凝血酶时间(TT)测定
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凝血试验指标包括以下几项:
1. 凝血酶原时间(PT):正常参考值通常为11-14秒,一般超过正常值上限3秒及以上则异常。
主要用于检
查外源性凝血系统的过筛试验,也是监测口服抗凝剂用量的首选指标。
2. 部分活化凝血酶原时间(APTT):正常值通常为25-37秒,此值增高常见于血浆因子水平降低,如血友
病A患者。
数值降低代表患者处于一种高凝状态,如凝血因子活性增高等。
3. 纤维蛋白原(FIB):即凝血因子Ⅰ,其正常范围是2-4g/L。
增高多见于急性心肌梗死、重症肝炎、肝硬
化、白血病的患者。
降低则可见于纤维蛋白原偏低的情况。
4. 凝血酶时间(TT):正常参考值一般在12-16秒内,数值增高多见于DIC纤溶亢进期、先天性凝血因子缺
乏、使用肝素等抗凝剂的情况。
此外,纤维蛋白降解产物(FDP)、抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)等也是凝血试验的重要指标。
这些指标的检测有助于医生诊断血液性疾病、肝脏疾病等,或在用药过程中对患者的情况进行监测,具有重要的临床意义。
凝血酶时间测定
凝血酶时间(thrombin time,TT)测定主要用于纤溶治疗的监测;过筛检测纤维蛋白原缺陷、循环中有肝素、类肝素的存在等。
(一)检验原理
凝血酶法:在血浆中加入标准化的凝血酶溶液后,使纤维蛋白原转变为纤维蛋白,血浆凝固所需的时间即为凝血酶时间。
(二)检验方法学
1.试剂
凝血酶溶液用生理盐水调节至使正常血浆的凝固时间在16~18秒为宜。
2.标本采集
受检全血与0.109mol/L枸橼酸钠溶液或0.1mol/L草酸钠溶液作9∶1抗凝,充分混匀,1500r/min离心10分钟,以此制备乏血小板血浆。
3.标本检验
取玻璃小试管1支,加入受检血浆0.1ml,置37℃水浴中,再加入凝血酶溶液0.1ml,立即启动秒表,轻轻摇动试
管,记录血浆凝固时间,重复上述检测,取平均值。
(三)方法学评价
离心时间及特殊的标本类型均会对检测构成影响(详见凝血酶原时间测定)。
(四)质量保证
1.正常对照
每次使用的凝血酶试剂的活性不尽相同,故应以正常人混合血浆作正常对照。
2.检验温度
水浴温度应恒定在36~38℃,温度过高或过低均可使凝血酶时间延长。
3.检验周期
应在采血后4小时内完成检测,否则可使凝血酶时间假性延长。
(五)参考范围
16~18秒。
(六)临床意义
TT延长指超过正常对照3秒以上,主要见于肝素或类肝素物质增多,系统性红斑狼疮、肝脏疾病、肾脏疾病、低(无)
纤维蛋白原血症、异常纤维蛋白原血症及F(g)DP增多如DIC、原发性纤溶等。
出凝血凝血酶时间(TT)测定(第四版)出凝血原理:在37℃条件下,在血浆中加入“标准化”的凝血酶溶液后,血浆凝固所需要的时间。
出凝血标本处理:患者处于休息状态下,采空腹静脉血(急诊病人除外)。
采血者应技术熟练,“一针见血”,以防止组织损伤,使外源性凝血因子进入标本。
最好不与其它实验一起采集而使血液停留在针管的时间延长。
采完血后,将血液沿管壁缓缓注入试管,避免产生气泡;然后迅速将血液和抗凝剂轻轻颠倒混匀,避免用力震荡。
全血要在1小时内分离血浆。
分离乏血小板血浆时,要在室温下3000rpm离心10分钟,室温下可存放4小时。
全部试验不能在4小时内完成,应将乏血小板血浆分装在~的小试管中快速冷冻,储存于-20℃冰箱中。
冷冻过的标本不能再次冷冻,否则结果会不准确。
冷冻血浆融化时,应将盛冷冻血浆的容器置于37℃水浴中,并轻轻摇动,使其迅速融化。
出凝血试剂:TT试剂购于天津威士达公司:德灵Test Thrombin Reagent试剂(试剂盒代号OWHM13)。
内含凝血酶测定试剂冻干品:标准浓度的牛凝血酶,牛白蛋白;凝血酶测定试剂缓冲液(25mmol/l,)。
按要求的量用缓冲液溶解小瓶中的试剂,测试之前必须将试剂溶解液预温到37℃。
复溶的试剂从冰箱中取出后室温平衡15min后上机分析。
