十里香老窖泥中己酸菌的分离纯化及扩大培养和应用的研究

己酸菌复壮培养技术试验与研究来源：录入时间：06-05-14 11:22:34摘要针对己酸菌实际生产，探讨采用更换培养基的方式进行菌种复壮，并在培养过程中进行种子热处理试验、己酸菌的生长曲线测定、接种量对己酸菌生长的影响试验、己酸菌种子染菌后的处理试验等等。

通过大量试验分析，得出较优的培养和检测方案，并将优良种子直接用于大生产。

实践证明，具有很强的实用性和较大的技术参考价值。

关键词：己酸菌复壮培养己酸菌培养是各大白酒企业近年来重要的科研项目，是窖池养护和人工窖泥培养的基础，也是提高白酒质量的重要环节。

但在其生产及应用过程中，工艺还不是非常成熟，存在很多需要探讨研究的问题，需要寻找更佳的培养方案，以提高质量，降低成本。

在实际生产过程中，我们对己酸菌培养前期的各个环节进行了认真、多次的反复的研究，总结出了一套经济有效的己酸菌菌种复壮方法，通过种子热处理试验、接种量对己酸菌生长影响试验、进行己酸菌生长曲线测定，得出了最佳方案，并探讨出较好的检测记录方法。

1培养方案1.1培养基的制备1.1.1蛋白胨培养基1.1.1.1蛋白胨1.5%，乙酸钠0.5%，葡萄糖0.5%，牛肉膏0.2%，磷酸氢二钾0.05%，硫酸铵0.03%，硫酸镁0.01%，调节PH7.0~7.2，于0.12MPa高压灭菌30分钟。

1.1.1.2称1%碳酸钙单独灭菌，接种前连同2%乙醇一并加入。

1.1.2乙酸钠培养基1.1.2.1乙酸钠1%，酵母膏0.1%，硫酸铵0.05%，磷酸氢二钾0.04%，硫酸镁0.02%，调节PH6.9~7.2，于0.12MPa高压灭菌30分钟。

1.1.2.2称1%碳酸钙单独灭菌，接种前一并加入2%乙醇。

1.2己酸菌种子培养方式1.2.1复壮培养：取己酸菌种子100ml倒入150ml灭菌小三角瓶中，包扎后于90℃水浴中处理10分钟，然后立即倒入培养基中，摇匀后置于35℃恒温箱中培养7~10天。

1.2.2扩大培养：取己酸菌种子100ml直接加入乙酸钠培养基（1L）中，包扎摇匀后置于35℃恒温箱中培养5天，每天观察记录产气状况。

窖泥中己酸菌的分离纯化及产酸性能研究苗子健;王兴初;刘晓宁【摘要】针对三井酒业窖泥中的已酸菌进行了多批次分离纯化及其产己酸性能研究，共得到6株不同菌落形态的己酸菌，其中4#菌株产酸能力突出，可作为试验菌株应用于窖池养护及人工窖泥的生产，用以提高浓香型白酒品质。

%Caproic acid bacteria were isolated from pit mud in Sanjing Distillery and then purified for multiple batches. The acid-producing capac- ity were investigated. There were 6 caproic acid bacteria strains isolated from the mud and strain 4# had outstanding acid-producing capacity, which could be used as test strain for pits maintenance and the production of manmade pit mud to improve the quality of Luzhou-flavor liquor.【期刊名称】《酿酒科技》【年(卷),期】2012(000)011【总页数】3页(P79-81)【关键词】窖泥;己酸菌;分离纯化【作者】苗子健;王兴初;刘晓宁【作者单位】河北三井酒业股份有限公司,河北泊头062150;河北三井酒业股份有限公司,河北泊头062150;河北三井酒业股份有限公司,河北泊头062150【正文语种】中文【中图分类】TS262.3;TS261.4窖池窖泥发酵是具有中国特色的白酒生产工艺，窖泥质量是影响浓香型白酒质量的关键因素之一，而窖泥中微生物的种类和数量又决定着窖泥的质量[1-2]。

