C2-2 分子克隆的工具酶
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分⼦⽣物学试卷(含答案)分⼦⽣物学试卷姓名:__________ 考试时间:_______ ___⼀、填空题,根据题意,将正确答案补充完整(本⼤题满分20分,每⼩题2分)1. 反式作⽤因⼦可划分为( )、组织特异性转录因⼦和( )三类。
2. 分⼦克隆中常⽤的⼯具酶有( )、( )、( )、( )。
3. 常⽤的核酸探针包括( )、( )和( )。
4. 限制性核酸内切酶的作⽤特点是识别位点的DNA序列呈⼆重旋转对称,即具有( )、切割DNA均产⽣含( )和3'-羟基的末端、错位切割产⽣具有5'-或3'-突出的粘性末端;⽽沿对称轴切割双链DNA产⽣平头末端,也称( )、少数不同的限制酶可识别和切割相同的( )。
5. 顺式作⽤元件按功能可划分为( )、( )、( )和( )。
6. 影响PCR的因素有( )、( )、耐热DNA聚合酶活性和⽤量、( )、( )、PH、温度、( )。
7. 原核细胞中各种RNA是催化⼀种酶催化( )种RNA⽣成的,⽽真核细胞基因的转录分别由( )种RNA聚合酶催化,其中rRNA基因由( )转录,hnRNA基因由( )转录,各类⼩分⼦量RNA则是( )的产物。
8. 体外重组常⽤⽅法有( )、平齐末端连接法、( )、( )和适配⼦连接法。
9. DNA切除修复需要的酶有( )、 ( )、( )。
10. PCR技术的基本过程是( )、( )、( )。
⼆、判断题,以下各题只有对错两个选项(本⼤题满分10分,每⼩题1分)1. Km值是酶的特性常数之⼀,与酶的浓度、pH、离⼦强度等条件或因素⽆关。
( )2. 有两个核酸制剂A和B,A的A250/A280=2.0,B的A250/A280=1.5,因此可判定制剂A的纯度⽐制剂B的要⾼。
( )3. 卫星DNA是⼀类⾼度重复序列,通常由串联重复序列组成。
( )4. ⽬前已知的G蛋⽩都是由α和βγ亚基组成的。
( )5. ⽣物膜中脂质的流动性受胆固醇含量的影响。
常见限制性内切酶识别序列(酶切位点)(BamHI、EcoRI、HindIII、NdeI、XhoI等)分子生物学实验室技术2009-11-17 17:46:32 阅读2235 评论2 字号:大中小订阅.在分子克隆实验中,限制性内切酶是必不可少的工具酶。
无论是构建克隆载体还是表达载体,要根据载体选择合适的内切酶(当然,使用T载就不必考虑了)。
先将引物设计好,然后添加酶切识别序列到引物5’端(英语怎么说?)。
常用的内切酶比如BamHI、EcoRI、HindIII、NdeI、XhoI等可能你都已经记住了它们的识别序列,不过为了保险起见,还是得查证一下。
下面,我就总结了一些常用的内切酶的识别序列,仅供各位参考。
下面这些内切酶都属于II型内切酶。
先介绍一下什么是II型内切酶吧。
The Type II restriction systems typically contain individual restriction enzymes and modification enzymes encoded by separate genes. The Type II restriction enzymes typically recognize specific DNA sequences and cleave at constant positions at or close to that sequence to produce 5-phosphates and 3-hydroxyls. Usually they require Mg 2+ ions as a cofactor, although some have more exotic requirements. The methyltransferases usually recognize the same sequence although some are more promiscuous. Three types of DNA methyltransferases have been found as part of Type II R-M systems forming either C5-methylcytosine, N4-methylcytosine or N6-methyladenine.ApaI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5'GGGCC^C 