胰蛋白酶抑制剂对Wnt信号通路的作用

wnt信号通路检测指标
Wnt信号通路检测指标主要包括以下几个方面：
1. β-catenin蛋白表达水平：Wnt信号通路激活后，β-catenin 蛋白的稳定性增加，其在细胞内的表达水平也会相应升高。

因此，通过检测β-catenin蛋白的表达水平可以反映Wnt信号通路的活性状态。

2. LRP6蛋白表达水平：LRP6是Wnt信号通路中的关键受体之一，其表达水平也会受到Wnt信号通路的影响。

因此，通过检测LRP6蛋白的表达水平也可以反映Wnt信号通路的活性状态。

3. GSK-3β磷酸化水平：GSK-3β是Wnt信号通路中的关键酶之一，其磷酸化水平会受到Wnt信号通路的影响。

因此，通过检测GSK-3β磷酸化水平也可以反映Wnt信号通路的活性状态。

4. TCF/LEF转录因子活性：TCF/LEF转录因子是Wnt信号通路中的下游效应分子，其活性会受到Wnt信号通路的影响。

因此，通过检测TCF/LEF转录因子活性也可以反映Wnt信号通路的活性状态。

以上是Wnt信号通路检测指标的主要方面，通过对这些指标的检测可以了解Wnt信号通路的活性状态，进而研究其在生物体内的功能和作用机制。

验证wnt信号通路的方法验证Wnt信号通路的方法包括以下步骤：1. 构建报告基因质粒：TOPFlash质粒是一种常用的报告基因质粒，可用于检测Wnt信号通路中β-catenin介导的TCF/LEF转录活性水平。

TOPFlash质粒是以pGL6-TA为模板，在其多克隆位点插入两组TCF/LEF结合位点序列，每组有三个重复序列，一组为正向序列，另一组是它的反向互补序列。

这些序列可以高灵敏度地检测TCF/LEF的转录活性水平。

2. 观察细胞凋亡：可以通过药物处理或基因敲除等方法来影响Wnt通路的活性，然后观察细胞凋亡情况。

如果药物激活了Wnt通路，导致细胞凋亡，可以通过RNAi下调β-catenin的表达或使用deltaN TCF4（TCF4的dominant negative）或其他能阻断Wnt信号通路的活性的方法，观察细胞凋亡情况是否下降。

如果下调Wnt活性后，细胞凋亡能力下降，则说明药物是通过激活Wnt通路导致凋亡的。

相反，如果药物抑制了Wnt通路，导致细胞凋亡，可以通过表达不被降解的β-catenin或其他活化Wnt信号通路的活性的方法，观察细胞凋亡情况是否下降。

如果上调Wnt活性后，细胞凋亡能力下降，则说明药物是通过抑制Wnt通路导致凋亡的。

3. 研究具体靶基因：为了进一步了解Wnt信号通路的作用机制，可以研究具体的Wnt靶基因。

这些靶基因包括与细胞增殖、分化、迁移等相关的基因，例如c-myc、cyclin D1等。

通过检测这些基因的表达水平或使用相关抑制剂等方法，可以进一步验证Wnt信号通路的作用机制。

总之，验证Wnt信号通路的方法需要综合考虑多种因素，包括报告基因质粒的构建、细胞凋亡的观察和具体靶基因的研究等。

通过这些方法，可以深入了解Wnt信号通路的作用机制，为相关疾病的治疗提供新的思路和策略。

wnt通路转录因子
Wnt通路转录因子是一类在Wnt信号传导通路中发挥重要作用的蛋白质。

Wnt通路是一种参与细胞增殖、分化和体轴形成的信号传导通路，对于胚胎发育和成人组织再生都具有重要作用。

Wnt通路转录因子通过调控基因的转录来影响细胞命运和组织发育。

Wnt通路转录因子的代表性成员包括β-catenin、TCF/LEF（T-cell factor/lymphoid enhancer factor）、以及其他辅助转录因子。

其中，β-catenin是Wnt信号传导通路中的核心分子，它在没有Wnt信号时被特定的蛋白质复合物标记并降解，而在Wnt信号激活时，β-catenin得以稳定并进入细胞核，与TCF/LEF等转录因子结合，从而调节靶基因的转录。

