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血清总胆红素和直接（结合）胆红素测定目前测定血清胆红素的方法主要有重氮试剂法（包括改良J-G法、二甲亚砜法、二氯苯重氮盐法和2，5二氯苯重氮四氟硼酸盐法等）、胆红素氧化酶法、钒酸盐氧化法、高效液相色谱法、导数分光光度法、经皮胆红素测定法以及直接分光光度法等。
改良咖啡因（J-G）法：一、实验原理血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应，生成紫色的偶氮胆红素；在同样条件下，未结合胆红素须有加速剂破坏胆红素氢键后才能与重氮试剂反应。
咖啡因、苯甲酸钠作为加速剂，醋酸钠缓冲液可维持反应的PH值同时兼有加速作用。
叠氮钠破坏剩余重氮试剂，终止结合胆红素测定管的偶氮反应。
最后加入碱性酒石酸钠，在碱性条件下，紫色偶氮胆红素转变为蓝色偶氮胆红素，使最大吸光度由530nm转移到598nm，此时，非胆红素的黄色色素及其它红色与棕色色素产生的吸光度可忽略不计，使测定的灵敏度和特异性增加。
最后形成的绿色是由蓝色的碱性偶氮胆红素和咖啡因与对氨基苯磺酸之间形成的黄色色素混合而成。
二、实验方法（一）器材试管，刻度吸管，分光光度计，37℃水浴箱。
（二）试剂1．咖啡因-苯甲酸钠试剂无水醋酸钠41g，苯甲酸钠37.5g，乙二胺四乙酸二钠EDTANa2 0.5g，溶于约500mL 的蒸馏水中，再加入咖啡因25g，搅拌至完全溶解(不可加热)，然后加蒸馏水稀释至1000mL，混匀，过滤后放置棕色试剂瓶中，室温保存可稳定6个月。
2. 5g/L 亚硝酸钠溶液：亚硝酸钠5.0g，加蒸馏水溶解并稀释至100mL，若发现溶液呈淡黄色时，应丢弃重配。
3. 5g/L 对氨基苯磺酸溶液：对氨基苯磺酸（NH2C6H4SO3H·H20）5.0g，加于约800mL 蒸馏水中，加浓盐酸15mL，待完全溶解后，加蒸馏水至1000mL。
4. 重氮试剂临用前，取5g/L 亚硝酸钠溶液（试剂2）0.5mL 与5g/L 对氨基苯磺酸溶液（试剂3）20mL 混合。
5. 5g/L 叠氮钠溶液：叠氮钠0.5g，用蒸馏水溶解并稀释至100mL。
直接胆红素测定的标准操作规程【目的】体外检测血清直接胆红素（DBIL）的含量。
【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理钒酸盐胆红素胆绿素PH3.0测定钒酸盐作用前后吸光度差异，可求标本中直接胆红素的浓度。
二、试剂1.试剂本科使用北京利德曼生化股份有限公司DBiL试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：2.校准要求使用去离子水与校准品两点定标，详见说明书；正常情况下，应每两周对测定进行一次校准。
三、操作测定（试剂准备液体试剂，直接使用，无需配制。
）四、计算DBIL=校准液（△A=A2-A1）×(△A标准/△A校准)五、质控程序1.建议采用朗道水平2(正常范围质控）和水平3（病理范围质控）两个水平的血清进行室内质控。
2.可接受性判断质控物的检测值应在给定质控范围，或可以通过参加卫生部室间质评对实验室的运作情况进行系统评估。
3.质控操作每日进行样本检测之前首先应进行质控操作，以考察系统的在控情况。
如果检测结果符合质控要求则进行样本操作；如果不符合质控要求，则应重复质控操作，以排除可能发生的偶然误差；如果仍不符合质控要求，则应考虑质控品的重新准备、试剂的重新校准或更新、仪器的维护等。
总胆红素28.5,间接胆红素22.4直接胆红素4.7总胆红素28.5，间接胆红素22.4，直接胆红素4.7，这是医学检验常见的三项指标，通常用于检测肝功能、溶血性疾病和胆道疾病等方面的情况。
在这篇文章中，我们将深入探讨这三项指标的含义、检测方法、结果解读以及与相关疾病的关联，帮助读者全面理解这个话题。
1. 总胆红素的作用和意义总胆红素是人体内的一种代谢产物，它主要由红细胞的破坏和衰老所释放。
