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胆红素指标的解读使用干化学法检测胆红素，可以提供总胆红素(TBIL)、结合胆红素(Be)、未结合胆红素(Bu)、6胆红素(DELB)、新生儿胆红素(NBIL)、直接胆红素(DBIL)等指标。
以下是对胆红素指标的解读。
TBIL：血液中总的胆红素，包含胆红素的所有组分，TBTL的升高表明黄疸的存在，但单凭TBTL不能了解黄疸的形成原因。
Bu：可认为是肝前性的胆红素，是尚未被肝细胞摄取进行葡萄糖醛酸化的胆红素，导致Bu的升高原因有肝前性(胆红素生成增多，如溶血等)和肝细胞性(肝细胞摄取Bu障碍或胆红素葡萄糖醛酸化过程受阻等)的原因。
Be：可认为是肝细胞性或肝后性胆红素，是被肝细胞摄取并完成葡萄糖醛酸化的胆红素，生理情况下，Be形成后，即通过肝胆系统排泌。
生理状态下，Be不应出现在血液中，只有在Be排泌受阻的情况下，Be才可能出现在血液中。
所以，通常情况下，Be结果为0, Be升高意味着肝细胞功能受损或胆汁排泌受阻。
6胆红素(DELB)：生理状态下，血液中不存在6胆红素，如果Be排泌受阻，导致血液中Be升高，Be浸泡在白蛋白的环境中发生酶促反应，白蛋白置换Be所结合的葡萄糖醛酸，最终生成6胆红素，其半衰期与白蛋白的半衰期相同。
5胆红素的作用在于指示梗阻的治疗效果，当梗阻排除后，Be迅速下降，TBIL也随之下降，而6胆红素浓度则在一定时间内保持不变，所以DELB与TBIL的比值表现为上升。
如果胆红素的各组分出现上述变化，则表明梗阻治疗成功。
由于DELB=TBIL-(Bu+Bc),因此，要检测DELB,必须要先检测TBIL、Bu和Be。
NBIL：其实就是总胆红素，新生儿Bu比正常人高得多，由于无法避免的光照作用的影响，利用传统的重氮试剂法检测出的总胆红素要比实际浓度低得多，而用干化学法检测，用Bu+Bc的结果代表新生儿胆红素，则可以明显纠正上述误差。
DBIL：直接胆红素，生理情况下，DBIL与Be相当；病理情况下，DBIL为Be与6胆红素之和。
血清总胆红素和直接（结合）胆红素测定目前测定血清胆红素的方法主要有重氮试剂法（包括改良J-G法、二甲亚砜法、二氯苯重氮盐法和2，5二氯苯重氮四氟硼酸盐法等）、胆红素氧化酶法、钒酸盐氧化法、高效液相色谱法、导数分光光度法、经皮胆红素测定法以及直接分光光度法等。
改良咖啡因（J-G）法：一、实验原理血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应，生成紫色的偶氮胆红素；在同样条件下，未结合胆红素须有加速剂破坏胆红素氢键后才能与重氮试剂反应。
咖啡因、苯甲酸钠作为加速剂，醋酸钠缓冲液可维持反应的PH值同时兼有加速作用。
叠氮钠破坏剩余重氮试剂，终止结合胆红素测定管的偶氮反应。
最后加入碱性酒石酸钠，在碱性条件下，紫色偶氮胆红素转变为蓝色偶氮胆红素，使最大吸光度由530nm转移到598nm，此时，非胆红素的黄色色素及其它红色与棕色色素产生的吸光度可忽略不计，使测定的灵敏度和特异性增加。
最后形成的绿色是由蓝色的碱性偶氮胆红素和咖啡因与对氨基苯磺酸之间形成的黄色色素混合而成。
二、实验方法（一）器材试管，刻度吸管，分光光度计，37℃水浴箱。
（二）试剂1．咖啡因-苯甲酸钠试剂无水醋酸钠41g，苯甲酸钠37.5g，乙二胺四乙酸二钠EDTANa2 0.5g，溶于约500mL 的蒸馏水中，再加入咖啡因25g，搅拌至完全溶解(不可加热)，然后加蒸馏水稀释至1000mL，混匀，过滤后放置棕色试剂瓶中，室温保存可稳定6个月。
2. 5g/L 亚硝酸钠溶液：亚硝酸钠5.0g，加蒸馏水溶解并稀释至100mL，若发现溶液呈淡黄色时，应丢弃重配。
3. 5g/L 对氨基苯磺酸溶液：对氨基苯磺酸（NH2C6H4SO3H·H20）5.0g，加于约800mL 蒸馏水中，加浓盐酸15mL，待完全溶解后，加蒸馏水至1000mL。
4. 重氮试剂临用前，取5g/L 亚硝酸钠溶液（试剂2）0.5mL 与5g/L 对氨基苯磺酸溶液（试剂3）20mL 混合。
5. 5g/L 叠氮钠溶液：叠氮钠0.5g，用蒸馏水溶解并稀释至100mL。
基础医学B a s i c M e d i c i n e35正常人体胆红素主要来自血中衰老的红细胞。
红细胞平均寿命为120天，衰老的红细胞所释放的血红蛋白在体内经过一系列的代谢，最后变成胆红素，分为非结合胆红素与结合胆红素，分别从大、小便中排出。
正常时血液中只含有微量的胆红素。
胆红素的研究是临床医学中古老而又重要的课题。
血清胆红素测定是肝、胆功能检查中的一项重要检测项目。
重氮盐法检测胆红素被临床实验室广泛采用，但该法易受许多因素的干扰、试剂无法长期稳定，在疾病诊断中受到一定的影响。
随着全自动生化分析仪的普及和应用，要求不断推出新的胆红素测定方法[1]。