Wnt通路转录因子在胚胎发育、干细胞命运决定、肿瘤发生等生物学过程中发挥着重要作用。

在胚胎发育中，Wnt通路转录因子参与了胚胎体轴的形成和器官的分化。

在成人组织中，Wnt通路转录因子也参与了组织的再生和修复过程。

此外，异常的Wnt通路转录因子活性与多种肿瘤的发生和发展密切相关，如乳腺癌、结肠癌等。

总的来说，Wnt通路转录因子作为Wnt信号传导通路的关键调节因子，对于细胞命运的决定、组织发育和疾病发生都具有重要作用，因此对其功能和调控机制的研究具有重要的理论和临床意义。

某大学生物工程学院《细胞生物学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（50分，每题5分）1. 甾类激素在胞内受体的同一部位取代抑制物，与胞内受体结合，从而激活受体。

（）答案：错误解析：抑制物覆盖受体的DNA结合位点使受体处于失活状态，该结合位点位于受体的中部，激素与受体结合的部位位于受体蛋白的C端。

2. 有丝分裂前期，核纤层蛋白去磷酸化使核膜破裂。

（）[上海交通大学2007研]答案：错误解析：现有观点认为有丝分裂前期，核纤层蛋白磷酸化而解聚并最终导致核膜崩解。

3. 细胞内的生物大分子是指蛋白质、脂类和DNA等。

（）[中科院中科大2007研]答案：错误解析：脂类不是生物大分子。

4. G蛋白偶联受体被激活后，使相应的G蛋白解离成α、β、γ三个亚基，以进行信号传递。

（）答案：错误解析：在细胞中G蛋白由α、β、γ三个亚基构成，β、γ以异二聚体的形式存在，Gα和Gβγ分别通过共价键锚定在膜上，当配体与受体结合，G蛋白的三聚体解离，并发生GDP与GTP的交换，游离的GαGTP处于活化的开启状态。

5. 不同生物及同一生物的不同细胞的细胞周期时间是不同的，其中G1期持续时间的差异最大。

（）[中科院中科大2005研]答案：错误解析：细胞周期时间长短主要差别在G1期，而S、G2、M总时间是相对恒定的。

6. 构成溶质跨膜的电化学梯度净驱动力来自溶质的浓度梯度和跨膜电位差。

（）答案：正确解析：细胞通过溶质浓度梯度或电化学梯度产生的主动运输，维持了高钾低钠的内环境。

7. 动物细胞胞质中一般具有中间丝蛋白库。

（）答案：错误解析：中间丝蛋白位于细胞核内。

8. 体外培养时，癌细胞通过分裂增殖并铺满培养器皿的表面形成单层后即停止分裂。

（）答案：错误解析：正常细胞通过分裂增殖并铺满培养器皿的表面形成单层后即停止分裂，而癌细胞由于对密度依赖性生长抑制失去敏感性，即失去了接触抑制，因而不会在形成单层时停止生长。

Wnt／β-catenin信号通路与发育和疾病研究进展Wnt信号通路是参与发育过程的关键信号网络，能够参与组织特化和细胞迁移等的发育过程。

Wnt信号通路在成体动物组织内稳态的维持过程中同样发挥着重要的作用，异常的Wnt信号常与多种癌症的发生密切相关。

本文概述了近两年来Wnt信号通路的激活机制、与其他功能蛋白和通路间的交互影响及其在发育和疾病方面的最新进展。

1Wnt/β-catenin信号通路概述β-catenin是一个多功能蛋白分子。

细胞未激活时，细胞质中的β-catenin与细胞粘附分子相互结合，共同定位在细胞连接处，起维持细胞连接的作用，其余大部分自由β-catenin被降解。

当有特殊刺激诱导时，β-catenin降解受到抑制，并转移到细胞核中与转录因子TCF和LEF家族相互作用调节基因表达。

由Wnt 配体触发依赖于β-catenin的信号通路被称为canonical Wnt/β-catenin信号通路。

然而另一些Wnt配体能够通过不依赖β-catenin的机制引发Wnt信号通路的激活。

哺乳动物中，Wnt家族包括19个成员，其配体家族有10个，共受体有LRP5和6、Ryk和Ror2。

不同Wnt与配体的组合能够触发细胞特异性复合体的形成以及特异信号通路的激活并产生不同的效应[1]。

研究表明其它受体和配体同样能够影响Wnt或β-catenin信号通路，例如R-spondins信号通路能够通过孤儿G蛋白偶联的受体促进Wnt/β-catenin信号通路的活性[2]；此外，粘附分子NCAM诱发的信号亦能促进β-catenin的转录活性[3]。

