<1>减少酶量；<2>缩短反应时间；<3>增大反应体积等.7．第一个分离的限制性内切核酸酶是EcoK；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_ EcoRl.8．限制性内切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的来源不同,但识别的序列都是GGCC,它们属于异源同工酶.9．DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_枯草杆菌蛋白酶切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段,具有两种酶活性：<1>5'-3'合成酶的活性；<2>3'-5'外切核酸酶的活性.10．为了防止DNA的自身环化,可用碱性磷酸酶去双链DNA_5’端的磷酸基团.11．EGTA是_Ca2+_离子螯合剂.12．测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶,它只有_5'-3'合成酶的活性,而没有3'-5'外切酶的活性.13．切口移位<nick translation>法标记DNA的基本原理在于利用DNA聚合酶I的__5'一3'外切核酸酶和5'一3'合成酶的作用.14．欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式,通常可采用____S1核酸酶切割或DNA聚合酶补平.15．反转录酶除了催化DNA的合成外,还具有__核酸水解酶H的作用,可以将DNA-RNA杂种双链中的_RNA_水解掉.16．基因工程中有3种主要类型的载体：质粒DNA,病毒DNA,质粒和病毒DNA杂合体.17．就克隆一个基因<DNA片段>来说,最简单的质粒载体也必需包括三个部分：__复制区：含有复制起点；选择标记：主要是抗性基因；克隆位点：便于外源DNA的插入.另外,一个理想的质粒载体必须具有低分子量.18．一个带有质粒的细菌在有EB的培养液中培养一段时间后,一部分细胞中已测不出质粒,这种现象叫质粒消除<或治愈>.19．pBR322是一种改造型的质粒,它的复制子来源于pMBl,它的四环素抗性基因来自于pSCl01,它的氨苄青霉素抗性基因来自于pSF2124<R质粒>.20．YAC的最大容载能力是1000kb,BAC载体的最大容载能力是300kb.21．pSCl01是一种严紧复制的质粒.22．pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体.pUC系列的载体是通过pBR322和M13两种质粒改造而来.它的复制子来自pMBl,Amp抗性基因则是来自转座子.23．噬菌体之所以被选为基因工程载体,主要有两方面的原因：一是它在细菌中能够大量繁殖,这样有利于外源DNA的扩增；二是对某些噬菌体<如λ噬菌>的遗传结构和功能研究得比较清楚,其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽. 24．野生型的M13不适合用作基因工程载体,主要原因是没有合适的限制性内切核酸酶识别位点和选择标记.25．黏粒<cosmid>是质粒—噬菌体杂合载体,它的复制子来自质粒、COS位点序列来自λ噬菌体,最大的克隆片段达到45 kb.26．野生型的λ噬菌体DNA不宜作为基因工程载体,原因是：<1>分子量大,<2>酶的多切点,<3>无选择标记27．噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的,其中来自质粒的主要结构是复制区,而来自噬菌体的主要结构是IG区. 28． 噬菌体载体由于受到包装的限制,插入外源DNA片段后,总的长度应在噬菌体基因组的75％～105％的X围内.29．在分离DNA时要使用金属离子螯合剂,如EDTA和柠檬酸钠等,其目的是螯合Mg2+离子,抑制核酸酶的活性.30．用乙醇沉淀DNA时,通常要在DNA溶液中加人单价的阳离子,如NaCl和NaAc,其目的是中和DNA分子的负电荷,增加DNA分子间的凝聚力.31．引物在基因工程中至少有4个方面的用途：<1>合成探针；<2>合成cDNA；<3>用于PCR反应；<4>进行序列分析32．Clark发现用Taq DNA聚合酶得到的PCR反应产物不是平末端,而是有一个突出碱基末端的双链DNA分子.