钒酸氧化法容易污染仪器，对别的测试产生影响[2]。
总胆红素的酶法测定早有报道，其方法学较为成熟，操作简便，快速准确，试剂可以长期稳定，特异性好，干扰少，但因为酶的来源、纯度、稳定性及一个波长测定不同胆红素成分等问题，应用具有局限性，在临床实际应用中未能得到推广。
提高酶法胆红素测定特异性的关键是选择BO D 对胆红素特异性氧化的反应条件，尽可能地加快B O D 对直接胆红素和间接胆红素的氧化。
复星长征公司研究出的产品跟重氮试剂的临床相关性较好。
1材料和方法1.1材料1.1.1重氮盐法检测试剂盒（罗氏公司）；钒酸氧化法检测试剂盒（北京利德曼生化技术有限公司）；酶法检测试剂盒（复星长征公司）。
1.1.2仪器A U 400全自动生化分析仪。
1.1.3标准与质控品标准品采用试剂配套校准品定值质控液（R A N D O X ）cl i nqa 定值血清。
1.2方法1.2.1测定方法几种总胆红素测定方法按试剂说明书进行操作。
1.2.2干扰液的制备脂肪乳干扰液：临床用50%的脂肪乳剂，以生理盐水10倍稀释到5%。
血红蛋白干扰液的制备：抽取4m l 新鲜血液置于生理盐水试管中，用生理盐水反复洗涤数次后，加入蒸馏水反复摇匀，使红细胞完全溶解（镜下瑞氏染色检查），离心沉淀后吸取上清液。
◆许可证号：浙食药监械生产许20090029号 ◆产品注册号： ◆产品标准号: -20093.4~21.7μmol/L（参照《全国临床检验操作规程》，建议各实验室建立自己的参考范围）检验结果的解释本法的检测范围为0~400μmol/L ，当样品测定值超过上限，应将样品用生理盐水进行稀释，重新测定，结果乘以稀释倍数。
检验结果的局限性1、当样品中抗坏血酸浓度≥1704μmol/L ，血红蛋白浓度≥4.0g/L ，甘油三酯浓度≥20mmol/L 时对测定结果又干扰。
2、血清中TBIL 的测定只是临床医师对患者进行诊断的指标之一，临床医师还要根据患者的体症、病史以及其他诊断项目、诊断手段进行综合判断。
产品性能指标1、线性范围：0~400μmol/L （相关系数r ≥0.99）2、重复性：测量精密度CV ≤4%、批间差≤8%3、准确度：相对偏差＜10%注意事项1、试剂盒样品用量可因仪器要求不同，按比例增减，计算公式不变。
2、本试剂仅供体外诊断用，试剂产生的废液及使用后难以降解的包装材料应集中收集后交当地废物处理站处理。
3、试剂使用后立即盖紧瓶盖，避免污染。
4、不同方法学试剂的质量控制结果之间会存在差异，使用时请确保质控选择与试剂的方法学保持一致。
5、不同批号的试剂不建议混用，如混用应重新校准。
参考文献1、叶应妩,王毓三.全国临床检验操作规程[M],3版.南京:东南大学出版社.,2006:452-457.2、德田邦明，古本和仁：临床化学22（2），116-122（1993）。
总胆红素检测试剂盒说明书（氧化法）企业名称：温州市维日康生物科技有限公司 生产地址：温州市瓯海区娄桥工业园园一路邮政编码：325000 电话：0577- 86585999 86585666 传真：0577- 86581858 网址： 邮箱：weirikan@感谢您使用我们的产品，使用前请仔细阅读此说明书总胆红素检测试剂盒说明书（氧化法）产品名称1、中文名称：总胆红素检测试剂盒（氧化法）2、英文名称：Total Bilirubin Determine Reagent Kit(Oxidation method)3、英文缩写：TBIL或TB包装规格预期用途本试剂盒用于体外定量检测人血清中总胆红素（TBIL）的含量。
胆红素测定方法胆红素是一种由肝脏产生的黄色物质，它在人体内起着重要的代谢作用。
胆红素的测定可以帮助医生判断肝功能和胆道疾病的情况，以及监测患者的治疗效果。
因此，准确测定胆红素水平对于临床诊断和治疗具有重要意义。
目前，常用的胆红素测定方法主要有血清胆红素测定法、尿胆红素测定法和组织胆红素测定法。
下面将分别介绍这三种方法的原理和操作步骤。
血清胆红素测定法是通过分析血液中的胆红素水平来判断肝功能和胆道疾病的情况。
操作步骤如下，首先，取一定量的患者血清标本，加入试剂混匀；然后，使用分光光度计测定混合液的吸光度，根据吸光度值计算出血清中的胆红素浓度。
这种方法操作简单，结果准确，是临床上常用的胆红素测定方法之一。
尿胆红素测定法是通过分析尿液中的胆红素水平来判断胆道疾病的情况。
操作步骤如下，首先，取一定量的患者尿液标本，加入试剂混匀；然后，使用分光光度计测定混合液的吸光度，根据吸光度值计算出尿液中的胆红素浓度。
这种方法简便快捷，适用于临床快速筛查。
组织胆红素测定法是通过分析组织样本中的胆红素水平来判断肝功能和胆道疾病的情况。
操作步骤如下，首先，取一定量的患者组织样本，加入试剂混匀；然后，使用分光光度计测定混合液的吸光度，根据吸光度值计算出组织中的胆红素浓度。
这种方法需要临床实验室条件支持，操作相对复杂，但结果准确可靠。