Luckert等[4]通过两种蛋白组学的方法研究一条通路中的多个蛋白，发现了一种特定肝癌细胞系是如何响应canonicalWnt配体Wnt3a，稳定β-catenin，并同时响应noncanonical Wnt配体Wnt5a。

然而在某些特定情况下，两种配体对蛋白量或是蛋白磷酸化的状态起到的作用是截然相反的。

Wnt信号通路在胚胎发育中的作用胚胎发育是一个既精彩又神秘的过程。

在胚胎发育过程中，各种细胞类型按照特定的时序和程序被产生，并最终形成一个完整的、有机体形态良好的个体。

而在这一发育过程中，Wnt信号通路起着重要的作用。

Wnt是一类蛋白质，包括约19种既可以促进细胞分裂、增殖、分化，又可以影响胚胎轴向、细胞极性、细胞命运的信号分子。

Wnt信号通路是Wnt蛋白质介导的一类信号转导通路，在胚胎发育、组织分化、细胞再生等方面，均发挥着极为重要的作用。

在胚胎发育中，Wnt信号通路在调控器官的形成和细胞命运的决定等方面都有着很大的作用。

Wnt信号通路可以形成一个非常复杂的调控系统，它与其他信号通路相互协同，共同控制着胚胎发育中的多个关键环节。

在早期的胚胎发育过程中，Wnt信号通路参与了很多重要的过程。

例如，在胚胎分类过程中，Wnt信号通路可以通过调节N-cadherin突出以及细胞聚合蛋白的表达来帮助细胞克服表面张力，从而实现胚胎分类过程。

同时，Wnt信号通路也可以参与到细胞极性的形成过程中，Wnt7a可以引导细胞向一个特定的方向分化，最终促使组织的形成过程能够依据胚胎的次序进行。

在骨骼及牙齿发育中，Wnt信号通路同样也很重要。

Wnt信号通路可以调节沉积于牙齿和骨骼中的分子，如糖原酶和干细胞标志物的表达，从而控制细胞命运的决定。

它还可以调节骨骼细胞的分化和成骨作用，细胞在环境刺激下表达特定的骨骼细胞基因，通过Wnt信号通路调控骨骼细胞的形成和增殖。

总的来说，Wnt信号通路在胚胎发育中的作用是至关重要的。

它对细胞命运（包括细胞分化、增殖等）的决定同时也对器官的形态、组织化等有举足轻重的作用。

Wnt信号通路参与了胚胎发育过程中的多个环节，同时也可以共同发挥作用，协同癌症、畸形和其他疾病的治疗。

今后Wnt信号通路的发现和应用也将会推动更多关于胚胎发育的研究，进而帮助我们更好地理解身体的起源，探索人类的奥秘。

胰腺癌发展中的关键信号通路及其作用薛光荣;李钦元【摘要】胰腺癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,起病隐匿、恶性程度高、预后差.胰腺癌发生受多种因素调节,发病机制不清,具有复杂分子发病机.而且,胰腺癌细胞内在的基因异常表达、表观遗传基因突变等因素对胰腺癌发生发展起重要作用.目前研究显示,胰腺癌发生过程与多种信号通路的交互作用密切相关,这些信号通路的研发都体现了临床分子靶向治疗的潜在前景.本文对近年研究的一些与胰腺癌发生相关的信号通路做了总结,这些通路主要包括Wnt信号通路、MAPK信号通路、PI3K/AKT/mTOR信号通路、Hedgehog信号通路等.主要瞄准这些通路在胰腺癌发生、发展过程中的作用,它们的变化特征以及异常变化所导致的结果等方面的最新研究进展,以期为胰腺癌的早诊早治、个体化诊疗等的基础、临床研究提供前言资料.【期刊名称】《甘肃科技》【年(卷),期】2015(031)014【总页数】4页(P138-140,108)【关键词】信号通路;肿瘤发展;基因突变;胰腺癌【作者】薛光荣;李钦元【作者单位】甘肃省民勤县社区卫生服务中心,甘肃民勤733300;甘肃省民勤县社区卫生服务中心,甘肃民勤733300【正文语种】中文【中图分类】R735.9胰腺癌（pancreatic carcinoma）发病率在全球范围内呈明显上升趋势，被喻为21世纪恶性肿瘤之王[1]。

