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第二章分子克隆工具酶题目第二章分子克隆工具酶一、选择题1.有关基因工程的叙述正确的是（） A.限制性内切酶只在获得目的基因时才用B.重组质粒的形成在细胞内完成C.质粒都可作运载体D.蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料2.限制性内切酶EcoRⅠ在野生型的λ噬菌体DNA中有5个切点，Hind Ⅲ有7个切点。
调整这些酶切位点的数量，主要通过（）。
A.体内突变 B.完全酶切后连接C.部分酶切D.先用甲基化酶修饰后再酶切二、填空题1.如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生5?突出的黏性末端，则可以用__________进行3?末端标记。
如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3?突出的黏性末端，可以用__________________ 进行3?末端标记。
2.可用T4 DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有____________和_______的活性。
三、判断题1. pBR327是在pBR322的基础上去掉了1089bp的片段，留下了ampR和tetR的完整片段。
pBR327比pBR322有更高的拷贝，每个细胞中含有30-45个拷贝。
同时pBR327具有接合能力，能直接转入其他细胞（）四、名词解释1. DNA聚合酶2. 限制性内切酶3. 甲基化酶4. T4-DNA连接酶5. 核酸酶6. Klenow酶7. T4 DNA聚合酶8. Taq DNA聚合酶9. 逆转录酶10. 同裂酶 11. 核酶五、简答题1.限制性内切酶分为哪几大类，各有什么特点？2. DNA修饰酶主要有哪些，各有什么作用？ 3.简述Klenow聚合酶的用途。
4.比较E.coli DNA 连接酶和Taq DNA 连接酶的作用特点。
5.限制性内切酶I的识别序列和切点是―G?GATCC―，限制性内切酶II的识别序列和切点是―?GATC―。
在质粒上有酶I的1个切点，在目的基因的两侧各有l个酶II的切点。
用上述两种酶分别切割质粒和含有目的基因的DNA。
分子克隆工具酶答案（选择和判断）题1关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当。
B. 这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶题目2Ⅱ型限制性内切核酸酶：( )D. 限制性识别非甲基化的核苷酸序列题目3Ⅲ型限制性内切核酸酶：( )E. 不同亚基的识别位点甲基化和限制活性相互排斥：MS亚基促使甲基化，R亚基促使限制题目4限制性片段长度多态性(RFLP)是：( )E. 物种中的两个个体限制性图谱间的差别题目5下面有关限制酶的叙述哪些是不正确的?( )E. 限制酶是外切酶而不是内切酶题目6因研究λ噬菌体的限制与修饰现象的本质而获得诺贝尔奖的科学家是：( )C. WArber题目7第一个被分离的Ⅱ类酶是：( )A. HindⅡ题目8双链DNA中一段自我互补的序列被称为回文序列，这种序列不具有下列特征：( )B. 可增强基因的表达题目9在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?( )B. 酶量酶量题目10在下列试剂中，那一种可以螯合Ca2＋离子?( )A. EGTA题目11在下列工具酶中，那一种可以被EGTA抑制活性?( )C. Bal 31核酸酶题目12限制性内切核酸酶可以特异性地识别：( )B. 双链DNA的特定碱基序列题目13限制性内切核酸酶的星号活性是指：( )B. 在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性。
