HPLC法测定新生化颗粒中益母草碱的含量-4页精选文档
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高效液相法测定益母草中益母草碱含量研究
江帆;聂晶;余建清;邱国福;胡先明
【期刊名称】《分析科学学报》
【年(卷),期】2008(24)3
【摘要】建立一种高效液相色谱(HPLC)检测鲜益母草及其制剂中益母草碱含量的方法。
色谱柱为依利特Hypersil柱,流动相为0.00125 mol/L KH2PO4-
CH3CN(87∶13,V/V),流速1 mL/min,柱温35℃,检测波长为276 nm。
益母草碱的标准曲线回归方程是y=227 394x+1 292 605,r=0.9999(n=5)。
该方法测定益母草及其制剂中益母草碱的含量,具有简便、准确及可靠的优点。
【总页数】3页(P347-349)
【关键词】益母草;益母草碱;高效液相色谱
【作者】江帆;聂晶;余建清;邱国福;胡先明
【作者单位】武汉大学药学院;湖北省医药工业研究院
【正文语种】中文
【中图分类】O657.72
【相关文献】
1.高效液相色谱-蒸发光散射法测定食品中糖醇含量的研究 [J], 唐治玉;傅博强;盛灵慧;王晶
2.高效液相色谱-电化学法测定大鼠脑脊液中多巴胺含量的研究 [J], 黄小莹;张黎君;
3.高效液相色谱-串联质谱法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱的含量 [J], 李铭
4.高效液相色谱-荧光法与高效液相色谱-二极管阵列法测定食品中维生素B1含量的比较研究 [J], 王柳玲;黄伟乾;吴国辉;高静茵;吴芷欣;谭键辉
5.高效液相色谱-蒸发光散射法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱的含量 [J], 黄园;梁月钊;陈晓军
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Vol.7 No.1Feb. 2021生物化工Biological Chemical Engineering第 7 卷 第 1 期2021 年 2 月益母草生物碱的提取工艺研究及含量测定胡慧慧,纪昂,张明慧,冯亚莉*(郑州工业应用技术学院药学与化学工程学院,河南新郑 451100)摘 要:目的:探讨益母草的最优提取工艺。
方法:以益母草总生物碱及盐酸益母草碱的含量为指标,研究水提、回流、超声等不同提取方法对二者提取率的影响,确定益母草的最优提取工艺。
结果:酸性乙醇回流提取法得到的总生物碱和盐酸益母草碱含量均最高,分别为2.14 mg/g 和0.282 mg/g。
结论:采用酸性乙醇回流提取法对益母草药材进行提取为最优方案。
关键词:益母草;生物碱;提取工艺;含量测定中图分类号:TQ464.4 文献标识码:AStudy on Extraction Technology and Content Determination of Alkaloid MotherwortHU Huihui, JI Ang, ZHANG Minghui, FENG Yali *(School of Pharmacy and Chemical Engineering, Zhengzhou University of Industrial Technology, Henan Xinzheng451100)Abstract: Objective: to explore the optimal extraction process of motherwort. Methods: taking the content of total alkaloid and hydrochloric acid of motherwort as indexes, the effects of different extraction methods such as water extraction, reflux and ultrasonic extraction on the extraction rate of motherwort were studied to determine the optimal extraction process. Results: the contents of total alkaloid and leonurine hydrochloride obtained by acid ethanol reflux extraction were the highest, 2.14 mg/g and 0.282mg/g respectively. Conclusion: acid ethanol reflux extraction is the best method to extract motherwort.Keywords: Motherwort; Alkaloids; Extraction process; Content determination益母草为唇形科植物益母草Leonurus japonicas Houtt.的新鲜或干燥地上部分[1],又称茺蔚、坤草、月母草、旋风草、益母蒿等,归心、肝、膀胱经,其味苦、辛,性微寒。
HPLC法测定新生化颗粒中羟基红花黄色素A的含量新生化颗粒由当归、川芎、桃仁、益母草、红花、炙甘草、干姜7味中药组成,具有活血、去淤、止痛的功效。
本方中的红花是活血通经、去淤止痛的主药,而羟基红花黄色素A是红花的主要功效成分。
笔者采用高效液相色谱法测定该成分的含量[1-3],以为进一步完善该制剂的质量控制标准提供依据。
1 仪器与试药1260高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司);Sartorius-ME235S 电子天平;CQ250超声清洗器。
羟基红花黄色素A对照品(中国药品生物制品检定所,批号111637-201207,供含量测定用,含量100.0%);新生化颗粒(云南白药集团股份有限公司,批号分别为ZLB1304, ZLB1201,,ZLB1308)。