在我国，胰腺癌为消化系统肿瘤的主要死亡原因之一，男性多于女性，二者之比1.17：2.1[2]。

临床研究发现，胰腺癌的预后不佳，在我国，其5年生存率一般为1%～5%，很少超过10%[2,3]。

胰腺癌半数以上位于胰头，约90%起源于腺管上皮，由于受胰腺解剖学和胰腺癌生物学特征等因素的影响，胰腺癌在早期便侵犯周围组织器官并发生远处转移[4]，加之胰腺癌早期无明显、特异的症状和体征，缺乏简便、可靠的诊断方法，就诊时3/4的患者已属晚期。

确诊病例手术可切除率仅为4%～27%，5年生存率＜5%。

WNT信号通路是一种细胞间通讯的途径，对细胞的生长、分化和迁移等过程起着重要的调控作用。

WNT 是"wingless"（无翅）和"integrated"（整合）两个词的缩写，因为最初在果蝇中发现这个信号通路时，突变体表现为无翅的表型。

WNT信号通路主要包括以下成员：
1. WNT蛋白：是一类分泌型糖蛋白，能够与细胞膜上的受体结合，触发信号传导。

2. WNT受体：是一类跨膜蛋白，能够与WNT蛋白结合，启动信号传导。

3. DVL蛋白：是WNT信号通路中的核心调控因子，能够与WNT受体结合，并进一步激活下游的信号分子。

4. AXIN蛋白：是一种支架蛋白，能够与DVL蛋白和APC蛋白结合，形成复合体，调控WNT信号通路的活性。

5. APC蛋白：是一种肿瘤抑制蛋白，能够与DVL蛋白和AXIN蛋白结合，形成复合体，调控WNT信号通路的活性。

WNT信号通路在生物体的发育过程中起着重要的作用，例如在胚胎发育、器官形成、细胞分化和迁移等过程中都起着关键的调控作用。

此外，WNT信号通路在肿瘤的发生和发展中也起着重要的作用，例如在结直肠癌、乳腺癌等肿瘤中，WNT信号通路异常激活，导致肿瘤的发生和发展。

总之，WNT信号通路是一种重要的细胞间通讯途径，对细胞的生长、分化和迁移等过程起着重要的调控作用，同时在肿瘤的发生和发展中也起着重要的作用。

Wnt信号机制全解析！3大信号传导通路一文掌握Wnt 配体蛋白是一类富含胱氨酸的糖蛋白，在发育、组织动态平衡、许多疾病的发生，包括癌症都起到了关键的作用。

根据分子机制的不同，Wnt 信号传导通路分为三种：Wnt/β-catenin 信号通路、Wnt/PCP 信号通路以及 Wnt/Ca2+信号通路。

在哺乳动物中共有 19 种 Wnt 基因，其中部分基因包含选择性剪接异构体[22,35,38]。

在功能上，不同的 Wnt 配体蛋白是高度保守的，由于不同Wnt 配体表达模式的不同，会造成不同的Wnt 配体在各个器官或组织发挥各自独特的作用[38]。

在内质网合成 Wnt 蛋白的过程中，Wnt 蛋白会被棕榈酰转移酶 Porcupine 棕榈酸修饰 [41]，而在 Wnt 蛋白成熟的过程中，跨膜蛋白Wntless/Evi（Wls）和棕榈酰化的Wnt 蛋白结合，并帮助 Wnt 蛋白运输到质膜[5,18,37,55]。

关于Wnt 蛋白如何到达Wnt 靶细胞存在两种假说，见图1，第一种，成熟的 Wnt 蛋白结合着 Wls 蛋白整合到分泌小泡或外泌体，位于分泌小泡或外泌体外侧的 Wnt 蛋白和 Wnt 受体相互作用[14,28,34,44]。