3'BamHI(类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' G^GATCC 3'BglII (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' A^GATCT 3'EcoRI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' G^AA TTC 3'HindIII (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' A^AGCTT 3'KpnI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' GGTAC^C 3'NcoI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' C^CA TGG 3'NdeI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' CA^TATG 3'NheI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' G^CTAGC 3'NotI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' GC^GGCCGC 3'SacI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' GAGCT^C 3'SalI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' G^TCGAC 3'SphI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' GCA TG^C 3'XbaI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' T^CTAGA 3'XhoI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' C^TCGAG 3'当然,上面总结的这些肯定不全,要查找更多内切酶的识别序列,你还可以选择下面几种方法:1. 查你所使用的内切酶的公司的目录或者网站;NEB网站上提供的识别序列图表下载2. 用软件如:Primer Premier5.0或Bioedit等,这些软件均提供了内切酶识别序列的信息;3. 推荐到NEB的REBASE数据库去查(网址:/rebase/rebase.html)当你设计好引物,添加上了内切酶识别序列,下一步或许是添加保护碱基了,可以参考:NEB公司网站提供的保护碱基参考表下载NEB公司网站上关于设计PCR引物保护碱基的参考双酶切buffer的选择(MBI、罗氏、NEB、Promega、Takara)这里再给大家推荐一种新的不需要连接反应的分子克隆方法,优点包括:①设计引物不必考虑选择什么酶切位点;②不必考虑保护碱基的问题;③不必每次都选择合适的酶来酶切质粒制备载体;④而且不需要DNA连接酶;⑤假阳性几率低(因为没有连接反应这一步,载体自连的问题没有了)。
名词解说操控子:是原核生物基因的一个基本转录单位,由编码序列及上游的调控序列构成。
编码序列往常包含几个功能有关的构造基因,调控序列有启动序列(启动子)、操控序列(操控基因)及其余调理序列构成。
顺式作用元件:是真核基因变大调控转录过程的特别DNA 序列,于转录因子联合而起作用,往常包含启动子、增强子、缄默子等。
反式作用元件:与其余基因的顺式作用元件联合,调理基因转录活性的蛋白质因子,依据功能不一样分为基因转录因子和特异性转录因子。
启动子:位于构造基因上游、与RNA 聚合酶辨别、联合的特异DNA 序列,与基因转录起始有关。
同源重组:是指发生在同源序列见得重组,它经过链的断裂和再连结,在两个DNA 分子同源序列间进行单链或双链的互换。
又称基因重组。
DNA 克隆:将重组分子导入适合指在体外对 DNA 分子依据既定目的和方案进行人工重组,细胞内,使其在细胞扩增和生殖,进而获取该DNA 分子大批拷贝的过程称为分子克隆,又叫基因克隆或重组 DNA 技术。
基因工程:在体外将目的基因和载体DNA 依据既定的目的基因进行人工重组,并将重组体导入宿主细胞,经过无性生殖和表达获取所需核酸、蛋白质、生物新品种。
