直接胆红素(DBIL)测定标准操作程序SOP文件

血清直接胆红素DBIL测定1.实验原理直接胆红素与2,4-二氯苯胺重氮盐形成重氮化合物，在酸性条件下呈红色。

2.标本：2.1病人准备：无特殊要求。

最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。

2.2类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。

3.标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。

4.标本运输：常温条件下避光保存运输。

5.标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。

6.实验材料6.1试剂：申能总胆红素试剂盒：14108271701 试剂＋试剂2 6.1.1试剂组成试剂1：16×64mlEDTA-Na20.07mmol/L氯化钠6.6g/L氨基磺酸70mmol/L试剂2：6×16ml2,4-二氯苯胺重氮盐0.09mmol/L盐酸130mmol/LEDTA-Na20.02mmol/L6.1.2试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂有效期为18个月。

试剂2必需避光保存。

试剂不可冰冻。

6.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。

6.1.5注意事项：此试剂为体外诊断用。

警告！腐蚀剂！不要入口。

避免和眼睛，皮肤或衣服接触。

如果接触到，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟。

接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。

6.2校准品：使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7.仪器：奥林巴斯AU1000生化分析仪8.操作步骤8.1项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件检验结果的判断与分析10.质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

直接胆红素测定的标准操作规程【目的】体外检测血清直接胆红素（DBIL）的含量。

【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。

2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。

【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。

体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。

注意有无应用影响测试项目的药物。

此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。

对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。

在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理钒酸盐胆红素胆绿素PH3.0测定钒酸盐作用前后吸光度差异，可求标本中直接胆红素的浓度。

二、试剂1.试剂本科使用北京利德曼生化股份有限公司DBiL试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：2.校准要求使用去离子水与校准品两点定标，详见说明书；正常情况下，应每两周对测定进行一次校准。

三、操作测定（试剂准备液体试剂，直接使用，无需配制。

）四、计算DBIL=校准液（△A=A2-A1）×(△A标准/△A校准)五、质控程序1.建议采用朗道水平2(正常范围质控）和水平3（病理范围质控）两个水平的血清进行室内质控。

2.可接受性判断质控物的检测值应在给定质控范围，或可以通过参加卫生部室间质评对实验室的运作情况进行系统评估。

3.质控操作每日进行样本检测之前首先应进行质控操作，以考察系统的在控情况。

如果检测结果符合质控要求则进行样本操作；如果不符合质控要求，则应重复质控操作，以排除可能发生的偶然误差；如果仍不符合质控要求，则应考虑质控品的重新准备、试剂的重新校准或更新、仪器的维护等。

血清直接胆红素（D-BIL）测定1. 实验原理直接胆红素与2,4-二氯苯胺重氮盐形成重氮化合物，在酸性条件下呈红色。

2. 标本：2.1 病人准备：无特殊要求。

最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。

2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。

3. 标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。

4. 标本运输：常温条件下避光保存运输。

5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。

6. 实验材料6.1 试剂：奥林巴斯总胆红素试剂盒：试剂＋空白对照6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂有效期为18个月。

试剂2必需避光保存。

试剂不可冰冻。

6.1.3 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。

6.1.4 注意事项：此试剂为体外诊断用。

警告！腐蚀剂！不要入口。

避免和眼睛，皮肤或衣服接触。

如果接触到，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟。

接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。

6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。

11. 计算方法以TruCal U复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算，以μmol/L报告。

血清直接胆红素测定标准操作规程1.检验原理：(机酸盐法)pH值接近3时，在锐酸盐和表面活性剂的作用下，胆红素被氧化成胆绿素。

此时，胆红素特有的黄色减少，在波长450nm处通过测定帆酸作用前后的吸光度的差可以求得样品中直接胆红素的浓度。

胆红素佩姗/表面活性剂>胆绿素3.样本要求新鲜无溶血血清，勿使用肝素抗凝血浆。

22〜25C保存8小时，2〜8℃保48小时，-20℃保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法：仪器法(详见DF-603∕DI-600标准操作规程)5.参考范围：6.检验结果的解释6.1样本含量超出线性范围时，建议用0.9%(W∕V)的氯化钠溶液稀释样本。

通常稀释2倍，当样本浓度较大时提高稀释倍数。

6.2单位换算：mg∕dL=umol∕L×0.05857检验方法的局限性6.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。

