微阵列分析
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染色体微阵列分析2篇第一篇:染色体微阵列分析随着基因组学和分子遗传学的发展,微阵列技术已成为一种有效的全基因组高通量分析方法,在癌症、生殖、遗传、神经系统和免疫学等领域应用广泛。
其中染色体微阵列也是微阵列技术中的一种,它可以检测染色体上的微缺失和微扩增,对染色体异常病人的筛查和诊断有重要作用。
染色体微阵列的原理是利用纯化的DNA样品在基因芯片上进行杂交反应,比较其与正常对照DNA样品的相对强度。
正常对照DNA被添加到反应中可减少混杂物的影响,从而使测试结果更可靠。
如果染色体存在缺失或扩增,相应的染色体区域的荧光强度比正常对照DNA低或高。
通过分析芯片上每个点芯片的荧光强度,确定染色体区域的突变类型和位置,从而检测染色体的异常。
染色体微阵列技术可以检测染色体全基因组或特定区域的微偏差,包括拷贝数变异和基因重排。
拷贝数变异是指基因拷贝数发生变化,包括基因微缺失、基因微扩增和复杂基因扩增。
基因重排是指染色体片段重排到非正常位置,包括倒位、平衡易位、不平衡易位等。
这些突变类型都会对基因和蛋白质的表达产生影响,进而引起多种疾病。
染色体微阵列技术的应用主要集中在遗传和神经系统疾病的诊断和研究上。
比如,常见的染色体工程疾病如唐氏综合症、爱德华综合症和帕特劳症都可以通过染色体微阵列技术检测。
此外,染色体微阵列技术还可以用于癌症的早期诊断和预后评估,以及肿瘤基因组学研究中。
虽然染色体微阵列技术已经成为一种成熟的高通量分析方法,但是仍然存在一些问题。
比如,一些较大的CNV(拷贝数变异)和基因重排可能不会被检测到;基因微缺失或微扩增可能与染色体上的一些重复序列混淆,使结果解释有误;此外,由于样品处理、芯片制作和信号分析存在误差,结果可能出现假阳性或假阴性。
总体来说,染色体微阵列技术是一种有效的检测染色体异常的方法,尤其适用于遗传和神经系统疾病。
随着技术的进步和不断地优化,相信染色体微阵列技术将在未来更广泛应用,为疾病诊断和治疗带来更多的帮助。
微阵列化学发光免疫分析法与蛋白蕊微阵列化学发光免疫分析法(microarray chemiluminescent immunoassay)是一种高通量的生物分析技术,可用于检测并定量多种蛋白质,例如抗体、细胞因子和肿瘤标志物等。
与传统的免疫分析方法相比,微阵列化学发光免疫分析法具有高灵敏度、高特异性、快速、高通量和自动化等优势,因此在生物医学研究和临床诊断中得到了广泛应用。
在微阵列化学发光免疫分析法中,首先将要检测的蛋白质样品固定在载玻片、芯片或微孔板等载体上。
然后,使用特异性的抗体与被检测蛋白质结合,并加入适当的标记物质,如酶或荧光染料,以发出化学发光信号。
最后,通过荧光或酶促反应的测量,可以定量检测样品中蛋白质的含量。
与传统的免疫分析方法相比,微阵列化学发光免疫分析法有以下优势:1.高通量:微阵列技术可以同时检测上千种蛋白质,使得高通量分析成为可能。
这样,可以快速且有效地筛选大量样本,提高研究效率。
2.高灵敏度:由于信号的放大和积累,微阵列化学发光免疫分析法比传统的免疫方法更为灵敏,可以检测到较低浓度的蛋白质。
3.高特异性:由于使用特异性的抗体与被检测蛋白质结合,微阵列化学发光免疫分析法具有高特异性,可以有效地避免其他蛋白质的干扰。
4.快速:微阵列化学发光免疫分析法只需几个小时即可完成,比传统的免疫分析方法更为快速,大大缩短了实验时间。
5.自动化:由于自动化的处理和读取,微阵列化学发光免疫分析法具有更高的可重复性和准确性,可以大大减少操作误差。
微阵列化学发光免疫分析法在生物医学研究和临床诊断中具有广泛的应用。