在正常情况下，总胆红素会通过肝脏转化为胆红素衍生物，然后排泄至肠道。
总胆红素的含量可以反映出肝功能和红细胞代谢的情况。
正常情况下，成年人的总胆红素水平应该在正常范围之内，超出正常范围可能意味着肝功能异常或溶血等疾病的存在。
2. 间接胆红素与溶血性疾病的关联间接胆红素是总胆红素中的一个分量，它主要是指未经过肝脏代谢的胆红素。
间接胆红素的含量可以反映出红细胞的破坏和溶血情况。
在溶血性贫血、遗传性溶血性黄疸等疾病中，间接胆红素的含量通常会升高。
通过检测间接胆红素的含量，可以帮助医生判断溶血性疾病的程度以及制定相应的治疗方案。
3. 直接胆红素与胆道疾病的关联直接胆红素是总胆红素中与肝脏转化有关的分量，它主要是指经过肝脏代谢后、分泌到胆汁中的胆红素。
直接胆红素的含量可以反映出肝脏对胆红素的代谢能力和胆道的通畅情况。
在肝功能异常、胆道梗阻、胆道炎症等疾病中，直接胆红素的含量通常会升高。
通过检测直接胆红素的含量，可以帮助医生判断肝功能和胆道情况，从而指导临床治疗。
4. 个人观点和理解总体来说，总胆红素、间接胆红素和直接胆红素是反映肝功能、红细胞代谢以及胆道情况的重要指标。
在临床实践中，通过对这三项指标的综合分析，可以帮助医生初步判断患者可能存在的疾病类型，制定进一步的检查和治疗方案。
作为患者，了解这些指标的含义和关联，有助于更好地配合医生的诊断和治疗，促进康复进程。
通过以上的深度和广度的探讨，相信读者对总胆红素、间接胆红素和直接胆红素有了更深入的理解。
胆红素分类、检测办法及直接胆红素与结合
胆红素区别和应用
胆红素包括直接胆红素、间接胆红素、结合胆红素、非结合胆红素、δ胆红素等等。
检测胆红素方法包括湿化学法，干化学法、其他。
比较常用是重氮反应法和干化学法。
直接胆红素：在检测中可以与重氮磺胺酸直接反应的胆红素。
间接胆红素：需要加入加速剂（苯丙酸钠、甲醇、安息香酸钠）等破坏其氢键再与重氮磺胺酸反应的胆红素。
结合胆红素：是指胆红素经肝脏极性转化后与葡萄糖醛酸结合的水溶性胆红素（Bc）。
Bc又分为单葡萄糖醛酸结合胆红素（mBc）和双葡萄糖醛酸结合胆红素（dBc）。
非结合胆红素（Bu）：是以白蛋白为载体的脂溶性游离胆红素。
δ胆红素（DELB）：δ胆红素是一种与白蛋白以酰胺键共价结合不可分解的胆红素，具有良好稳定性，半衰期在17-23天。
直接胆红素可以溶于水的胆红素，但少量游离胆红素也可以参加直接反应，少量游离胆红素的氢键被破坏也会参加重氮反应。
重氮反应中：直接胆红素=结合胆红素（Bc）+大部分δ胆红素（DELB）+少量非结合胆红素（Bu）
结合胆红素（Bc）=mBc+dBc
间接胆红素=非结合胆红素。
检测胆红素的方法
检测胆红素的方法有多种，常见的方法包括：
1. 血清总胆红素测定：通过检测血液中的总胆红素含量来评估胆红素水平。
此方法常用于评估黄疸的严重程度。
2. 血清直接胆红素测定：血液中的直接胆红素主要来自于肝脏的代谢作用，直接胆红素测定可以评估肝脏功能。
3. 尿液胆红素测定：尿液中的胆红素通常与黄疸有关，通过检测尿液中胆红素的浓度可以评估肝脏或胆道系统的功能。
4. 新生儿血清胆红素测定：用于评估新生儿黄疸的程度，通常通过脚底或掌心的皮肤颜色变化来评估。
5. 胆红素结合能力测定：通过检测血液中胆红素的结合能力来评估肝脏功能和胆红素代谢能力。
以上方法常用于临床胆红素的检测，具体使用哪种方法需要根据患者情况和医生的判断来决定。
胆红素怎么检查你知道胆红素怎么检查吗？胆红素是判断肝病的指标之一，胆红素对肝脏具有一定的保护作用，一旦胆红素过高，就意味着疾病，那么你知道胆红素怎么检查吗？我们一起来看看。
文章目录胆红素怎么检查1、胆红素怎么检查1.1、湿化学法:反应均在液体试剂中进行,重氮法、氧化酶法、化学氧化(如钒酸盐氧化法)法等。
1.2、重氮法:在强酸(pH1-2)条件下,胆红素和重氮离子偶联,形成有颜色的偶氮化合物,重氮胆红素显色的强度与胆红素浓度呈比例,光电比色测定。