出凝血仪器:使用Sysmex公司的CA-7000型全自动血液凝固仪。
出凝血操作:按仪器操作步骤执行标准操作。
出凝血4.6.1开机:按下机器侧面的POWER 按钮。
开机后机器进行自检,当屏幕上边显示“Ready:”时可以进行试验。
出凝血4.6.2检查消耗品:1、准备反应杯:打开仪器上盖装反应杯的盖子查看反应杯是否够量,不足时,需及时添加。
(一次性最多可放1000 个杯子)2、准备试剂:按照仪器对试剂的要求,把试剂准备好,放到仪器内相应位置,注意查看试剂的量和有效期。
如还不熟悉试剂位置时,可在主屏幕上选Reagent Setting,按屏幕显示放置试剂。
凝血酶时间测定(TT)一、测定原理:1、在凝血酶作用下,待检血浆中纤蛋白原变位纤维蛋白。
当待检血浆中抗凝物质增多是,凝血酶时间延长。
二、标本要求:1、凝血专用管(CTAD管,枸椽酸钠0.109M,蓝帽)抽取静脉血至刻度线,充分混匀。
1000转离心10分钟后2小时内测定完毕。
2、测定量 100ul血浆三、试剂:1、STAGO公司原装试剂STA®-THROMBIN®2、保存条件:2-8℃3、使用条件:使用前干粉与稀释液混匀,放入搅拌珠,以保持试剂为混悬液,条码扫描后放入仪器试剂柜特定位置。
四、仪器和材料:1、STA全自动血凝仪2、含有磁珠的反应杯五、标准和质控:1、预定标,标准曲线由厂家在试剂中提供。
2、质控品为原装STA-COAG CONTROL N+P两批号定值血浆干粉,保存条件2-8℃。
使用前加蒸馏水1ml,混匀即可使用,试剂开启后在试剂柜内稳定8小时。
编写:伍海波制定日期:2011.12.1六、操作程序:1、装卸试剂:F2键打开试剂柜,条码扫描后确认试剂量,放入特定孔(带搅拌珠混匀功能)即可。
2、定标与室内质控:更换试剂批号时仪器根据每批试剂的标准曲线自动定标,24小时室内质控自动测定一次,未通过则仪器会提示报警。
3、标本测定:F1键打开标本柜,输入号码后随机插入标本孔,选择测定项目后关闭标本柜。
吸样针加100ul血浆入反应杯,预温240秒后加入50ul TT试剂并开始计时。
秒数计算均由仪器根据曲线自动完成换算。
4、传送并核收结果。
5、注意事项:a、血量与抗凝剂比例适宜,离心时间充分以确保血浆中无血小板干扰测定结果。
b、标本无凝固。
七、计算和参考值由仪器自动完成,正常参考值:14-21秒编写:伍海波制定日期:2011.12.1。
凝血四项内容与正常值及意义乐安中心卫生院钟恒一.凝血因子测定:1活化部分凝血活酶时间(APTT):秒数:25—37,需与正常对照比较超过10s以上异常2凝血酶原时间(PT):秒数:11—14 ,需与正常对照超过3s 以上异常。
活动度:80-120% INR:0。
8—1。
2 3纤维蛋白原(FIB):2—4g/L二.纤维蛋白溶解检测:4凝血酶时间(TT):秒数:12—16 需与正常对照超过3s以上异常各项意义:PT:主要反映外源性凝血系统状况,其中INR常用于监测口服抗凝剂。
延长见于先天性凝血因子ⅡⅤⅦⅩ缺乏及纤维蛋白原缺乏,后天凝血因子缺乏主要见于维生素K 缺乏、严重得肝脏疾病、纤溶亢进、DIC、口服抗凝剂等;缩短见于血液高凝状态与血栓性疾病等;APTT:主要反映内源性凝血系统状况,常用于监测肝素用量。
增高见于血浆因子Ⅷ、因子Ⅸ与因子XI水平减低:如血友病A、血友病B及因子XI缺乏症;降低见于高凝状态:如促凝物质进入血液及凝血因子得活性增高等情况;TT:主要反映纤维蛋白原转为纤维蛋白得时间。
增高见于DIC纤溶亢进期,低(无)纤维蛋白原血症,异常血红蛋白血症,雪中纤维蛋白(原)降解产物(FDPs)增高;降低无临床意义。
FIB:主要反映纤维蛋白原得含量。
增高见于急性心肌梗死减低见于DIC消耗性低凝溶解期、原发性纤溶症、重症肝炎、肝硬化;凝血酶原时间(PT):秒数:11-14 ,需与正常对照超过3s 以上异常、活动度:80—120% INR:0。