除了上述常用的胆红素测定方法外，近年来还出现了一些新的胆红素测定技术，比如高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS/MS）、蛋白质质谱技术等。
这些新技术能够更加准确地测定胆红素水平，为临床诊断和治疗提供更可靠的依据。
总的来说，胆红素测定是临床诊断和治疗中不可或缺的一部分，不同的测定方法各有特点，医生可以根据具体情况选择合适的方法进行检测。
随着医学技术的不断发展，相信胆红素测定方法也会不断完善，为临床诊断和治疗提供更多的选择和便利。
影响胆红素提取量的因素及注意事项一、影响胆红素提取量的因素（一）原料方面胆红素主要是从胆汁中提取的，那胆汁的来源就很关键啦。
如果是从健康动物的胆汁中提取，和从患病动物胆汁中提取，可能就会有差别。
比如说，健康动物胆汁里胆红素的含量可能相对稳定，质量也比较好。
要是动物本身有肝病之类的疾病，胆汁里可能就会混有其他杂质，影响胆红素的提取量呢。
还有啊，胆汁的新鲜程度也很重要哦。
新鲜的胆汁里胆红素的状态可能比较好提取，如果放置时间长了，胆红素可能会发生一些变化，像是氧化之类的，那提取量肯定就会减少啦。
（二）提取方法不同的提取方法对胆红素提取量影响可大了。
传统的提取方法可能效率比较低，能提取出来的胆红素量有限。
现在有一些新的技术，像酶法提取之类的，据说效果很不错。
但是这些新方法呢，也不是那么容易操作的。
要是操作过程中哪个环节没做好，比如酶的用量不对，或者反应的温度、时间没控制好，那也会影响胆红素的提取量。
而且不同的提取方法对设备的要求也不一样，设备的好坏也会影响最终的提取量哦。
（三）环境因素环境对胆红素提取量也有影响呢。
如果提取的环境比较脏，有很多灰尘或者微生物，那就很容易污染胆汁和提取过程中的试剂、设备等。
一旦被污染了，胆红素的纯度就会下降，提取量也会跟着减少。
还有温度和湿度也不能忽视，要是在一个湿度很大的环境里提取，可能会导致一些试剂受潮，影响反应的进行，进而影响胆红素的提取量。
二、注意事项（一）原料采集在采集胆汁的时候，一定要保证采集过程的卫生。
要使用干净的工具，避免胆汁被污染。
而且采集的量也要合适，不能太多也不能太少。
太多了可能会处理不过来，导致部分胆汁变质影响提取；太少了呢，又不值得进行提取操作，毕竟提取过程也需要一定的成本呢。
（二）提取操作按照提取方法的要求，严格控制每一个操作步骤。
比如说，在使用化学试剂的时候，要准确称量，保证试剂的浓度合适。
还有反应过程中的搅拌速度啊、加热温度啊，都要按照规定来。
氧化酶法和钒酸盐法测定血清胆红素的方法比较郝树彬;孙洪厚;孙秀会;刘兴翠;王志全;孙爱国【摘要】目的：通过对测定结果进行比对，研究胆红素钒酸盐氧化法和胆红素氧化酶法的反应方法原理，探讨两种方法之间异同点及结果是否具有可比性。
方法以两种方法分别检测310例血清，计算回归方程，评估两种方法的相关性。
对异常样本进一步实验以研究方法之间的异同。
结果总胆红素测定结果的回归方程为Y＝1.0651X＋1.1972，相关系数r＝0.9970。
成年人及＞30天儿童直接胆红素测定结果回归方程为Y＝0.9459X＋0.5995，相关系数r＝0.9944；新生儿测定结果的回归方程为Y＝0.4104X＋2.7563，相关系数r＝0.8835；结果异常新生儿血清梯度稀释后钒酸盐氧化法结果不可接受。
结论总胆红素和成人及＞30天儿童的直接胆红素两种方法测定结果的相关性在可接受范围内；新生儿直接胆红素测定两种方法的相关性不可接受；钒酸盐氧化法不可用于新生儿直接胆红素测定。
%Objective To study reaction principle of bilirubin vanadate oxidation method and bilirubin oxidase method through comparison of the determination results,and discuss similarities and difference between the two methods .Methods 310 ca-ses were measured and analyzed with each method.Abnormal samples were further investigated.Results Fortotal bilirubin, the regression equation obtained wasY=1.065 1X+1.197 2,the correlation coefficientr=0.997 0.For direct bilirubin of a-dults and children greater than 30 days,the regression equation wasY=0.945 9X+0.599 5 and the