例如,在肿瘤标志物筛选中,可以使用微阵列化学发光免疫分析法同时检测多种肿瘤标志物,通过比较其相对含量,可以辅助早期肿瘤的诊断和预后评估。
此外,该技术还可以用于药物研发、新型分子的鉴定和生物标记物的发现等领域。
总之,微阵列化学发光免疫分析法是一种高通量、高灵敏度、高特异性、快速和自动化的生物分析技术,在生物医学研究和临床诊断中有着广泛的应用前景。
微阵列—比较基因组杂交技术及其在肿瘤研究中的应用微阵列技术是一种高通量的基因表达分析方法,它通过比较基因组杂交技术实现对大量基因表达水平的同时检测和分析。
本文将介绍微阵列技术的原理和应用,并重点探讨其在肿瘤研究中的应用。
一、微阵列技术原理微阵列技术是基于比较基因组杂交的原理实现的,其基本步骤包括样本准备、RNA提取和标记、芯片杂交和信号检测四个主要环节。
1. 样本准备:首先需要提取研究对象的RNA样本,例如从肿瘤组织或正常组织中提取RNA。
为了获得可靠的数据,研究者需要大量重复样本。
2. RNA提取和标记:首先将提取的RNA逆转录成cDNA,然后利用核酸杂交和扩增技术,将样本RNA与反义RNA标记物杂交。
标记物可以是荧光标记的核酸分子或生物素等,以便后续的检测。
3. 芯片杂交:将标记的RNA样本加入到微阵列芯片上,通过杂交反应使得标记物与芯片中的探针片段互相结合。
4. 信号检测:利用激光扫描仪扫描芯片上的标记物,获取荧光信号,并根据信号的强度和密度来定量分析基因的表达水平。
二、微阵列技术在肿瘤研究中的应用微阵列技术在肿瘤研究中具有广泛的应用前景,主要体现在以下几个方面:1. 基因表达谱的分析:通过微阵列技术可以同时检测和分析大量的基因表达水平,从而了解肿瘤发生发展的分子机制。
比较正常组织与肿瘤组织的基因表达谱差异,可以发现潜在的肿瘤标志物或靶向治疗的新靶点。
2. 肿瘤分类与诊断:肿瘤是一类异质性很强的疾病,通过微阵列技术可以将肿瘤分子分型和个性化治疗相结合,实现精准医疗。
通过分析肿瘤细胞的基因表达谱,可以准确地判断肿瘤类型和预测患者的预后。
3. 药物研发与耐药机制研究:利用微阵列技术可以筛选出特异性作用于肿瘤的新药物。
通过比较药物敏感性和耐药性细胞系的基因表达差异,可以揭示耐药机制,并寻找新的治疗策略。
4. 分子靶向治疗的预测:微阵列技术能够评估患者对靶向治疗的敏感性和预测疗效,从而帮助医生制定个体化的治疗方案。
基于微阵列技术的基因表达分析随着基因工程、分子生物学等技术的发展,研究人员可以更深入地了解人类及其他生物的遗传特征。
而在这些技术中,微阵列技术是一项非常重要的技术。
本文将阐述基于微阵列技术的基因表达分析,并探讨其在生物学研究中的应用。
基因表达与微阵列技术基因表达是指基因识别到转录、翻译成蛋白质的过程。
基因表达分析是指研究哪些基因在特定条件下被表达。
这一分析方法通常是使用微阵列技术来大规模地测量基因表达水平的变化。
微阵列是一种高度自动化的技术,可以同时检测几千个基因。
它的工作原理是在面积较小的玻璃芯片上固定许多小的DNA探针。
这些探针是用来识别特定的基因片断。
然后,可以将待分析的RNA样品标记并施加到微阵列上。
在特定的条件下,样品RNA会与相应的探针杂交,并产生荧光强度信号,从而量化基因表达的水平。
微阵列技术的优势是非常显著的。
它可以同时检测数千个基因,从而提供了对生物系统的全方位的了解。
而且,它可以使研究人员更好地理解基因行为,无论是研究开放的基因、发掘新基因或是研究疾病潜在治疗机会。
通过对基因表达的改变进行研究,可帮助科学家确定诸如癌症等疾病的起源和发展过程,以及如何诊断和治疗这些疾病等因素。
微阵列技术在生物富集与筛选中的应用微阵列技术可用于对基因表达进行富集和筛选。