8-1、2 PT:凝血酶原时间就是检查外源性凝血因子得一种过筛试验,就是用来证实先天性或获得性纤维蛋白原、凝血酶原、与凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ得缺陷或抑制物得存在,其中INR用于监测口服抗凝剂得用量,就是监测口服抗凝剂得首选指标活化部分凝血活酶时间(APTT):秒数:25—37,需与正常对照比较超过10s以上异常APTT检查内源性凝血因子得一/种过筛试验,就是用来证实先天性或获得性凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ得缺陷或就是否存在它们相应得抑制物,同时,APTT也可用来凝血因子Ⅻ、激肽释放酶原与高分子量激肽释放酶原就是否缺乏,由于APTT得高度敏感性与肝素得作用途径主要就是内源性凝血途径,所以APTT成为监测普通肝素首选指标、凝血酶时间(TT):秒数:12—16需与正常对照超过3s 以上异常TT凝血酶时间测定凝血酶时间延长见于肝素增多或类肝素抗凝物质存在、如SLE、肝病、肾病等,低(无)纤维蛋白血症、异常纤维蛋白原血症、纤维蛋白原降解产物(FDP)增多、如DIC、原发性纤溶等。
凝血四项内容与正常值及意义乐安中心卫生院钟恒一.凝血因子测定:1活化部分凝血活酶时间(APTT):秒数:25-37,需与正常对照比较超过10s以上异常2凝血酶原时间(PT):秒数:11-14 ,需与正常对照超过3s以上异常。
活动度:80-120%INR:0.8-1。
23纤维蛋白原(FIB):2-4 g/L二。
纤维蛋白溶解检测:4凝血酶时间(TT):秒数:12-16 需与正常对照超过3s以上异常各项意义:PT:主要反映外源性凝血系统状况,其中INR常用于监测口服抗凝剂。
延长见于先天性凝血因子ⅡⅤⅦⅩ缺乏及纤维蛋白原缺乏,后天凝血因子缺乏主要见于维生素K缺乏、严重的肝脏疾病、纤溶亢进、DIC、口服抗凝剂等;缩短见于血液高凝状态和血栓性疾病等;APTT:主要反映内源性凝血系统状况,常用于监测肝素用量。
增高见于血浆因子Ⅷ、因子Ⅸ和因子XI水平减低:如血友病A、血友病B及因子XI缺乏症;降低见于高凝状态:如促凝物质进入血液及凝血因子的活性增高等情况;TT:主要反映纤维蛋白原转为纤维蛋白的时间。
增高见于DIC纤溶亢进期,低(无)纤维蛋白原血症,异常血红蛋白血症,雪中纤维蛋白(原)降解产物(FDPs)增高;降低无临床意义。
FIB:主要反映纤维蛋白原的含量。
增高见于急性心肌梗死减低见于DIC消耗性低凝溶解期、原发性纤溶症、重症肝炎、肝硬化;凝血酶原时间(PT):秒数:11—14 ,需与正常对照超过3s以上异常。
活动度:80—120% INR:0。
8-1。
2 PT:凝血酶原时间是检查外源性凝血因子的一种过筛试验,是用来证实先天性或获得性纤维蛋白原、凝血酶原、和凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的缺陷或抑制物的存在,其中INR用于监测口服抗凝剂的用量,是监测口服抗凝剂的首选指标活化部分凝血活酶时间(APTT):秒数:25—37,需与正常对照比较超过10s以上异常APTT 检查内源性凝血因子的一/种过筛试验,是用来证实先天性或获得性凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ的缺陷或是否存在它们相应的抑制物,同时,APTT也可用来凝血因子Ⅻ、激肽释放酶原和高分子量激肽释放酶原是否缺乏,由于APTT的高度敏感性和肝素的作用途径主要是内源性凝血途径,所以APTT成为监测普通肝素首选指标。
凝血功能化验单各项解读
凝血功能化验单常用于检测人体内的凝血能力,其中包括以下一些指标:
1. 凝血酶原时间(PT):指血液凝固所需时间。
该指标常用
于检测肝功能、维生素K缺乏等问题,正常值为11-13.5秒。
2. 活化部分凝血时间(APTT):该指标能够检测肝功能、血
小板、因子缺乏等问题,正常值在25-35秒之间。
3. 凝血酶时间(TT):指血浆中凝血酶形成所需时间,常用
于检测凝血因子缺乏、肝功能等问题。
正常值为14-18秒。
4. 纤维蛋白原(FIB):该指标能够反映人体内纤维蛋白原的
水平,是血栓形成的主要组成部分。
