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TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)产品简介：碧云天生产的显色法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。
对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤，即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。
细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。
基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合，最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞，这就是本试剂盒通过TUNEL(T dT-mediated d U TP N ick-E nd L abeling)法检测细胞凋亡的原理。
本试剂盒有如下优点。
(1) 高灵敏度：可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。
(2) 特异性好：TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。
(3) 快速：仅需约2-3个小时即可完成。
(4) 应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。
TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。
这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。
显色基质鲎试剂盒使用说明书(终点显色法，含偶氮化试剂)【用途】显色基质鲎试剂( Chromogenic End-point Tachypleus Amebocyte Lysate , CE TAL )用于体外细菌内毒素的定量检测，禁止以任何途径进入机体。
【原理】鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品,鲎试剂中含有Ｃ因子、Ｂ因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。
在适宜的条件下（温度，pH值及无干扰物质），细菌内毒素激活C 因子，引起一系列酶促反应，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的显色基质，使其分解为多肽和黄色的对硝基苯胺（pNA，λmax = 405nm）。
在一定时间内，pNA的生成量与细菌内毒素浓度成正相关，据此，可以定量供试品的内毒素浓度。
同时，对硝基苯胺（pNA）也可用偶氮化试剂染成玫瑰红色（λmax = 545nm），避免了供试品本身的颜色对405nm处吸收峰的干扰。
【检测限】按反应时间不同可检测0.1EU/ml-1 EU/ml和0.01EU/ml -0.1EU/ml两个区间( 反应时间T 1 和T 2 见出厂检验报告) 。
【试剂盒组成】细菌内毒素工作品，2支鲎试剂， 1.7ml/支，2支显色基质，1.7ml/支，2支偶氮化试剂1，10ml/支，2支偶氮化试剂2，10ml/支，2支偶氮化试剂3，10ml/支，2支HCl (反应终止剂)，50ml/瓶，1瓶细菌内毒素检查用水，50ml/瓶，2瓶【贮存】阴凉处, 最佳2-8℃,避光贮存。
【用法】1 .材料和设备1.1 试剂鲎试剂、细菌内毒素工作品、显色基质、偶氮化试剂1 、偶氮化试剂2 、偶氮化试剂3、HC l ( 反应终止剂) 、细菌内毒素检查用水。
1.2器材旋涡混合仪、移液器、多道移液器、封口膜、试管架。
恒温水浴箱（37±1℃）、分光光度计。
注意：接触试剂及供试品的所有器皿必须是无热原的(我公司提供无热原耗材)。
Calbiochem ®FragEL™ DNA Fragmentation Detection Kit,Colorimetric -TdT Enzyme目录货号QIA33背景介绍背景介绍：：细胞凋亡是细胞的一种基本生物学现象，在生物体进化、内环境的稳定以及系统发育中发挥着重要的作用。
细胞凋亡发生在正常的细胞周期循环中，并发生形态学和生理生化的特征性改变，比如细胞皱缩，细胞间连接消失，线粒体膜电位消失，通透性改变，核质浓缩，核膜核仁破碎，DNA 降解成为约180bp-200bp 的片段；胞膜有小泡状突起，膜内侧磷脂酰丝氨酸外翻到膜表面，胞膜结构仍保持完整，最终凋亡细胞遗骸被分割包裹为几个凋亡小体，并迅速被周围专职或非专职吞噬细胞吞噬。