乙腈为色谱纯(经0.45μm滤膜过滤),水为超纯水,其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果2.1 色谱条件与系统适用性试验:色谱柱:Agilent Eclipse XDB C18;流动相:甲醇-乙腈-0.7%的磷酸溶液(26:2:72);进样量:10μL;流速1.0mL/min;检测波长403nm;柱温30℃。
2.2 溶液制备:供试品溶液制备:取本品,研细,精密称取约2.0g,置锥形瓶中,精密加入25%甲醇50ml,称定重量,超声处理(功率300W,频率50kHz)40分钟,放冷,再称定重量,用25%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
对照品溶液制备:取羟基红花黄色素A对照品适量,精密称定,加25%甲醇制成每1ml含0.13mg的溶液,即得。
阴性对照溶液制备:按新生化颗粒剂制备工艺,制备缺红花的阴性样品,照供品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
2.3 方法学考察:专属性试验分别精密吸取2.2项下3种溶液各10μL,按拟定的色谱条件进样,记录色谱图,在此条件下,理论塔板数以羟基红花黄色素A峰计算大于3000。
见图1。
可见,在对照品溶液色谱主峰处,供试品溶液色谱相同保留时间的色谱峰,阴性对照溶液无此色谱峰,说明处方中其他成分对测定无干扰。
HPLC法同时测定益母草中4种成分乔晶晶;吴啟南;许一鸣;薛敏;王倩;赵玲玲【期刊名称】《中成药》【年(卷),期】2018(040)011【摘要】目的建立HPLC法同时测定益母草Leonurus japonicas Houtt.药材中盐酸益母草碱、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷的含有量.方法益母草70%乙醇提取液的分析采用HPLC-PDA、Waters XBridgeTM C18色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5 μm);以甲醇-水(含0.1%甲酸)为流动相;体积流量1.0 mL/min;检测波长277 nm;柱温30℃.采用灰色关联度分析(GRA)对其进行综合评价.结果盐酸益母草碱、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷分别在3.73~466 (r=1.000 0)、0.40~198.4(r=0.999 9)、0.50~47.92(r=0.999 4)、1.83~109.68 (r=0.9996) pg/mL的范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为98.25%、99.46%、98.61%、98.91%,RSDs分别为1.97%、2.67%、2.19%、2.17%.同一产地中的不同成分、不同产地中的同一成分均存在一定差异,河南-南阳的益母草样品综合品质评价最优.结论该方法准确稳定,重复性好,可用于益母草的质量控制.【总页数】5页(P2467-2471)【作者】乔晶晶;吴啟南;许一鸣;薛敏;王倩;赵玲玲【作者单位】南京中医药大学药学院,中药资源产业化与方剂创新药物国家地方联合工程研究中心,江苏省中药资源产业化过程协同创新中心,江苏南京210023;南京中医药大学药学院,中药资源产业化与方剂创新药物国家地方联合工程研究中心,江苏省中药资源产业化过程协同创新中心,江苏南京210023;南京中医药大学药学院,中药资源产业化与方剂创新药物国家地方联合工程研究中心,江苏省中药资源产业化过程协同创新中心,江苏南京210023;南京中医药大学药学院,中药资源产业化与方剂创新药物国家地方联合工程研究中心,江苏省中药资源产业化过程协同创新中心,江苏南京210023;南京中医药大学药学院,中药资源产业化与方剂创新药物国家地方联合工程研究中心,江苏省中药资源产业化过程协同创新中心,江苏南京210023;南京中医药大学药学院,中药资源产业化与方剂创新药物国家地方联合工程研究中心,江苏省中药资源产业化过程协同创新中心,江苏南京210023【正文语种】中文【中图分类】R284.1【相关文献】1.应用HPLC法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱的含量 [J], 莫怀初2.HPLC法同时测定蒙药达乌里芯芭中梓醇和益母草苷的含量 [J], 包玉秋;那仁朝克图3.HPLC法测定益母草中的黄酮类化合物 [J], 翁爱彬;郑荔莉;方剑英4.HPLC法测定益母草药材、益母草颗粒及复方益母草膏中益母草碱的含量 [J], 巩长芹;张师愚;常筠5.HPLC法测定新生化颗粒中益母草碱的含量 [J], 陈亚;陈健;向鹏宇;胡幸因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
实训十五 HPLC 测定益母草注射液中盐酸水苏碱含量
一、实训目的
1、掌握高效液相色谱法在中药制剂定量分析中的应用。
2、熟悉高效液相色谱仪的使用。
二、仪器与试药
1、仪器:高效液相色谱仪
2、试剂:盐酸水苏碱对照品,益母草注射液,纯净水,磷酸二氢钾,三乙胺
三、实训原理
益母草注射液为益母草加工制成的灭菌水溶液, 益母草为常用中药, 含盐酸水苏碱、益母草碱等生物碱类成分, 均为益母草中的主要有效成分。
因此本实验选用盐酸水苏碱作为本标准的控制指标, 用高效液相色谱法测定。
四、实训操作
1、色谱条件
反相键合相硅胶柱, 流动相为0.05mol/L磷酸二氢钾-三乙胺(100∶0.1) 色谱柱为C
18
(以磷酸调pH 值至2.3) , 检测波长为203nm , 流速0.18ml·m in- 1, 柱温30℃。
2、供试品溶液的制备
精密量取本品1ml, 置25ml 量瓶中, 用流动相稀释至刻度, 摇匀, 即得。
3、对照品溶液的制备
精密称取盐酸水苏碱对照品适量, 加流动相配制成每1ml含0.4mg的溶液, 即得。
4、测定
精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μL, 注入液相色谱仪,测定,即得。
分别进样3次,记录色谱峰面积。
五、实训结果
按外标法计算含量
六、思考题
1、影响理论塔板数的因素有哪些?