correlation coefficient r=0.994 4.For neonatal direct bilirubin,the regression equation wasY=0.410 4X+2.756 3 and the correlation coefficient r=0.883 5.The results from vanadate oxidation method wereunacceptable for abnormal neonatal serum measurement after serial dilution.Conclusion The overall conclusions were that for the measurement of total bilirubin,and direct bilirubin for adults and children older than 30 days.The correlation between these two methods is in an acceptable range,for measure-ment of neonatal direct bilirubin,the correlation between thesetwo methods was not acceptable.It is not recommended to measure neonatal direct bilirubin by vanadate oxidation method.【期刊名称】《现代检验医学杂志》【年(卷),期】2017(032)001【总页数】5页(P113-116,120)【关键词】总胆红素;直接胆红素;胆红素氧化酶法;钒酸盐氧化法;新生儿直接胆红素【作者】郝树彬;孙洪厚;孙秀会;刘兴翠;王志全;孙爱国【作者单位】山东省医疗器械产品质量检验中心/山东省医疗器械生物学评价重点实验室，济南 250101;莘县中日友好医院，山东聊城 252400;潍坊泽城生物技术有限公司，山东潍坊 261100;山东省恒信检测技术开发中心，济南 250101;莘县中日友好医院，山东聊城 252400;青州荣军医院，山东潍坊 262500【正文语种】中文【中图分类】R446.112血清中胆红素有3种存在形式：未结合胆红素、结合胆红素和共价结合于清蛋白的胆红素(δ-胆红素，Bδ)[1]。
方法批内批间低值高值低值高值钒酸盐法均值21.9190.421.4187.3CV 3.58% 2.46% 4.22% 2.57%亚硝酸盐法均值23.2185.622.7186.5CV1.12%2.94%2.36%2.72%胆红素的测定,传统使用重氮试剂法,该法使用时间较早,测值准确,但其试剂稳定性差、副反应明显。
经过多次改良仍然不能消除其比较明显的缺点。
化学氧化法包括钒酸盐氧化法、亚硝酸盐氧化法、过硫酸盐氧化法及综合氧化法等,化学氧化法因其具有抗干扰能力强、线性范围宽、重复性好及准确度高[1]等优点现在是最流行的测定血清胆红素的方法。
目前市场主要使用钒酸盐氧化法和亚硝酸盐氧化法,且两方法使用的原料差别不大,试剂性能也相近,本实验参考CLSI 的部分评价方法,主要通过精密度,线性范围,抗干扰性能三方面比较两试剂的区别,方便实验室或医院根据不同的需要选择。
1材料1.1试剂和仪器仪器使用日立7080全自动生化仪,试剂使用北京利德曼生化股份有限公司生产的总胆红素测定试剂盒(钒酸盐法)以及上海荣盛生物药业有限公司生产的总胆红素测定试剂盒(亚硝酸盐法)。
1.2标准液与质控液标液使用朗道定标血清2350-794,质控液使用朗道质控血清1530-791,1532-616。
1.3样本选用当天新鲜血清,无溶血,脂血(黄疸样本可作为高值样本)。
1.4干扰物抗坏血酸干扰物:100g/L 的抗坏血酸注射液用生理盐水稀释到10g/L。
肝素干扰物:使用12500U/支的肝素抗凝剂。
枸橼酸钠干扰物:使用3.2%枸橼酸钠抗凝剂。
血红蛋白干扰物:为外购干扰试剂。
1.5数据分析使用IBM SPSS Statistics 19数据分析软件进行统计分析。
2实验方法2.1精密度测试参考CLSI EP5[2]文件要求:取高值和低值的血清样本各一份,用两总胆红素试剂测试高低值样本各20次,计算批内精密度。
取高值和低值血清各一份,分装为20份于-20℃左右避光保存。
胆红素测定方法胆红素是人体内一种重要的生化物质，它是红细胞分解时产生的一种黄色的代谢产物。
正常情况下，胆红素会通过肝脏代谢后排泄出体外，但是当人体内胆红素代谢发生异常时，就会导致黄疸等症状的出现。
因此，准确测定胆红素的含量对于诊断和治疗相关疾病具有重要意义。
一、胆红素测定方法的原理。
胆红素的测定方法主要包括间接测定法和直接测定法两种。
间接测定法是通过测定血液中总胆红素的含量来间接反映胆红素的含量，而直接测定法则是直接测定血液中胆红素的含量。
