【临床微生物实验】_非发酵菌概述、假单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌

第二十章不发酵菌及检验（不发酵G-杆菌）本章内容概述假单胞菌属（一）铜绿假单胞菌（二）嗜麦芽窄食单胞菌不动杆菌属、产碱杆菌属、黄杆菌属、莫拉菌属军团菌属不发酵菌概述不发酵或仅氧化形式利用葡萄糖的革兰阴性无芽胞杆菌；大部分为专性需氧菌。

包括13个属。

大多为条件致病菌。

除不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌及个别假单胞菌外，氧化酶试验均为阳性。

氧化-发酵（O-F）试验是确定非发酵菌与发酵菌以及测定非发酵菌是否利用糖的基本试验。

麦康凯琼脂上：假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属等生长，而莫拉菌属和艾肯菌属等不生长。

假单胞菌属铜绿假单胞菌——生物学特性形态与结构形态：细长杆菌。

染色：G-。

特殊结构：无芽胞，无荚膜。

有1～3根鞭毛，运动活泼。

培养特性营养要求：不高。

气体环境：专性需氧。

温度环境：最适35℃，4℃不生长。

菌落特点：普通琼脂平板：圆形大小不一，边缘不整齐、扁平、隆起、光滑湿润且常呈融合状态的菌落。

血液琼脂平板：扁平、湿润、有特殊气味的灰绿色或蓝绿色菌落，有金属光泽；周围有透明溶血环。

选择培养基：（麦康凯琼脂培养基）微小无光泽半透明菌落，48h菌落中心常呈棕绿色。

（SS琼脂培养基）类似沙门菌的菌落，稍久菌落可呈棕绿色。

产生的主要色素：①绿脓素，为蓝绿色，无荧光性；②绿色荧光素。

铜绿假单胞菌——微生物检验及鉴定标本采集：根据病情采集相应的临床标本。

形态学检查分离培养：依据菌落特征、色素（约10%菌株不产生色素）、气味等以及涂片染色结果。

生化试验（鉴定）耐药性具有多重耐药。

初代敏感的菌株在治疗3～4d后可能发生耐药。

亚胺培南耐药主要原因之一是产生金属酶。

铜绿假单胞菌——致病性及临床意义俗称绿脓杆菌。

是医院感染的主要病原体之一。

引起的局部感染常见于烧伤或创伤后，亦可引起中耳炎、角膜炎、尿道炎和下呼吸道感染，甚至引起心内膜炎、肺炎，严重者可引起败血症，死亡率甚高。

假单胞菌属嗜麦芽窄食单胞菌革兰阴性杆菌。

端鞭毛1～8根，有动力、无芽胞、无荚膜。

1、贝多芬的童年尽管如是悲惨，他对这个时代和消磨这时代的地方，永远保持着一种温柔而凄凉的回忆。

2、社会永远处在这两条路的中间：真理或爱。

它通常的解决，往往是把真理和爱两者一齐牺牲了。