2、系统适应性试验包括哪些内容?
3、HPLC含量测定方法有哪些?。
收稿日期:2007-07-26 修回日期:2007-11-02*通讯联系人:胡先明,男,博士,教授,博士生导师,从事药物合成化学、天然产物化学及其药剂学研究.第24卷第3期V ol.24 N o.3分析科学学报JO U RN AL O F A N AL Y T ICA L SCIEN CE 2008年6月June 2008文章编号:1006-6144(2008)03-0347-03高效液相法测定益母草中益母草碱含量研究江 帆1,2,聂 晶2,余建清1,邱国福1,胡先明*1(1.武汉大学药学院,武汉430072; 2.湖北省医药工业研究院,武汉430061)摘 要:建立一种高效液相色谱(H PLC)检测鲜益母草及其制剂中益母草碱含量的方法。
色谱柱为依利特H ypersil 柱,流动相为0.00125m ol/L KH 2PO 4-CH 3CN (87B 13,V/V ),流速1mL/min,柱温35e ,检测波长为276nm 。
益母草碱的标准曲线回归方程是y =227394x +1292605,r =0.9999(n =5)。
该方法测定益母草及其制剂中益母草碱的含量,具有简便、准确及可靠的优点。
关键词:益母草;益母草碱;高效液相色谱中图分类号:O657.7+2 文献标识码:A益母草(H er ba L eonur i )为唇形科植物,其主要有效成分为丁香酸、益母草碱等[1]。
益母草碱具有活血化淤、利水消肿的作用,是中医妇科良药。
它能够抑制血小板的聚集,防止血栓的形成[2];可扩张外周血管,降低血管阻力,具有一定的抗高血压,降低冠脉阻力,增加冠脉血流量,保护心脏等药理作用[3]。
益母草碱的测定方法有雷氏盐剩余比色法[4]、雷氏盐沉淀溶解比色法[5]、紫外分光光度法[6]、薄层扫描法[7]、高效液相色谱法(H PLC)法[8,9]等。
本实验采用高效液相法对含益母草制剂中的益母草碱进行含量测定,结果表明,该方法较其他方法更准确可靠,从而为益母草及其制剂的质量控制提供了更可靠的方法。
益母草中益母草碱的HPLC检测论文益母草中益母草碱的HPLC检测论文目的建立益母草中益母草碱的HPLC检测方法。
方法 C18色谱柱,流动相:甲醇?pH=1.7的醋酸/醋酸钠缓冲液(体积比85∶15),流速0.6 mL·min-1,检测波长277 nm,灵敏度0.1AUFS,柱温25 ℃。
结果益母草药材中益母草碱的质量分数为0.015%;平均回收率为100.08%,RSD为0.15%。
结论高效液相色谱直接检测益母草碱,简便易行,结果准确可靠。
益母草为唇形科植物益母草(Leonurus heterophyllus Sweet)的干燥地上部分,以花蕾期的地上部分的干品或鲜品入药,性味苦、辛、微寒,归肝、心包经,具有活血调经、化瘀生新、收缩子宫之功效,主治月经不调、胎漏难产、行经腹痛及产后淤阻等证,素有“血家圣药”、“经产良药”之称。
益母草中主要含有生物碱类、二萜类、甾醇、黄酮类、有机酸、脂肪酸类等成分。
益母草中生物碱以益母草碱和水苏碱为主[1]。
药理作用研究证明,益母草中的主要有效成分益母草碱(leonurine)具有显著的直接扩张外周血管、增加血流量、抗血小板聚集活性等作用[2],可有效的降低血液黏度和提高红细胞的变形能力,还可调经止血,保护心肌缺血再灌注损伤。
在《中国药典》[3]及各级别标准中,益母草药材和益母草制剂的'质量控制均是以总生物碱为指标,文献[4,5]则采用雷氏盐剩余比色法测定益母草中盐酸水苏碱。
而对于益母草碱的含量却没有要求,这样不能保证益母草及其制剂的安全、有效。
以益母草为原料的多种制剂,如益母草胶囊、益母草冲剂、益母草口服液、益母草浸膏、益母草片等都是临床上的常用品,除个别品种在《中国药典》2005年版增加了含量测定项目外,多数品种无统一标准,有的品种则无含量测定要求,使市售的产品质量得不到保证。
所以建立一个以益母草碱为指标直接检测益母草药材及其制剂的统一的质量标准是很有意义的。
HPLC法测定新生化颗粒中益母草碱的含量新生化颗粒由当归、川芎、桃仁、益母草等组成,具有活血、去淤、止痛的功效。
处方中益母草其主要有效成分为丁香酸、益母草碱等。
益母草碱具有活血化淤、利水消肿的作用。