二、胆红素测定方法的步骤。
1. 间接测定法的步骤：a. 采集患者静脉血标本；b. 用适当的试剂将血液标本中的胆红素转化为测定所需的产物；c. 通过光度法或比色法测定产物的吸光度；d. 根据吸光度值计算出胆红素的含量。
2. 直接测定法的步骤：a. 采集患者静脉血标本；b. 将血液标本中的蛋白质沉淀，得到清澈的血清；c. 通过高效液相色谱法或其他特定仪器测定血清中胆红素的含量。
三、胆红素测定方法的注意事项。
1. 采集血液标本时要注意无菌操作，避免污染；2. 试剂的选择和使用要严格按照说明书进行，避免试剂变质影响测定结果；3. 测定过程中要注意标本的保存和处理，避免因为外界因素导致结果出现偏差；4. 操作人员要熟练掌握测定方法，避免因为操作不当而导致结果不准确。
四、胆红素测定方法的应用。
胆红素测定方法主要应用于临床诊断和治疗过程中，可以帮助医生判断患者是否存在胆红素代谢异常，及时进行诊断和治疗。
此外，胆红素测定方法也可以用于科研领域，帮助科研人员深入了解胆红素的代谢规律及相关疾病的发病机制。
总结，胆红素测定方法是一项重要的生化检测方法，通过测定血液中胆红素的含量可以帮助医生进行诊断和治疗。
在实际操作中，要严格按照操作规程进行，避免因为操作不当导致结果不准确。
希望本文对于胆红素测定方法有所帮助。
总胆红素化学氧化法和重氮法-概述说明以及解释1.引言1.1 概述总胆红素是一种重要的生化指标，其测定方法多种多样。
其中，总胆红素化学氧化法和重氮法是常用的两种方法。
总胆红素化学氧化法通过将总胆红素氧化为胆红素氧化物，再进行光度测定来确定总胆红素含量。
相比之下，重氮法则是通过将总胆红素转化为双重氮化合物，然后进行比色测量来确定总胆红素的含量。
总胆红素化学氧化法在医学、生物化学和临床诊断中有着广泛的应用。
它具有操作简单、结果准确、灵敏度高等优点。
通过这种方法可以快速、准确地检测出总胆红素含量，为疾病的早期诊断和治疗提供重要依据。
然而，总胆红素化学氧化法也存在一些缺点，例如对样品准备要求高、耗时较长、需要使用特定的试剂等。
重氮法是另一种常用的测定总胆红素含量的方法。
它具有操作简单、结果可靠、灵敏度高等特点。
重氮法适用于各种类型的样品，包括血液、尿液和胆汁等。
与总胆红素化学氧化法相比，重氮法更加灵敏，并且可以检测出低浓度的总胆红素。
然而，重氮法也存在一些不足，例如对pH值和温度的要求较高，以及有一定的毒性和危险性。
通过比较总胆红素化学氧化法和重氮法，可以发现它们各自具有一定的优点和局限性。
总的来说，总胆红素化学氧化法在操作简单、结果准确方面具有一定优势；而重氮法则在灵敏度高、适用范围广方面具有一定优势。
根据具体的需求和实际情况，选择不同的方法进行总胆红素的测定，能够更好地满足实验要求和研究需要。
综上所述，总胆红素化学氧化法和重氮法是两种常用的测定总胆红素含量的方法。
它们各自具有一定的优缺点，适用于不同的实验需求。
通过综合评估和比较，可以选择合适的方法进行总胆红素的测定，为相关领域的研究和应用提供可靠的数据支持。
随着科学技术的不断发展，这两种方法仍有进一步改进和完善的空间，有望在未来取得更加广泛的应用。
文章结构部分的内容如下：1.2 文章结构本文将分为5个主要部分来论述总胆红素化学氧化法和重氮法这两种方法。
钒酸盐氧化法测定血清总胆红素的实验观察与讨论目前，不少临床实验室在应用钒酸盐氧化法测定血清总胆红素，该方法具有影响因素少，试剂成本低，结果稳定，线性范围宽（0-1026umol/L）等优点，但在实际应用过程中，我们也遇到了一些问题，并通过反复试验找到了相应的改进措施，效果良好，现报道如下：1 材料和方法1.1原理在pH3附近,标本中的总胆红素因表面活性剂和钒酸的作用直接被氧化成胆绿素,此时由于胆红素特有的黄色减少，测定钒酸作用前后的吸光度之差,可直接求出总胆红素的浓度。
1.2仪器：贝克曼LX20生化分析仪1.3试剂上海华氏亚太生物制药有限公司钒酸盐氧化法总胆红素测定试剂盒,液体双试剂(R1: Tris-HCL 缓冲液，表面活性剂；R2:磷酸盐缓冲液化学氧化剂钒酸钠)1.4胆红素标准品(日本和光纯药工业株式会社提供)。
1.5用450nm波长的测试方法与应用630nm波长的测试方法除波长与反应方向不同,其它实验参数均相同。
实验所给予的各样本胆红素值均为抽查病人样本用重氮法测定所得。
X代表测定均值， CV代表变异系数，n代表重复测定次数，胆红素单位为umol/L .2 观察与讨论2.1间接胆红素浓度大量增多的样本的检测。