3、脸上的肌肉突然隆起，血管膨胀、犷野的眼睛变得倍加可怕；嘴巴发抖；仿佛一个魔术家召来了妖魔而反被妖魔制服一般。

4、我的信仰使人厌恶或阻碍别人，这是可能的。

但要更改它却不在我能力范围以内，好似我不能改变我的**一样。

我除了我所相信的以外不能相信别的，尤其在这个我将回到神那边去的时候。

5、也许是他作品中最深刻的，仿佛用血泪写成的，结果是一文都不曾拿到。

把贝多芬煎熬完的是，日常的窘况，无穷尽的讼案：或是要人家履行津贴的诺言，或是为争取侄儿的监护权，因为他的兄弟卡尔于一八一五年死于肺病，遗下一个儿子。

6、我称为英雄的，并非以思想强力称雄的人，而只是靠心灵而伟大的人。

7、没有伟大的人格，就没有伟大的人，甚至也没有伟大的艺术家，伟大的行动者；所有的只是些空虚的偶像，匹配下贱的群众的；时间会把他们一齐摧毁。

成败又有什么相干？主要是成为伟大，而非显得伟大。

8、宽大的鼻子又短又方，竟是狮子的相貌。

一张细腻的嘴巴，但下唇常有比上唇前突的倾向。

牙床结实得厉害，似乎可以磕破核桃。

左边的下巴有一个深陷的小窝，使他的脸显得古怪地不对称。

9、艺术家对于他的作品的爱是艺术的心灵。

没有爱便没有艺术作品。

10、在这些**的痛苦之上，再加另外一种痛苦。

韦格勒说他从没见过贝多芬不抱着一股剧烈的热情。

这些爱情似乎永远是非常纯洁的。

11、他甚至在一八二六年时在自己头上打了一枪。

然而他并不死，倒是贝多芬几乎因之送命：他为这件事情所受的难堪，永远无法摆脱。

12、贝多芬的心灵里多少有些清教徒气息；粗野的谈吐与思想，他是厌恶的：他对于爱情的神圣抱着毫无假借的观念。

13、竭力为善，爱自由甚于一切，即使为了王座，也永勿欺妄真理。

14、有时候，人生的现象与痛苦是那么悲惨，对于我们的爱是一种打击，那时，为了拯救这爱，拯救这信念，我们不得不把它超临人世之上，以致它有和人世脱离一切关系的危险。

第二十章不发酵菌及检验（不发酵G-杆菌）本章内容概述假单胞菌属（一）铜绿假单胞菌（二）嗜麦芽窄食单胞菌不动杆菌属、产碱杆菌属、黄杆菌属、莫拉菌属军团菌属不发酵菌概述不发酵或仅氧化形式利用葡萄糖的革兰阴性无芽胞杆菌；大部分为专性需氧菌。

包括13个属。

大多为条件致病菌。

除不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌及个别假单胞菌外，氧化酶试验均为阳性。

氧化-发酵（O-F）试验是确定非发酵菌与发酵菌以及测定非发酵菌是否利用糖的基本试验。

麦康凯琼脂上：假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属等生长，而莫拉菌属和艾肯菌属等不生长。