根据这一发现设计了克隆PCR产物的T—载体.33．在cDNA的合成中要用到S1核酸酶,其作用是切除在第二链合成时形成的发夹环34．乙醇沉淀DNA的原理是乙醇使DNA分子脱水. 35．假定克隆一个编码某种蛋白质的基因,必须考虑其表达的三个基本条件：<1>保持正确的可读框<2>能够使其转录的启动子<3>具有翻译的起始和终止信号36．受体细胞的感受态是接受外源DNA的生理状态_. 37．DNA重组连接的方法大致分为四种：<1>黏性末端连接；<2>平末端连接；<3>同聚物接尾连接；<4>接头连接法. 38．将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个基因组DNA克隆_,各种此类质粒的集合体称之为构建了一个基因组DNA文库.39．将含有一个mRNA的DNA拷贝的克隆称作一个_cDNA克隆,源于同一批RNA制备物的克隆群则构建了一个_ cDNA文库_.40．只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成,用_聚合酶链式反应<PCR>可以将这段DNA进行百万倍的扩增. 41．人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为0︒C 时吸附DNA, 42︒C _时摄人DNA.42．目前,在重组体的筛选中,已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法.大致可以分为：<1>遗传学方法；<2>物理筛选法；<3>核酸杂交法；<4>表达产物分析法等.43．PCR扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法,它适合于_插入外源片段的种类较多,大小又极为相似的重组体的筛选. 44．核酸杂交探针可分为两大类：DNA探针和RNA探针.其中DNA探针又分为___基因组DNA探针和cDNA 探针. 45．如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生5’突出的黏性末端,则可以用_Klenow酶填补的方法_进行3’末端标记.如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3’突出的黏性末端,可以用__T4DNA聚合酶进行3’末端标记.46．单链DNA探针的标记可以采用下列方法：<1>用M13噬菌体载体合成单链DNA探针；<2>从mRNA反转录合成单链cDNA探针；<3>用不对称PCR合成单链DNA探针.47．根据Northern杂交的结果可以说明：外源基因是否进行了转录_.48．差示杂交<differential hybridization>技术需要__两种不同的细胞群体能够表达不同的基因,即在一个群体中能够表达一些基因,而在另一个细胞群体中不能表达这些基因.49．RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开,然后被转移到一X硝酸纤维素膜<尼龙膜>上,同一放射DNA探针杂交的技术称__ Northern印迹_. 50．在__Southern印迹_技术中,DNA限制性片段经凝胶电泳分离后,被转移到硝酸纤维素膜<或尼龙膜>上,然后与放射性的DNA探针杂交.51．可用T4 DNA聚合酶进行平末端的DNA标记,因为这种酶具有__5’→3’合成酶_和_3’→5’外切核酸酶_的活性. 52．根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体,必需考虑三种因素：<1>克隆的是完整的基因；<2>使用的是表达载体；<3>不含内含子.53．Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别：<1>印迹的对象不同：Northern是RNA,Southern是DNA；<2>电泳条件不同,前者是变性条件,后者是非变性条件. 54．放射免疫筛选的原理基于以下三点：<1>抗体能够被吸附到固体支持物上；<2>同一个抗原可以同几种抗体结合；<3>抗体能够被标记二、选择题<单选或多选>1．因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是< ><a>A．Kornberg <b>W．Gilbert <c>P．Berg <d>B．