临床上常遇到由于间接胆红素的大量增多而致总胆红素浓度大幅升高的病例,如蚕豆黄,新生儿溶血症等疾病，血液间接胆红素的比例可高达90%以上,由于间接胆红素的极性基团被掩蔽,在被钒酸氧化前有一个被表面活性剂处理的过程,间接胆红素含量越高,则在较短时间内处理得越不完全,导致第二试剂加入后未被表面活性剂完全处理的间接胆红素不能及时地被钒酸所氧化,单位时间内胆红素的实际反应量减少,在试剂盒设置的反应时间结束时,仍然显示出较高的吸光度,也就是说标本内的胆红素并没有完全参与反应,因此测得结果低于样本的实际浓度,误差幅度则随着间接胆红素在标本中比例的扩大而增加,为此我们采取稀释样本(一般将样本用生理盐水作2-5倍稀释即可),适当延长样本与第一试剂中表面活性剂的作用时间(原300秒改为420秒)。
血清直接胆红素测定标准操作规程1.检验原理：（钒酸盐法）pH 值接近3时，在钒酸盐和表面活性剂的作用下，胆红素被氧化成胆绿素。
此时，胆红素特有的黄色减少，在波长450nm 处通过测定钒酸作用前后的吸光度的差可以求得样品中直接胆红素的浓度。
胆红素−−−−−→−表面活性剂钒酸盐/胆绿素 2.试剂主要组成成分3.样本要求 新鲜无溶血血清，勿使用肝素抗凝血浆。
22～25℃保存8小时，2～8℃保48小时，-20℃保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法：仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6.检验结果的解释6.1样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V ）的氯化钠溶液稀释样本。
通常稀释2倍，当样本浓度较大时提高稀释倍数。
6.2单位换算：mg/dL=umol/L ×0.05857检验方法的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊或以水空白在450nm 处吸光度大于0.500时不能使用。
8.产品性能指标8.1线性范围：在给定的样本/试剂比例和条件下测定时，本世纪线性范围可达0-320umol/L 。
8.2试剂空白吸光度：在450nm 处，光径1cm 时，空白吸光度A ≤0.500，△A空白/分钟≤0.002.8.3准确度：相对偏差≤10%。
8.4精密度8.4.1批内精密度CV≤3%8.4.2批间精密度：R≤10%8.5分析灵敏度：在给定的样本/试剂比例和条件下测定时，1umol/L的直接胆红素对应的△A不低于1.5×3108.6干扰试验无明显干扰：添加干扰物后的测定值与初始测定值的相对偏差处于±10%以内。
8.7方法比较：本试剂盒与商品化试剂盒测定40个样本测定结果相关性如下：y=1.052x-1.254；r=0.998。
9.临床意义：在肝细胞内质网中，胆红素结合成水溶性的胆红素双葡糖醛酸酯，能和重氮试剂直接反应，故称直接胆红素。
胆红素指标的解读使用干化学法检测胆红素，可以提供总胆红素（TBIL）、结合胆红素（Bc）、未结合胆红素（Bu）、δ胆红素（DELB）、新生儿胆红素（NBIL）、直接胆红素（DBIL）等指标。
以下是对胆红素指标的解读。
TBIL：血液中总的胆红素，包含胆红素的所有组分，TBIL的升高表明黄疸的存在，但单凭TBIL不能了解黄疸的形成原因。
Bu：可认为是肝前性的胆红素，是尚未被肝细胞摄取进行葡萄糖醛酸化的胆红素，导致Bu的升高原因有肝前性（胆红素生成增多，如溶血等）和肝细胞性（肝细胞摄取Bu障碍或胆红素葡萄糖醛酸化过程受阻等）的原因。
Bc：可认为是肝细胞性或肝后性胆红素，是被肝细胞摄取并完成葡萄糖醛酸化的胆红素，生理情况下，Bc形成后，即通过肝胆系统排泌。
生理状态下，Bc不应出现在血液中，只有在Bc排泌受阻的情况下，Bc才可能出现在血液中。
所以，通常情况下，Bc结果为0，Bc升高意味着肝细胞功能受损或胆汁排泌受阻。
δ胆红素（DELB）：生理状态下，血液中不存在δ胆红素，如果Bc排泌受阻，导致血液中Bc升高，Bc浸泡在白蛋白的环境中发生酶促反应，白蛋白置换Bc所结合的葡萄糖醛酸，最终生成δ胆红素，其半衰期与白蛋白的半衰期相同。
δ胆红素的作用在于指示梗阻的治疗效果，当梗阻排除后，Bc迅速下降，TBIL也随之下降，而δ胆红素浓度则在一定时间内保持不变，所以DELB与TBIL的比值表现为上升。
如果胆红素的各组分出现上述变化，则表明梗阻治疗成功。
由于DELB=TBIL-(Bu+Bc)，因此，要检测DELB，必须要先检测TBIL、Bu和Bc。
NBIL：其实就是总胆红素，新生儿Bu比正常人高得多，由于无法避免的光照作用的影响，利用传统的重氮试剂法检测出的总胆红素要比实际浓度低得多，而用干化学法检测，用Bu+Bc的结果代表新生儿胆红素，则可以明显纠正上述误差。
DBIL：直接胆红素，生理情况下，DBIL与Bc相当；病理情况下，DBIL为Bc与δ胆红素之和。
不同方法的胆红素试剂比较胆红素的测试一直困扰着检验界，目前市场上主要有重氮法、钒酸盐法、氧化法、KHC3法等，请各位就以上几种方法结合临床应用讨论一下他们的优缺点，供大家参考。
中生直接胆红素试剂盒使用说明书Direct Bilirubin Kit（D.Bili）重氮法通用型（液体）本试剂用于测定人血清中直接胆红素的浓度。