优点:可直接比色,手续简单、易于自动化。
缺点:重氮试剂不稳定,须由亚硝酸钠和氨基苯磺酸临时生成;易受溶血、脂血等因素干扰,胆红素浓度过高时影响准确度。
1.3、氧化酶法:胆红素氧化酶催化样品中的胆红素氧化,生成胆绿素引起450nm处吸光值下降。
1.4、化学氧化法:胆红素的四吡咯结构具有还原性,因此各种低分子的武技氧化剂和在一定条件下具有氧化性的各种镀金属元素都可以氧化胆红素。
1.5、钒酸法:在pH=3的条件下,血清胆红素可经钒酸氧化成胆绿素,从而使胆红素特有的黄色减少,可根据加入钒酸前后450nm处吸光度的下降与血清胆红素呈正比。
2、胆红素正常参考值直接胆红素的正常参考值范围为:0～0.4mg/dl。
总胆红素(直接胆红素与间接胆红素之和)正常值参考范围:约胆红素0.2～1.2mg/dl(一些实验室数值参考范围高达1.9mg/dl)。
3、胆红素的间接胆红素:说明可能是溶血性黄疸造成的,直接胆红素升高也可能会有输血时血型不合,贫血等原因分类3.1、总胆红素:间接胆红素偏高,直接胆红素偏高,说明肝细胞性黄疸,肝细胞受到损害,肝功能减退,肝脏不能完全将间接胆红素转化为直接胆红素,同时肝内胆管受压引起了排泄障碍,直接胆红也不能完全排到胆道,同时有可能伴有急性黄疸型肝炎,慢性活动性肝炎,肝硬化,肝癌等疾病。
3.2、直接胆红素:说明是由阻塞性黄疸造成的。
3.3、间接胆红素:说明可能是溶血性黄疸造成的,直接胆红素升高也可能会有输血时血型不合,贫血等原因。
血清总胆红素和直接（结合）胆红素测定
目前测定血清胆红素的方法主要有重氮试剂法（包括改良J-G法、二甲亚砜法、二氯苯重氮盐法和2，5二氯苯重氮四氟硼酸盐法等）、胆红素氧化酶法、钒酸盐氧化法、高效液相色谱法、导数分光光度法、经皮胆红素测定法以及直接分光光度法等。
改良咖啡因（J-G）法：
一、实验原理
血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应，生成紫色的偶氮胆红素；在同样条件下，未结合胆红素须有加速剂破坏胆红素氢键后才能与重氮试剂反应。
咖啡因、苯甲酸钠作为加速剂，醋酸钠缓冲液可维持反应的PH值同时兼有加速作用。
叠氮钠破坏剩余重氮试剂，终止结合胆红素测定管的偶氮反应。
最后加入碱性酒石酸钠，在碱性条件下，紫色偶氮胆红素转变为蓝色偶氮胆红素，使最大吸光度由530nm转移到598nm，此时，非胆红素的黄色色素及其它红色与棕色色素产生的吸光度可忽略不计，使测定的灵敏度和特异性增加。
最后形成的绿色是由蓝色的碱性偶氮胆红素和咖啡因与对氨基苯磺酸之间形成的黄色色素混合而成。
二、实验方法
（一）器材
试管，刻度吸管，分光光度计，37℃水浴箱。
（二）试剂
1．咖啡因-苯甲酸钠试剂无水醋酸钠41g，苯甲酸钠37.5g，EDTANa2 0.5g，溶于约500mL 的蒸馏水中，再加入咖啡因25g，搅拌至完全溶解(不可加热)，然后加蒸馏水稀释至1000mL，混匀，过滤后放置棕色试剂瓶中，室温保存可稳定6个月。
2. 5g/L 亚硝酸钠溶液：亚硝酸钠5.0g，加蒸馏水溶解并稀释至100mL，若发现溶液呈淡黄色时，应丢弃重配。
3. 5g/L 对氨基苯磺酸溶液：对氨基苯磺酸（NH2C6H4SO3H·H20）5.0g，加于约800mL 蒸馏水中，加浓盐酸15mL，待完全溶解后，加蒸馏水至1000mL。
4. 重氮试剂临用前，取5g/L 亚硝酸钠溶液（试剂2）0.5mL 与5g/L 对氨基苯磺酸溶液（试剂3）20mL 混合。
5. 5g/L 叠氮钠溶液：叠氮钠0.5g，用蒸馏水溶解并稀释至100mL。
6. 碱性酒石酸钠溶液：氢氧化钠75g，酒石酸钠(Na2C4H4O6·2H2O)263g，加蒸馏水溶解并稀释至1000mL，混匀，置塑料瓶中，室温保存可稳定6个月。
7.胆红素标准液可购买，也可按以下方法配制：
（1）稀释血清：收集不溶血、无黄疽、清晰的血清过滤作为混合血清稀释剂。
取过滤血清1.0ml，加生理盐水24ml，混匀。