包含转基因动物、植物、基因工程生产药物、基因诊疗和基因治疗等。
限制性核酸内切酶:指一类能辨别和切割双链DNA 分子内特定的碱基次序的核酸水解酶,绝大部分是从原核细胞中提取的,可分为三类,此中Ⅱ型是分子克隆中最常用的工具酶。
pBR322 :是研究最早、最清楚的质粒,其所有次序为4363bp,含有一个复制原点、一个Amp r 和 Tet r标志,有限制酶酶切位点,可供外源性基因插入,利用这种遗传标志,有益于挑选出重组转变菌。
gDNA 文库:即基因组 DNA 文库,是指存在于转变菌内、由克隆载体所携带的所有基因组DNA 的会合。
它涵盖了基因组所有基因信息。
cDNA 文库:是细胞总mRNA 的克隆,文库只包含表达蛋白质或多肽的基因。
10.重组体的筛选常用的方法有哪些?简述各种方法的原理。
1、表型筛选法:DNA体外重组所用的载体常常携带一个或几个可供选择的遗传标记或标记基因,当外源基因插入载体并转入受体细胞后,使受体细胞可获得或缺失这些标记表型,可以通过插入失活筛选阳性克隆。
2、抗药性标志的筛选:如果克隆载体带有某种抗药性标志基因,转化后只有含这种抗药基因的转化子细菌才能在含该抗药菌素的平板上幸存并形成菌落,[ 这样就可将转化菌与非转化菌区别开来。
3、B---半乳糖苷酶系筛选:很多4、蓝白筛选45、DNA损伤的突变有哪些类型?1、碱基对的置换2、颠换:原为嘧啶突变后变为嘌呤或原为嘌呤[突变后为嘧啶3、移码突变丢失或插入一个或几个核苷酸4、二聚体的形成5、重排;DNA分子内部发生较大片段的交换F1.分子克隆中常用的工具酶有哪些?各有何用途?1.限制性内切酶:1.DNA重组,2,构建新质粒,3,组建DNA物理图谱2.DNA聚合酶:制备DNA探针3,逆转录酶:DNA的序列分析;用于各种PCR 4,DNA链接酶:1粘端DNA或DNA切口间的连接 2,可用于粘性未端的连接5,DNA修饰酶:改变成修饰DNA的某些基因,如加“尾巴”。
2.何谓载体?分子克隆中常用的载体有哪些?理想的载体应具备哪些条件?载体:指能够将外源性DNA片段引入宿主细胞并能在宿主细胞中进行自我复制或最终使外源性DNA表达的自主DNA。
常用的载体有:质粒、噬菌体、粘粒、病毒、人工染色体理想载体条件:1、在宿主细胞中有自我复制能力2、拷贝数多 3、应具有筛选标志 4、有RE切割位点5、分子量不宜过大 6、最好配备有调控元件 7、载体DNA与宿主DNA容易分开3.何谓PCR?试述PCR基本技术原理和影响因素。
PCR是一种体外扩增特异片段的技术,其原理类似DNA的体内扩增。
它包括:高温变性(90-97°C)低温退火(45—55°C)中温延伸(72度左右)。
分子克隆中常用的四种工具酶及其应用分子克隆是利用分子生物学技术对目标DNA进行扩增及克隆的过程。
在分子克隆的过程中,常常需要使用许多酶类工具来完成不同的任务。
以下介绍了分子克隆过程中最常用的四种酶类工具及其应用。
1. 限制性内切酶限制性内切酶(Restriction endonuclease)又称限制酶,是一类可特异性切割DNA特定序列的酶。
它可以在DNA的特定位置切割成不同的碎片,而不会破坏DNA的结构。
因此,限制酶被广泛应用于DNA的纯化、分析和重组等领域。
在分子克隆中,限制酶通常用于切割DNA的特定序列,以获得所需的DNA片段。
同时,也可以用于制备载体DNA的端部修饰,方便插入外来DNA片段。
此外,限制酶还可以用于分析DNA序列的变异和同源性等特征。
2. DNA连接酶DNA连接酶(DNA ligase)是一种催化DNA连结软帽酶,用于连接具有互补末端的DNA片段。
连接酶广泛应用于DNA重组、引物连接、克隆和测序等领域。
在分子克隆中,DNA连接酶通常使用于将外来DNA片段连接到载体 DNA 上。
此外,为了克隆具有完整DNA序列的目标基因,连接酶还可以用于连接PCR扩增出来的目标DNA序列。
3. PCR酶聚合酶链反应(Polymerase chain reaction, PCR)是一种快速、有效、敏感的DNA扩增技术。
在PCR过程中,通过PCR酶催化下的DNA扩增反应,能够在很短的时间内扩增目标DNA的数量。
在分子克隆中,PCR酶通常用于扩增目标DNA片段。
利用PCR技术,可以选择性增加目标DNA的数量并在容易处理的基本DNA片段之间产生特定的限制酶切断部位,为后续分子克隆实验提供方便。
4. 接头酶接头酶(T4 DNA ligase)是一种针对DNA单链断裂或缺口进行修复和连接的酶。
在分子克隆中,接头酶主要用于将外来DNA片段和载体DNA粘到一起。
