胰蛋白酶抑制剂

大豆中的胰蛋白酶抑制剂及其提取方法解读大豆中的胰蛋白酶抑制剂是一种重要的生物活性物质，它能够抑制胰蛋白酶的活性，从而保护大豆不受胰蛋白酶的分解。

这种抑制剂在食品、医药等领域都有广泛的应用。

为了提取大豆中的胰蛋白酶抑制剂，可以采用以下步骤：1. 制备大豆胰蛋白酶抑制剂初级上清液：将干大豆加水浸泡过夜后磨碎并充分混匀成浆液，然后搅拌后加溶液用3层以上的纱布过滤，得到滤液和豆渣。

接着以2-5:1.5的比例添加柠檬酸钠和磷酸三钠，直至滤液ph值达到4.5～6.0，对添加柠檬酸钠和磷酸三钠后的滤液进行浸提并水浴，水浴后离心去除杂蛋白，得到初级上清液。

2. 制备大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物：将初级上清液加热，并在上清液中添加硫酸铵，直至硫酸铵浓度30%，搅拌后得到次级搅拌液。

将次级搅拌液用滤纸过滤去脂，并将滤液静置过夜，即可得到粗提上清液。

在粗提上清液中加入硫酸铵，直至硫酸铵浓度50%，搅拌沉淀后得到大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物。

以上步骤完成后，就可以提取到大豆中的胰蛋白酶抑制剂。

这种抑制剂的应用可以保护大豆不受胰蛋白酶的分解，同时也可以应用到食品、医药等领域中。

在提取过程中，需要严格控制各个步骤中的条件和操作，以保证提取的质量和效率。

除了作为食品和医药领域的原料，大豆胰蛋白酶抑制剂还可以用于研究胰蛋白酶的活性及其作用机制。

通过进一步纯化大豆胰蛋白酶抑制剂，可以获得更高纯度的抑制剂，从而更好地了解其结构和功能。

此外，大豆胰蛋白酶抑制剂的研究还可以与人工智能技术相结合，开发出更加智能化的方法来提取和纯化这种抑制剂。

例如，可以利用人工智能算法预测大豆胰蛋白酶抑制剂的活性，优化提取和纯化过程，提高抑制剂的产量和质量。

此外，大豆胰蛋白酶抑制剂的活性研究还可以与营养学、生理学等领域相结合，研究其在人体内的生理作用和营养价值。

例如，可以研究大豆胰蛋白酶抑制剂对人体肠道健康的影响，以及其在预防和治疗某些疾病方面的应用。

同时，大豆胰蛋白酶抑制剂的研究还可以与农业领域相结合，开发出更加环保和高效的农业生产方式。

·食品科技·豆制品中胰蛋白酶抑制剂的研究杨丽杰吴非霍贵成孙占海（东北农业大学）【摘要】对豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性进行了调查，发现水解蛋白、乳用蛋白、组织蛋白、水豆腐、干豆腐中胰蛋白酶抑制剂活性均被钝化了以上；对腐乳、豆酱中胰蛋白酶抑制剂活性进行检测，结果未检出。

无糖豆粉、豆粉、豆浆以及内酯豆腐中胰蛋白酶抑制剂钝化率低于。

比较了种热处理方式对胰蛋白酶抑制剂的钝化效果，得到巴氏杀菌可钝化胰蛋白酶抑制剂；高压杀菌可钝化，超高温灭菌可钝化。

【关键词】豆制品；胰蛋白酶抑制剂；热处理中图分类号：文献标识码：文章编号：（）大豆营养价值高，是人和动物的主要蛋白质来源，但其中含有胰蛋白酶抑制剂，有碍营养素的吸收，导致食用后身体不适或豆制食品感官上的缺陷，严重时会造成人或动物的死亡。

豆制品中胰蛋白酶抑制剂的存在还没有引起人们足够的重视。

目前失活胰蛋白酶抑制剂主要采用热处理，为达到彻底钝化而采用的过度加热可使大豆中的蛋白质溶解度降低，营养物质遭到破坏。

而且，胰蛋白酶抑制剂比较耐热，热处理的效果也很有限。

本研究对市场上多种豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性进行了测定调查，比较了常用热处理方式对胰蛋白酶抑制剂的钝化效果，有利于人们对豆制品安全性的认识，为更彻底地失活胰蛋白酶抑制剂提供依据。