正常值在2-4克/升之间。
5. D-二聚体(D-dimer):用于检测体内是否有血栓形成或血
管损伤等情况,若D-二聚体水平升高,则可能存在血栓或血
管损伤等。
正常值为小于0.5微克/升。
6. 纤溶酶原激活物时间(PFA):该指标能够检测血小板聚集
和红细胞聚集功能,常用于评估出血性疾病。
正常值为100秒左右。
7. 血小板计数:指血液中血小板数量,正常值为150~
400×10^9/L。
以上几项指标以及其他一些相关指标,如白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白、血小板平均体积等都可以提供对人体凝血状态的评估。
如果有异常,则需要进一步诊断和治疗。
凝血四项内容及正常值:一.凝血因子测定:1活化部分凝血活酶时间(APTT):秒数:25-37,需与正常对照比较超过10s以上异常2凝血酶原时间(PT):秒数:11-14 ,需与正常对照超过3s 以上异常。
活动度:80-120% INR:0.8-1.23纤维蛋白原(FIB):2-4 g/L二.纤维蛋白溶解检测:4凝血酶时间(TT):秒数:12-16 需与正常对照超过3s以上异常各项意义:PT:主要反映外源性凝血系统状况,其中INR常用于监测口服抗凝剂。
延长见于先天性凝血因子ⅡⅤⅦⅩ缺乏及纤维蛋白原缺乏,后天凝血因子缺乏主要见于维生素K缺乏、严重的肝脏疾病、纤溶亢进、DIC、口服抗凝剂等;缩短见于血液高凝状态和血栓性疾病等;APTT:主要反映内源性凝血系统状况,常用于监测肝素用量。
增高见于血浆因子Ⅷ、因子Ⅸ和因子XI水平减低:如血友病A、血友病B及因子XI缺乏症;降低见于高凝状态:如促凝物质进入血液及凝血因子的活性增高等情况;TT:主要反映纤维蛋白原转为纤维蛋白的时间。
增高见于DIC纤溶亢进期,低(无)纤维蛋白原血症,异常血红蛋白血症,雪中纤维蛋白(原)降解产物(FDPs)增高;降低无临床意义。
FIB:主要反映纤维蛋白原的含量。
增高见于急性心肌梗死减低见于DIC消耗性低凝溶解期、原发性纤溶症、重症肝炎、肝硬化;凝血酶原时间(PT):秒数:11-14 ,需与正常对照超过3s 以上异常。
活动度:80-120% INR:0.8-1.2PT:凝血酶原时间是检查外源性凝血因子的一种过筛试验,是用来证实先天性或获得性纤维蛋白原、凝血酶原、和凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的缺陷或抑制物的存在,其中INR用于监测口服抗凝剂的用量,是监测口服抗凝剂的首选指标活化部分凝血活酶时间(APTT):秒数:25-37,需与正常对照比较超过10s以上异常APTT 检查内源性凝血因子的一/种过筛试验,是用来证实先天性或获得性凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ的缺陷或是否存在它们相应的抑制物,同时,APTT也可用来凝血因子Ⅻ、激肽释放酶原和高分子量激肽释放酶原是否缺乏,由于APTT的高度敏感性和肝素的作用途径主要是内源性凝血途径,所以APTT成为监测普通肝素首选指标。
关于凝血功能的监测指标
1. 凝血酶原时间(prothrombin time, PT):PT是凝血因子通路中凝血酶形成的时间。
正常情况下,PT为11-13秒。
如果PT延长,说明凝血功能异常。
2. 部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time, APTT):APTT主要用于评估内源性凝血通路的凝血功能。
正常情况下,APTT为25-35秒。
延长的APTT可能表示存在凝血因子缺乏或异常。
3. 血小板计数(platelet count):血小板是促进止血的关键元素。
正常情况下,血小板计数为150,000-450,000/μL。
低血小板计数可能导致凝血功能障碍。
4. 凝血酶时间(thrombin time, TT):TT是在凝血酶形成时血浆中纤维蛋白原转化为纤维蛋白的时间。
正常情况下,TT为15-17秒。
延长的TT可能意味着凝血功能异常。