7.2若试剂浑浊或以水空白在450nm处吸光度大于0.500时不能使用。

8.产品性能指标8.1线性范围：在给定的样本/试剂比例和条件下测定时，本世纪线性范围可达0-320umol∕Lo8.2试剂空白吸光度：在45Onm处，光径ICm时，空白吸光度AW0.500,△A空白/分钟WO.002.8.3准确度：相对偏差≤10%<.8.4精密度8. 4.1批内精密度CV≤3%8. 4.2批间精密度:R≤10%8.5分析灵敏度：在给定的样本/试剂比例和条件下测定时，IUmOl/L的直接胆红素对应的4A不低于1.5×IO-3内。

9.7方法比较：本试剂盒与商品化试剂盒测定40个样本测定结果相关性如下：y=1.052χ-1.254;r=0.9989.临床意义：在肝细胞内质网中，胆红素结合成水溶性的胆红素双葡糖醛酸酯，能和重氮试剂直接反应，故称直接胆红素。

它和总胆红素同时测定可作为黄疸的鉴别依据。

前言为使临床检验操作规范化，指导检验人员严格按规程进行正确的常规操作，保证检验质量，特制定本操作规程。

本规程的编写遵循了ISO 15189《医学实验室——关于质量和能力的特殊要求》及WS/T 227-2002《临床检验操作规程编写要求》的有关规定并结合产品实际情况制订，作为本产品的标准操作程序。

本规程从2007年5月2日起实施，每2年复审1次。

本规程由浙江伊利康生物技术有限公司编制。

本规程起草单位：伊利康生物技术有限公司技术部。

本规程主要起草人：蒙凯、蔡其浩。

本规程首次起草。

目录1 检验申请 (3)2 标本采集与处理 (3)3 试剂及成份 (4)4方法原理 (4)5 仪器 (4)6 校准液及校准模式 (4)7质控品与室内质控规则 (4)8标本检测步骤 (5)9 结果计算 (5)10 操作性能 (5)11试剂使用的注意事项 (5)12参考范围及医学决定水平 (5)13检验结果的报告及范围 (5)14临床意义 (6)15结果审核分析以及相关项目的联系 (6)16威胁生命的“紧急值”及报告规定. (6)17有关引用程序与文件 (6)18参考文献附录A XXX型生化分析仪参数直接胆红素测定标准操作规程1.检验申请单独检验项目申请：血清直接胆红素（缩写DBIL）测定；组合项目申请：肝功能测定项目组合。

临床医生根据需要提出检验申请。

2.标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后。

体检对象抽血前应有两周的正常状况记录。

注意有无应用影响测试项目的药物。

此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。

应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

2.2标本采集2.2.1除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。

在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带，不抗凝，置普通试管中。

直接胆红素（重氮盐法）作业指导书1概述直接胆红素[1](英文缩写DBIL)又称结合胆红素。

未结合胆红胆红素用凡登伯定性试验呈直接反应，故将这种胆红素称为合胆红素的升高，说明经肝细胞处理和处理后胆红素从胆道的排泄发生障碍。

2标本的收集新鲜无溶血标本，血清或血浆样本均不溶血。

血浆样本只能采用肝素或EDTA抗凝。

样本在4摄氏度可稳定7天。

采血前病人应禁食12小时，采集静脉3ml,待凝固后（最好放在37摄氏度水浴箱内45分钟）通常为加抗凝剂的血液在30-60分钟凝血析出血清。

3000r/min离心5-10分钟，分离出血清备用。

不建议采用血浆标本。

3：方法原理样品中直接胆红素与重氮对氨基苯磺酸反应，生成酸性偶氮胆红素，其在570nm处光吸收值增加与杨品中直接胆红素的浓度成正比，通过测定570nm处吸光度的变化，即可计算出样品中直接胆红素的浓度。

4剂来源，配置及储存试剂来源：迪瑞试剂配置：试剂一和试剂二按100:1的比例。

即10ml 试剂一加0.1ml试剂二，混合后即成工作液试剂储存：试剂避光储存2-8摄氏度可稳定至标签所示失效期。

5分析仪器CS-600B全自动生化分析仪分析参数：样品量25 u/l 试剂量：250 u/l测光点0--41 测定模式：1点终点法正反应分析波长：570nm/660nm(主波长/副波长)6计算方法总胆红素浓度（μmol/L）=样本管吸光度×校准液浓度（μmol/L）校正管吸光度μmol/L7 线性范围：本实验的线性范围：0---300μmol/L8参考范围成人1.7—6.8μmol/L9 失控控理1：立即重测同一质控品，如重测后结果仍不再允许范围，请进行下一步。

