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microRNA-513b-5p通过抑制αB-crystallin促进晶状体细胞氧化应激和凋亡

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医学研究杂志 ２０１９年 ９月 第 ４８卷 第 ９期
·论 著·
ｍｉｃｒｏＲＮＡ－５１３ｂ－５ｐ通过抑制 αＢ－ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ 促进晶状体细胞氧化应激和凋亡
张爱华

摘 要 目的 研究 ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲ）－５１３ｂ－５ｐ对晶状 体 稳 定 性 调 节 蛋 白 αＢ－ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ的 调 节 关 系，及 ｍｉＲ－５１３ｂ－５ｐ 对晶状体上皮细胞（ｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ，ＬＥＣ）氧 化 应 激 和 凋 亡 调 节 的 下 游 机 制。 方 法 实 时 定 量 ＰＣＲ（ＲＴ－ｑＰＣＲ）和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法分别检测白内障患者和健康志愿者晶状体组织中 ｍｉＲ－５１３ｂ－５ｐ及 αＢ－ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ的水平。ｍｉＲ－５１３ｂ－５ｐ拟 似 物 ｍｉｍｉｃ 单独转染 ＬＥＣ细 胞 ＳＲＡ０１／０４，或 抑 制 剂 和 Ｈ２Ｏ２ 共 处 理 ＳＲＡ０１／０４；另 外，ｍｉｍｉｃ与 αＢ－ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ过 表 达 质 粒 ｃＤＮＡ３．１－αＢ－ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ（ｃ－ＣＲＹＡＢ）联合转染 ＳＲＡ０１／０４，试剂盒检测的细 胞 凋 亡 率，ＲＴ－ｑＰＣＲ法 和 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法 分 别 检 测 ｍｉＲ－５１３ｂ－５ｐ 的水平及 αＢ－ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ、活性氧（ＲＯＳ）和 超 氧 化 物 歧 化 酶 （ＳＯＤ）的 表 达 变 化，生 物 信 息 学 分 析 和 荧 光 素 酶 报 告 基 因 实 验 研 究 ｍｉＲ－５１３ｂ－５ｐ和 αＢ－ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ的靶向关系。结果 白内障患者晶 状 体 组 织 中 ｍｉＲ－５１３ｂ－５ｐ的 水 平 显 著 上 调 （Ｐ＜０．０５）和 αＢ－ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ的表达水平下调（Ｐ＜０．０５）；过表达 ｍｉＲ－５１３ｂ－５ｐ促 进 ＳＲＡ０１／０４凋 亡 和 活 性 氧 ＲＯＳ分 子 水 平，下 调 抗 氧 化 分 子 ＳＯＤ；抑制 ｍｉＲ－５１３ｂ－５ｐ降低 Ｈ２Ｏ２ 所诱导的活性氧 ＲＯＳ（Ｐ＜０．０５）；αＢ－ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ的表达被 ｍｉＲ－５１３ｂ－５ｐ过表达显著性 下调（Ｐ＜０．０５），ｍｉＲ－５１３ｂ－５ｐ过 表 达 对 细 胞 凋 亡 和 ＲＯＳ与 ＳＯＤ水 平 的 调 控 作 用 被 αＢ－ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ过 表 达 显 著 削 弱 （Ｐ＜ ００５）。结论 ｍｉＲ－５１３ｂ－５ｐ通过对 αＢ－ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ蛋白的负调节从而促进 ＬＥＣ的氧化应激和凋亡。
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｍｉＲ－５１３ｂ－５ｐａｎｄαＢ－ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ，ａｎｄｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｆｅｃｔａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆｍｉＲ－５１３ｂ－５ｐｏｎｏｘｉｄａｔｉｖｅａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉＲ－５１３ｂ－５ｐａｎｄαＢ－ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄｂｙＲＴ－ｑＰＣＲ ａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｉｎｔｈｅｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅｌｅｎｓｆｒｏｍ ｃａｔａｒａｃｔｐａｔｉｅｎｔｓａｎｄｈｅａｌｔｈｙｖｏｌｕｎ ｔｅｅｒｓ．ＬｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓＳＲＡ０１／０４ｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈｍｉＲ－５１３ｂ－５ｐｍｉｍｉｃａｌｏｎｅｏｒｃｏ－ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈｍｉＲ－５１３ｂ－５ｐｍｉｍｉｃ ａｎｄαＢ－ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｌａｓｍｉｄ（ｃＤＮＡ３．１－αＢ－ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ，ｃ－ＣＲＹＡＢ）．ＳＲＡ０１／０４ｗｅｒｅｓｔｉｍｕｌａｔｅｄｂｙＨ２Ｏ２ ａｌｏｎｅｏｒ ｃｏ－ｔｒｅａｔｅｄｂｙｍｉＲ－５１３ｂ－５ｐｉｎｈｉｂｉｔｏｒａｎｄＨ２Ｏ２．ＴｈｅｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＣｅｌｌＡｐｏｐｔｏｓｉｓＫｉｔｓ．