5. D-二聚体(D-dimer):D-二聚体是纤维蛋白降解产物,可以用于评估血栓形成和纤维蛋白降解的程度。
正常情况下,D-二聚体水平较低。
高水平可能表示存在凝血异常或血栓形成。
这些指标通常结合使用来评估凝血功能的状态和异常。
根据具体情况,可能还会进行其他进一步的凝血功能测试。
应该根据病情和医生的建议进行凝血功能的监测和评估。
凝血酶时间(TT)测定标准操作规程1.检验原理:待测血浆加入适量的凝血酶,使纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白,在光学浊度仪器上测定凝固所需的时间,即为待测血浆的TT。
2.试剂主要组成成分R1:TT试剂:牛凝血酶、稳定剂;R2:TT复溶液:缓冲液。
3.样本要求3.1.采集静脉血,立即按9份血:1份抗凝剂比例与0.109mol/L枸橼酸钠充分混合均匀。
室温3000rpm离心12分钟,上层淡黄色液体为待检的乏血小板血浆。
3.2血浆室温放置,宜在2小时内检测。
3.3血浆若不能及时检测,用塑料吸管分离,-20℃可保存2周。
测定前37℃快速融化,轻微混匀后立即检测。
4.检验方法:全自动血凝分析仪测定(详见雷杜RAC-1830标准操作规程)5.参考区间:11—17秒6.检验结果的解释:报告TT秒数(S),检验结果与各实验室的参考值范围相关。
7.检验方法的局限性7.1凝血过程中从因子激活到纤维蛋白激活到纤维蛋白形成的一系列反应。
因此,检验结果可能受到治疗药物(干扰物)、检验操作、检验系统等因素的影响,应考虑这些因素。
7.2试剂被污染,或者样品杯、吸管等被凝血试剂污染,会导致凝血异常,需严格控制。
8产品性能指标8.1重复性:用质控血浆重复测试所得结果的变异系数(CV),应不超过5.0%。
8.2瓶间差:用质控血浆测试,瓶间差应不超过6.0%。
9临床意义凝血酶时间延长包括以下几种情况:(1)低(无)纤维蛋白原血症,纤维蛋白原浓度通常为0.9g/L或更低。
(2)血中存在肝素或类似肝素的抗凝物质,如SLE、肝病、肾病等。
(3)在纤溶状态下,纤维蛋白原的功能降低。
(4)存在异常纤维蛋白原。
(5)如果患者和正常质控血浆混合液的凝血酶时间值更接近于患者的血浆凝血酶时间值,并且如果该患者在抽血测定前6h内并没有摄入肝素,则该患者血浆中很可能存在异常纤维蛋白原或纤维蛋白降解产物。
异常纤维蛋白血症和巨球蛋白血症,有造成凝血酶时间缩短的可能。
血浆凝血酶时间(TT)检测及临床意义一、概述1、凝血酶时间(thrombin time,TT)是反映血浆中纤维蛋白原转变为纤维蛋白过程有无异常的筛检指标之一。
2、TT 延长主要反映纤维蛋白原浓度减少或功能异常以及血液中存在相关的抗凝物质(肝素、类肝素等)。
二、实验原理在凝血过程中,纤维蛋白原在凝血酶的作用下转变为纤维蛋白,是凝血的共同途径。
在37℃条件下,在待检乏血小板血浆中,加入一定量的“标准化”凝血酶后直接将纤维蛋白原转变为纤维蛋白,使血浆发生凝固所需的时间即为 TT。
三、检测方法(一)试剂1、0.109mol/L枸橼酸钠溶液。
2、凝血酶溶液:可将浓凝血酶液加生理盐水直至正常人对照血浆的凝固时间为16~18秒。
3、健康人对照血浆。
(二)器材离心机、37℃水浴箱、微量加样器、注射器、试管、秒表或全自动血液凝固仪等。
(三)操作1、试管法①标本采集和处理常规静脉采血1.8ml加人含0.109mol/L枸橼酸钠溶液0.2ml的试管中,充分混匀,3000r/min离心20分钟,分离乏血小板血浆。
②预温将正常对照血浆和待测血浆0.1ml分别加人试管中,放置37℃水浴预温5分钟。
③测定试管中分别加入0.1ml凝血酶溶液,立刻混并启动秒表计时。
④观察计时在明亮处观察试管内液体的流动状态,当液体流动减慢或出现混浊时,停止计时,记录凝固时间。
重复测定2~3次取平均值作为正常对照TT值。
⑤采用同样方法测定受检血浆的TT值。
2、血凝仪法:按仪器说明书进行操作。
四、参考区间16~18 秒,超过正常对照值3秒为异常。
由于试剂中凝血酶浓度不同,其检测结果存在差异。