2：新开一瓶质控品，重测失控项目，如新开的质控血清结果正常，那么原来质控血清可能过期或在室温防止时间过长而变质，如结果仍不再允许范围，则进行下一步。

3：进行仪器维护，重测失控项目。

检查仪器状态，查明光源是否更换，比色杯是否需要清洗或更换？对仪器进行清洗等维护。

直接胆红素测定SOP_DBIL临床意义_检验科生化项目SOP一、直接胆红素测定的临床意义直接胆红素(Direct Bilirubin, DBIL)是从红细胞和其他组织中释放的胆红素的成分之一、正常情况下，直接胆红素的浓度较低，只占总胆红素(Total Bilirubin, TBIL)的一小部分。

然而，当胆红素代谢障碍时，直接胆红素的水平会升高，显示出一些特定的临床意义：1.肝功能评估：直接胆红素测定是评估肝功能的重要指标之一、肝脏是胆红素的代谢和排泄主要器官，当肝脏受损或胆道阻塞时，直接胆红素的水平会升高。

2.胆道疾病诊断：直接胆红素水平的升高可能是由于胆道梗阻、胆管炎、胆上皮细胞损伤或其他胆道疾病引起的。

通过测定直接胆红素的水平，可以协助医生确定疾病的类型和程度，并指导治疗方案的选择。

3.血红蛋白病变：一些血红蛋白病变如溶血性贫血、遗传性球形红细胞性贫血等，会导致血红蛋白不正常分解，使得直接胆红素的水平升高。

通过测定直接胆红素的水平可以帮助医生确定贫血的类型和严重程度，并制定相应的治疗方案。

以下是直接胆红素测定的检验科生化项目SOP的详细步骤：1.标本采集：采集患者血清标本，禁食时间要超过8小时，以避免脂质和胆固醇的影响。

2.试剂准备：根据试剂包装上的说明书，将试剂准备好。

一般包括直接胆红素试剂、标准品和质控品。

3.样本处理：将采集到的血清标本放入试剂盒特定的反应池内，加入适量的试剂。

4.反应：将反应池放入试剂盒中的分光光度计中，按照光度计参数设定，启动反应。

5.数据分析：根据反应的结果，使用光度计测量直接胆红素的吸光度，并根据标准曲线将吸光度值转换为直接胆红素的浓度。

6.质控品检测：每天开始工作前，需对质控品进行检测，确认试剂盒的准确性和稳定性。

7.结果判读与报告：根据测量结果和参考范围，判断直接胆红素的浓度是否正常。

将结果报告给医生或病人。

8.仪器维护：定期对光度计进行检查和维护，保证仪器的准确性和稳定性。

凤庆县人民医院质量管理体系文件生化室SOP文件编号：FQYY-LAB-SH-CZ-01~47第二版编制：鲁伟审核：李树荣批准：李树荣生效日期：2012年10月1日凤庆县人民医院检验科目录目录目录修订页临床标本采集程序1.目的:规范临床标本的采集，减少实验前的影响因素。

2.范围:适用于为协助疾病诊断和治疗而进行的临床生化样品采集活动。

临床样本包括血液、尿液、胸腹水等各种体液。

3.职责:临床生化实验室：指导临床各科室正确采集标本，提高实验结果的准确性。

4.程序:4.1 静脉血的采集：4.1.1 静脉血标本采集前病人应注意的问题：4.1.1.1 避免剧烈运动，一般主张抽血前24小时不做剧烈运动，清晨取血，住院病人可在起床前抽血，匆忙赶到门诊的人应至少休息15分钟后取血。