McClintock2．第一个作为重组DNA载体的质粒是< ><a>pBR322 <b>ColEl <c>pSCl01 <d>pUCl83．关于宿主控制的限制修饰现象的本质,下列描述中只有< >不太恰当.<a>由作用于同一DNA序列的两种酶构成<b>这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶<c>这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA 进行修饰<d>不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统4．Ⅱ型限制性内切核酸酶：< ><a>有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列<b>仅有内切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提供<c>限制性识别非甲基化的核苷酸序列<d>有外切核酸酶和甲基化酶活性<e>仅有外切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提供5．下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?< ><a>限制酶是外切酶而不是内切酶<b>限制酶在特异序列<识别位点>对DNA进行切割<c>同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的<d>一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA,产生黏末端<e>一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA,产生平末端6．第一个被分离的Ⅱ类酶是：< ><a>EcoK <b>HindⅢ<c>HindⅡ<d>EcoB7．在下列进行DNA部分酶切的条件中,控制那一项最好?< ><a>反应时间<b>酶量<c>反应体积<d>酶反应的温度8．在下列试剂中,那一种可以螯合Ca2+离子?< ><a>EDTA <b>柠檬酸钠<c>SDS <d>EGTA 9．在下列工具酶中,那一种可以被EGTA抑制活性?< ><a>S1单链核酸酶<b>末端转移酶<c>碱性磷酸酶<d>Bal 31核酸酶10．限制性内切核酸酶可以特异性地识别：< ><a>双链DNA的特定碱基对<b>双链DNA的特定碱基序列<c>特定的三联密码<d>以上都正确11．下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中,正确一项的是< >.<a>Sau3A I <b>E．coRI <c>hind III <d>Sau 3A1 12．限制性内切核酸酶的星号活性是指：< ><a>在非常规条件下,识别和切割序列发生变化的活性.<b>活性大大提高<c>切割速度大大加快<d>识别序列与原来的完全不同13．下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?< ><a>甘油含量过高<b>反应体系中含有有机溶剂<c>含有非Mg2+的二价阳离子<d>酶切反应时酶浓度过低14．关于宿主控制的限制修饰现象的本质,下列描述中只有< >不太恰当<a>由作用于同一DNA序列的两种酶构成<b>这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶<c>这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA 进行修饰<d>不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统15．在长模板链的指导下引物延伸合成长的DNA互补链时应选用< ><a>T4DNA聚合酶<b>Klenow酶．<c>大肠杆菌DNA聚合酶I <d>T7DNA聚合酶16．末端转移酶是合成酶类,< ><a>作用时不需要模板<b>在Ca2+的存在下,可以在突出的3,末端延长DNA链<c>在Ca2+的存在下,可以在隐蔽的3,末端延长DNA链<d>上述说法有两种是正确的17．在基因工程中,可用碱性磷酸酶< ><a>防止DNA的自身环化<b>同多核苷酸激酶一起进行DNA的5,末端标记<c>制备突出的3,末端<d>上述说法都正确18．