因此每个实验室应建立相应的参考区间。
五、注意事项1、标本需用枸橼酸钠抗凝, 肝素或 EDTA抗凝血浆不宜作本试验。
2、采血后宜在1小时内完成检测,室温下保存不应超过3小时,4℃下保存不超过4小时。
3、已稀释好的凝血酶溶液要尽快使用,若置于4℃下须在3天内使用。
4、TT测定时,所加入血浆的凝血酶试剂的浓度对其结果影响极大,将对照血浆的TT值调在16~18秒,再测标本较为合适。
凝血酶时间TT检测介绍
用途
用于人血浆的凝血酶时间(TT)的测定。
概要和解释
用凝血酶检测试剂测定凝血酶时间适用于:
1.纤维蛋白原溶解治疗的监测
2.纤维蛋白形成障碍或怀疑重度纤维蛋白原缺乏的筛查
3.肝素诱导凝血酶时间延长和纤维蛋白形成障碍的鉴别诊断
凝血酶时间延长不仅见于纤维蛋白聚合性疾病,而且见于使用肝素。
采用爬虫酶时间试剂进行鉴别。
方法学原理
凝血酶可使血浆标本中的纤维蛋白原转化为纤维蛋白,形成凝块。
形成凝块的时间即检测时间。
标本
采集血浆,将枸橼酸钠(0.11mol/l)1份与静脉全血9份混合,避免产生气泡,按不小于1500转/分,离心至少15分钟,除去上层血浆,保存在15-25℃备用。
更多详情请参见CLSI文件H21-A5 15-25℃标本稳定时间:4小时,含肝素标本在2小时内进行检测。
方法
结果
检测结果以“秒”报告。
室内质控
每一批样本检测前都需要进行质控分析,以及更换试剂和至少工作日每8小时必须进行质控。
质控操作应和标本处理一样。
每个实验室必须设定质控范围,或厂商提供靶值的均值和范围,或实验室自己建立的范围。
如果实验前,质控结果超出之前建立的范围,则必须重新核查试剂和血凝分析仪。
必须在失控原因查出并纠正后才能进行病人的样本分析。
参考值范围
14-21秒。
该范围内的系统误差可能由所用仪器产生。
如果必要,实验室应建立自己的参考范围。
凝血酶时间TT测定作业指导书
1. 实验原理:
在待测血浆中加入标定的凝血酶溶液,在凝血酶的作用下,血浆中的纤维蛋白原转变为纤维蛋白,血浆凝固所需的时间即为凝血酶时间。
当待测血浆中的抗凝物质增多或纤维蛋白含量异常时,凝血酶时间会发生相应的改变。
2. 标本采集:
2.1 早晨空腹采血(空腹12小时左右),静脉采血。
2.2
3.8%(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀。
3. 标本存放:1小时内(3000r/min×10min)分离血浆,室温放置不超过2小时,2~8℃保存不超过4小时,长时间保存需在冰冻条件下,(-70℃不超过6个月),只能冻融1次,在37℃迅速解冻,以减低凝血因子的消耗,解冻后立即测试。
4. 标本运输:低温条件下运输。
5. 标本拒收的标准:抗凝剂不符合,采血量不准确,凝固,溶血,脂血标本不能作测定。
6. 实验材料:
北京世帝科学仪器公司凝血酶时间测定试剂盒,主要成分由液态凝血酶试剂组成。
其中凝血酶的主要成分为猪凝血酶。
7. 仪器设备:。
修改纪录:1目的本操作书的制定的目的是,为操作者进行血浆凝血酶时间测定提供正确的操作方法。
2适用范围适用于血浆凝血酶时间测定3定义凝血酶时间(TT)是一个快速而简易地评价纤维蛋白形成的试验,因子X III 缺乏时,TT保持正常。
当PT,APTT延长,不能解释结果时,在进行其他试验之前,应先测定TT,再做其他确诊测试。
4测定原理和临床意义4.1测定原理在过量的凝血酶存在下,被稀释血浆的凝固时间可直接反映血浆中纤维蛋白原水平。
4.2临床意义反映血浆中纤维蛋白的减少和FDP的增多,可作为异常纤维蛋白原的筛选试验。
延长:血循环中纤维蛋白(原)降解产物(FDP)(如DIC继发纤溶亢进、溶拴治疗后));肝素或类肝素物质增多;AT-Ⅲ活性增高;纤维蛋白原严重减少(如先天性无纤维蛋白血症、严重肝脏疾病)等。
异常FDP(骨髓瘤,风湿性关节炎)缩短:见于高凝状态。
5实验室条件5.1实验场所中心实验室临检室5.2温湿度要求室温:15-30℃湿度:20-80%6标本要求6.1标本种类6.1.1标本种类血浆6.1.2标本量最适量:3ml最小量:2ml分析量:200ul不适标本的处理:采集量过少、抗凝剂错误、血液凝固等情况下,拒收标本,及时与临床联系,并做好登记。
