第三章 微生物细胞培养技术汇总

细胞培养实验技术大全第一章细胞培养的基本原理与技术现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术，而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系，特别是在医药领域的发展，细胞培养更具有特殊的作用和价值。

比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的。

基因工程乙肝疫苗很多是以CHO细胞作为载体；细胞工程中更是离不细胞培养，杂交瘤单克隆抗体，完全是通过细胞培养来实现的，既使是现在飞速发展的基因工程抗体也离不开细胞培养。

正在倍受重视的基因治疗、体细胞治疗也要经过细胞培养过程才能实现，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。

总之，细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。

第一节体外培养的概念一、基本概念体外培养（in vitro culture），就是将活体结构成分或活的个体从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长和发育的方法。

组织培养：是指从生物体内取出活的组织（多指组织块）在体外进行培养的方法。

细胞培养：是指将活细胞（尤其是分散的细胞）在体外进行培养的方法。

器官培养：是指从生物体内取出的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在体外进行培养的方法。

二、体内、外细胞的差异和分化1、差异：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。

因此，培养中的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体，它们既保持着与体内细胞相同的基本结构和功能，也有一些不同于体内细胞的性状。

实际上从细胞一旦被置于体外培养后，这种差异就开始发生了。

2、分化：体外培养的细胞分化能力并未完全丧失，只是环境的改变，细胞分化的表现和在体内不同。

细胞是否表现分化,关键在于是否存在使细胞分化的条件，如Friend细胞（小鼠红白血病细胞）在一定的因素作用下可以合成血红蛋白，血管内皮细胞在类似基膜物质底物上培养时能长成血管状结构，杂交瘤细胞能产生特异的单克隆抗体，这些均属于细胞分化行为。

细胞培养方法总结细胞培养是生物学研究中重要的实验技术之一，通过在体外人工创造和维持细胞生长环境，使细胞能够持续繁殖、生长和分化。

本文将对常用的细胞培养方法进行总结，并介绍其步骤和注意事项。

一、细胞培养基的配制细胞培养基是细胞生长所必需的营养物质和生长调节因子的混合物，根据细胞类型和实验需求的不同，培养基种类繁多。

在配制培养基时，应按照标准操作流程，确保成分准确无误并避免细菌和真菌的污染。

二、细胞的分离和传代1. 细胞的分离：将细胞从原来的培养皿中取出，并用消化酶、细胞分离酶等方法进行细胞的离散处理，以获得单细胞悬浮液或小团的细胞群。

2. 细胞的培养：将悬浮的细胞或细胞小团转移至新的培养皿中，添加适量的培养基，并静置于恒温培养箱中，创造适宜的生长环境，促进细胞的生长。

3. 细胞的传代：当原始细胞群生长至饱和状态时，需进行细胞的传代，即将部分细胞转移到新的培养皿中，以保持细胞的活力和增长。

传代过程中，注意维持传代比例和规律的同时，避免细胞超密植或过稀。

三、细胞冻存和解冻细胞冻存是将培养好的细胞保存在低温下，以延缓其代谢过程，以备后续使用。

具体步骤包括：1. 预处理：加入冻存保护剂，如二甲基亚砜(DMSO)或甘油，以降低冻存过程对细胞的伤害。

2. 储存管制备：将细胞转移到冻存管中，并标记相关信息，如细胞类型、培养时间等，以方便后续的识别。

3. 冷冻：将装有细胞的冻存管放置在低温环境中，逐渐降温至最终低温储存条件下，一般为液氮温度（-196°C）。

4. 解冻：将冻存管取出，快速置于37°C预热的培养基中解冻，然后将细胞转移至培养皿中，尽快恢复细胞活性。

四、细胞凋亡检测细胞凋亡是指细胞主动发生的自我死亡过程。

为了研究细胞凋亡的发生机制，需对细胞进行凋亡检测。

以下是常用的细胞凋亡检测方法之一：1. Annexin V/PI双染法：利用Annexin V亲和素与磷脂酰丝氨酸的结合，通过荧光检测乙酰胆碱酯酶的失活，以区分早期和晚期凋亡。