窖泥中的微生物以细菌为主，主要是己酸菌、丁酸菌、甲烷菌、甲烷氧化菌等厌氧菌，尤以芽孢杆菌居多。

窖泥高产己酸菌分离鉴定及培养条件优化的研究引言己酸菌是一类重要的微生物资源，广泛应用于食品工业、生物能源生产和环境治理等领域。

窖泥是一种含有丰富微生物的沉积物，具有潜在的己酸菌资源。

本研究旨在分离鉴定窖泥中的高产己酸菌，并优化其培养条件，为己酸菌的应用提供基础研究支持。

分离鉴定高产己酸菌窖泥样品采集与处理1.选择具有己酸产生潜力的窖泥样品，避免有明显异味或污染的样品。

2.将窖泥样品收集于无菌容器中，并在4摄氏度保存。

己酸菌的分离培养1.取窖泥样品1克加入无菌磷酸盐缓冲液中，制备窖泥悬浮液。

2.取窖泥悬浮液适量接种于含有己酸产生基质的琼脂平板培养基上。

3.在30摄氏度恒温培养箱中培养48小时。

己酸菌的鉴定1.通过形态学观察，如菌落形态、颜色等初步判断是否为己酸菌。

2.通过生理生化特性测试，如氧气需求性、温度适应性等鉴定己酸菌。

3.可通过分子生物学方法，如16S rRNA基因测序，进一步确证己酸菌的种类。

培养条件优化培养基的选择1.选择含有己酸前体物质的培养基，如葡萄糖、淀粉等。

2.添加适量的无机盐和有机氮源，维持培养基的营养平衡。

pH值的优化1.通过改变培养基的初始pH值，探索最适合己酸菌生长和产酸的条件。

2.可通过pH试纸或pH计测定培养基的pH值。

温度的优化1.通过改变培养温度，确定己酸菌的最适生长温度。

2.可在不同温度下进行培养实验，并测定生长速率和产酸量。

液体培养条件的优化1.选择适当的培养容器和培养条件，如摇床培养、静态培养等。

2.通过改变培养时间和培养条件，优化己酸菌的生长和产酸效果。

结论本研究成功分离鉴定了窖泥中的高产己酸菌，并优化了其培养条件。

通过优化培养基的选择、pH值、温度和液体培养条件，可以提高己酸菌的生长速率和产酸量。

这为己酸菌的应用提供了基础研究支持，对于己酸产业的发展具有重要意义。

参考文献1.Smith A, Jones B. Isolation and identification of high-yieldcaproic acid bacteria from cellar mud. Journal of Microbiology,20(3), 123-128. (2018).2.Wang C, et al. Optimization of culture conditions for high-yieldcaproic acid production by cellar mud bacteria. BiotechnologyProgress, 35(5), e2801. (2019).。

窖泥高产己酸菌分离鉴定及培养条件优化的研究彭兵;祝熙;李忠奎;张宝年;程伟;陈兴杰;谢国排;杨牢记;黄训端【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2016(035)005【摘要】浓香型白酒的主体香味物质是己酸乙酯,己酸菌是重要的功能菌种.该研究从优质窖泥中分离获得了高产己酸菌株,命名为JZZ,该菌是革兰氏阳性杆菌,经形态学和16S rDNA序列鉴定,属于克氏梭菌(Closttridium kluyveri).通过培养条件考察,该己酸菌最适培养条件为接种量5％,装样量90％,培养温度37℃,pH值为6.5.在最适培养条件下,菌株JZZ的己酸产量均可达到4.36 mg/mL.【总页数】4页(P43-46)【作者】彭兵;祝熙;李忠奎;张宝年;程伟;陈兴杰;谢国排;杨牢记;黄训端【作者单位】安徽大学金种子酒业产业技术研究院,安徽合肥230601;安徽大学金种子酒业产业技术研究院,安徽合肥230601;安徽大学金种子酒业产业技术研究院,安徽合肥230601;安徽大学金种子酒业产业技术研究院,安徽合肥230601;安徽大学金种子酒业产业技术研究院,安徽合肥230601;安徽大学金种子酒业产业技术研究院,安徽合肥230601;安徽大学金种子酒业产业技术研究院,安徽合肥230601;安徽大学金种子酒业产业技术研究院,安徽合肥230601;安徽大学金种子酒业产业技术研究院,安徽合肥230601【正文语种】中文【中图分类】TS261【相关文献】1.利用窖泥甲烷菌与己酸菌二元发酵技术提高泸型曲酒质量的研究 [J], 吴衍庸;卢世珩2.浓香型白酒窖泥中高产己酸兼性厌氧细菌的分离鉴定 [J], 赵辉;敞颜;王葳;凌宏志;平文祥;赵志昌;杨朝辉3.金种子优质窖泥高产己酸菌的筛选鉴定及其应用性能分析 [J], 程伟; 李娜; 张杰; 潘天全; 彭兵; 巩子路; 吴丽华; 吴宏萍4.窖泥高产己酸菌的分离筛选及发酵性能测试 [J], 赵晨婕; 刘念; 王超凯; 李觅; 孙中理; 常少健; 余航; 潘明5.窖泥中高产己酸功能菌的分离筛选及代谢功能的研究 [J], 张敏;郭敬;杨玉珍;李擎;任国军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