题目14下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?( )C. 酶切反应时酶浓度过低题目15关于回文序列，下列各项中，( )是不正确的B. 是高度重复序列题目16关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当D. 这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶题目17T4DNA连接酶是从T4噬菌体感染的E．coli中分离的，这种连接酶( ) B. 既能催化平末端连接又能催化黏性末端连接题目18DNA连接酶在体内的主要作用是在DNA复制、修复中封闭缺口，( )A. 将双链DNA分子中的5，磷酸基团同3，-OH末端重新形成磷酸二酯键题目19在长模板链的指导下引物延伸合成长的DNA互补链时应选用( )A. T7DNA聚合酶题目20末端转移酶是合成酶类，( )D. 在C0 2＋的存在下，可以在3’突出末端延长DNA链题目21在基因工程中，可用碱性磷酸酶( )B. 防止DNA的自身环化题目22从E．coli中分离的连接酶：( )C. 需要NAD作辅助因子题目23下列酶中，除( )外都具有磷酸酶的活性C. λ核酸外切酶题目24下列哪一种酶作用时需要引物? ( )D. 反转录酶题目25S1核酸酶的功能是( )B. 以上有两项是正确的题目26Klenow酶与DNA聚合酶相比，前者丧失了( )的活性C. 5’-3’外切酶题目27用Bal31核酸酶作系列缺失突变时，( )A. 需要Ca 2＋作辅助因子题目28在cDNA技术中，所形成的发夹环可用( )A. 用S1核酸酶切除题目29可以在切口部位起作用的酶是( )A. S1核酸酶题目30T4RNA连接酶：( )A.作用时不需要模板题目31限制性内切核酸酶在DNA中的识别／切割位点的二级／三级结构也影响酶切效率。
第一章基因克隆基因工程的基本技术有哪些？答：对核算分子的分离、纯化、回收、分析和检测、切割、连接和修饰，以及序列测定、诱变、扩增和转移等基因操作技术。
构建基因文库一般使用什么作为载体？答：一般使用大肠杆菌作为载体克隆与亚克隆？答：克隆在一等程度上等同于基因的分离。
亚克隆是将目的基因所对应的小段的DNA片段找出来。
PCR对基因克隆有什么作用？答：现在基因克隆可以不用通过构建基因文库来实现，可以通过理性设计和PCR扩增获得大多数所需要的基因。
但是尽管如此，在不知道基因序列的情况下，如相互作用的基因，表达调控因子，新基因等，还需要构建基因文库来进行基因克隆。
第二章分子克隆工具酶限制与修饰系统？答：限制系统可以排除外来DNA。
限制的作用实际就是降解外源DNA，维护宿主稳定的保护机制。
甲基化是常见的修饰作用，宿主通过甲基化来达到识别自身遗传物质和外来遗传物质的作用。
并且能够保证自身的DNA不被降解。
使用最广泛的限制酶？答：EcoR I是应用最广泛的限制性内切酶限制性内切酶的命名？答：宿主属名第一字母、种名头两个字母、菌株号+序列号。
如：HindIII限制与修饰系统分类？答：至少可分为3类。
II类所占比例最大，其酶分子为内切酶与甲基化分子不在一起，识别位点为4-6bp的回文序列，切割位点为识别位点中或者靠近识别位点。
其限制反应与甲基化反应是分开的反应。
不需要ATP的参与。
限制酶识别的序列长度？结构？答：一般为4-6个bp，即每256和每4096个碱基中存在一个识别位点。
回文序列，不对称序列，多种不同序列，间断对称序列限制酶产生的末端？答：1、黏末端2、平末端3、非对称突出末端什么是同裂酶？分类？答：识别相同序列的限制酶称为同裂酶。
但他们的切割位点有可能不同。
分为：1、同位同切酶2、同位异切酶3、同工多位酶4、其他限制性内切酶的作用是什么？它的反酶是什么？答：什么是同尾酶？答：许多不同的限制酶切割DNA产生的末端是相通的，切实对称的，即他们可产生相同的黏性突出末端。
分子克隆中常用的四种工具酶及其应用分子克隆是利用分子生物学技术对目标DNA进行扩增及克隆的过程。
在分子克隆的过程中，常常需要使用许多酶类工具来完成不同的任务。
以下介绍了分子克隆过程中最常用的四种酶类工具及其应用。
1. 限制性内切酶限制性内切酶（Restriction endonuclease）又称限制酶，是一类可特异性切割DNA特定序列的酶。
它可以在DNA的特定位置切割成不同的碎片，而不会破坏DNA的结构。
因此，限制酶被广泛应用于DNA的纯化、分析和重组等领域。
在分子克隆中，限制酶通常用于切割DNA的特定序列，以获得所需的DNA片段。