细胞培养技术第一篇：细胞培养技术的基本概念细胞培养技术是指在体外人工培养生物细胞的一种技术，该技术主要应用于生命科学、医学研究、生物制药等领域。

细胞培养技术的基本概念主要包括：细胞培养的类型、培养基、细胞的消耗物质、细胞培养的设备和细胞培养的步骤等，下面就逐一进行介绍。

一、细胞培养的类型细胞培养主要分为原代细胞培养和继代细胞培养两种类型。

1.原代细胞培养原代细胞培养是指直接从体组织中分离出来的生物细胞进行培养。

该类型的细胞培养在实验室中很少用到，因为从体组织中分离细胞的方法很繁琐，而且这种方法得到的细胞数量和品质不能保证。

2.继代细胞培养继代细胞培养是指从已经培养的细胞中分离出来的细胞进行培养。

这种类型的细胞培养方法非常常见，因为可以在实验室中轻松实现。

二、培养基培养基是指用来提供细胞分裂和生长所需营养物质的一种物质。

培养基通常由肝素、胰岛素和细胞因子等多种不同的化合物构成，以满足不同类型的细胞对营养物质的需求。

三、细胞的消耗物质细胞培养期间需要提供物种很多，其中主要包括以下几种：1.抗生素：用来防止在培养细胞中出现感染。

2.气体：氧气和二氧化碳是保证细胞正常生长的重要物质。

3.酸碱指示剂：用来检测培养基的酸碱度，以保证细胞处于适宜的pH值下。

四、细胞培养设备1.培养箱：用于控制培养环境中的温度、湿度和氧气等因素。

2.显微镜：用来观察细胞的形态和生长情况。

若无显微镜，还需要检测仪器，用来检测培养细胞的生长情况。

3.细胞培养板：用来培养细胞和收集细胞。

五、细胞培养的步骤细胞培养的步骤一般可以分为以下几个：1.细胞分离：从样品中分离出单个的细胞。

2.细胞传代：选取健康的细胞将其转移至新的培养基中，继续增殖，以获得更多的细胞。

3.细胞计数：测量细胞数量以确定下一步操作所需的细胞量。

4.细胞培养：将细胞加入新的培养基中，进行培养。

根据细胞培养的不同类型，上述步骤会稍有不同。

总之，细胞培养技术对于生命科学、医学研究、生物制药等领域都具有重要的应用价值，它通过人工培养细胞，为科学家们提供了一种研究生物学的新途径。

微生物的培养与应用是微生物学的重要内容，涉及到微生物的生长、繁殖、控制以及在各个领域的应用。

以下是一些微生物培养与应用的知识点总结：
1. 培养基：微生物培养的基础是培养基，它提供了微生物生长所需的营养物质和环境条件。

培养基可以分为固体培养基（琼脂糖培养基）和液体培养基（肉汤培养基）。

2. 培养技术：常用的微生物培养技术包括平板法、液体培养法、摇瓶培养法等。

平板法适用于菌落计数和纯培养，液体培养法适用于大规模培养和代谢产物的提取，摇瓶培养法适用于微生物生长动力学研究。

3. 培养条件：微生物的生长需要适宜的温度、pH值、氧气和营养物质等条件。

不同微生物具有不同的生长条件要求，例如，人体共生菌一般在37摄氏度下生长，而一些嗜热微生物则需要较高的温度。

4. 培养纯化：为了获得纯种微生物，常常需要进行培养纯化。

常用的方法包括单菌分离、传代培养和鉴定技术等。

传代培养是通过连续传代使微生物形成纯种，鉴定技术可以通过形态学、生理生化特性和分子生物学方法确定微生物的种属。

5. 微生物应用：微生物在各个领域具有广泛的应用，包括食品工业、制药工业、环境保护、农业等。

例如，乳酸菌可以用于酸奶和乳酸发酵食品的生产，放线菌可以产生抗生素，生物修复可以利用微生物降解污染物。

6. 发酵技术：发酵是微生物应用的重要手段之一，通过微生物的代谢活动产生有用的产物。

发酵技术在酿酒、酱油、乳制品和抗生素等行业得到广泛应用。

这些是微生物培养与应用的一些基础知识点，还有很多深入的内容和应用领域可以继续学习和探索。

名词解释：细胞组织培养：细胞（组织）培养是指从生物体内取出细胞（组织），模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存、生长并维持其结构和功能的方法。