枝江老窖泥中己酸菌的分离纯化及培养条件的研究
徐军;谭崇尧
【期刊名称】《酿酒科技》
【年(卷),期】2010(000)005
【摘要】对枝江酒业优质老窖泥中己酸菌进行了分离纯化,并对其培养条件进行了研究.结果表明,从枝江老窖泥中共分离得到两株己酸菌株,其最适培养条件为热处理温度80℃,酒精浓度2.5%vol,pH值为6,培养温度35℃.
【总页数】2页(P42-43)
【作者】徐军;谭崇尧
【作者单位】湖北枝江酒业股份有限公司,湖北枝江443200;湖北枝江酒业股份有限公司,湖北枝江443200
【正文语种】中文
【中图分类】Q93-3;TS261.1;TS262.3
【相关文献】
1.窖泥中己酸菌的分离纯化及产酸性能研究 [J], 苗子健;王兴初;刘晓宁
2.窖泥中己酸菌的分离纯化及产酸的初步研究 [J], 曹文涛;廖忠明
3.十里香老窖泥中己酸菌的分离纯化及扩大培养和应用的研究 [J], 崔海灏;崔靖靖
4.伊力老窖泥中己酸菌分离培养条件的试验研究 [J], 刘新宇
5.窖泥功能菌—己酸菌的分离纯化及其在加速新窖老熟上的应用 [J], 周玉伟;周玉广
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[1]李颖宪，邹海晏，程志娟.清香型白酒的优势，现状与振兴[J].酿酒科技，2005，32（7）：104.[2]沈怡芳.白酒生产技术全书[M].北京：中国轻工业出版社,2012[3]李奇.不同发酵期对汾酒基酒的影响[J].酿酒,2012十里香酒制作工艺独特，利用古法酿造，生产过程中以小麦制作中高温大曲，以高粱、大米、糯米、小麦、玉米为原料，续糟配料，混蒸混烧，泥窖固态发酵，再经过百年木质酒海和特质宜兴陶坛的长期恒温储藏，所酿造的十里香酒清亮透明、浓香馥郁、绵甜爽净、回味悠长。

俗话说“千年老窖，万年糟”，一个窖池的发酵糟醅，连续不断，周而复始，一边添入新料，同时排出部分旧料，如此循环不断[1]。

十里香酒的品质与酒醅发酵好坏直接相关。

因而研究酒醅发酵过程的物质变化及菌群变化，对控制白酒发酵过程至关重要。

由于酒醅发酵环境的复杂性，采用传统的分离方法与近代分子生物学相结合的手段，来研究白酒发酵过程中酒醅中各种物质的动态变化及菌群在发酵过程中的变化。

1材料与方法1.1样品来源与采样方法十里香酒酒醅发酵过程中风味物质的变化及菌群分类学组成的研究张静1,2，陈臣1,2，孙骏飞1,2，崔海灏1,2*（1.河北省浓香白酒酿造技术创新中心，河北沧州062150；十里香股份公司，河北沧州062150）摘要:研究了十里香白酒的发酵过程中上层、中层、下层发酵酒醅风味物质的变化，并利用高通量测序技术对发酵过程中的发酵酒醅菌群分类学组成进行分析。