下列酶中,除< >外都具有磷酸酶的活性<a>λ核酸外切酶<b>外切酶Ⅲ<c>单核苷酸激酶<d>碱性磷酸酶19．下列哪一种酶作用时需要引物? < ><a>限制酶<b>末端转移酶<c>反转录酶<d>DNA连接酶20．S1核酸酶的功能是< ><a>切割双链的DNA <b>切割单链的RNA <c>切割发夹环<d>以上有两项是正确的21．Klenow酶与DNA聚合酶相比,前者丧失了< >的活性.<a>5,--3,合成酶, <b>3,--5,外切酶<c>5,---3,外切酶<d>转移酶22．下面关于松弛型质粒<relaxed plasmid>性质的描述中,< >是不正确的<a>质粒的复制只受本身的遗传结构的控制,而不受染色体复制机制的制约,因而有较多的拷贝数<b>可以在氯霉素作用下进行扩增<c>通常带有抗药性标记<d>同严紧型质粒融合后,杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子23．基因工程中所用的质粒载体大多是改造过的,真正的天然质粒载体很少,在下列载体中只有< >被视为用作基因工程载体的天然质粒载体<a>pBR322 <b>pSCl01 <c>pUBll0 <d>pUCl824．下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大?< ><a>质粒<b>黏粒<c>酵母人工染色体<YAC><d> 噬菌体<e> cDNA表达载体25. 松弛型质粒：< ><a>在寄主细胞中拷贝数较多<b>可用氯霉素扩增<c>一般没有选择标记<d>上述<a>、<b>两项正确26．Col El是惟一用作基因工程载体的自然质粒,这种质粒：< ><a>是松弛复制型〔b>具有,四环素抗性<c>能被氯霉素扩增<d>能产生肠杆菌素27．同一种质粒DNA,以三种不同的形式存在,电泳时,它们的迁移速率是：< ><a>OCDNA>SCDNA>LDNA<b>SCDNA>LDNA>OCDNA<c>LDNA>OCDNA>SCDNA<d>SCDNA>OCDNA>LDNA28．pBR322是一种改造型的质粒,含有两个抗性基因,其中四环素抗性基因来自：< ><a>ColEl <b>Ri质粒<c>pSCl01 <d>pUCl8 29．关于穿梭质粒载体,下面哪一种说法最正确?< ><a>在不同的宿主中具有不同的复制机制<b>在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点<c>在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶<d>在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率30．能够用来克隆32kb以下大小的外源片段的质粒载体是< ><a>charomid <b>plasmid <C>cosmid <d>phagemid 31．第一个作为重组DNA载体的质粒是< ><a>pBR322 <b>ColEl <c>pSCl01 <d>pUCl832. Ti质粒：< ><a>可从农杆菌转到植物细胞中<b>作为双链DNA 被转移<c>在植物中导致肿瘤<d>介导冠瘿碱的合成,作为细菌的营养物和植物的生长激素<e>需要细菌的vir基因帮助转移<f>在植物细胞中作为染色体外质粒33．黏粒<cosmid>是一种人工建造的载体,< ><a>它具有COS位点,因而可进行体外包装<b>它具有质粒DNA的复制特性<c>进入受体细胞后,可引起裂解反应<d>进入受体细胞后,可引起溶源化反应34．有两种确定核酸中核苷酸序列的方法：化学序列分析法<Maxam-Glbert>和酶学序列分析法<Sanger>.酶学测序法的基本原理／优点是：< ><a>碱基与特殊染料间不同的相互作用<b>一个合成引物的延伸和DNA修复合成的可靠终止<c>限制性位点与DNA末端标记的相关性<d>可同时对DNA双螺旋的两条链进行测序<e>反应是DNA特异的,RNA不会带来干扰.这样既减少纯化步骤,也节约了开支.35．关于cDNA的最正确的说法是：< ><a>同mRNA互补的单链DNA <b>同mRNA 互补的双链DNA<c>以mRNA为模板合成的双链DNA <d>以上都正确36．