第二种，Wnt 蛋白的转移是通过细胞间的 FZD 受体和跨膜 E3 ligases Rnf43/Znrf3 来介导的[11]。

▲ 图 1. Wnt 蛋白分泌的模式[38]01 Wnt/β-catenin 信号通路Wnt/β-catenin 信号通路是依赖于β-catenin 蛋白介导的一类Wnt 信号通路，见图 2。

▲ 图2. Wnt/β-catenin 信号模式图[38]Wnt/β-catenin 信号通路由Wnt 配体蛋白与七次跨膜蛋白FZD 受体结合而启动，当Wnt 配体蛋白会与靶细胞膜上的Wnt 信号受体FZD 和共受体LRP5 或LRP6 形成的异源二聚体相互作用[50]，Dishevelled 蛋白会被招募到细胞膜和 FZD 结合[7,25,29,52]，而通过被招募到细胞膜上的Dishevelled 蛋白和 Axin 相互作用，Axin-GSK3 蛋白复合物也被招募到细胞膜处[50]。

经典信号通路之Wnt信号通路1、Wnt信号通路简介Wnt信号通路是一个复杂的蛋白质作用网络，其功能最常见于胚胎发育和癌症，但也参与成年动物的正常生理过程。

2、Wnt信号通路的发现Wnt得名于Wg （wingless) 与Int。

wingless 基因最早在果蝇中被发现并作用于胚胎发育,以及成年动物的肢体形成INT 基因最早在脊椎动物中发现，位于小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV）整合位点附近。

Int-1 基因与wingless 基因具有同源性。

果蝇中wingless 基因突变可导致无翅畸形，而小鼠乳腺肿瘤中MMTV复制并整合入基因组可导致一种或几种Wnt基因合成增加。

3、Wnt信号通路的机制Wnt信号通路包括许多可调控Wnt信号分子合成的蛋白质，它们与靶细胞上的受体相互作用，而靶细胞的生理反应则来源与细胞和胞外Wnt配体的相互作用。

尽管发应的发生及强度因Wnt配体，细胞种类及机体自身而异,信号通路中某些成分，从线虫到人类都具有很高的同源性。

蛋白质的同源性提示多种各异的Wnt配体来源于各种生物的共同祖先。

经典Wnt通路描述当Wnt蛋白于细胞表面Frizzled受体家族结合后的一系列反应，包括Dishevelled受体家族蛋白质的激活及最终细胞核内β—catenin水平的变化. Dishevelled （DSH）是细胞膜相关Wnt受体复合物的关键成分，它与Wnt结合后被激活，并抑制下游蛋白质复合物，包括axin、GSK—3、与APC蛋白.axin/GSK-3/APC 复合体可促进细胞内信号分子β-catenin的降解。

当“β-catenin 降解复合物”被抑制后,胞浆内的β—catenin得以稳定存在，部分β—catenin进入细胞核与TCF/LEF转录因子家族作用并促进特定基因的表达。