在分子克隆的过程中,外来DNA片段和载体DNA之间通常存在一些不兼容的末端或过于短的重叠部分。
分子生物学试卷姓名:__________ 考试时间:_______ ___一、填空题,根据题意,将正确答案补充完整(本大题满分20分,每小题2分)1. 反式作用因子可划分为( )、组织特异性转录因子和( )三类。
2. 分子克隆中常用的工具酶有( )、( )、( )、( )。
3. 常用的核酸探针包括( )、( )和( )。
4. 限制性核酸内切酶的作用特点是识别位点的DNA序列呈二重旋转对称,即具有( )、切割DNA均产生含( )和3'-羟基的末端、错位切割产生具有5'-或3'-突出的粘性末端;而沿对称轴切割双链DNA产生平头末端,也称( )、少数不同的限制酶可识别和切割相同的( )。
5. 顺式作用元件按功能可划分为( )、( )、( )和( )。
6. 影响PCR的因素有( )、( )、耐热DNA聚合酶活性和用量、( )、( )、PH、温度、( )。
7. 原核细胞中各种RNA是催化一种酶催化( )种RNA生成的,而真核细胞基因的转录分别由( )种RNA聚合酶催化,其中rRNA基因由( )转录,hnRNA基因由( )转录,各类小分子量RNA则是( )的产物。
8. 体外重组常用方法有( )、平齐末端连接法、( )、( )和适配子连接法。
9. DNA切除修复需要的酶有( )、 ( )、( )。
10. PCR技术的基本过程是( )、( )、( )。
二、判断题,以下各题只有对错两个选项(本大题满分10分,每小题1分)1. Km值是酶的特性常数之一,与酶的浓度、pH、离子强度等条件或因素无关。
( )2. 有两个核酸制剂A和B,A的A250/A280=2.0,B的A250/A280=1.5,因此可判定制剂A的纯度比制剂B的要高。
( )3. 卫星DNA是一类高度重复序列,通常由串联重复序列组成。
( )4. 目前已知的G蛋白都是由α和βγ亚基组成的。
( )5. 生物膜中脂质的流动性受胆固醇含量的影响。
2 分子克隆工具酶(4学时)概述限制性内切核酸酶甲基化酶(Methylase)DNA聚合酶(DNA polymerase Ⅰ)其他分子克隆工具酶工具酶的定义o在生物技术中常用的各种工具酶系指能用于DNA和RNA分子的切割、连接、聚合、反转录等有关的各种酶系统称为工具酶。
o基因工程的操作,是在分子水平上的操作,是依赖一些酶(如限制性核酸内切酶,连接酶,DNA聚合酶等)作为工具对基因进行人工切割,拼接和扩增等操作。
所以把这些酶称之为“工具酶”。
o工具酶是对野生菌株(或真核生物如酵母)进行改造、优化、而产生的生物工程产品。
o自然界的许多微生物体内存在着一些具有特异功能的酶类。
这些酶类参与微生物的核酸代谢,在核酸复制和修复等反应中具有重要作用,有的酶还作为微生物区别自己和非己的DNA 进而降解非己DNA的防御工具。
o本章主要介绍用于基因工程的各种工具酶。
常用的工具酶2.1 限制性内切酶(restriction enzyme)o限制与修饰(Restriction and modification)o限制酶识别的序列o限制酶产生的末端o DNA末端长度对限制酶切割的影响o位点偏爱(Site preference)o酶切反应条件o星星活性(star activity)o单链DNA 的切割o酶切位点的引入o影响酶活性的因素o酶切位点在基因组中分布的不均一性E.coli k 感染频率下降许多E .coli B 【E .coli B 限制λ(k )】1. 限制与修饰现象①50年代后Luria 和Human(1952), Bertani 和Weigle (1953) 发现细菌的“限制”现象:2.1.1 限制与修饰(Restriction and modification )E.coli B 修饰λ(k)*λ(k)感染E.coli(B)细菌如何对λ噬菌体进行限制和修饰?E.coli B对这些λ(K)进行了修饰。
表2-1 λ噬菌体不同感染株对E.coli 不同菌株的感染率111E.coli C 10-4110-4E.coli B10-410-41E.coli KλC λB λK λ噬菌体感染率E.coli 菌株细菌的限制—修饰系统①1962年W.Arber(瑞士)发现,寄主对噬菌体的修饰是在λPhage的DNA上。
分子生物学一、名词解释1.ORF答:ORF是open reading frame的缩写,即开放阅读框架。
在DNA链上,由蛋白质合成的起始密码开始,到终止密码为止的一个连续编码列,叫做一个开放阅读框架。