4.1.1.2 注意合理饮食。

除了急诊或其它特殊原因外，一般主张在禁食12小时后空腹取血，延长空腹时间(饥饿)或餐后血液的化学成分都会变化.饮酒对实验亦有影响。

4.1.1.3 药物的影响。

很多的药物进入人体后可影响某些化验项目的结果，病人在化验前应尽可能停服对实验有干扰的药物。

4.1.2 静脉血标本采集前医生、护士应注意的问题：4.1.2.1.检验申请单填写要求：检验申请单用钢笔或黑笔填写，使用正楷字，字迹清楚，填写完整。

填写内容包括：受检者姓名、性别、年龄、临床诊断、送检标本、检验项目、标本采集年月日时、申请医生及采样者签名。

4.1.2.2 采用一次性真空采血管，多项化验时应首先将血注入血常规管，然后是抗凝管（注意要正确使用抗凝剂），最后是非抗凝管。

4.1.2.3 采血时的体位建议以坐位5分钟后取血为宜，止血带使用应少于1分钟，以免引起血液淤滞，造成血管内溶血或血液某些成分的改变。

4.1.2.4 当一侧手臂输液时应从对侧手臂取血，以降低对血糖、血钾等实验结果的影响。

4.1.2.5 血标本应防止溶血，影响溶血的因素有:使用止血带时间过长；抗凝管使用不当或抗凝混合时过度振荡；容器污染；血液中泡沫注入试管；标本放置时间过长；突然受冷或受热及离心力过大等。

血清结合胆红素测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：血清结合胆红素测定(缩写DBIL)；组合项目申请：血生化中肝功能测定。

临床医生根据需要提出检验申请。

2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。

或采用含分离胶的真空采血管。

2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。

2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。

2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。

专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。

2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。

2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。

2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。

2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。

2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。

2.2.2标本保存时间：血液胆红素见光易分解，标本注意避光保存。

室温（15～25℃）下可稳定2h，普通冰箱中（2～8℃）稳定12h。

-15～-25℃度可以稳定3～4个月。

为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密℃闭或覆盖湿巾。

2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。

2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。

2.3.2不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。

3 方法原理钒酸盐胆红素胆绿素pH 3.0测定钒酸盐作用前后吸光度差异，可求得样品中的直接胆红素的浓度4 试剂及其他用品4.1试剂：结合胆红素试剂盒（货号476856）。

由北京利德曼生化技术有限公司出品。

4.2试剂盒保存：保存于2～8℃，试剂未启封情况下可以稳定至失效期。

启封试剂在仪器的试剂仓冰箱中至少稳定14天。

微量法直接胆红素（DBIL）含量检测试剂盒说明书货号：UPLC-MS-6030规格：100T/96S产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体25mL×1瓶4℃保存试剂二液体6mL×1瓶4℃保存产品说明：直接胆红素（Direct bilirubin，DBil）又称结合胆红素，是由间接胆红素进入肝后受肝内葡萄糖醛酸基转移酶的作用与葡萄糖醛酸结合生成的。

直接胆红素增高对临床诊断阻塞性黄疸、肝细胞性黄疸、肝癌、胰头癌、胆石症、胆管癌等有重要意义。

直接胆红素能被亚硝酸钠氧化，生成胆绿素。

通过检测450nm下波长变化，可计算出直接胆红素的含量。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）血清、血浆等液体样本：直接测定。

若溶液浑浊，可以离心后取上清进行测定。

二、测定步骤1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至450nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2、按下表步骤加样：（96孔板或者EP管中加入下列试剂）试剂名称（μL）测定管空白管样本8蒸馏水8试剂一192192充分混匀，置于37℃水浴锅/恒温培养箱中孵育5min，测定450nm处吸光度A，分别记为A1测定、A1空白试剂二4848充分混匀，置于37℃水浴锅/恒温培养箱中准确反应5min，测定450nm处吸光度A，分别记为A2测定、A2空白；计算ΔA测定=A1测定-A2测定；ΔA空白=A1空白-A2空白。

空白管只需测1-2次。

（使用比色皿反应时，第一步5min反应完成将液体倒入比色皿比色后，可直接在比色皿中加入试剂二混合均匀反应5min直接进行测定；使用96孔板反应时，可以将上述试剂直接加入96孔板中反应第一步的5min，之后直接加入试剂二进行第二步反应）三、DBIL含量计算1、计算公式（1）使用96孔板：DBIL含量（μmol/L）=1495.7×（ΔA测定-ΔA空白）-15.343（2）使用微量比色皿：DBIL含量（μmol/L）=1099.7×（ΔA测定-ΔA空白）-10.73注意事项：1、胆红素见光易分解，测定时要尽量避光。