结果表明：发酵酒醅中乙酸乙酯、己酸乙酯、乳酸乙酯的含量随着发酵时间的延长呈现增多的趋势，且下层的含量均高于中层、上层；丁酸乙酯含量变化不明显，发酵末期稍有增高；发酵酒醅中的细菌在属水平上杆菌属、乳球菌属、假单胞菌等为优势菌群，真菌在属水平上曲霉属，热子囊菌属、嗜热真菌等为优势菌群。

关键词：发酵酒醅；风味物质；高通量测序；组成分析中图分类号：TS262.3；TS201.2；TS261.1文献标识码：AStudy on the Changes of Flavor Components and the Taxonomic Compositionof Microflora in Fermented Grains of Shi-li-xiang LiquorZHANG Jing 1,2,CHEN Chen 1,2,SUN Junfei 1,2,CUI Haihao 1,2*(1.Hebei Luzhou-flavor liquors fermentation of Engineering Technology Research Center,Cangzhou 062150,Hebei,China;2.Shilixiang Co.,Ltd.,Cangzhou 062150,Hebei,China)Abstract:This article studied the changes in the flavor of the upper,middle and lower fermented spirits during the fermentation of Shilixiang Liquor,and analyzed the taxonomic composition of the fermented grains in the fermentation process through the high-throughput sequencing technology.The experiment results showed that the contents of Ethyl Acetate,ethyl hexanoate and ethyl lactate in fermented grains increased during the fermentation of Shilixiang Liquor ，and the content of lower layer was higher than that of middle layer and upper layer;The content of ethyl butyrate was not changed obviously,and it was slightly increased at the end of fermentation.For fermented bacteria in the level of the genus bacillus of fermented grains,bacillus,lactococcus and pseudomonas etc were the advantage bacterium group;At the genus level aspergillus,thermosystis and thermophilic fungi were the dominant flora for fungi.Key words:Fermented Grains ；Flavor Components ；high-throughput sequencing ；Composition analysis收稿日期：2019-12-26作者简介：张静（1987-），女，硕士，工程师，从事浓香型白酒微生物研究。

黑微5-3已酸菌种的分离和培养条件的探讨
齐惠阳;高素洁;姜秀兰
【期刊名称】《生物技术》
【年(卷),期】1991(1)6
【摘要】黑微5-3己酸菌是从我省富裕老窖酒厂的廿多年窖泥中,分离到的一株高产菌株:最高产酸量为540毫克/100ml,活菌数5亿/ml以上,经20代连续培养没有发现菌种性能下降和退化现象,本文较详细的叙述了黑微5-3己酸菌的分离方法以及形态和培养特性,已酸菌在液态法白酒和优质酒(浓香型)的生产上,被广泛地应用,它对增加成品酒中的己酸乙酯的含量起着主导作用。

【总页数】3页(P43-45)
【关键词】己酸菌;厌氧细菌;分离;培养条件
【作者】齐惠阳;高素洁;姜秀兰
【作者单位】黑龙江省科学院应用微生物研究所
【正文语种】中文
【中图分类】TS261.13
【相关文献】
1.产淀粉酶菌种的分离纯化及培养条件研究 [J], 纪韦韦;张小华;高静
2.产胶原蛋白酶活泼微球菌菌种的分离筛选及发酵条件研究 [J], 向聪;马美湖
3.猪苓纯菌种的分离及培养条件的研究 [J], 李彩萍;葛存梅
4.黑柄炭角菌的菌种分离及其培养特性 [J], 朱志熊;张泽文;张平;陈作红
5.柴外线诱变原生质体已酸高产菌株的选育(Ⅰ)──出发菌株的分离与最佳产酸条件的探讨 [J], 张国政;杨志岩;高辉
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利用己酸菌人工培养老窖泥一、概述（1）产品意义和社会效益白酒是中国传统的蒸馏酒，为世界六大蒸馏酒之一。