2.结构基因答:结构基因(structural genes)可被转录形成mRNA,并翻译成多肽链,构成各种结构蛋白质或催化各种生化反应的酶和激素等。
3.断裂基因答:基因是核酸分子中贮存遗传信息的遗传单位,一个基因不仅仅包括编码蛋白质或 RNA 的核酸序列,还包括保证转录所必需的调控序列、位于编码区 5 ' 端与 3 ' 端的非编码序列和内含子。
真核生物的结构基因,由若干个编码区和非编码区互相间隔开但又连续镶嵌而成,去除非编码区再连接后,可翻译出由连续氨基酸组成的完整蛋白质,这些基因称为断裂基因(split gene)。
4.选择性剪接答:选择性剪接(也叫可变剪接)是指从一个mRNA前体中通过不同的剪接方式(选择不同的剪接位点组合)产生不同的mRNA剪接异构体的过程,而最终的蛋白产物会表现出不同或者是相互拮抗的功能和结构特性,或者,在相同的细胞中由于表达水平的不同而导致不同的表型。
5.C值答:基因组的大小通常以其DNA的含量来表示,我们把一种生物体单倍体基因组DNA的总量成为C值(C value)。
6.生物大分子答:生物大分子指的是作为生物体内主要活性成分的各种分子量达到上万或更多的有机分子。
常见的生物大分子包括蛋白质、核酸、脂类、糖类。
7.酚抽提法答:酚抽提法最初于1976年由Stafford及其同事提出,通过改良,以含EDTA、SDS及无DNA酶的RNA酶裂解缓冲液破碎细胞,经蛋白酶K处理后,用pH8.0的Tris饱和酚抽提DNA,重复抽提至一定纯度后,根据不同需要进行透析或沉淀处理获得所需的DNA样品。
8.凝胶过滤层析答:凝胶过滤层析也称分子排阻层析或分子筛层析,利用凝胶分子筛对大小、形状不同的分子进行层析分离,是根据分子大小分离蛋白质混合物最有效的方法之一。
生物秀实验频道——专业生物实验中心 /bio101/ 分子克隆技术 实验操作手册 2005生命科学技术学院课程简介分子克隆技术是指DNA的无性繁殖技术。
分子克隆技术课程主要是针对生物技 术专业、生物科学专业、生命科学与技术基地班本科生及生物学类专业研究生而开 设的实验课。
实验内容涉及分子克隆的一些基本方法及基本操作技巧,主要包括分 子克隆和分子杂交两大部分:分子克隆技术:DNA重组技术是分子生物学的核心内容。
本实验利用质粒载体 克隆外源DNA片段,通过这个实验大家可以掌握质粒载体的抽提、外源DNA的准备、 酶切、连接及感受态细胞的制备、连接产物的转化以及阳性克隆子的鉴定和验证等。
分子杂交技术:实验室常用的分子杂交技术主要有 Southern blotting, Northern blotting,Western blotting 及 Dot blotting 等。
Southern blotting 是通过用一种或多种限制性内切酶消化基因组或其它来源的 DNA,经过琼脂糖凝胶 电泳按大小分离酶切所得的片段,随后 DNA 在原位发生变性并从凝胶转移到一固相 支持物上(硝酸纤维素膜或尼龙膜)。
DNA转移至固相支持物的过程中各DNA的相对 位置保持不变,用一定方法(如放射性同位素)标记的 DNA 探针与固着在膜上的 DNA 杂交,经X-光片自显影显现出与探针DNA互补的DNA电泳条带的位置,然后进行分 析。
本实验要求掌握植物总 DNA 的抽提、质量检测、限制性内切酶操作、DNA 的琼 脂糖凝胶电泳、转膜、探针的制备、同位素操作等方面的实验技术。
在转录水平上 研究和了解基因的表达与调控是分子生物学和基因操作的重要内容。
为让学生初步 了解有关RNA的操作过程注意事项,我们还列出Northern blotting的操作步骤以供 选择。
目 录系列一 分子克隆技术 (4)实验一 质粒的制备 (4)实验二 DNA的琼脂糖凝胶电泳 (5)实验三 外源 DNA片段在质粒载体中的克隆 (7)实验四 感受态细胞的制备 (9)CaCl2 感受态细胞的制备实验步骤 (9)电转化法制备大肠杆菌感受态细胞的实验步骤 (10)实验五 质粒的转化及转化子的鉴定 (11)热激法转化实验步骤: (11)质粒电转化大肠杆菌感受态细胞操作步骤 (12)实验六 PCR技术 (12)系列二 Southern 杂交技术 (14)实验一 植物总 DNA的快速少量抽提(CTAB 法) (14)实验二 总 DNA质量检测及酶切 (15)实验三 电泳、转膜 (16)实验四 Southern Blotting (18)系列三 Northern Blotting (24)实验一 RNA Extraction (mini prep) (24)实验二 RTPCR (Reverse transcription PCR) (26)实验三 RNA的电泳,转膜和杂交 (28)附录 试剂配方 (29)一 细菌培养试剂 (30)二 质粒抽提试剂 (30)三 DNA操作试剂 (31)四 RNA操作试剂 (34)Stock Solution: (34)Work Solution (35)系列一 分子克隆技术实验一 质粒的制备质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体,它在基因操作中具有 重要作用。