6.1.3容器枸橼酸钠抗凝管---9体积血采集到1体积0.109 M枸椽酸钠抗凝剂中(NCCLSH3-A3,H21-A21标准)6.1.4采集条件采集时间:检查对象生活饮食处于日常状态,安静。
拒收标准:采血量不足、严重乳糜血、抗凝不充分、严重乳糜血、抗凝剂有误等采集部位:静脉采血。
6.2使用条件6.2.1保存条件---标本血浆在20℃保存8小时,如果采用肝素治疗,标本保存2小时。
* 不要将血浆置于2 - 8℃保存。
6.2.2保存事项必须及时检验,放置过久可影响检验结果。
6.2.3保存天数:1天6.2.4保存场所:临检室6.2.5特殊容器:无6.2.6预防措施标本为可感染性标本,应注意人员及环境的防护,防护措施请使用眼镜,口罩,手套等。
凝血酶时间(TT)测定
(分析仪器法)
1实验原理:凝固法
确定量的血浆样本(100μl),加入凝血酶时间(TT)反应试剂(50μl)经过一定时间(3min)加湿后,采用波长660nm的光照射样本,凝血过程中血浆的混浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定,然后通过标准曲线求出凝血酶时间。
2标本采集
2.1早晨空腹采血(空腹12小时左右),静脉采血。
2.2
3.8%(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀。
3标本存放
1小时内(3000r/min×15min)分离血浆,室温放置不超过2小时,2~8℃保存不超过4小时,长时间保存需在冰冻条件下,(-70℃不超过6个月),只能冻融1次,在37℃迅速解冻,以减低凝血因子的消耗,解冻后立即测试。
4标本运输:低温条件下运输。
5标本拒收的标准:抗凝剂不符合,采血量不准确,凝固,溶血,脂血标本不能作测定。
6. 实验材料:
6.1 德国Dade Behring Marburg 公司凝血酶时间测定试剂,每瓶5ml(用配套稀
释液溶解)共50人份,未开封试剂2~8℃贮存到说明书上有效期,复溶试剂2~8℃保存不超过7天。
6.2 Dade Citrol质控血浆.用蒸馏水1ml溶解后放置30分钟,才能使用或分装。
复溶后,室温保存2小时,2~8℃4小时。
7. 仪器设备:
7.1 仪器名称: Sysmex CA-1500全自动血液凝固分析仪
7.2 仪器厂家:日本Sysmex公司
7.3 仪器型号:Sysmex CA-1500
7.4 仪器技术参数:
7.4.1 速度:最快检测速度180测试/小时,组合检测约140测试/小时
7.4.2 试剂位:36个,具冷藏功能。
7.4.3 样本位:50个,可自动连续添加。
7.5 仪器校准程序:
7.5.1 校准频率:当方法改变,试剂厂家或试剂型号改变,仪器维修影响测定结果
等情况时,必须进行校准。
7.5.2 校准操作:设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)
8. 操作步骤:
8.1 检查前准备:
8.1.1 清空废液瓶,清空反应杯抛弃槽。
8.1.2 添加足够反应杯(不能超出警告线)。
8.1.3 添加清洁液试剂,清洗用蒸馏水等。
8.2 开机
先开打印机再开主机,开机后仪器自检,约15分钟,屏幕上方“Not Ready”
变为“Ready”,表示仪器预热完成,进入系统准备工作状态,可进行测定。
8.3 输入工作清单:
从主菜单选,选
输入第一个样本号→按相应实验项目名称键并同时输入此标本的其他
测试项目,若选“凝血四项(PT、APTT、Fbg、TT)”,可按
选项选择,选中项目相应位置标记为“○”,选完项目后按
删除某项目时只需按该项目(按键如
同样输入其他标本编号项目。
(快速输入可用
复制同样项目的输入。
8.4 放置样本
按8.3所设好的工作清单顺序将离心分离好的样本放置于样本架上,并按顺序把样本架排列于Sampler进样器右边位置(最多同时放5架共50个样本)
8.5 按.