假单胞菌属铜绿假单胞菌——生物学特性形态与结构形态：细长杆菌。

染色：G-。

特殊结构：无芽胞，无荚膜。

有1～3根鞭毛，运动活泼。

培养特性营养要求：不高。

气体环境：专性需氧。

温度环境：最适35℃，4℃不生长。

菌落特点：普通琼脂平板：圆形大小不一，边缘不整齐、扁平、隆起、光滑湿润且常呈融合状态的菌落。

血液琼脂平板：扁平、湿润、有特殊气味的灰绿色或蓝绿色菌落，有金属光泽；周围有透明溶血环。

选择培养基：（麦康凯琼脂培养基）微小无光泽半透明菌落，48h菌落中心常呈棕绿色。

（SS琼脂培养基）类似沙门菌的菌落，稍久菌落可呈棕绿色。

产生的主要色素：①绿脓素，为蓝绿色，无荧光性；②绿色荧光素。

铜绿假单胞菌——微生物检验及鉴定标本采集：根据病情采集相应的临床标本。

形态学检查分离培养：依据菌落特征、色素（约10%菌株不产生色素）、气味等以及涂片染色结果。

生化试验（鉴定）耐药性具有多重耐药。

初代敏感的菌株在治疗3～4d后可能发生耐药。

亚胺培南耐药主要原因之一是产生金属酶。

铜绿假单胞菌——致病性及临床意义俗称绿脓杆菌。

是医院感染的主要病原体之一。

引起的局部感染常见于烧伤或创伤后，亦可引起中耳炎、角膜炎、尿道炎和下呼吸道感染，甚至引起心内膜炎、肺炎，严重者可引起败血症，死亡率甚高。

假单胞菌属嗜麦芽窄食单胞菌革兰阴性杆菌。

端鞭毛1～8根，有动力、无芽胞、无荚膜。

非发酵G-杆菌(nonfermentative G- Bacilli)1. 非发酵菌是一群需氧、无芽孢、不利用糖或仅能氧化分解糖类是做为能量来源的G-杆菌。

（1）通常所讲的非发酵菌指在KIA中24小时内表面能够生长，在底部不生长的需氧G-杆菌。

（2）非发酵菌与其它苛养或非糖发酵的G-杆菌之间的界限只是传统意义上的，并不是根据明确的遗传或表型特点来划分。

（3）多为条件致病菌，近年来日益增多，尤其是医院感染。

2. 分类与命名：主要的非发酵G-杆菌属被分成6个科：（1）假单胞菌科：根据rRNA-DNA同源性分为5个rRNA群①rRNAⅠ群/假单胞菌属；②rRNAⅡ群/伯克霍尔德菌属；③rRNAⅢ群/丛毛单胞菌属、食酸菌属；④rRNAⅣ群/短波毛单胞菌属；⑤rRNAⅤ群/窄食单胞菌属；⑥其它：鞘氨醇单胞菌属、希瓦菌属等（2）产碱杆菌科：产碱杆菌属；（3）黄杆菌科：华丽杆菌属（4）莫拉菌科：不动杆菌属、莫拉菌属；（5）甲基球菌科；（6）根瘤菌科3. 非发酵菌的基本鉴定要求（1）缺少糖发酵的证据，通常是在KIA或TSI培养基中无酸产生，斜面和底部均呈红色。

（2）氧化酶+（不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、唐菖蒲伯克菌、浅黄华丽单胞菌、栖稻黄素单胞菌-），但并非所有氧化酶+的G-杆菌都是非发酵菌。

（3）麦康凯上生长很差或不生长。

（4）动力：多为+，但多为专性需氧，故半固体培养基中不明显，宜用直接动力观察或染色法。

4. 重要的鉴定试验（1）葡萄糖利用（O/F试验）：O/F培养基:蛋白胨和糖类的比例为1:5而不同于发酵菌的1:2。

（2）氧化酶试验：（3）动力：半固体培养基:应只穿刺培养基顶部4mm，在培养4-6小时后首次观察结果,24和48小时后再次观察结果。

更准确的方法是湿片法和鞭毛染色。

（4）色素形成：非发酵菌可形成多种色素，有助于菌种的鉴定。

（5）硝酸盐还原/产气：将硝酸盐还原成亚硝酸盐，进而释放氮的生化过程。

（6）吲哚试验：需用含色氨酸丰富的培养基，产吲哚黄杆菌、脑膜败血黄杆菌、食酸丛毛单胞菌等+。

非发酵菌的鉴定的临床探讨发表时间：2011-08-31T14:47:05.327Z 来源：《中外健康文摘》2011年第19期供稿作者：吕春凤[导读] 非发酵菌主要是指一大群不发酵糖类、专性需氧、不产生芽胞的革兰阴性杆菌。

吕春凤（黑龙江省绥滨农场疾病控制中心 156203）【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）19-0284-02 【关键词】非发酵菌鉴定探讨非发酵菌主要是指一大群不发酵糖类、专性需氧、不产生芽胞的革兰阴性杆菌。

在临床微生物学实验室遇到所有革兰阴性杆菌中，非发酵菌占15%，其中2/3是假单胞菌。

非发酵菌大多为机会致病菌，是引起医院内感染的重要致病菌。

临床标本中遇到的非发酵菌有近10个菌属的数十个种别。

主要菌属有假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、无色杆菌属、莫拉菌属、金氏杆菌属、黄杆菌属、艾肯菌属、土壤杆菌属等。