在分光光度计中，以比色杯光径1cm，波长414nm，用生理盐水调零，读取的吸光度应小于0.100，波长460nm 处读取的吸光度应小于0.040。
（2）171umol/L胆红素标准液：称取符合标准的胆红素（MW:584.68）10mg，加入二甲基亚砜1ml，玻棒搅匀，加入0.05mol/LNa2CO3溶液2ml，使胆红素完全溶解。
移入100ml 容量瓶，用稀释血清洗涤数次并移入容量瓶中，缓慢加入0.1mol/LHCl溶液2ml（边加边缓慢摇动，切勿产生气泡），最后用稀释血清稀释至100ml。
避光，4℃保存，三天内有效，最好当天绘制标准曲线。
（三）步骤
1. 取试管3支，标明总胆红素管、结合胆红素管和空白管，然后按下表操作：
试剂(ml) 总胆红素管结合胆红素管空白管
血清0.2 0.2 0.2
咖啡因-苯甲酸钠试剂 1.6 - 1.6
氨基苯磺酸溶液- - 0.4
重氮试剂0.4 0.4 -
混匀，总胆红素管置室温10min，结合胆红素管置37℃水浴准确放置1min，按下表继续操作：
叠氮钠溶液- 0.05 -
咖啡因-苯甲酸钠试剂- 1.55 -
碱性酒石酸钠溶液 1.2 1.2 1.2
充分混匀后，用空白管调零，于波长600nm，读取总胆红素管和结合胆红素管吸光度，在标准曲线上查出相应的胆红素浓度。
胆红素氧化酶法
一、实验原理
胆红素呈黄色，在450nm附近有最大吸收峰。
胆红素氧化酶(BOD)催化胆红素氧化，随着胆红素被氧化，A450nm下降，下降程度与胆红素被氧化的量相关。
在pH8.0条件下，未结合胆红素及结合胆红素均被氧化，因而检测450nm吸光度的下降值可反映总胆红素含量；加入SDS及胆酸钠等阴离子表面活性剂可促进其氧化。
在pH3.7～4.5缓冲液中，BOD催化单葡萄糖醛酸胆红素(mBc)、双葡萄糖醛酸胆红素(dBc)及大部分δ胆红素氧化，非结合胆红素(Bu)在此pH条件下不被氧化。
用配制于人血清中的二牛磺酸胆红素(ditaurobilirubin，DTB)作标准品，检测此条件下450nm吸光度的下降值可反映结合胆红素的含量。
二、实验方法
1．0.1mol/LTris-HCl缓冲液(pH8.2) 称取三羟甲基氨基甲烷(Tris)1.211g，胆酸钠172.3mg,十二烷基硫酸钠(SDS)432.6mg，溶于去离子水90ml中，在室温(25～30℃)用1mol/L盐酸调节pH至8.2(约用6ml)，再加蒸馏水至100ml，置冰箱保存，此液含4mmol/L胆酸钠、15mmol/L SDS。
2．0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH4.5)。
3．BOD溶液如系冻干品，按说明书要求复溶，但复溶后冰箱保存不宜过长(约可保存1周)，如系液体(可能含有甘油)，置4℃冰箱可保存较长时间，BOD贮存溶液的酶活性一般在数千至1万～2万U/L，BOD工作液酶活性可按反应液中BOD终浓度达0.3～1.0U/ml计算。
4．总胆红素标准液(342μmol/L) 按胆红素测定J-G法中方法配制，或市售合乎要求的标准液。
5．结合胆红素标准液将DTB配于胆红素浓度可忽略不计的人血清中，或用冻干品按说明书要求重建。
配制后分装于聚丙烯管内，－70℃保存，可稳定6个月。
冻干品未重建前置低温中，至少稳定1年。
加入BOD工作液后立即混匀，置37C水浴5min，用分光光度计，在450nm波长，去离子水调零，读取各管吸光度(A)。
用于对照管的比色杯与非对照管的比色杯不得混用。
钒酸盐氧化法(试剂盒)
一、原理
在PH=3左右，有表面活性剂和间接反应胆红素抑制剂的条件下，样品中的直接胆红素被氧化剂钒酸钠氧化为胆绿素。
胆红素的黄色特异性吸光度下降，通过测定钒酸盐氧化前后吸光度的变化，计算样品中直接胆红素的含量。
二、实验方法
试剂：柠檬酸缓冲液100mM
表面活性剂2mmol/L
磷酸缓冲液10mM
偏钒酸钠4mmol/L
适用于半/全自动生化分析仪，两周内用完。