同时，也可以用于制备载体DNA的端部修饰，方便插入外来DNA片段。
此外，限制酶还可以用于分析DNA序列的变异和同源性等特征。
2. DNA连接酶DNA连接酶（DNA ligase）是一种催化DNA连结软帽酶，用于连接具有互补末端的DNA片段。
连接酶广泛应用于DNA重组、引物连接、克隆和测序等领域。
在分子克隆中，DNA连接酶通常使用于将外来DNA片段连接到载体 DNA 上。
此外，为了克隆具有完整DNA序列的目标基因，连接酶还可以用于连接PCR扩增出来的目标DNA序列。
3. PCR酶聚合酶链反应（Polymerase chain reaction, PCR）是一种快速、有效、敏感的DNA扩增技术。
在PCR过程中，通过PCR酶催化下的DNA扩增反应，能够在很短的时间内扩增目标DNA的数量。
在分子克隆中，PCR酶通常用于扩增目标DNA片段。
利用PCR技术，可以选择性增加目标DNA的数量并在容易处理的基本DNA片段之间产生特定的限制酶切断部位，为后续分子克隆实验提供方便。
4. 接头酶接头酶（T4 DNA ligase）是一种针对DNA单链断裂或缺口进行修复和连接的酶。
在分子克隆中，接头酶主要用于将外来DNA片段和载体DNA粘到一起。
在分子克隆的过程中，外来DNA片段和载体DNA之间通常存在一些不兼容的末端或过于短的重叠部分。
卷1．反式作用因子的结构域包括 、 、 。
2．顺式作用元件包括 、 、 。
3．II 型限制酶切割产生的两种切口是 和 。
4．理想载体应有多克隆位点，供 ；必须有自身的复制子， 才能 。
5．DNA 分子体外连接的方法有 、 、 和 。
6．探针标记物分为 和 两种。
7．核酸杂交中，检测细胞或组织中的核酸要用 ；检测固定在膜上，未经分离的DNA 分子要用 。
8．PCR 的每一轮循环均需经过 、 和 三步。
9．列出四种癌基因家族 、 、 和 。
10．mRNA 相对定量分析常用的方法为 和 。
11．基因治疗的主要策略有 、 和 三种。
二、单项选择题（每题1分，共30分）1.关于基因的描述,错误的是:( ) A.基因是含有编码RNA 或肽链的信息单位C.真核结构基因是断裂基因D.基因结构中不含有调控序列E.基因片段可以是DNA,也可以是RNA2.启动子是( )A.mRNA开始被翻译的序列B.开始转录生成mRNA的DNA序列C.RNA聚合酶识别和结合的DNA序列D.阻遏蛋白结合DNA的部位E.产生阻遏物的基因3．顺式作用元件不包括（）A．TA TA盒B．CAAT盒C．GC盒D．沉默子E．以上都不是4．真核基因的结构特点，错误的是（）A．真核基因组结构庞大B．转录产物是多顺反子C．含大量重复序列D．真核结构基因是断裂基因E．90%左右的序列为非编码序列5．基因表达过程不包括（）A．DNA甲基化B．转录C．翻译D．RNA剪切E．RNA复制6.分子克隆技术中，除下列何种酶外，均为常用的工具酶（）A.逆转录酶B.DNA连接酶C.末端转移酶D.拓扑异构酶E.限制性核酸内切酶7.COS位点存在于( )A.pBR322分子内B.pUC系列载体分子内C.λ噬菌体分子内D.病毒载体分子内E.YAC分子内8.关于SD序列，错误的是（）A.存在于原核生物细胞内B.是1974年Shine和Dalgarno发现的C.是位于mRNA中AUG上游约3—11bP的富含嘌呤的序列D.存在于真核细胞内E.是mRNA与30S核糖体亚基之间的识别与结合序列9.对于cDNA文库,下列叙述中错误的是:A.从cDNA文库中可筛选得到真核基因B.cDNA文库是细胞总mRNA的克隆,其中各个克隆所含的外源DNA的片段是相同的C.cDNA文库只包含表达蛋白质或多肽的基因D.特异性探针可从cDNA文库中得到E.cDNA文库中某一克隆的扩增即是特异的cDNA克隆10．抑癌基因可（）A．促进细胞生长与增殖B．抑制细胞分化和成熟C．促进细胞凋亡D．活化时可诱导肿瘤发生E．正常组织中不表达11．原癌基因活化的机制，错误的是（）A．获得启动子或增强子B．基因易位C．原癌基因的甲基化修饰D．原癌基因扩增E．原癌基因点突变12．Rb基因，错误的是（）A．是一种抑癌基因B．是视网膜母细胞瘤基因C．表达产物可促进细胞分化，抑制细胞增殖D．最初发现于视网膜母细胞瘤中E．该基因活化可致视网膜母细胞瘤13．P53基因的作用错误的是（）A．编码P53蛋白是一种核内磷酸化蛋白B．可识别细胞内DNA的损伤，并参与修复过程C．可促进细胞生长、增殖、分化D．可促进DNA损伤的细胞凋亡E．可抑制肿瘤发生14．下列哪项不属于基因诊断的范畴（）A．检测遗传病基因的结构B．检测病原体基因的结构C．检测肿瘤相关基因D．检测基因表达水平E．检测DNA的合成和分解状况15．对基因诊断，下列概念中错误的是（）A.是病因诊断，有较强的针对性B.只能检测处于活化状态的基因。