4、Wnt介导的细胞反应经典Wnt信号通路介导的重要细胞反应包括：癌症发生。

Wnts, APC, axin,与TCFs表达水平的变化均与癌症发生相关。

wnt信号通路相关因子
wnt信号通路是一种对胚胎和成年人体内的许多细胞和组织发挥重要功能的信号传导系统。

它与胚胎的建立和成长、干细胞的调控、细胞增殖、分化、再生和肿瘤发生密切相关。

wnt信号通路相关因子包括：
1.β-catenin：是wnt信号通路中一个重要的调节因子，调节细胞的增殖、分化和存活。

2.Wnt：是一类转化生长因子，通过与受体Fzd结合，激活wnt信号通路，参与各种生物学过程，包括胚胎发育、干细胞分化和再生。

3.LRP5和LRP6：是共受体分子，与Fzd受体结合后，激活wnt信号通路。

4.Axin：是反转录核酸酶，对wnt信号通路进行负调节。

5.DKK和SFRP：是wnt信号通路的负调节因子，抑制wnt的介导作用。

6.TCF/LEF转录因子：是wnt信号通路的真核配体，介导wnt信号的下游效应。

总之，wnt信号通路相关因子在调节细胞命运、胚胎发育和多种生理和病理状态中都发挥着重要作用。

Wnt信号途径2008-06-05 10:57Wnt是一类分泌型糖蛋白，通过自分泌或旁分泌发挥作用。

在小鼠中，肿瘤病毒整合在Wnt之后而导致乳腺癌，命名为Int1，它与果蝇的无翅基因（Wingless，wg）有高度同源性。

Wnt信号途径能引起胞内β-连锁蛋白（β-catenin）积累。

β-catenin（在果蝇中叫做犰狳蛋白Armadillo）是一种多功能的蛋白质，在细胞连接处它与钙粘素相互作用，参与形成粘合带，而游离的β-catenin可进入细胞核，调节基因表达。

Wnt信号在动物发育中起重要作用，其异常表达或激活能引起肿瘤。

Wnt的受体是卷曲蛋白（frizzled，Frz），为7次跨膜蛋白，结构类似于G蛋白偶联型受体，Frz胞外N端具有富含半胱氨酸的结构域（cysteine rich domain，CRD），能与Wnt结合。

Frz作用于胞质内的蓬乱蛋白（Dishevelled，Dsh或Dvl），Dsh能切断β-catenin的降解途径，从而使β-catenin在细胞质中积累，并进入细胞核，与T细胞因子（T cell factor / lymphoid enhancer factor，TCF/LEF）相互作用，调节靶基因的表达，TCF/ LEF是一类具有双向调节功能的转录因子，它与Groucho结合抑制基因转录，而与结合β-catenin则促进基因转录。

Wnt还需要另外一个受体（co-receptor），即LRP5/6，属于低密度脂蛋白受体相关蛋白（LDL-receptor-related protein，LRP），但至今还不清楚它如何与Frz 一起活化Dsh。

Wnt信号途径可概括为（图8-34）：Wnt→Frz→Dsh→β-catenin的降解复合体解散→β-catenin积累，进入细胞核→TCF/LEF→基因转录（如c-myc、cyclinD1）。

β-catenin的降解复合体：主要由APC、Axin、GSK-3β、CK1等构成。

论著文章编号１００６－８１４７（２０21）０3-0217-05wnt 经典信号通路在酸性pH 抑制成骨细胞功能中的作用张顺1，2，田爱现2，张杨2，郭悦2，王岩2，董本超2，马剑雄2，马信龙1，2（1.天津医科大学总医院骨科，天津300052；2.天津市天津医院骨科研究所，天津大学天津医院骨科研究所，天津300050）摘要目的：探讨wnt 经典通路在酸性pH 抑制成骨细胞功能中的作用。

方法：胶原酶消法提取新生Sprague-Dawley （SD ）大鼠颅骨原代成骨细胞，碱性磷酸酶（ALP ）和茜素红（ARS ）染色鉴定。

传代培养至第3代，分别用pH6.0、pH6.4、pH6.8、pH7.4（对照）的DMEM 高糖培养基进行培养。

CCK8法检测各组细胞增殖情况；Live/Dead 染色观察凋亡情况；反转录聚合酶链反应（RT-PCR ）检测各组细胞COL1A1、β-catenin 、RUNX2、wnt3a 的mRNA 表达水平；Western 印迹法分析各组细胞COL1A1、β-catenin 、RUNX2、wnt3a 蛋白的表达情况。

结果：ALP 和ARS 染色结果均为阳性，证明提取的原代细胞为成骨细胞。

CCK8结果显示随着pH 值降低和时间延长，pH6.0、pH6.4、pH6.8组实验各组细胞增殖活力均有下降（F=42.800、93.700，均P <0.05）。

Live/Dead 染色结果显示，随着pH 值降低，细胞凋亡百分比显著增加（F =63.74，均P <0.05）。

RT-PCR 结果显示,与对照组相比，pH6.0、pH6.4、pH6.8组mRNA 的表达显著降低（F =20.32、17.76、7.809、11.16，均P <0.05）。

Western 印迹结果显示,与对照组相比，pH6.0、pH6.4、pH6.8组蛋白表达水平均显著下降（F =20.02、15.67、22.11、42.11，均P <0.05）。