测定原理：对氨基苯磺酸+HCl+NaNO2氯化重氮苯磺酸+NaCl血清直接胆红素+氯化重氮苯磺酸偶氮胆红素（红紫色）试剂盒主要成分与浓度：试剂稳定性：原装试剂在2~8℃避光保存，有效期12个月。
工作液在2~8℃可稳定7天，室温下可保存24小时。
样品：新鲜无溶血血清，肝素或EDTA血浆。
操作步骤：波长：546nm（540~560nm）反应温度：37℃比色杯光径：1cm将R1与R2以40:1比例混合，即成工作液。
分别混合均匀，在37℃保温5分钟，分别读取吸光度A（在60分钟内吸光度保持不变）。
计算：直接胆红素浓度（μmol/L或mg/dl）C=[(A样品－A样品空白)－(A试剂－A试剂空白)] ×F*F*=C标准/[(A标准－A标准空白)－(A试剂－A试剂空白)]此F*值为用BM公司cafs.标准或中生直接胆红素标准（另购）定标所测。
参考值：0~5.1μmol/L (0~0.3mg/dl)参考文献：Thomas L (ed) Labor and Diagnose,4a ed.Marb-urg:Die Medizi-nische Verlagsgesellschaft, 1992:235各医院应根据本地区实际情况建立自己的正常值。
线性上限：直接胆红素浓度可达171μmol/L(10mg/dl）注意事项：1. 样品中直接胆红素含量高于171μmol/L （10mg/dl）时，用生理盐水稀释后再重新测定，结果乘以稀释倍数。
2.由于胆红素遇光分解为胆绿素，因此采血后请尽快进行测定，如果不能及时测定，血清应避光冷冻保存。
3.溶血时可能会出现负值。
4. R2应避光保存，R2变黄则不能使用。
5. 使用本公司生产的“直接胆红素试剂盒”，必须同时使用BM公司的cafs.标准或中生直接胆红素标准（另购）定标。
6.本试剂盒不带标准，若有需要可另购中生公司的直接胆红素标准。
7.本试剂盒仅可作为单一试剂使用，不能作为双试剂上机使用，如需使用，请购买直接胆红素液体双试剂盒。
8.本产品仅用于体外诊断，避免直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽。
9.本产品应在2~8℃条件下贮存，避免在2~8℃以上及0℃以下存放。
中生直接胆红素（D.Bili）液体试剂盒说明书钒酸盐法用途：本试剂用于测定人血清中直接胆红素的含量。
测定原理：在特定条件下（pH3.0），血清中胆红素与钒酸反应，生成胆绿素，其在450nm处吸光度的下降与血清中直接胆红素含量成正比。
试剂成分与浓度：试剂稳定性：原装试剂在2~8℃避光保存，有效期12个月。
样品：新鲜无溶血血清，肝素或EDTA血浆。
操作步骤：波长：主波长 450nm 副波长 540nm反应温度：37℃比色杯光径：1cm将R1与R2按4:1比例混合，即成工作液。
分别混合均匀，在37℃保温5分钟，分别读取吸光度A。
计算：样品中直接胆红素浓度（μmol/L或mg/dl）C=[(A样品－A样品空白)－(A试剂－A试剂空白)] ×FF=C标准/ [(A标准－A标准空白)－(A试剂－A试剂空白)]1.0mg/dl相当于17.1μmol/L参考值：0~6.84μmol/L (0~0.4mg/dl)各医院应根据本地区实际情况建立自己的正常值。
线性上限：直接胆红素浓度可达256.5μmol/L(15mg/dl)注意事项：1. 样品中直接胆红素含量高于15mg/dl时，用生理盐水稀释后再重新测定，结果乘以稀释倍数。
2. 由于胆红素遇光分解为胆绿素，因此采血后请尽快进行测定，如果不能及时测定，血清应避光冷藏保存。
3. 溶血严重时可能会出现负值。
4. 本试剂盒不带标准，若有需要可另购中生公司的胆红素标准（钒酸盐法）。
5. 本产品仅用于体外诊断，避免直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽。
6本产品应在2~8℃条件下贮存，避免在2~8℃以上及0℃以下存放。
迈克直接胆红素（DBil）试剂盒—氧化法用途：本试剂用于测定人血清中直接胆红素的含量。
适用于全自动生化分析仪。
原理：样品中直接胆红素在pH3.0附近，以及氧化剂和表面活性剂作用下，可以被氧化成胆绿素。
与此同时，胆红素特有的黄色也随之消失。
测定反应前后吸光度的差，即可计算出样品中直接胆红素的浓度。
胆红素胆绿素试剂盒组成：R1：缓冲液Good’s缓冲液 100.0mmol/L反应促进剂、抗干扰剂R2：反应液氧化剂 4.0mmol/L本试剂盒不附校准品，请用户另行购买。
样品要求：样品为新鲜无溶血现象的血清。
样品应在低温条件下运输保存，样品中直接胆红素2～8℃密闭避光保存可稳定3天，冰冷保存可稳定3个月。
标本收集后应尽快分离血清进行测定。