ＲＴ－ｑＰＣＲａｎｄＷｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｔｅｓｔｔｈｅｌｅｖｅｌｃｈａｎｇｅｓｏｆｍｉＲ－５１３ｂ－５ｐ，αＢ－ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ，ｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｐａｓｅ３（ｃ－ｃａｓｐａｓｅ３），ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ （ＲＯＳ）ａｎｄｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ（ＳＯＤ）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓｔｏｏｌｓ．Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅｒｅｐｏｒｔｅｒａｓｓａｙｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｃｏｎｆｉｒｍ ｔｈｅｄｉｒｅｃｔｔａｒｇｅｔｉｎｇｒｅｌａｔｉｏｎ ｓｈｉｐｏｆｍｉＲ－５１３ｂ－５ｐｔｏαＢ－ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｉｎｔｈｅｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅｌｅｎｓｆｒｏｍ ｃａｔａｒａｃｔｐａｔｉｅｎｔｓ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉＲ－５１３ｂ－５ｐｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ（Ｐ＜０．０５）ａｎｄαＢ－ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｗｅｒｅｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄ（Ｐ＜０．０５）ｃｏｍｐａｒｅｄｔｏｔｈｅｈｅａｌｔｈｙｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓｇｒｏｕｐ．ＭｉＲ －５１３ｂ－５ｐｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＳＲＡ０１／０４ｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｓａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＲＯＳ（Ｐ＜０．０５），ａｎｄｍｉＲ－ ５１３ｂ－５ｐｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒｅｐｒｅｓｓｅｄｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＨ２Ｏ２ ｏｎｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＲＯＳａｎｄＳＯＤ（Ｐ＜０．０５）．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｍｉＲ－５１３ｂ－５ｐ ｍｉｍｉｃｏｎｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＲＯＳａｎｄＳＯＤ ａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｉｎＳＲＡ０１／０４ｃｅｌｌｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙａｔｔｅｎｕａｔｅｄｂｙｃ－ＣＲＹＡＢ（Ｐ＜０．０５）．Ｆｕｒ ｔｈｅｒｍｏｒｅ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆαＢ－ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄｂｙｔｈｅｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉＲ－５１３ｂ－５ｐ（Ｐ ＜０．０５），ａｎｄ αＢ－ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｗａｓｏｎｅｏｆｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｓｏｆｍｉＲ－５１３ｂ－５ｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＭｉＲ－５１３ｂ－５ｐｐｒｏｍｏｔｅｓｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓａｎｄａｐｏｐｔｏ ｓｉｓｏｆｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｂｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇαＢ－ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ．
关 键 词 ｍｉｃｒｏＲＮＡ－５１３ｂ－５ｐ αＢ－ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ 晶 状 体 上 皮 细 胞 氧 化 应 激 凋 亡 中图分类号 Ｒ７７６．１ 文献标识码 Ａ ＤＯＩ １０．１１９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３５４８Ｘ．２０１９．０９．０３３
ｍｉｃｒｏＲＮＡ－５１３ｂ－５ｐＰｒｏｍｏｔｅｓＯｘｉｄａｔｉｖｅＳｔｒｅｓｓａｎｄＡｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＬｅｎｓＥｐｉｔｈｅｌｉａｌＣｅｌｌｓｂｙＩｎｈｉｂｉｔｉｎｇαＢ－ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ． ＺｈａｎｇＡｉｈｕａ．Ｄｅ ｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙｍ，ＦｕｄａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＺｈｏｎｇｓｈａｎＨｏｓｐｉｔａｌＱｉｎｇｐｕＢｒａｎｃｈ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０１７００，Ｃｈｉｎａ