用碱法分离质粒DNA时,染色体DNA之所以可以被除去,是因为：< ><a>染色体DNA断成了碎片<b>染色体DNA分子量大,而不能释放<c>染色体变性后来不与复性<d>染色体未同蛋白质分开而沉淀37. 关于碱解法分离质粒DNA,下面哪一种说法不正确?< ><a>溶液I的作用是悬浮菌体<b>溶液Ⅱ的作用是使DNA变性<c>溶液Ⅲ的作用是使DNA复性<d>质粒DNA分子小,所以没有变性,染色体变性后不能复性38. Clark做了一个有趣的实验,发现TaqDNA聚合酶可以不需要模板,在双链DNA的末端加一个碱基,主要是加< > ．<a>dGTP <b>dATP <c>dCTP <d>dTTP 39．根据构建方法的不同,基因文库分为基因组文库、cDNA 文库等.在下列文库中,< >属cDNA文库<a> YAC文库<b> MAC文库<c> 扣减文库<d> BAC文库40．下面关于多克隆位点<multiple clone site,MCS>的描述,不正确的—句是< ><a>仅位于质粒载体中<b>具有多种酶的识别序列<c>不同酶的识别序列可以有重叠<d>一般是人工合成后添加到载体中41．在cDNA技术中,所形成的发夹环可用< ><a>限制性内切核酸酶切除<b>用3¹外切核酸酶切除<c>用S1核酸酶切除<d>用5¹外切核酸酶切除42．在DNA的酶切反应系统中,通常：< ><a>用SSC缓冲液<b>加入Mg2+作辅助因子<c>加入BSA等保护剂<d>上述说法中,有两项是正确的43．黏性末端连接法,不仅操作方便,而且< ><a>产生新切点<b>易于回收外源片段<c>载体不易环化<d>影响外源基因的表达44．在下列表型中,< >是基因工程上理想的受体菌表型<a>r+m+rec*<b>r-m-rec-<C>r-m-rec+ <d>r+m+rec-45．关于DNA接头在基因工程中的作用,下列说法中哪一项不正确?< ><a>给外源DNA添加适当的切点<b>人工构建载体<c>调整外源基因的可读框<d>增加调控元件46．cDNA文库包括该种生物的< ><a>某些蛋白质的结构基因<b>所有蛋白质的结构基因<c>所有结构基因<d>内含子和调控区47．下列关于建立cDNA文库的叙述中,哪一项是错误的?< ><a>从特定组织或细胞中提取DNA或RNA<b>用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA<c>以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA<d>新合成的双链DNA甲基化48．下列对黏性末端连接法的评价中,哪一项是不正确的?< ><a>操作方便<b>易于回收片段<c>易于定向重组<d>载体易于自身环化,降低重组率49．关于感受态细胞性质的描述,下面哪一种说法不正确?< ><功具有可诱导性<b>具有可转移性<c>细菌生长的任何时期都可以出现<d>不同细菌出现感受态的比例是不同的50．下面关于用T4多核苷酸激酶标记5' 端制备探针的描述中< >是不正确的.<a>既能标记DNA,又能标记RNA <b>既能标记双链DNA又能标记单链DNA<c>只能标记突出的5' 端不能标记其他类型末端<d>DNA或RNA必须有5'-OH的存在51．Southem印迹的DNA探针< >杂交.<a>只与完全相同的片段<b>可与任何含有相同序列的DNA片段<c>可与任何含有互补序列的DNA片段’．<d>可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段<e>以上都是52．用下列方法进行重组体的筛选,只有< >说明外源基因进行了表达.<a>Southem印迹杂交<b>Northem印迹杂交<c>Western印迹<d>原位菌落杂交53．下列哪一个不是Southern印迹法的步骤?< ><a>用限制酶消化DNA <a>DNA与载体的连接<c>用凝胶电泳分离DNA片段<d>DNA片段转移至硝酸纤维素膜上<e>用一个标记的探针与膜杂交54．报告基因< ><a>以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列<b>以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区<c>能用于检测启动子的活性<d>能用于确定启动子何时何处有活性55．在利用lacZ失活的显色反应筛选法中,IPTG的作用是< ><a>诱导宿主的α肽的合成<b>诱导宿主的ω肽的合成<c>作为酶的作用底物<d>作为显色反应的指示剂56. 