二倍体细胞株：具有二倍体染色体数的细胞株。

细胞组织培养选材：根据实验目的、观察指标确定所选组织器官。

培养选材一般来自胚胎组织的培养物；比成体组织更易生存和生长。

这主要是因为胚胎组织有更多的胚胎组织干细胞，它们具有更高的自我更新和多能分化能力。

原代培养：一般指从组织中分离在体外生长至传代之前的细胞培养。

这种培养通常是异质性，生长缓慢，但比较能代表原组织的类型并表达原组织特性。

缺点是在培养过程中会失去许多原组织的细胞。

传代细胞：原代细胞生长物或细胞系生长到一定阶段，分散成单个细胞，按一定比例接种于新的培养容器内称之传代。

传代细胞称之细胞系，可分为两类：有限细胞系和连续细胞系。

传代形成的具有各自生物特性或标志的细胞系称之为细胞株。

世代：指细胞经过一次分裂后完成后至下次分裂的过程。

细胞富集：当细胞分离纯化并不完全彻底，培养物中能达到以某种细胞为主（占绝大多数）的程度。

细胞纯化：是指从原代培养前成分混杂的异质性细胞悬液中或者从培养物中获得单一类型细胞的过程。

通过细胞分离和纯化得到细胞株或系。

传代：也称为再培养，把一瓶培养细胞全部或分成几份再培养的过程。

组织工程：组织工程是应用生命科学和工程学的原则及方法，在正确认识哺乳动物的正常及病理两种状态下的组织结构与功能关系的基础上，研究、开发用于修复、维护、促进人体各种组织或器官损伤后的功能和形态的生物替代物的一门新兴学科。

Density inhibition:密度抑制，由于细胞密度过大，培养液营养耗尽、代谢产物过多和生存空间消失所引起细胞增殖的抑制现象。

消化液：在原代细胞培养和细胞传代时，都要用消化液，最常用的是胰蛋白酶和二乙烯四乙酸二钠（EDTA），其次是一些特殊的组织细胞培养用的各型胶原酶。

在原代细胞培养中，使用消化液从组织块中分离（散）出单个的细胞；在进行细胞传代时，消化液使细胞脱离生长表面并离散成单个细胞。

细胞、微生物及其有关培养技术1细胞及微生物1.1 细胞高等植物细胞膜外有细胞壁，细胞质中常陪伴有质体，体内有叶绿体、液泡及线粒体。

动物细胞无细胞壁，细胞质中常有中心体。

细胞作为生物体结构和功能的基本单位，拥有运动、营养和生殖的功能。

1.2 微生物微生物包含细菌、真菌及一些小型的原生生物、显微藻类等在内的一大类生物集体以及病毒。

微生物多为单细胞生物，野生生计条件比较简单。

其余，固然其个体十分细小，却与人类关系亲密，与人类的生产和生活有重要的联系。

微生物种类众多，起码有 10 万种以上。

按其结构、化学构成及生活习惯等差异可分红三大类。

一是真核细胞型微生物，其细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁以及染色体，且胞质内有完好的细胞器。

二是原核细胞型微生物，其细胞核分化程度低，仅有原始核质，没有核膜与核仁。

细胞器结构和功能其实不完美。

这种微生物种类众多，有细菌、螺旋体、支原体、立克次体和衣原体和放线。

三是非细胞型微生物，病毒为其代表。

它们没有典型的细胞结构，只好在活细胞内生长和生殖。

2植物组织与动物组织细胞先进行分裂与生长，而后由细胞分化产生了不一样的细胞群，把形态、结构相像，在个体发育中由同样根源的细胞群所构成的结构和功能单位，称为组织。

2.1 植物组织植物组织分为分生组织和成熟组织。

依据分生组织在植物体中的散布地点，可分为顶端分生组织，侧生疏生组织及居间分生组织。

为适应特定的生理功能，细胞出现了更加显然的特化，形成了各样不同的成熟组织。

薄壁组织：同化组织、汲取组织、储藏组织、通气组织和传达细胞。

输导组织：导管、管胞、筛胞、筛管和伴胞。

机械组织：厚角组织和厚壁组织。

保护组织：表皮和周皮。

分泌结构：外分泌结构和内分泌结构。

在植物的个体发育中，由同类细胞构成的组织是简单组织；由多种种类细胞构成的组织构成的组织称为复杂组织。

简单组织：分生组织、薄壁组织。

复合组织：表皮、周皮、树皮、木质部、韧皮部和维管制。

2.2 动物组织依据结构、功能和发源的差异能够将动物组织分为 4 类：上皮组织、结缔组织（包含松散结缔组织、致密结缔组织、网状结缔组织和弹性结缔组织等）、肌组织和神经组织。