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针对不同靶位点的siRNA对人晶状体上皮细胞NF-κBP65表达的抑制作用

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针对不同靶位点的siRNA对人晶状体上皮细胞NF-κBP65表达的抑制作用张丽娜;赵桂秋;梁涛;王青;杨姗姗【期刊名称】《中华实验眼科杂志》【年(卷),期】2008(026)008【摘要】目的探讨针对核因子-κB(NF-κB)P65亚基的小干扰RNA(siRNA)对晶状体上皮细胞(LECs)NF-κB表达的影响.方法设计并合成3条NF-κB siRNA,1条阴性对照siRNA.实验分为6组,A组为正常对照组,常规体外培养HLE-B3细胞;B组为肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激组;C、D、E、F组为转染组,分别转染4条siRNA,24h后加入含TNF-α的培养基培养.免疫印迹法、实时荧光定量PCR法分别检测NF-κB P65蛋白与mRNA的表达.结果 B组与A组比较,NF-κB P65表达明显增加,差异有统计学意义(P＜0.01).C组、D组与B组比较,NF-κB表达明显减少,差异有统计学意义(P＜0.01).结论特异性siRNA可以明显降低HLE-B3细胞株NF-κB P65蛋白及mRNA的表达,为RNA干扰治疗外伤性白内障奠定了基础.【总页数】4页(P586-589)【作者】张丽娜;赵桂秋;梁涛;王青;杨姗姗【作者单位】266003,青岛大学医学院附属医院眼科;266003,青岛大学医学院附属医院眼科;266003,青岛大学医学院附属医院眼科;266003,青岛大学医学院附属医院眼科;266003,青岛大学医学院附属医院眼科【正文语种】中文【中图分类】R776.1【相关文献】1.针对不同靶位点的siRNA对HepG2人肝肿瘤细胞株FOXO3a表达的抑制作用[J], 熊清芳;杨永峰;谢玉桃;黄平;钟艳丹;冯晓宁2.针对HBV S基因发夹状siRNAs表达载体的构建及其在HepG2215细胞中对HBV基因表达的抑制作用 [J], 范旭;何升松3.用siRNA表达框架抑制CYP450 2E1基因转录筛选高效的RNA干扰位点及构建该位点的siRNA表达载体 [J], 徐芸;李继昌;万志红4.不同浓度茶多酚对脂多糖诱导的内皮细胞中NF-κBp65表达的影响 [J], 李百齐;许伟;李萍;高丽;宋琦;张庭婷5.siRNA对小鼠血管内皮细胞NF-κBp65表达的抑制作用 [J], 周晓彤;沈振亚;于曙东;余云生;叶文学;黄浩岳;焦鹏;滕小梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

微小RNAs在眼组织的表达及其与眼科疾病的关系

微小RNAs在眼组织的表达及其与眼科疾病的关系

微小RNAs在眼组织的表达及其与眼科疾病的关系杨东【期刊名称】《中华实验眼科杂志》【年(卷),期】2012(030)010【摘要】MicroRNAs(miRNAs) are a newly discovered class of small noncoding RNAs that rcgulate gene expression by translational repression or mRNA degradation.It has become evident that miRNAs are involved in many important biological processes,including tissue differentiation and development,showing a tissue specificity and development-stage specificity.In the other hand,miRNAs play critical roles in neovascularization and a variety of pathophysiological processes,such as pathological angiogenesis,oxidative stress response,immune response and inflammation.Currently,miRNAs of the retina,lens and cornea have been established,and they would be potential therapeutic targets in the eye diseases.Here,the distribution of miRNAs in the eye and their role in ocular diseases were summarized.%微小核糖核酸(miRNAs)是内源性小分子非编码调控RNAs,通过抑制转录或降解mRNA调控基因的表达.研究发现miRNAs涉及组织分化和生长等许多重要的生物进程,显示出组织特异性和生长阶段特异性,也参与新生血管形成及很多病理进程,如肿瘤血管新生、氧化应激、免疫反应和炎症.目前,视网膜、晶状体和角膜的miRNAs转录组已经建立,并可能在未来作为眼科疾病治疗的手段之一.就miRNAs在眼组织中的分布及其在眼病中的异常表达进行综述.【总页数】5页(P956-960)【作者】杨东【作者单位】150001 哈尔滨医科大学附属第一医院眼科医院【正文语种】中文【相关文献】1.微小RNAs在眼组织的表达及其与眼科疾病的关系 [J], 杨东（综述）;张红（审校）2.微小RNA-17-3p、微小RNA-19a-3p、微小RNA-20b-3p在冠心病患者血清中的表达水平及其与左心室重构的关系 [J], 王轶;周国庆;李蓓;刘统;路营辉3.微小RNA-17-5p及RNA-21在卵巢癌患者血清中的表达及与术后复发的关系[J], 窦燕4.平均血小板体积与血小板计数比值、微小RNA-26b相对表达量、微小RNA-195相对表达量与高血压性左心室肥厚的关系及其对患者预后的预测价值研究 [J], 闫玉敏;王希柱;张振飞;常绍菊;陈荣花;贾洪娟;宋巧凤5.阿尔茨海默病患者血浆微小RNA-18a表达及与白细胞介素6的关系 [J], 刘春兴;万瑛;高永辉;吴建峰;吴旭明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