切口移位是指在< >作用下,使< >带上放射性标记.<a>DNA聚合酶I,RNA <b>DNA聚合酶I,DNA<c>DNA聚合酶Ⅲ,RNA <d>DNA聚合酶Ⅲ,DNA 57．用于核酸分子杂交的探针可以是放射性标记的< ><a>DNA <b>RNA <c>抗体<d>抗原58．Southern印迹是用DNA探针检测DNA片段,而Northern 印迹则是：< ><a>用RNA探针检测DNA片段<b>用RNA探针检测RNA片段<c>用DNA探针检测RNA片段<d>用DNA探针检测蛋白质片段59．用免疫化学法筛选重组体的原理是< ><a>根据外源基因的表达<b>根据载体基因的表达<c>根据mRNA同DNA的杂交<d>根据DNA同DNA的杂交60．随机引物标记探针,下列各项中哪一项是不正确的?< ><a>双链DNA、单链DNA、RNA都是可以标记的<b>不需要用Dnase I预处理<c>反应时可用Klenow酶<d>反应时可用DNA 聚合酶161．在切口移位标记DNA探针时只能使用< ><a>Klenow酶<b>DNA聚合酶I <c>DNA聚合酶Ⅱ<d>DNA聚合酶Ⅲ62．要对一双链的DNA分子进行3¹末端标记,可用< ><a>Klenow酶<b>DNA聚合酶I <c>T4DNA聚合酶<d>T7DNA聚合酶答案1．c；2．c；3．b；4．b 5．b,C,d,e；6．c；7．b；8．d；9．d；10．B；11．d；12．a；13．d；14．b 15．d；16．c；17．a,b；18．a；19．c；20．d；21．c；22．C；23．b；24．C；25．d；26．a,C,d；27．b；28．c；29．b；30．a；31．c；32．a,c,d,e, 33．a,b,c；34．b；35．c；36．c；37．d；38．b；39．c；40．a；41．c；42．a,b,c；43．b；44．b；45．d；46．a；47．a；48．c；49．c；50．b；51．c；52．c；53．b；54．a,c,d；55．a；56．b；57．a,b；58．c；59．a；60．d；61．b；62．c；三、简答题1．说明Sanger DNA测序法的原理.Sanger DNA测序法是建立在两个基本原理之上：<1>核酸是依赖于模板在聚合酶的作用下由5'端向3'端聚合<DNA聚合酶参与了细菌修复DNA合成过程>；<2>可延伸的引物必须能提供游离的3'羟基末端,双脱氧核苷酸由于缺少游离的3'羟基末端,因此会终止聚合反应的进行.如果分别用4种双脱氧核苷酸终止反应,则会获得4组长度不同的DNA片段.通过比较所有DNA片段的长度可以得知核苷酸的序列.2．某学生在用EcoRI切割外源DNA片段时,出现了星号活性,请分析可能的原因?盐离子浓度不对,温度不对,甘油浓度过高.3．在序列5'-CGAACA TA TGGAGT-3'中含有一个6bp的Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列,该位点的序列可能是什么?回文序列是：5'-CATA TG-3,4．下面几种序列中你认为哪一个<哪些>最有可能是Ⅱ类酶的识别序列：GAATCG,AAATTT, GATATC, ACGGCA? 为什么?GA TATC；AAA TTT,因为它们是回文序列.5．当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时,若要进行双酶切,应采取什么措施?为什么?注意星活性,先低盐,后高盐；先低温酶,后高温酶；并且可以直接在换酶前将第一种酶失活,再加第二种酶,否则,易产生星活性.或使用通用缓冲液.6．为什么反转录酶在聚合反应中会出错?由于反转录酶缺少在E．coli DNA聚合酶中起校正作用的3'-5'外切核酸酶活性,所以聚合反应往往会出错,在高浓度的dNTP和Mg2+下,每500个碱基中可能有一个错配.7．什么是测序酶<sequenaseTM>?所谓测序酶即是修饰了的T7 DNA聚合酶,是采用缺失的方法,从外切核酸酶结构域中除去28个氨基酸,这样使T7 DNA聚合酶完全失去了3'-5'的外切核酸酶活性,只有5'---3'聚合酶的活性,而且聚合能力提高了3～9倍,测序时常用此酶.8．什么是S1核酸酶作图<S1 nuclease mapping>?S1核酸酶作图是一种对RNA转录产物的末端和剪接位点进行作图的方法9 Y AC载体具有什么样的功能性DNA序列?