例如,使用微阵列技术可以轻松地识别一组特定的基因表达,使其在不同阶段的生命过程中精确定义。
这些进一步识别的基因可以用于更精确地发掘某类生物过程的机理。
此外,微阵列技术也可以用于生物标志物的探测。
生物标志物是指某些物质特征,可用于检测疾病状态或生物过程。
微阵列技术可用于识别有关某疾病的生物标志物,从而为理解某些疾病的发病机理提供线索并提供有关诊断与治疗的见解。
未来的微阵列应用微阵列技术已经发展了20多年,而目前正在探索并发展其潜在应用。
例如,已经出现了一些新技术,其中一些可以使用单细胞分析来评估生物组织状态。
这可以帮助医生更准确地理解患者的病情,并制定更有效的治疗计划。
基因表达分析中的微阵列数据处理技术应用分析微阵列技术是一种广泛应用于基因表达分析的高通量技术,它能够同时检测上千个基因在细胞或组织中的表达水平,并为我们提供大量的基因表达数据。
然而,处理和分析微阵列数据是一个复杂而繁琐的过程,需要采用一些专门的技术和方法,以提取和解释有价值的信息。
本文将对微阵列数据的处理技术及其在基因表达分析中的应用进行分析和讨论。
首先,微阵列数据处理流程主要包括预处理、质量控制、归一化和差异分析等步骤。
预处理是将原始的图像数据转换为表达矩阵的过程,通常包括背景校正和探针强度的计算。
质量控制是评估数据的可靠性和准确性的步骤,包括检测和删除低质量的样本、探针和基因。
归一化是对数据进行标准化处理,以消除技术和实验间的变异性。
差异分析则是比较不同组间基因的表达水平,找出显著差异的基因。
以上步骤在微阵列数据处理过程中相互关联,确保最终结果的可靠性和准确性。
在实际应用中,我们可以利用微阵列数据处理技术来解决一些生物学问题。
首先,微阵列数据处理技术可以帮助我们识别和鉴定与疾病相关的基因。
通过比较病例组和对照组的基因表达谱,我们可以筛选出在疾病发生和发展过程中显著改变的基因,进一步研究其功能和机制。
其次,微阵列数据处理技术可以帮助我们了解基因调控网络和信号通路。
通过构建基因共表达网络和进行功能富集分析,我们可以揭示基因之间的相互作用关系和重要的生物学通路,从而深入理解基因表达调控的机制。
此外,微阵列数据处理技术还可以帮助我们预测疾病的发生和预后。
通过建立预测模型和分析基因签名,我们可以根据患者的基因表达谱进行疾病的早期诊断、预后评估和个体化治疗。
虽然微阵列数据处理技术在基因表达分析中具有重要的应用价值,但是也存在一些挑战和限制。
首先,微阵列数据处理过程中存在大量的假阳性和假阴性结果,需要采取一些统计方法和策略来控制错误率。
其次,微阵列数据处理需要耗费大量的计算资源和时间,对于大规模数据分析来说尤为突出。
微阵列数据分析(MicroarrayDataAnalysis)蔡政安副教授(台湾前⾔在⼈类基因组测序计划的重要⾥程碑陆续完成之后,⽣命科学迈⼊了⼀个前所未有的新时代,在⼈类染⾊体总长度约三⼗亿个碱基对中,约含有四万个基因,这是⽣物学家⾸次以这么宏观的视野来检视⽣命现象,⽽医药上的研究⽅针亦从此改观,科学研究从此正式进⼊后基因组时代。
微阵列实验(Microarray)及其它⾼通量检测(high-throughput screen)技术的兴起,⽆疑将成为本世纪的主流;微阵列实验主要的优势在于能同时⼤量地、全⾯性地侦测上万个基因的表达量,通过基因芯⽚,可在短时间内找出可能受疾病影响的基因,作为早期诊断的⽣物标记(biomarker)。
然⽽,由于这⼀类技术的⾼度⾃动化、规模化及微型化的特性,使得他们所⽣成的数据量⾮常庞⼤且数据形态⽐⼀般实验数据更加复杂,因此,传统统计分析⽅法已经不堪使⽤。
在此同时,统计学家并未在此重要时刻缺席,提出⾮常多新的统计理论和⽅法来分析微阵列实验数据,也⼴受⽣物学家所使⽤。