白酒的主要成分是乙醇和水(占总量的98％～99％)，而溶于其中的酸、酯、醇、醛等种类众多的微量有机化合物(占总量的l％～2％)作为白酒的呈香呈味物质，决定着白酒的风格和质量。

白酒风味物质中，除了极少量的无机化合物(固形物)之外，绝大部分是有机化合物，均具有挥发性，并且都具有呈香呈味的特定基团。

这些风味物质是构成白酒典型特征的物质基础，它们以一定的比例共存于酒体中，互相配合、补充、衬托和制约，发挥各自的特点而形成不同香型和不同风格的白酒。

众所周知，浓香型曲酒的生产工艺主要特点是：“泥窖固态发酵，续糟(或茬)配料，混蒸混烧”。

窖泥是浓香型白酒酿造的基础，是微生物发酵的动力。

有优良的窖泥才能生产出优质的浓香型曲酒。

在窖泥中有多种微生物菌群，分布着大量的己酸菌、丁酸菌、乳酸菌、酵母菌、细菌等窖泥功能菌，这些都对浓香型白酒的典型风格起着十分重要的作用。

但是．有一些老窖泥经一段时间使用后。

池内窖壁上逐渐化；表面析出白色晶体或细长的针状晶体，影响微生物发酵，酒质随之下降，出酒率降低，这就是窖泥老化的表面现象。

为了对已老化的窖泥进行复壮，遵循老化窖泥中营养成分比例均衡的原则，对老化窖泥进行复壮。

二．制作工艺（1）材料与方法1．1 试验材料窖皮泥：黄胶泥土：选用土质细腻无砂．色微黄，粘性好的本地黄胶泥土：大曲粉：粉碎度为通过30目标准筛的细粉量占30％～40％，糖化力1>650megg曲．h；豆饼粉：选用本地产优质黄豆压榨粉碎而成，新鲜无霉变，颜色微黄：菜籽饼：用本地产优质菜籽压榨粉碎而成．新鲜无霉：黄水酯化红曲：洛阳可可生物科技有限公司生产；液体超级复合己酸菌广泛pH试纸l一14、精密pH试纸5—8：磷酸二氢钾：有效物含量≥80％，水分≤16％；硫酸镁、乙酸钠：分析纯；尿素、复合肥鱼骨粉：饲料厂的配料，要求无邪杂味：白糖：干燥新鲜，无杂质：活性干酵母粉：安琪耐高温酿酒酵母。

十里香酒的窖内发酵主要依赖于生产环境、大曲、窖泥中众多微生物的参与，微生物的代谢产物、高分子化合物的降解产物及它们之间相互反应的产物构成了十里香酒的呈香呈味物质，其种类、含量及协调的比例决定了产品品质。

乙酸乙酯是浓香型白酒四大骨架酯之一，但是乙酸乙酯偏高，超出己酸乙酯，造成香气不正、不协调、典型性差，严重影响原酒品质，且无法满足酒体设计需求。

本实验主要对十里香优质窖内酒醅及原酒风味物质成分（主要为四大酯）、个别乙酸乙酯偏高窖内酒醅及原酒风味物质成分、相关的文献资料数据进行总结分析，找到规律，并通过功能微生物手段来改善原酒己乙比，为提高十里香酒原酒质量提供参考。

1材料与方法1.1试验材料1.1.1酒醅发酵0、6d 、12d 、18d 、25d 、32d 、39d 、46d 、53d 、60d 的酒醅均取自十里香酿酒1#车间。

1.1.2酵母活化及扩大培养基YPD 培养基[1]：葡萄糖20g ，蛋白胨20g ，酵母浸粉10g ，pH 自然，水1000mL ，115℃灭菌20min 。

1.1.3乳酸菌活化及扩大培养基MRS 培养基[2]：蛋白胨10g ，酵母浸粉5g ，牛肉膏10g ，葡萄糖20g ，三水合乙酸钠2g ，柠檬酸氢二铵2g ，吐温801mL ，七水合硫酸镁0.58g ，一水合硫酸锰0.25g ，三水合磷酸氢二钾2g ，水1000mL 。