医学细胞与分子生物学习题库标准答案一、名词解释:1.高度重复基因:在真核生物细胞基因组中重复出现可达106次以上的DNA序列,称为高度重复序列基因或高度重复序列DNA。
2.断裂基因:真核生物大部分基因含有内含子,基因是不连续的,故称断裂基因。
3.基因组:细胞或生物体的整套单倍体)遗传物质,称为基因组。
基因组的大小用全部DNA的碱基对总数表示。
4.基因:是核酸分子中遗传信息的基本单位,是指RNA序列信息及表达这些信息所必需的全部核甘酸序列。
现代分子生物学的基因概念是合成有功能的蛋白质或RNA 所必需的全部DNA序列(除部分病毒RNA),即一个基因不仅包括编码蛋白质或RNA的核酸序列,还应包括为保证转录所必需的调控序列。
5.微卫星DNA:6.基因文库:是指含有某种生物体(或组织、细胞)全部基因的随机片段的重组DNA克隆群体。
7.内含子:真核生物DNA分子中插入外显子之间的非编码序列。
8.外显子:真核生物DNA分子中编码蛋白质的序列。
9.基因表达的调控:机体的各种细胞中含有相同的遗传信息(相同的结构基因),但并非在所有细胞中同时表达,而必须根据机体的不同发育阶段、不同的组织细胞及不同的功能状态,选择性、程序性地表达特定数量的特定基因,这就叫基因表达的调控。
10.卫星DNA:是出现在非编码区的串联重复序列。
11.基因表达:是指原核生物和真核生物基因组中特定的结构基因所携带的遗传信息、,经过转录、翻译等一系列过程,合成具有特定的生物学功能的各种蛋白质。
表现出特定的生物学效应的全过程。
12.增强子:指位于启动子上游或下游并通过启动子增强邻近基因转录效率的DNA 顺序,增强子本身不具备启动子活性。
13.顺式作用元件:指某些能影响基因表达但不编码蛋白质和RNA的DNA序列,按照功能分为启动子、增强子、终止子、沉默子和衰减子等。
14. SD序列:SD序列是与细菌16S rRNA 3,端互补的序列。
原核生物在起始密码AUG上游方向4-13个碱基之间有一段富含嘌吟的序列,其一致序列为AGGAGG,称为SD序歹列。
分子生物学一、名词解释1.ORF 答:ORF是open reading frame的缩写,即开放阅读框架。
在DNA链上,由蛋白质合成的起始密码开始,到终止密码为止的一个连续编码列,叫做一个开放阅读框架。
2.结构基因答:结构基因(structural genes)可被转录形成mRNA,并翻译成多肽链,构成各种结构蛋白质或催化各种生化反应的酶和激素等。
3.断裂基因答:基因是核酸分子中贮存遗传信息的遗传单位,一个基因不仅仅包括编码蛋白质或RNA 的核酸序列,还包括保证转录所必需的调控序列、位于编码区 5' 端与 3' 端的非编码序列和内含子。
真核生物的结构基因,由若干个编码区和非编码区互相间隔开但又连续镶嵌而成,去除非编码区再连接后,可翻译出由连续氨基酸组成的完整蛋白质,这些基因称为断裂基因(split gene)。
4.选择性剪接答:选择性剪接(也叫可变剪接)是指从一个mRNA前体中通过不同的剪接方式(选择不同的剪接位点组合)产生不同的mRNA剪接异构体的过程,而最终的蛋白产物会表现出不同或者是相互拮抗的功能和结构特性,或者,在相同的细胞中由于表达水平的不同而导致不同的表型。
5.C值答:基因组的大小通常以其DNA的含量来表示,我们把一种生物体单倍体基因组DNA的总量成为C值(C value)。
6.生物大分子答:生物大分子指的是作为生物体内主要活性成分的各种分子量达到上万或更多的有机分子。
常见的生物大分子包括蛋白质、核酸、脂类、糖类。
7.酚抽提法答:酚抽提法最初于1976年由Stafford及其同事提出,通过改良,以含EDTA、SDS及无DNA酶的RNA酶裂解缓冲液破碎细胞,经蛋白酶K处理后,用pH8.0的Tris饱和酚抽提DNA,重复抽提至一定纯度后,根据不同需要进行透析或沉淀处理获得所需的DNA样品。
8.凝胶过滤层析答:凝胶过滤层析也称分子排阻层析或分子筛层析,利用凝胶分子筛对大小、形状不同的分子进行层析分离,是根据分子大小分离蛋白质混合物最有效的方法之一。