为什么在克隆大片段时,YAC具有优越性?YAC带有天然染色体所有的功能元件,包括一个着丝粒,一个DNA复制起点,两个端粒.Y AC能够容纳长达几百kb的外源DNA,这是质粒和黏粒办不到的.大片段的插入更有可能包含完整的基因,在染色体步移中每次允许更大的步移距离,同时能够减少完整基因组文库所需的克隆数目.10．列举质粒载体必须具备的4个基本特性.<1>独立复制；<2>有选择标记；<3>有独特的酶切位点；<4>能转化但不扩散. 11．什么叫穿梭载体？含有细菌质粒和克隆的真核生物DNA片段的杂种质粒,有两个复制起点和既能在细菌又能在真核细胞中进行选择的选择标记,所以,很容易从一宿主转到另一个宿主<来回穿梭>. 12．如何将野生型的λ噬菌体改造成为一个理想的载体?<1>削减分子量<除去非必需区和整合区>；<2>削减酶切位点；<3>添加选择标记；<4>引入终止突变13．PCR的基本原理是什么?用PCR扩增某一基因,必须预先得到什么样的信息?<1>DNA半保留复制的原理,在体外进行DNA的变性、复性和引物延伸.<2>至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列.14．cDNA克隆与基因组克隆有何不同?基因组克隆包含所有不在cDNA中出现的内含子.15．怎样将一个平末端DNA片段插入到EcoR I限制位点中去?化学合成一些长为10bp含有EcoRI识别位点的短的DNA片段,然后与待克隆片段两端连接起来,如果用EcoRI切割这种连接片段,就会产生EcoRI的单链末端.这种片段就可以插入到任何EcoRI的限制性内切酶位点中16．简述以黏粒为载体构建基因文库的原理.<1>COS位点可以自身环化；<2>可以利用COS位点包装λ噬菌体颗粒；<3>可以感染寄主细胞；<4>利用质粒复制子复制,不整合、不裂解.17．酵母人工染色体要在酵母细胞中稳定存在,必须有哪些基本的结构?<1>着丝粒；<2>端粒；<3>ARS序列.18．何谓YAC? 主要特性是什么?<1>含有来自其他生物DNA的酵母人工染色体,叫YAC；<2>主要特性是可以克隆较大的外源片段.19．Muller的PCR反应同大肠杆菌体内的DNA复制有哪些不同?你认为根本的差别在哪里?PCR用双引物,体内复制用单引物.20．欲将一真核生物的结构基因克隆后转移到原核生物<如E．coli>中进行表达,克隆时应注意哪些问题?应注意的问题有：启动子、密码子、剪接、分泌.21．假定你分离到一个E．coli的Thy- 突变体,并推测有可能是ThyA基因突变.请设计一个方案用PCR从染色体DNA扩增突变的ThyA基因,测定突变的序列.<注：E．coli 野生型的ThyA基因的序列是已知的>为了扩增突变体的thyA基因,先设计一对引物,其中一个引物的序列与thyA基因的5’端相同,另一个引物同该基因的3’端互补.在引物的5’端加上合适Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列,以便于后来的克隆.将染色体DNA同引物混合后,进行PCR扩增.然后进行琼脂糖凝胶电泳,纯化扩增片段,可以直接测序或克隆到合适的载体再测序.22．你在做Southern印迹分析,并且刚完成了凝胶电泳这一步.根据方案,下面一步骤是用NaOH溶液浸泡凝胶,使DNA变性为单链.为了节省时间,你略过了这一步,直接将DNA从凝胶转至硝酸纤维素膜上.然后用标记探针杂交,最后发现放射自显影片是空白.错在哪里?如果你的杂交探针是双链的,可能因为在加人杂交混合物之前忘记将探针变性而得到空白的放射自显影结果.23．切口移位<nick translation>标记探针的主要步骤有哪些?<1>DNaseI造成切口；<2>DNA聚合酶III的5’→3’外切核酸酶进行切割；<3>DNA聚合酶Ⅲ的5’→3’合成酶进行修补；<4>在修补过程中,随着切口<nick>的移动,将放射性的底物掺人到双链DNA中.24．用EcoRI和Hind Ⅲ分别切割同一来源的染色体DNA,并进行克隆,在前者的克隆中筛选到A基因,但在后者的克隆中未筛选到A基因,请说明原因.原因是：HindⅢ的切点在A基因内.25．什么是Western印迹?它与Southern印迹有什么不同?Western印迹是将蛋白质经电泳分离后从凝胶中转移到固相支持物上,然后用特异性的抗体进行检测.它与Southern的不同在于探针的性质不同,在Western印迹中使用的探针是抗。