测定步骤：1. 基本参数：方法：终点法样品/试剂：1/35主波长： 450nm 反应温度：37℃副波长： 546nm 反应时间：10min2. 操作：测定（U）校准（S）空白（B）样品（ml）0.01 -- --校准液（ml）-- 0.01 --蒸馏水（ml）-- -- 0.01试剂R1（ml）0.28 0.28 0.28混匀，37℃恒温5分钟，空白管调零450nm测吸光度A1试剂R2（ml）0.07 0.07 0.07混匀，37℃恒温5分钟，空白管调零450nm测吸光度A2。
操作流程图：蒸馏水调零←——测定——→Time：5分钟 10分钟37℃主波长450nm↑↑副波长546nm试剂R1：0.28ml 试剂R2 ：0.07ml样品：0.01ml直接胆红素（D-Bil）测定试剂盒KHC3法【用途】本试剂是定量检测血清或血浆中直接胆红素的含量。
【分析原理】在电子传递体KHC3存在下，结合胆红素被氧化生成蓝绿色的显色基团。
未结合胆红素在此条件下未被溶解，仍与白蛋白结合，所以不能进行直接检测。
KHC3结合胆红素───→胆蓝素（黄色）（蓝绿色）IR750试剂在700nm处，有一很轻微的吸光度，在750nm处有很明显的吸光度，在同一波长下，以不含有胆红素的血清作为样本，会引起吸光度轻微降低，而以水作为样本则不会使吸光度降低。
因此，必须使用零点校准物和Synermed? IRCal 2的参考血清进行校准或使用含有高值和低值的参考血清一齐进行定标。
零点的校准物是模拟血清的影响作为空白。
【试剂组成】试剂1（R1）直接胆红素试剂盐酸0.16NKHC3 3mmol/l增溶剂【试剂贮存及稳定性】试剂可在室温20~25°C下保存至有效期。
【样本要求】选择新鲜抽出的，空腹病人无溶血的血清或肝素抗凝的血浆样本。
血清要迅速与细胞分离最大限度地减少溶血。
文献记录显示，血浆可作为样本使用，血浆与血清结合胆红素的值没有差别。
血清中的结合胆红素在白光照射下（人造或者阳光）都会使胆红素被氧化或脱氢生成胆绿素或者其它的中间产物。
血清中的胆红素在光照一个小时后将会下降50%的浓度。
最佳的保存方法是避光和低温保存。
样本在室温下避光保存可稳定2天，冷藏避光保存可稳定4~7天，冰冻避光保存可稳定3个月。
【操作程序】1．试剂准备：试剂在使用前无需特别准备，可直接使用。
2．基本参数：测定模式终点法波长700nm比色杯光径1cm 温度37°C孵育时间4~5分钟3．手工操作：a．选择设置700nm波长b．调整反应温度37°Cc．血清/血浆/定标液/质控与试剂按1:10的比例混匀d．孵育4~5分钟后读取样本终点吸光度（也可用双波长进行检测，副波长在740~770nm。
用主波长测得的吸光度减去副波长的吸光度，得到DA。
）【定标】推荐使用直接胆红素零定标液和IR CAL 2定标液进行两点定标。
以蛋白作为基质的IR CAL 2含有大约5mg/dl（86mmol/l）的直接胆红素，可对此方法进行校准。
每个月进行定标一次。
【质控】每一个实验室应该在测量未知样本的同时检测质控物。
推荐检测每一批样本时应同时与正常值和异常值的质控一同检测并确保质控在可接受的范围内。
一般的质控物可适用，并且结果必须在实验室所建立的标准之内。
【结果计算】可以从两个参考物进行定标制成的定标曲线或由零点的定标物和IRCal制成的定标曲线中查出样本浓度，也可以根椐以下公式求出结果：样本浓度= 因子× DA样本DA样本是由样本的吸光度减去用零点的校准物作为样本所测得的吸光度例如：A样本=0.050A700nm因子=252.5样本浓度=0.050×252.5=12.6mmol/L（0.74mg/dl）【参考范围】成人：0~0.3mg/dl（0~5m mol/l）直接胆红素的水平根据性别、年龄和饮食而变化，强烈建议每个实验室建立自已实验室参考值。
【试剂性能】1．线性范围：0~10mg/dl（0~171m mol/l）。
如果样本中直接胆红素水平高于此值，应用去离子水稀释样本重做，结果乘以稀释倍数。
2．精密度：批内CV < 8.2%批间CV < 7.6%3．灵敏度：0.02mg/dl【注意事项】1．血红蛋白浓度低于1000mg/dl时，对测试没有影响。
2．脂血（内脂）浓度低于750mg/dl时，对测试没有影响。
3．血红蛋白（血液替代品）浓度低于1000mg/dl时，对测试没有影响。
4．尿液中尿蓝酶的浓度水平在0.5mmol/l和1.0mmol/l时，对测试没有影响。
5．关于由生物学或方法学所引起的干扰,请参阅有关资料。
我觉得KHC3法最优秀的地方是解决了胆红素试剂的稳定性问题。
其他试剂都必须在2－8℃保存，而此试剂则可在常温下保存，这是一个很大的突破。
胆红素难做的原因一个是试剂不稳定，第二是标准品不稳定，这给仪器定标带来困难，所以许多试剂都没有胆红素标准，而由厂家直接给出参考因子。
但由于试剂和仪器方面的因素，这个因子会有差异。
所以有时同一个病人在不同的医院所测出的结果相差很远，甚至相差近十倍。