直接胆红素(DBIL)检测（钒酸氧化法）1.原理钒酸盐测定钒酸盐作用前后吸光度差异，可求得样品中的直接胆红素的浓度。

直接胆红素钒酸胆绿素2. 标本采集和准备2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。

体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。

注意有无应用影响测试项目的药物。

应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

2.2 静脉采血：血清：未抗凝试管（红色试管）血浆：肝素抗凝（绿色试管）除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。

在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

2.3 标本处理：血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。

3.标本储存：2-8℃可稳定保存12小时，避光-20℃可稳定3个月。

4.标本运输：密封，室温运输。

5.标本拒收标准：污染、溶血、标本量不足标本不宜作此项检测。

6.实验材料：6.1试剂及组成：本科使用南昌百特生物高新技术股份有限责任公司TBIL试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：6.2试剂准备：试剂为即用式。

6.3试剂稳定性与贮存原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。

试剂开瓶后，在2-8℃可保存15天。

6.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。

6.5 校准品：使用英国廊道公司校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.6质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7.仪器设备：迪瑞CS-600B8.操作步骤：见CS-600B常规样本测定程序直接胆红素检测试剂盒自动生化分析仪CS-600B主要参数见附录19.质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

直接胆红素操作程序1.目的规范直接胆红素（DBIL）检测试验，确保检测结果准确性和重复性。

2．范围本操作规程适用于生化室工作人员、实习人员、进修人员的操作前培训。

3.术语4．测定原理4．1测定方法：重氮法4．2 测定原理：对氨基苯磺酸+HCl+NaNO2→氯化重氮苯磺酸+NaCl直接胆红素+氯化重氮苯磺酸→偶氮胆红素（红紫色）其在546nm处的吸光度与血清直接胆红素的生成量成正比。

5．标本5．1标本种类：新鲜无溶血血清。

5．2标本采集：见生化标本采集程序。

6．试剂6．1试剂来源：和光试剂。

6．1．1组成包装规格：R1 540ml×4 R2 135ml×46．1．2试剂准备试剂为液体双试剂，无需配制,开瓶即可使用，用后及时置于2～8℃避光保存。

6．1．3试剂稳定性新打开原装试剂在2～8℃避光保存，稳定期12 个月。

试剂开瓶载机2～8℃稳定30天。

7.仪器参数设定AU2700参数设定：和光试剂仪器参数设定参见试剂厂家提供的试剂参数说明书。

8．校准8．校准：具体参见临床生化校准程序8.1 校准条件：8.1.1仪器光路系统经过光路保养或更换光源等重要部件后。

8.1.2仪器经过大保养后。

8.1.3挪动仪器的安装地点。

8.1.4更换试剂批号。

8.1.5室内质控失控。

8．2 AU2700和光试剂系统的校准：8.2.1 准备：和光配套胆红素校准物.8.2.2 保存和稳定性：原校准品在2～8℃保存至有效期，1ml蒸馏水复溶，复溶后在2～8℃可保存7天。

8.2.3保存位置：低温冰箱-20℃。

8.2.4操作步骤：蓝色样本架的1号位置放蒸馏水；黄色样本架的9号位置放和光配套胆红素定标液→仪器主画面[USER] →[Calibration] →[选择校准项目]→[START]→[YES]。

9．室内质控及失控纠正：见临床生化室内质控程序9．1质控物来源：柏乐液体质控（批号:45612/45613）。

9．2质控物储存条件及准备：-15～-20℃保存至有效期，从低温冰箱取出后室温平衡30分钟。

1、方法依据：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司直接胆红素（D-Bil钒酸盐氧化法）测定方法2、适用范围：适用于人血清直接胆红素（D-Bil）的测定。

3、试剂仪器：3.1 试剂：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司原装试剂盒。

3.2未开启的试剂盒在2℃～8℃保存有效期为一年。

试剂开瓶后应避光保存，在2℃～8℃可稳定28天。

试剂不可冰冻。

3.3 仪器：迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪.4、操作程序4.1方法原理直接胆红素在pH3.0附近，以及钒酸盐和表面活性剂存在下，可以被氧化成胆绿素。

与此同时，胆红素特有的黄色也随之消失。

测定胆红素氧化前后吸光度的差，可以计算出样品中直接胆红素的浓度。

4.2样本要求新鲜血清，样本收集后应尽快测定，必须避光保存。

避免溶血。

4.3上机操作4.3.1试剂装载、校准、样品和质控血清分析操作详见“《迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪标准操作、维护、保养规程》”。