1 假单胞菌属1.1 生物学特性直或微弯杆菌，长1.5～5.0μm，宽0.5～1.0μm，革兰染色阴性。

单端鞭毛，1根或数根，有动力。

严格需氧代谢。

氧化酶阳性，触酶阳性。

1.2 常规鉴定从临床标本中分离到的非发酵菌，大约占所有革兰阴性杆菌中的15%，其中铜绿假单胞菌占70%，其次是不动杆菌属，嗜麦芽窄食单胞菌占第三位，荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌、斯氏假单胞菌较少见。

荧光假单胞菌DNA 同源群的鉴定。

该群有3个菌种，铜绿、荧光和恶臭假单胞菌，主要生物学特性是能产生水溶性色素，如青脓素或称荧光素，绿脓素不发荧光，可用氯仿从培养液抽提获得。

此外，尚有少数菌株可产生红脓素、黑脓素，也有不产色素的菌株。

氧化酶阳性、精氨酸双水解酶阳性，一般能在麦康凯琼脂上生长，利用枸橼酸盐，对多粘菌素敏感。

氧化葡萄糖、蔗糖无反应。

据统计，临床标本中铜绿假单胞菌不产绿脓素的菌株约占10%，既不产生绿脓素亦不产生青脓素的也占10%左右。

对于不产生绿脓素的铜绿假单胞鉴定最低限度应具有以下特性：端极一根鞭毛，有动力，在O-F葡萄糖培养基需氧管中产酸，氧化酶阳性，精氨酸双水解酶阳性，42℃生长，其他如硝酸盐还原产生氮气，麦康凯琼脂上生长，对多粘菌素敏感皆有鉴定参考价值。

第二十五章非发酵菌及检验本章考点：1.概述：概念2.假单胞菌属●概念●分类●铜绿假单胞菌临床意义和微生物学检查3.不动杆菌属、产碱杆菌属、莫拉菌属、黄杆菌属一、概述非发酵菌主要是指一群①不发酵或不分解糖类的②革兰阴性③无芽胞④需氧杆菌。

目前，非发酵菌包括13个属。

主要有假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、莫拉菌属、黄杆菌属等。

这些细菌大多为条件致病菌。

对于非发酵菌的鉴定，必须首先进行种属间的鉴别，然后进行种间的鉴定。

一般实验室只需用几项试验，如氧化酶、O-F试验、动力及鞭毛、菌落色素、硝酸盐还原试验以及在麦康凯琼脂上的生长情况等即可对90%～95%分离的菌株作出初步鉴定。

1.培养温度：多数非发酵菌适宜生存于自然界，培养温度以30℃为宜。

有的更适宜生长于室温（18℃～22℃）。

故常规标本应先培养于35℃～37℃，再培养于30℃或室温。

2.动力与鞭毛：在非发酵菌的鉴定中，细菌是否具有鞭毛及鞭毛的特点有重要的诊断意义。

由于非发酵菌大部分为专性需氧菌，在半固体培养基上观察动力不明显，因细菌在琼脂表面生长，底层穿刺生长不良或不生长，故观察非发酵菌的动力以30℃或室温12～24h培养物悬滴法为准。

有时需借助鞭毛染色予以鉴定。

3.氧化酶试验：该试验是鉴定非发酵菌的重要试验，非发酵菌中除不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌及个别假单胞菌外，氧化酶试验均为阳性。

4.氧化-发酵（O-F）试验：本试验是确定非发酵菌与发酵菌以及测定非发酵菌是否利用糖的基本试验。

非发酵菌对葡萄糖的代谢特点是氧化型产生微量酸。

在氧化-发酵（O-F）试验中，应为开管产酸，闭管不变。

5.在麦康凯琼脂上生长情况：如假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属等生长，而莫拉菌属和艾肯菌属等不生长。

非发酵菌几种主要菌属的基本特征见表5-25-1。

表5-25-1 非发醇菌主要菌属的基本特征二、假单胞菌属假单胞菌属为一大组革兰阴性杆菌，大量存在于水、土壤和空气中。

在人类感染的非发酵菌中，假单胞菌属约占70%～80%，主要为铜绿假单胞菌（约55%～65%）。