由于微阵列数据分析所牵涉的统计问题层⾯相当⼴且深⼊,本⽂仅针对整个实验中所衍⽣的统计问题加以介绍,并介绍其中⼀些新的图形⼯具⽤以呈现分析结果。
基因芯⽚的原理微阵列芯⽚即⼀般所谓的基因芯⽚,也是基因组计划完成后衍⽣出来的产品,花费成本虽⾼,但效⽤⽆限,是⽬前所有⽣物芯⽚中应⽤最⼴的,由于近年来不断改进,也是最有成效的⽣物技术。
⼀般⽽⾔,基因芯⽚是利⽤微处理技术,先把⼈类所有的基因分别固着在⼀⼩范围的玻璃⽚(glass slide)、薄膜(membrane)或者硅芯⽚上;然后,可以平⾏地、⼤量地、全⾯性地侦测基因组中mRNA的量,也就是侦测基因的调控及相互作⽤表达。
⽬前微阵列芯⽚⼤致分为以下两种平台:cDNA芯⽚及⾼密度寡核⽢酸芯⽚(high-density oligonucleotide),两种系统⽆论在芯⽚的制备及样本处理上都有相当的差异,因此在分析上也略有不同,以下便就芯⽚的特性简略介绍。
微阵列分析与基因差异表达药物基因组学中的基因表达分析目前主要应用于创新药物研究和开发。
同时,基因表达谱已经开始为慢性致命性疾病的药物治疗效应提供预测信息,并指导治疗选择,而寡核苷酸微阵列平台具有应用于药物基因组学研究的潜在优势。
微阵列分析的特点:与DNA顺序分析和基因分型不同,微阵列基因表达分析的分析物是信使RNAs (mRNA)。
信使RNAs的不稳定性要比DNA大得多,对操作方面的要求非常高,以避免由于Rnase酶降解而产生假象。
此外,信使RNA在经PCR产生DNA拷贝扩增之前,或在大多数的微阵列分析中,或在产生cRNA拷贝的试管内转录(IVT)线性扩增程序中,都是逆转录形成cDNA的。
在IVT反应期间,cRNAs都被标记,而在杂交到寡核苷酸阵列时往往被分裂。
在研究中,基因表达阵列常常采用被标记的cRNAs或长寡核苷酸作为固定探针,以及由类似于半导体工业应用的光刻技术制造的寡核苷酸探针阵列;寡核苷酸探针可直接在微阵列表面合成,还可以应用多空间的完美匹配单碱基-错匹配探针对来查询每一个重要的基因。
这种高密度寡核苷酸探针诊断方法可检测出拼接变异种的能力,以及因特殊转录而造成融合基因时产生的特异性嵌合转录(如慢性髓细胞白血病中的BCR-ABL)。
目前有很多种途径来对成千上万的探针强度数据点进行数据分析,最近提出的是临床应用表达类型的最佳实用指导方针。
各种全自动化的分析方法(如层次聚类算法与运用自组织图)可供用于确定具有相似表达类型的分组基因之间的关系。
同样,还有一些需操作人员监管的分析方法(如支持向量机),可应用同质的PCR检测平台进行药物效应的基因显型检测,以筛选和鉴定最可能有效的患者。
促进肿瘤诊治水平提高基因的表达差异是药物疗效的基础。
基因表达的各种分析方法正在开发过程中,为疾病,尤其是肿瘤的治疗选择提供分子图表类型信息。
例如,常见的急性成人或儿童白血病的微阵列基因表达分析可以鉴定与特殊染色体易位或删除有关的分子图表类型,这样可以选择不同的治疗方案。
染色体微阵列分析报告引言染色体微阵列是一种用于研究基因组改变的方法,它可以同时分析多个基因座的拷贝数变异。
本文档将介绍染色体微阵列分析的原理、实验流程以及结果分析。
方法样本准备从病人体内获取染色体样本,例如血液、组织等,进行细胞培养和染色体提取工作。
微阵列实验将提取得到的染色体样本进行荧光标记,并与已知引物探针进行杂交。
然后使用染色体微阵列芯片进行读取和扫描,获取到每个基因座的信号强度。
数据分析根据信号强度,使用专门的数据分析软件对微阵列数据进行处理和分析。
常见的分析方法包括拷贝数变异分析、基因座关联分析等。
结果拷贝数变异分析根据微阵列数据,可以获得每个基因座的信号强度,从而推断拷贝数变异的情况。