4.3.2 校准：4.3.2.1 标准液的准备：校准品使用迈瑞医疗国际股份有限公司配套冻干品，按说明书要求稀释后分装，-20℃冷冻保存，用前提前15分钟从冰箱中取出，复溶到室温后上机检测。

4.3.2.2 校准程序：首次使用校准。

当有以下情况时需重新校准：1）换试剂批号或出现质控漂移时；2）当仪器做完保养后；3）仪器进行零件更换时。

每次试验前用准备好的校准品进行校准，校准通过后进行检测。

4.3.2.3 质控：在标本开始之前做质控，质控通过后方能进行标本的检测。

4.3.3 测试基本参数4.4参考范围1.7～6.8 mol/L（0.1～0.4 mg/dL）（注：各实验室应有自己的参考范围。

）4.5 方法评价线性范围：1～430 μmol/L。

样本中含量超出可报告范围，请用生理盐水稀释后测定，结果乘以稀释倍数。

反应曲线异常时应进行重复测定确认。

精密度：批内CV ≤ 5.0%批间CV ≤ 6.0%分析灵敏度：本试剂盒的检测低限1 μmol/L。

直接胆红素（DBIL）测定的标准操作程序【应用范围】体外检测血清、血浆DBIL浓度测定。

【适用仪器】Olympus AU-27全自动生化分析仪。

【程序改变】严格遵循仪器、试剂说明书及校准品使用说明。

【方法学原理】在PH2.9环境中，表面活性剂和偏钒酸盐与直接胆红素作用形成胆绿素，胆红素的减少引起在波长450nm处吸光度的下降，吸光度的变化与直接胆红素的含量成正比。

【试剂】溶液A（R1）：酒石酸缓冲液PH 2. 90.1 mmol/L表面活性剂稳定剂70mmol/L溶液B（R2）:偏钒酸盐4mmol/L磷酸盐缓冲液PH7.010mmol/L稳定剂2.校准品：DiaSys TruCal U。

3.质控品：Randox Assayed Multiseral Level 1 and Level 2.【标本收集与准备】1.血清或血浆标本根据实验室标准采集程序采集标本，适用标本为血清或肝素抗凝血浆（肝素钠抗凝结果高0.5mmol/l）,不可从正在静脉滴注手臂上采血，上机标本不能有凝块，样品采集后2天内离心标本，分离血清，血清或血浆标本室温保存4天，冷藏7天，冷冻保存6个月。

【操作步骤】1. 仪器测定参数设置2. 试剂准备：将准备好的试剂置仪器试剂盘中（8C ）。

3. 校准校准物的准备：将校准物从冰箱取出，冻干校准物按说明书加入蒸馏水复溶，轻轻颠倒混匀3次，不可用力震摇，室温放置30分钟至完全溶解；液体校准物从冰箱取出，室温放置15分钟以平衡至室温。

校准物的选择尽可能选择配套仪器厂家校准品。

亦可将校准液复溶后分装保存于-20C 冰箱中，每周校准一次或更换试剂批次后进行校准。

上机校准程序：[1] 选择用户菜单USERCalibrationStart Entry 进入输入界面。

[2] 用光标键选欲校准项目，。

确认后按叵互。

⑶将校准品按屏幕显示放入绿色校准架相应位置，将校准架置入进样轨道，按▲开始。

【参考范围】血清/血浆DBIL ： 1.7-6.8 mol/L 【临床意义】D.Bil 临床上多用于黄疸的诊断和黄疸性质的鉴别。

目录1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂与校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录A: 参数1. 检测原理对氨基苯磺酸+ HCl + NaNO2 --------- 氯化重氮苯磺酸+ NaCl 胆红素+ 氯化重氮苯磺酸-------偶氮胆红素2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。

体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。

注意有无应用影响测试项目的药物。

此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。

应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。

在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

2.3 抗凝剂：血浆多主张用EDTANa2（1mg/mL）抗凝。

2.4 标本处理：血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。

3．试剂3.1 试剂：本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司DBIL试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：标准液：64.5umol/L (3.75mg/dL)3.2 校准血清：使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。

校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。

全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。

3.3 试剂与校准血清的稳定性：原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。