分子生物学试卷姓名：__________ 考试时间：_______ ___一、填空题，根据题意，将正确答案补充完整(本大题满分20分,每小题2分)1. 反式作用因子可划分为( )、组织特异性转录因子和( )三类。
2. 分子克隆中常用的工具酶有( )、( )、( )、( )。
3. 常用的核酸探针包括( )、( )和( )。
4. 限制性核酸内切酶的作用特点是识别位点的DNA序列呈二重旋转对称，即具有( )、切割DNA均产生含( )和3'-羟基的末端、错位切割产生具有5'-或3'-突出的粘性末端；而沿对称轴切割双链DNA产生平头末端，也称( )、少数不同的限制酶可识别和切割相同的( )。
5. 顺式作用元件按功能可划分为( )、( )、( )和( )。
6. 影响PCR的因素有( )、( )、耐热DNA聚合酶活性和用量、( )、( )、PH、温度、( )。
7. 原核细胞中各种RNA是催化一种酶催化( )种RNA生成的，而真核细胞基因的转录分别由( )种RNA聚合酶催化，其中rRNA基因由( )转录，hnRNA基因由( )转录，各类小分子量RNA则是( )的产物。
8. 体外重组常用方法有( )、平齐末端连接法、( )、( )和适配子连接法。
9. DNA切除修复需要的酶有( )、 ( )、( )。
10. PCR技术的基本过程是( )、( )、( )。
二、判断题，以下各题只有对错两个选项(本大题满分10分,每小题1分)1. Km值是酶的特性常数之一，与酶的浓度、pH、离子强度等条件或因素无关。
( )2. 有两个核酸制剂A和B,A的A250/A280=2.0,B的A250/A280=1.5,因此可判定制剂A的纯度比制剂B的要高。
( )3. 卫星DNA是一类高度重复序列，通常由串联重复序列组成。
( )4. 目前已知的G蛋白都是由α和βγ亚基组成的。
( )5. 生物膜中脂质的流动性受胆固醇含量的影响。
三四章分⼦克隆载体---答案_完_第三章分⼦克隆载体（Molecular cloning vectors）⼀、名词解析1.质粒：质粒是染⾊体外的遗传因⼦，能进⾏⾃我复制（但依赖于宿主编码的酶和蛋⽩质）；⼤多数为超螺旋的双链共价闭合环状DNA分⼦（covalently closed circle , cccDNA），少数为线性；⼤⼩⼀般为1～200Kb，有的更⼤。
2.质粒拷贝数：质粒拷贝数(plasmid copy numbers)是指细胞中单⼀质粒的份数同染⾊体数之⽐值,常⽤质粒数/每染⾊体来表⽰。
不同的质粒在宿主细胞中的拷贝数不同。
3.质粒的不相容性：两个质粒在同⼀宿主中不能共存的现象称质粒的不相容性，它是指在第⼆个质粒导⼊后，在不涉及DNA 限制系统时出现的现象。
不相容的质粒⼀般都利⽤同⼀复制系统，从⽽导致不能共存于同⼀宿主中。
4.质粒的转移性：质粒具转移性。
它是指在⾃然条件下，很多质粒可以通过称为细菌接合的作⽤转移到新宿主内。
它需要移动基因 mob ，转移基因 tra ，顺式因⼦ bom 及其内部的转移缺⼝位点 nic。
5.穿梭质粒：既能在真核细胞中繁殖⼜能在原核细胞中繁殖的载体。
这类载体必须既有细菌的复制原点或质粒的复制原点，⼜含有真核⽣物的复制原点，还具备酶切位点和合适的筛选指标。
它⽤来转化细菌，⼜可以⽤于转化真核细胞。
6.α-互补：α-互补是指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β-半乳糖苷酶（β -galactosidase ，由 1024 个氨基酸组成）阴性的突变体之间实现互补。
α-互补是基于在两个不同的缺陷β-半乳糖苷酶之间可实现功能互补⽽建⽴的7.温和噬菌体：既能进⼊溶菌⽣命周期⼜能进⼊溶源⽣命周期的噬菌体。
8.溶源性细菌：具有⼀套完整的噬菌体基因组的细菌叫溶源性细菌。
9.整合：如果噬菌体的DNA是被包容在寄主细菌染⾊体DNA中，便叫做已整合的噬菌体DNA。