拷贝数增加或减少可能与一些疾病相关。
基因座关联分析通过比较不同基因座之间的信号强度,可以发现它们之间的关联性。
这有助于理解基因座之间的相互作用和调控机制。
结果解读根据拷贝数变异分析和基因座关联分析的结果,可以得出一些结论。
例如,某个基因座的拷贝数增加与某种疾病的发病风险增加有关等。
结论染色体微阵列是一种有效的分析基因组改变的方法。
通过对微阵列数据的处理和分析,可以获得有关基因座的拷贝数变异和关联性的重要信息。
这对于研究疾病的发病机制和个体的遗传特征具有重要意义。
参考文献: 1. Smith A, et al. (2005). Microarray analysis of human copy number variants. 2. Johnson B, et al. (2007). Association mapping in structured populations.。
微阵列技术的实验设计和数据分析指南微阵列技术(microarray technology)是一种用于同时检测和量化大量基因表达水平的高通量方法。
它的广泛应用在生物医学研究、药物开发和临床诊断中具有重要的意义。
本文将为您提供微阵列实验设计和数据分析的指南,帮助您准确并有效地进行研究。
1. 实验设计1.1 定义研究问题:首先明确您的研究目的和问题,确定您希望回答的科学问题,例如,探究某个疾病的潜在生物标志物或评估药物治疗的剂量依赖性。
1.2 样本选择和处理:选择适当数量和类型的样本,确保代表性和可比性。
样本预处理包括RNA提取、反转录和标记等步骤,务必遵循标准化的流程和实验室规程。
1.3 平衡处理和随机分组:如研究涉及多组样本比较,应注意考虑处理组间的平衡和随机分组,以减少实验批次效应对结果的影响。
1.4 样本重复:为了评估实验的可重复性和可靠性,在实验设计中应包含适当数量的样本重复,以确保结果的统计意义和稳定性。
2. 平台选择和实验流程2.1 微阵列芯片选择:根据研究问题的需要,选择适当的微阵列芯片平台。
考虑芯片上的探针数目、探针的特异性和可靠性,以及平台的成本等因素。
2.2 样本标记和杂交:根据芯片厂商提供的标准操作步骤,进行样本标记和杂交,将标记后的核酸探针混合物与芯片进行杂交,使其与目标序列特异性结合。
2.3 芯片扫描和图像分析:使用合适的芯片扫描仪对芯片进行扫描,将获得的图像导入图像分析软件进行信号强度的提取和图像处理。
3. 数据预处理和质量控制3.1 数值转换:使用适当的数值转换方法,将原始数据转换为可解释和比较的数值,如对数转换、Z-score标准化等。
3.2 质量控制:对实验过程中生成的数据进行质量控制,包括检查实验批次效应、检测离群样本和低质量探针等,及时处理数据质量问题。
3.3 缺失数据处理:考虑探针的缺失情况,根据缺失数据的特点选择适当方法进行缺失值填补或剔除。
4. 数据分析和解释4.1 差异表达分析:使用适当的统计方法(如t检验、方差分析或非参数法),对实验组和对照组之间的差异进行分析,识别差异表达的基因。
染色体微阵列分析染色体微阵列分析是一种常用的遗传学检测方法,用于检测染色体序列的变异和异常。
它可以帮助医生和研究人员了解遗传疾病的发生机制,并为病人提供个性化的诊断和治疗方案。
本文将介绍染色体微阵列分析的原理、应用和潜在的风险。
染色体微阵列分析的原理是基于DNA微阵列技术,它可以同时检测数千个基因的表达量和染色体上的拷贝数变异。
在染色体微阵列分析中,首先需提取被检测者的DNA样本,然后将其转化为标记有荧光物质的cRNA(互补RNA)。
接下来,将cRNA与染色体上的DNA序列片段进行杂交反应。