笔者采用高效液相色谱法测定该成分的含量[1-4]。
该方法简单、准确、重复性好,可用于新生化颗粒的质量控制。
1 仪器与试药
Agilent 1200高效液相色谱仪;Sartorius-ME235S电子天平;盐酸益母草碱对照品(中国药品生物制品检定所,批号111823-201202,含量94.7%);新生化颗粒(云南白药集团股份有限公司,批号分别为ZLB1301,ZLB1302,ZLB1304)。
乙腈为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件:
色谱柱:Agilent Eclipse XDB C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.4%辛烷磺酸钠的0.1%磷酸溶液(26:74);流速1.0mL/min;检测波长277nm;柱温25℃。
进样量:10μL。
2.2 溶液制备:
取盐酸益母草碱对照品适量,精密称定,加70%乙醇制成每1ml含
30μg的溶液,即得对照品溶液。
取本品,研细,精密称取约4.0g,置锥形瓶中,精密加入70%乙醇100ml,称定重量,加热回流2小时,放冷,再称定重量,用 70%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过。
取续滤液,即得供试品溶液。
按新生化颗粒剂制备工艺,制备缺益母草的阴性样品,照供
品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。
2.3 方法学考察:
系统适用性试验取2 2项下3种溶液,拟定的色谱条件进行测定。
结果阴性对照品溶液在与对照品溶液色谱峰相应保留时间位置上未出现
吸收峰,说明处方中其他成分对测定无干扰。
见图1。
图1高效液相色谱图(1)阴性对照品溶液(2)对照品溶液(3)供试品溶液
线性关系考察:精密称取盐酸益母草碱对照品(含量94.7%计)10.8mg,70%乙醇溶液定容于100 mL容量瓶中,得质量浓度约为108μg/ml 作为母液,分别精密吸取母液0.5;1.0;2.0;4.0;8.0ml;分别定容于10ml的容量瓶中,得质量浓度分别为5.4;10.8;21.6;43.2;86.4μg/ml 盐酸益母草对照品溶液,分别取上述溶液10μl注入液相色谱仪,以质量浓度为横坐标(x),峰面积为纵坐标(y),线性回归得回归方程为:
y=17x+20.23,r=0.9995,表明盐酸益母草碱质量浓度在5.4~86.4μg/ml 范围内线性关系良好。
精密度试验:取2 1制备的对照品溶液,按2 3色谱条件重复进样6次,结果峰面积的RSD为0.71%(n=6),表明仪器精密度良好。
重复性试验:精密称取同一批号样品(批号为ZLB1304),按供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液,分别测定,结果峰面积的RSD为0.97%(n=6),表明方法重现性好。
稳定性试验:取同一供试品溶液,于制备后0,2,4,8,12,24 h
进样。
结果峰面积的RSD为1.17%、(n=6),表明供试品溶液在24h内稳定。
加样回收试验:取已知含量的样品(批号ZLB1304)6份,精密加入盐酸益母草碱对照品(浓度为0.108mg/ml)适量,按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定,计算回收率,结果盐酸益母草碱平均回收率为98.80%,RSD%为0.72%;结果见表1。
表1 盐酸益母草碱加样回收实验结果(n=6)
3 讨论
照《中国药典》2010年版一部“益母草”项下的含量测定方法,故选择用70%乙醇加热回流提取,为保证被测成分的完全提取,实验中考察了回流 1、2、3小时不同提取时间对提取效率的影响,结果表明回流2小时后供试品中盐酸益母草碱的含量基本稳定不变,故将提取时间定为加热回流2小时。
曾试用水、70%甲醇、70%乙醇提取,结果发现,用70%乙醇作为提取溶剂效果最优。
本实验采用的处理方法简便易行,结果准确可靠,专属性强,重现性好,可用于该制剂的质量控制。
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