材料与方法材料与设备腐乳、干豆腐、内酯豆腐、豆浆、水豆腐、豆酱、豆粉为市售；无糖豆粉、水解蛋白、乳用蛋白、组织蛋白为大豆蛋白食品公司提供；生豆粉为实验室自备；所用化学试剂为分析纯或生化试剂。

牛胰蛋白酶、、均由美国公司生产。

仪器设备：振荡培养箱（上海医用仪表厂）、离心机（北京医用离心机厂）、型凯氏定氮仪（北京宜兴科教仪器研究所）、多功能恒温水浴锅型（沈阳市医疗器械厂）、紫外可见分光光度计型（日本岛津公司）、高压灭菌器（上海医用核子仪器厂）。

试验方法豆制品中常规营养成分测定d水分含量测定：常压干燥法。

i粗蛋白测定：微量凯式定氮法。

大豆胰蛋白酶抑制剂的钝化方法详情介绍：热处理效果受到大豆的品种、含水量和颗粒大小以及加热的温度、压力和时间等因素的影响。

加热不足则达不到破坏STI的目的；而加热过度会产生Maillard反应，使氨基酸(特别是赖氨酸、精氨酸和胱氨酸)遭到破坏，还会使蛋氨酸、异亮氨酸和赖氨酸消化率降低。

STI受热失活分为两个阶段。

一般认为，第一阶段是KTI失活，第二阶段是BBTI失活。

但是，Robvan等(1998)认为。

第一阶段是KTI和BBTI共同失活，第二阶段是KTI进一步失活。

具体方法：1.膨化处理膨化分为湿法和干法两种。

湿法膨化是先将大豆预湿润，使用高压和蒸气强制大豆通过压模或小孔：而干法膨化是先将大豆粗碎。

不加水和蒸气直接进入挤压机螺旋轴内。

经过内摩擦产生的高温高压经由小孔喷出。

2.其他热处理方法蒸气处理分为：常压和高压．常压温度低，为100℃以下，对氨基酸的破坏少；高压使用专门的蒸气锅，效果随温度、时间、压力、pH值和原料的性质不同有很大差异。

曾勇庆等(2000)推荐，常压110℃、60 min或115℃、40 min，高压(3．51 b／in2)105 °C、15 min。

微波处理是通过1～2 nm微波对水分子进行振荡，将电磁能转化为热能。

其效果与原料中的水分和处理时间呈正相关。

3.化学处理：化学处理一般都是利用化学物质破坏STI的二硫键，从而改变STI 的分子结构以达到灭活目的。

4.生物处理：某些真菌和细菌菌株所产生的特异性酶对大豆中的STI有一定灭活效果。

外源蛋白酶可在常温下使STI失活。

杨晓泉等(2000)报道，枯草芽孢杆菌蛋白酶的工业酶A(Alcalase)留胰蛋白酶抑制剂活性为对照组的2027 mgmL，游离氨基酸含量为7．1 mg／mL，大豆蛋白的水解度为8．9％。

5.超声波处理：超声波处理导致二硫键的变化，可能机理是由于在超声波场的作用下，产生空穴，这些空穴随着压力的变化而发生交替的膨胀和破裂，改变了生物活性分子的结构，从而影响活性；或者超声波场振动的泡沫产生了自由基，自由基作用于二硫键上的硫原子从而使胰蛋白酶抑制剂中的二硫键断开，二硫键于是转变成游离巯基，最终导致STI结构的改变。