Eaf2基因调控microRNA抑制白内障发生的机制研究

Eaf2基因调控microRNA抑制白内障发生的机制研究

Eaf2基因调控microRNA抑制白内障发生的机制研究秦宇;赵江月;罗文婷;李晶;吴欣蔚;刘佳;阎启昌;张劲松【期刊名称】《中国医科大学学报》【年(卷),期】2015(000)003【摘要】Objective To explore the expression of microRNA in Eaf2 knockout mice and the effect of Eaf2 on the apoptosis of human lens epithe⁃lial cells and the expression of microRNA in lens. Methods pEGFP⁃C1⁃Eaf2 was transfected into SRA01/04 cells using Lipofectamine 2000 to over express Eaf2 gene,and then the flow cytometry was used to detect cell apoptosis rate. And real time q⁃PCR was used to measure the expression of microRNA both in human lens epithelial cells and Eaf2 knockout mice. Results Compared with controls,the apoptosis rate of cells transfected with pEGFP⁃C1⁃Eaf2 was reduced,the expression of miR⁃125b and let⁃7a was significantly increased and miR⁃204 was decreased in cells transfect⁃ed with pEGFP⁃C1⁃Eaf2. Compared with controls,the expression of miR⁃125b and let⁃7a was lower and miR⁃204 was higher in Eaf2 knockout mice. Each result was statistically significant(P<0.01). Conclusion Eaf2 might inhibit apoptosis of human lens epithelial cells via regulating the expression of microRNA. Eaf2 may have a protective effect for the lens in the genesis of cataract.%目的：探讨Eaf2基因敲除小鼠中microRNA的表达情况，以及Eaf2基因对人晶状体上皮细胞凋亡及晶状体内microRNA表达的影响。

2024北京高三一模生物汇编：生物技术与工程(非选择题)

2024北京高三一模生物汇编：生物技术与工程(非选择题)

2024北京高三一模生物汇编生物技术与工程（非选择题）一、非选择题1．（2024北京顺义高三一模）人在衰老过程中某些性状会发生改变，为寻找衰老的原因，科研人员对染色质开展了相关研究。

(1)由图1可知，导致个体衰老的原因包括某些染色质区域，某些DNA 。

(2)DNA甲基化会抑制转录并引发更紧密的染色质结构的形成，推测衰老染色质结构松散会（促进/抑制）基因表达。

(3)科研人员推测：核内DNA断裂后的修复会导致表观遗传信息紊乱或丢失，加速细胞衰老。

为验证该推测，科研人员基于图2原理，利用以下实验材料构建ICE模型鼠。

①Cre酶基因：源自噬菌体，其编码的酶进入细胞核后作用于DNA上的Lx序列，导致两个Lx间的DNA 片段丢失；①I-E核酸酶基因：编码的I-E核酸酶位于细胞核，与诱导剂T、Cre酶形成复合物，切割DNA；①口服诱导剂T：小分子化合物，可诱导Cre酶进细胞核。

请完善技术路线：(4)染色质上的修复蛋白因子可修复受损DNA，通过对ICE小鼠的检测，发现已修复的DNA未发生碱基序列的改变。

通过检测，可知获得的ICE鼠表观遗传信息紊乱；检测细胞的形态结构，可知细胞衰老。

2．（2024北京顺义高三一模）学习以下材料，回答（1）~（5）题。

碳同化途径的工程化改造烟草是转基因研究的模式生物。

烟草的光合速率受RuBP羧化-氧化酶（R酶）催化效率和胞内CO2浓度服制。

R酶由大亚基（RL）和小亚基（RS）组成，RL蛋白和RS蛋白分别由叶绿体rl基因和细胞核rs基因编码，大小亚基在叶绿体中组装形成R酶。

R酶既能催化C5羧化形成C3，也能催化C5氧化为C2，进入线粒体分解为CO2，R酶催化的反应类型取决于其周围的CO2和O2浓度。

玉米等植物已经进化出CCM机制，叶绿体中R酶周围积累CO2以增强羧化和抑制氧化。

研究人员尝试在烟草中替换R酶，并构建CCM 途径。

H+菌是一种自养型细菌。

H+菌的羧基体由多种蛋白构成，蛋白外壳包裹着R酶和碳酸酐酶（CA）。