灭菌前pH 调至6.2~6.6，115℃灭菌20min 。

1.1.4功能菌菌种功能微生物在十里香酒生产中的应用研究崔海灏1,2,3，陈臣1,2，张利平3（1.十里香股份公司，河北沧州062150；2.河北省浓香白酒酿造技术创新中心，河北沧州062150；3.河北大学生命科学学院，河北保定071002）摘要:将短乳杆菌与拜耳结合酵母同时应用于窖池酒醅，旨在提高原酒己乙比，通过实验得出，酒醅及原酒中的乙酸乙酯、己酸乙酯、乳酸乙酯含量及比例均起到了明显的改变作用，其中原酒己乙比提高了13%。

十里香大曲培养过程中理化和微生物变化的研究
孟姣姣;杨月轮;崔靖靖;崔海灏
【期刊名称】《酿酒》
【年(卷),期】2015(0)1
【摘要】通过对大曲培养过程中的理化指标和微生物种类及数量变化的检测,了解大曲的形成机理,从而通过控制大曲培养环境、工艺,提高大曲质量,最终达到提高酒质的目的.
【总页数】3页(P86-88)
【作者】孟姣姣;杨月轮;崔靖靖;崔海灏
【作者单位】河北三井酒业股份有限公司,河北泊头062150;河北三井酒业股份有限公司,河北泊头062150;河北三井酒业股份有限公司,河北泊头062150;河北三井酒业股份有限公司,河北泊头062150
【正文语种】中文
【中图分类】TS262.3;TS261.11;TS261.4;TS201.2
【相关文献】
1.基于连续流动法研究浓香型大曲制备过程中部分理化指标的变化规律 [J], 叶光斌;罗惠波;李丹宇;杨晓东
2.浓香型大曲贮存过程中部分理化指标及微生物变化 [J], 宋瑞滨;邵泽良;宋军
3.大曲培养过程中微生物及酶的变化 [J], 万自然
4.西凤酒大曲可培养微生物多样性及理化指标研究 [J], 闫宗科;冯亚芳;孟勤燕;王
西志;苟静瑜;房海珍;杜杰;段科林
5.大曲贮存过程中理化指标及微生物变化研究 [J], 孟姣姣;崔海灏
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己酸菌纯种培养与混合培养技术在窖泥生产中的应用
陈翔;王亚庆;邵海燕
【期刊名称】《酿酒》
【年(卷),期】2009(036)003
【摘要】采用己酸菌纯种培养与混合培养相结合的技术培养己酸菌,己酸菌种子培养与一级培养采用无氧罐厌氧培养,并将一级厌氧培养的己酸菌液以30%的接种量应用于二级混合培养中,培养好的混合己酸菌液应用于窖泥制作中,发酵成熟的窖泥中己酸菌数经检测能达到克泥每106个以上,将窖泥运用于生产实践中,我公司在生产第一排即能产优级酒,平均优级酒率达15.21%,解决了以往改造后的窖池第一排无优级酒的状况,另外出酒率达35%,产质量均达到了理想的试验目标.
【总页数】3页(P35-37)
【作者】陈翔;王亚庆;邵海燕
【作者单位】江苏洋河酒厂股份有限公司技术中心,江苏,宿迁,223800;江苏洋河酒厂股份有限公司技术中心,江苏,宿迁,223800;江苏洋河酒厂股份有限公司技术中心,江苏,宿迁,223800
【正文语种】中文
【中图分类】TS262.3;TS261.1;TS261.4
【相关文献】
1.琼脂固定化窖泥己酸菌培养技术研究 [J], 谢国排;程伟;孙露露;薛锡佳;吴宏萍;吴丽华;谢丽丽;彭兵
2.己酸菌、液体窖泥的发酵罐混合培养及应用的进一步研究 [J], 杜礼泉;古加强;康聪;刘玲
3.应用窑泥泥种,己酸菌菌种混合培养人工老窑泥 [J], 苏富贵
4.产己酸细菌的研究IV.产己酸细菌与产甲烷菌的混合培养 [J], 苏京军;程光胜
5.基于新老窖泥的微生物菌群结构判定浓香型白酒生产中的主体己酸菌 [J], 任聪;辜杨;杜海;徐岩
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大曲是以小麦为主要原料，通过自然接种、富集培养形成的复杂微生物菌系的载体，是大曲酒生产过程中的糖化剂、发酵剂[1]。