roche cooktail蛋白酶成分罗氏鸡尾酒（Roche鸡尾酒）是一种用于生物科学研究的常用试剂盒，其中包含多种蛋白酶。

蛋白酶是一类能够加速蛋白质降解的酶类分子，它们具有多种不同的功能和特性。

以下将介绍Roche鸡尾酒中常见的蛋白酶成分。

1.胰蛋白酶（Trypsin）：胰蛋白酶是一种消化酶，由胰腺分泌，用于在消化过程中分解蛋白质。

在Roche鸡尾酒中，胰蛋白酶被用于体外细胞培养中，用于细胞的离析和传代。

它能够通过剪切蛋白质的肽键来降解蛋白质分子。

2.胰蛋白酶抑制剂（Trypsin Inhibitor）：胰蛋白酶抑制剂是一种能够抑制胰蛋白酶活性的分子。

在Roche鸡尾酒中，胰蛋白酶抑制剂被用于停止胰蛋白酶的活性，从而控制蛋白质降解的过程。

3.蛋白激酶抑制剂（Protein Kinase Inhibitors）：蛋白激酶抑制剂是一类能够抑制蛋白激酶活性的分子。

在Roche鸡尾酒中，蛋白激酶抑制剂被用于研究细胞信号传导的过程。

它们能够干扰蛋白激酶的活性，从而影响细胞内信号传递通路。

4.磷酸酶抑制剂（Phosphatase Inhibitors）：磷酸酶是一类能够去磷酸化蛋白质的酶。

在Roche鸡尾酒中，磷酸酶抑制剂用于抑制磷酸酶活性，从而保持蛋白质磷酸化状态。

5.蛋白酶抑制剂混合物（Protease Inhibitor Cocktail）：这是Roche鸡尾酒中的一个重要成分，它由多种蛋白酶抑制剂组成，能够抑制多种蛋白酶的活性。

蛋白酶抑制剂混合物能够保护蛋白质免受蛋白酶降解的影响，从而保持蛋白质的稳定性。

Roche鸡尾酒中的这些蛋白酶成分在生物科学研究中发挥着重要作用。

它们能够帮助研究人员保护蛋白质的完整性，提高实验的可靠性和准确性。

另外，这些蛋白酶成分还能够用于调节细胞内的信号传导过程，从而揭示细胞生物学的各个方面。

需要注意的是，Roche鸡尾酒中的蛋白酶成分不能用于食品加工或药品制造。

它们仅限于科学研究中的使用，需要严格遵守实验室安全操作规程。

蛋白酶抑制剂种类
蛋白酶抑制剂是一类能够抑制蛋白酶活性的物质，主要存在于某些植物、动物和一些微生物中。

以下是一些常见的蛋白酶抑制剂种类：
1.胰蛋白酶抑制剂：抑制胰蛋白酶活性的蛋白质，是植物中广泛存在的一类蛋白质。

它们可以抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、羧基肽酶等，从而影响这些酶所催化的蛋白质的水解。

2.丝氨酸蛋白酶抑制剂：这是蛋白质水解酶中的一大类，主要包括抑胃素、抑胰蛋白酶、抑糜蛋白酶等。

它们能可逆地与相应的丝氨酸蛋白酶形成共价键，因而能够阻断某些内肽酶催化蛋白质水解的能力。

3.天冬氨酸蛋白酶抑制剂：主要存在于豆科植物中，能够抑制枯草杆菌蛋白酶的活性。

4.半胱氨酸蛋白酶抑制剂：这种抑制剂可以与半胱氨酸蛋白酶形成共价键，因而能够抑制这些酶的活性。

5.金属蛋白酶抑制剂：这类抑制剂主要通过与金属蛋白酶的活性中心发生相互作用，从而抑制其活性。

这些抑制剂在生物体的生长、发育和防御等方面有着重要的作用。

同时，在食品工业和医药工业中，它们也有着广泛的应用。

例如，某些蛋白酶抑制剂可以作为防腐剂，用于延长食品的保质期；在医药方面，也可以利用这些抑制剂来研发新药或探索新的治疗手段。

此外，还有一种与蛋白酶抑制剂相似的物质叫做抗蛋白酶，其主要作用是抑制或灭活蛋白酶的活性，以避免食物中的蛋白质被过度分
解或破坏。

例如，胰凝乳蛋白酶抑制剂就是一种抗胰蛋白酶，能抑制胰蛋白酶和糜蛋白酶的活性，从而保护消化道中的蛋白质。

如需获取更多有关蛋白酶抑制剂的信息，建议查阅相关文献或咨询生物学家获取帮助。

PMSF
分子式：C7H7FO2S
分子量：
1）抑制（如胰蛋白酶，，凝血酶）和巯基蛋白酶（如木瓜蛋白酶）；
2）10mg/ml溶于异丙醇（或无水乙醇）中；它对异丙醇没有特殊要求，分析纯即可，它也可以用DMSO进行配置，储存浓度同样为100mM
3）在室温可保存一年,一般保存在-20度或4度.；
4）工作浓度：17~174ug/ml（~1mM），储存液浓度为100或200mM；
5）在水液体溶液中不稳定，30分钟就会降解一半，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF，样品处理超过1h,补加一次。

（见水分解，使用前加入）
剧毒，严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。

为了安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。

凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。

在水溶液中不稳定。

应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。

在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。

pH值为时，20μmmol/lPMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH>）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。

PMSF的储存：2-8℃可以存放数月之久。

欲长期保存，可冻存在-20℃。