最后,使用显微镜观察染色体上的荧光信号,以确定基因的表达量和染色体的结构变异。
染色体微阵列分析在临床应用中有着广泛的应用。
首先,它可以用于检测染色体异常,如染色体缺失、重复和倒位等。
这些异常往往与遗传疾病的发生密切相关,通过染色体微阵列分析可以及早发现这些异常,从而指导临床诊断和治疗。
其次,染色体微阵列分析可以用于评估肿瘤患者的染色体变异情况,以指导治疗方案的制定和预后的判断。
此外,它还可以用于检测染色体序列的失衡情况,如染色体局部缺失和重复,这对研究人员来说是非常有价值的。
然而,染色体微阵列分析也存在一定的风险。
首先,该技术需要高度专业的实验操作和数据解读能力,否则可能会导致错误结果的产生。
其次,因为染色体微阵列分析是通过检测基因的表达量和染色体序列的拷贝数来判断异常的,所以它可能无法检测一些基因变异,如染色体点突变和基因结构变异。
此外,染色体微阵列分析也存在着一定的伦理和隐私问题,因为它可以揭示被检测者的遗传信息,可能对个人和家庭产生潜在的影响。
因此,在进行染色体微阵列分析之前,需要对潜在的风险和益处进行综合评估,并充分考虑被检测者和家族的意愿。
同时,也需要进行必要的知情同意和隐私保护措施,以确保被检测者的权益和数据的安全。
综上所述,染色体微阵列分析是一种常用的遗传学检测方法,具有广泛的临床应用前景。
它可以帮助医生了解疾病的发生机制,并为病人提供个性化的诊断和治疗方案。
微阵列分析微阵列分析是一种针对微小阵列系统的分析方法,其目的是通过研究微阵列中的各个成分,进而了解其结构、功能和性能。
微阵列分析技术被广泛应用于生物学、医学、化学以及其他领域的研究中,为科学研究提供了重要的工具和手段。
微阵列是一种高通量的实验技术,可以同时检测和分析数百到数万个生物分子或化合物。
通过在固定载体上将成百上千个寡核苷酸探针或抗体固定在特定的位置上,可以实现对样品中目标物质的高效筛查和定量分析。
微阵列分析可以快速、高效地识别和量化大量的生物标志物,从而帮助研究人员了解生物系统的复杂性。
微阵列分析的过程一般包括实验设计、材料准备、实验操作、数据采集和数据分析等几个主要步骤。
在实验设计阶段,研究人员需要确定研究目的、样本类型和实验方案等。
材料准备包括对样品的预处理、核酸或蛋白质的提取以及探针的制备等。
实验操作主要包括样品处理、标记、杂交等步骤,通过这些步骤可以将目标物质与探针进行特异性结合。
数据采集是将实验结果以数字形式记录下来,可以通过扫描或成像技术获取。
数据分析是整个微阵列分析过程中最为重要的环节,研究人员可以通过不同的方法对数据进行处理和分析,从而获得有关目标物质丰度、表达模式、关系网络等信息。
微阵列分析技术在生物学研究中有着广泛的应用。
例如,在基因表达研究中,研究人员可以通过分析微阵列数据来了解不同基因在不同生理状态下的表达水平和模式,从而揭示基因调控网络和疾病发生机制。
在药物研发中,微阵列分析可以用于筛选和评估药物的效果,帮助科研人员寻找合适的药物靶点和药物分子。
在疾病诊断和治疗方面,微阵列分析可以根据患者的基因表达谱进行分析,为个体化医学提供参考和指导。
微阵列分析技术的发展为生物学研究带来了巨大的变革。
通过高通量的并行分析,研究人员可以更全面、高效地了解生物系统的复杂性,揭示其内在的机理和规律。
与传统的实验方法相比,微阵列分析具有更高的灵敏度、更广泛的覆盖面和更高的通量,能够提供更多的信息和洞察力。
微阵列分析与基因差异表达
药物基因组学中的基因表达分析目前主要应用于创新药物研究和开发。
同时,基因表达谱已经开始为慢性致命性疾病的药物治疗效应提供预测信息,并指导治疗选择,而寡核苷酸微阵列平台具有应用于药物基因组学研究的潜在优势。
微阵列分析的特点:
与DNA顺序分析和基因分型不同,微阵列基因表达分析的分析物是信使RNAs (mRNA)。
信使RNAs的不稳定性要比DNA大得多,对操作方面的要求非常高,以避免由于Rnase酶降解而产生假象。
此外,信使RNA在经PCR产生DNA拷贝扩增之前,或在大多数的微阵列分析中,或在产生cRNA拷贝的试管内转录(IVT)线性扩增程序中,都是逆转录形成cDNA的。
在IVT反应期间,cRNAs都被标记,而在杂交到寡核苷酸阵列时往往被分裂。
在研究中,基因表达阵列常常采用被标记的cRNAs或长寡核苷酸作为固定探针,以及由类似于半导体工业应用的光刻技术制造的寡核苷酸探针阵列;寡核苷酸探针可直接在微阵列表面合成,还可以应用多空间的完美匹配单碱基-错匹配探针对来查询每一个重要的基因。
这种高密度寡核苷酸探针诊断方法可检测出拼接变异种的能力,以及因特殊转录而造成融合基因时产生的特异性嵌合转录(如慢性髓细胞白血病中的BCR-ABL)。
目前有很多种途径来对成千上万的探针强度数据点进行数据分析,最近提出的是临床应用表达类型的最佳实用指导方针。
各种全自动化的分析方法(如层次聚类算法与运用自组织图)可供用于确定具有相似表达类型的分组基因之间的关系。
同样,还有一些需操作人员监管的分析方法(如支持向量机),可应用同质的PCR检测平台进行药物效应的基因显型检测,以筛选和鉴定最可能有效的患者。
促进肿瘤诊治水平提高
基因的表达差异是药物疗效的基础。
基因表达的各种分析方法正在开发过程中,为疾病,尤其是肿瘤的治疗选择提供分子图表类型信息。
例如,常见的急性成人或儿童白血病
的微阵列基因表达分析可以鉴定与特殊染色体易位或删除有关的分子图表类型,这样可以选择不同的治疗方案。
此外,在药物开发期间常规地进行肿瘤组织的基因表达分析,有可能鉴定出能预测药物效应的表达类型。
现在,科研人员通过分析在乳腺癌细胞株中5氟尿嘧啶(5-FU)诱导的基因表达,已经确定了与耐药和疗效有关的基因;取自针吸活检的mRNA的寡核苷酸微阵列分析获得的基因表达类型能预测乳腺癌患者服用多烯紫杉醇(Docetaxel)的疗效;对B系急性成淋巴细胞白血病患儿的白血病细胞所做的基因表达分析已经鉴定出来一套不同表达的基因,它们与对强的松、长春新碱、天冬酰胺酶制剂或柔红霉素的敏感性或耐药有关--这些信息在未来可用于指导治疗选择。
采用寡核苷酸微阵列的基因组分析可以结合生物信息分析,以精选出对诊断测试开发具有高度预测价值的最精简的不同表达基因,以便可用于低复杂性的诊断化验之中。
例如,在预期乳腺癌患者服用他莫西芬的疗效时,将雌激素受体阳性者的基因表达信号减少到两个基因表达比率,有助于开发简单的RT-PCR测试方法。
微阵列(micmarray)包括cDNA微阵列(cDNA microarray)和DNA芯片(DNA chips)。
它是近年来发展起来的可用于大规模快速检测基因差别表达、基因组表达谱、DNA序列多态性、致病基因或疾病相关基因的一项新的基因功能研究技术。
其基本原理是:将成千上万条DNA片段『lq"cDNA、表达序列标签(expressed sequence tag,EST)或特异性的寡核甘酸片段1按横行纵列有序地点样在固相支持物上,固相支持物为硝酸纤维膜或尼龙膜时,称为微阵列。
把固相支持物改为指甲盖大小的玻片或硅片时所形成的微阵列就称为DNA芯片。
检测时,首先以来自不同生理状态和发育阶段的mRNA为模板。
以放射性同位素或荧光物标记的dNTP为底物反转录合成cDNA.再用合成出的cDNA与微阵列或DNA芯片进行杂交。
然后通过计算机对结果进行判读和处理,就可以知道芯片上的哪些基因在细胞里表达,哪些基因不表达;同样也可以测知哪些基因的表达水平高,哪些基因的表达水平低。