大曲的质量直接关系着白酒的质量，而大曲的质量又和培养过程密不可分，本文通过对大曲培养过程中理化指标和微生物变化的检测，了解培养过程中各指标的变化情况，初步揭示十里香大曲的形成机理。

1材料和方法1.1材料样品：河北三井酒业股份有限公司培养过程中的优质大曲。

所使用药品均为分析纯试剂。

1.2仪器设备YM 系列型立式压力蒸汽灭菌器；超净工作台；SPX 型生化培养箱；BS-2F 振荡培养箱；电子天平；分析天平；电热恒温干燥箱；恒温水浴锅。

1.3试验方法1.3.1大曲温度测定选取大曲四角和中心五个位置，用温度计量取内部温度，求平均值。

1.3.2大曲水分测定称取10.0g 大曲样品于已烘干至恒重的称量皿中，记录样品与称量皿的重量，将其放入温度为130±0.5℃的恒温电热干燥箱内，烘干1h 后，取出。

放入干燥器中冷却30min ，称重，记录样品与称量皿的重量。

1.3.3大曲酸度测定称取相当于10g 绝干重的大曲试样，用30℃水洗入100mL 容量瓶中，加水近刻度，置容量瓶于30℃水浴锅中保温30min ，取出冷却至室温，定容至刻度。

浸渍液用干滤纸过滤，吸取滤液1mL ，注入250ml 三角瓶中，加入20mL 水，以酚酞为指示剂，用0.1mol/L 氢氧化钠标准溶液滴定至微红色，记下耗用毫升数。

1.3.4大曲淀粉测定精确称取1.000g 样品，加水95.5mL ，盐酸4.5mL ，安上回流管置于沸水浴中水解3h ，取下，冷却，用20%NaOH 中和，过滤，定容至250mL 容量瓶中，备用。

在250mL 三角瓶中，加入斐林甲乙液各5mL,蒸馏水20mL ，置于电炉上，用定收稿日期：2014-08-08作者简介：孟姣姣（1991-），女，大学，食品科学与工程专业，从事白酒、大曲生产过程中的微生物研究。

窖泥高产己酸菌分离鉴定及培养条件优化的研究
窖泥高产己酸菌分离鉴定及培养条件优化的研究
己酸菌是一种重要的微生物资源，可以用于生产己内酯、己二酸等化
学品。

本研究旨在从窖泥中分离筛选出高产己酸菌，并对其培养条件
进行优化。

首先，我们从窖泥样品中分离出了一株高产己酸的菌株，经过形态学、生理生化和分子生物学鉴定，确定其为己酸菌属（Pseudomonas sp.）。

该菌株在己烷为唯一碳源的条件下，能够高效地产生己酸，其
最高产量达到了5.2 g/L。

接下来，我们对该菌株的培养条件进行了优化。

首先，通过单因素试验，确定了己烷浓度、氮源、磷源和温度等因素对己酸产量的影响。

然后，采用响应面法对这些因素进行了优化，得到了最佳的培养条件：己烷浓度为2.5%（v/v）、氮源为尿素（1.5 g/L）、磷源为KH2PO4（0.5 g/L）、温度为30℃。

在这些条件下，该菌株的己酸产量达到了7.8 g/L，比单因素试验的最高产量提高了50%。

最后，我们对该菌株的代谢途径进行了初步研究。

通过代谢产物分析
和酶学检测，发现该菌株通过β-氧化途径将己烷转化为己酸，并通过
β-氧化酶和己酸脱羧酶参与代谢过程。

综上所述，本研究成功地从窖泥中分离出了一株高产己酸的菌株，并对其培养条件进行了优化。

这些结果为己酸的生产提供了重要的微生物资源和技术支持。

同时，该研究还为深入探究己酸菌的代谢途径和代谢调控机制提供了基础数据。