盖好遮光盖,确认仪器为准备状态(显示屏正上方显示“Ready”)按
键,进样开始,→测定进行,仪器显示为“Analying”(被选择项目背景变为
“◎”,此时可重复8.3,8.4,继续输入其他架样本工作清单,按
继续确认测试任务,添加样本架继续测试,→测定完成,测定项目背景变为“●”,打印机打印出测定结果,所有测定清单完成,系统恢复“Ready”状态。
8.6 每日维护:完成每日的测定后,关机前维护。
8.6.1 冲冼针Rinse Probe
8.6.2 清空废液瓶,和已使用过的反应杯。
8.6.3 将试剂架连用试剂放入冰箱。
8.7关机:先关主机,再关打印机。
9.检验结果的判断与分析:
9.1 仪器测定TT的线性范围在5-600秒,测定完成后仪器显示TT秒数,若不能
对参数进行正确计算,将出现下列信息:
﹡﹡﹡.﹡出现错误,不能得到分析数据
ˉˉˉ.ˉ不能计算参数
+++.+数值超出线性范围.
9.2 仪器设定TT参考范围在14-20秒,如果得不到一个正常数值,在数据的左侧
将出现下列标记:
﹡出现错误信息
< 数据低于可报告的低限
> 数据高于可报告的高限
10. 质量控制:每批样本同时测定两个浓度水平(高值和正常值)的质控品,以2S
为警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。
质控规则详见室内质控作业指导书。
11 临床意义:
11.1参考范围:14-20秒(不同厂家试剂有不同参考范围,请参照试剂说明书)11.2TT延长:患者血循环中AT-Ⅲ活性明显增高,肝素增多或类肝素抗凝物质
存在,如SLE、肝病肾病等,异常纤维蛋白原血症,低(无)纤维蛋白原血症,FDP增多(如DIC),异常球蛋白增多(如MM)等。
11.3TT缩短:常见于血样本有微小凝块或钙离子存在时。
12变异的潜在来源
12.1抗凝剂:草酸盐、EDTA、肝素不适用于PT检查
12.2标本采集处理不当,如血与抗凝剂未充分混匀,出现凝块,混匀时过分用力,
使标本溶血,造成结果变异。
12.3纤溶药物的影响,如双香豆素、链激酶、尿酶等。
12.4超剂量使用肝素使凝固时间延长。
12.5FDP增加使凝固时间延长。
12.6某些药物,如口服避孕药、雌激素、天门冬酰胺酶、钠络酮等影响测试结
果。
13. 操作注意事项:干粉试剂及质控血浆溶解
13.1确认溶剂类型,一般溶解液包括:蒸馏水、生理盐水、缓冲液、厂家特定
溶解液,必须按说明书要求使用。
13.2溶解时,轻轻转动容器,保证干粉完全溶解,避免剧烈振荡。
13.3复溶后,室温放置5-10分钟方可使用。
14. 仪器维护与保养
14.1日常维护(见8.6)
14.2每周维护
14.2.1液路冲洗:仪器在“Ready”状态下,从主菜单按
→按键运行此程序→完成后按
返回。
14.2.2清洁仪器:定期用擦布擦干净仪器内外,包括试剂槽。
14.3需要时维护:
14.3.1调整压力:仪器在“Ready”状态下,以主菜单按
→按键,显示压力是否在其调整范围内?若不在,则打开仪器右侧相应压力调整旋钮,旋动调整好压力,再锁紧旋钮。
14.3.2更换灯泡:关机→从仪器右侧取下灯泡外盖及内盖→换上好的灯泡→装
认关上遮光盖,按
14.3.3更换保险管:关机→从仪器左侧旋下保险盖→更换上好的保险管→装上
保险管盖。
15. 参考文献
15.1叶应妩.王毓三等《全国临床检验操作规程》第三版,东南大学出版社. 15.2 Sysmex公司《Sysmex CA-1500操作手册》1998.6修订本.。