以上改变发生在不同的细胞凋亡阶段。
检测原理检测原理：：在凋亡晚期细胞中，DNA 会被降解为不同大小的片段，正常的或正在增殖的细胞则几乎没有DNA 的断裂，该方法是将生物素（Biotin ）标记和未标记的dNTP 在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT 酶）的作用下，连接到凋亡细胞中断裂DNA 片段的3’-OH 末端，然后再用亲和素（Streptavidin ）标记的HRP 与标记上的Biotin-dNTP 结合，并通过DAB 显色后用显微镜检测凋亡细胞。
试剂盒对标试剂盒对标记反应进行了优化记反应进行了优化，，采用最佳比例的采用最佳比例的生物生物生物素标记和未标记的素标记和未标记的dNTP 进行3’-OH 末端的核苷酸掺入末端的核苷酸掺入，，使得同一个断裂的DNA 片段片段末端可以形成更长的末端可以形成更长的末端可以形成更长的““标记尾巴标记尾巴””，该“标记尾巴标记尾巴””减少了相邻掺入dNTP 上标记基团的空间位阻上标记基团的空间位阻，，增加每个断裂片段后的增加每个断裂片段后的标记标记标记基团数目基团数目基团数目；；同时生物素和亲和素的高亲和力也可以和力也可以提高检测灵敏度提高检测灵敏度提高检测灵敏度，，减少非特异性反应减少非特异性反应。
关于食品安全快速检测试剂盒的一些见解从四个方面浅谈食品安全检测试剂盒：一、食品安全检测试剂盒产业出现的原因和重要性1、实验室设备数量有限：食品在生产、储存、运输及销售等各个环节，都有可能受到污染，需要多部门、多环节来加以监控。
而实验室的建设成本较大、设备数量有限，满足不了实际需求，由此需要便携式的快速检测设备、试材来实施快速检测行为。
2、实验室的样品检测周期较长：对于许多食物如蔬菜、豆浆、快餐等等，如果送实验室检测，在还没有得到检测报告之前就已过食用期或已销售待尽了。
为保障此类食品的食用安全性，比较好的措施即是快速检测。
3、实验室的样品检测费用较高：许多廉价、普遍食用而又容易出问题的食物如集贸市场出售的食物，要用成百上千倍的检测费用由实验室来全面保障食用者的安全是不现实的，而快速检测则是一种可行的补充行为。
4、实验室的工作量较大：有些物质如色素，己知的就有三千多种，要想区分哪些是食用色素、哪些是非食用色素，要用常规的方法检测其工作量是相当大的，为了减轻工作强度，提高工作效率，需要快速检测加以筛选定性，条件许可时再加以定量。
以上的几种情况导致食品检测测远远满足不了食品安全保障的需求，由此需要快速检测行业来适应食品业发展的需要，食品安全检测试剂盒等快速检测产品就应运而生了。
二、试剂盒按检测方法的分类1、酶联免疫法：酶联免疫法的基本原理是，酶分子与抗体分子共价结合，滴加底物后，底物可在酶作用下出现颜色反应。
根据此方法研制的试剂盒称为酶联免疫试剂盒，既可以定性检测又可以定量检测，检测最快只需几个小时。
此方法多用来检测兽药。
2、化学发光法：化学发光法的基本原理与酶联免疫法基本相同，不同之处在于酶标记物具有产生荧光的特性。
根据此方法研制的试剂盒称为化学发光试剂盒，与荧光光度计或与之配套的化学发光仪可以定量检测。
总体来说化学发光法研制的试剂盒比酶联免疫法试剂盒更灵敏和精确。
3、酶法：酶法的基本原理是利用酶催化一系列生物化学反应，最终产生可用现有检测方法测定的物质。
![[精华]鲎试剂试验方法](https://img.taocdn.com/s1/m/28cbff01caaedd3383c4d3b4.png)
[精华]鲎试剂试验方法鲎试剂实验方法鲎试剂按实验方法可分为:凝胶法、动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂。
凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。
凝胶法是通过观察有无凝胶形成作为反应的终点。
此法操作比较简单，经济，不需要专用测定设备，可以进行定性或半定量测定。
凝胶法鲎试剂常见规格为0.1ml/支或0.2ml/支的单个测试或0.5ml/支至5.2ml/瓶的真空封口西林瓶装的多个测试。
使用时一般应加细菌内毒素检查用水复溶后使用。
厦门市鲎试剂实验厂有限公司的真空封口试管凝胶法鲎试剂是把鲎试剂直接灌装在试管中，在真空中压盖封口的新产品。
使用时直接用样品溶解鲎试剂，不会割伤手，更加简单方便安全。
特异性鲎试剂，即弃G因子鲎试剂，是厦门市鲎试剂实验厂有限公司国内首创的产品，它专一对内毒素起反应，避免了G因子旁路的干扰，使检测结果更加可靠，在药检和临床检验方面是不可或缺的理想检测试剂。
目前厦门市鲎试剂实验厂有限公司提供的各种内毒素检测鲎试剂均为特异性鲎试剂，都能对抗葡聚糖的干扰，只对内毒素起反应。
因此不列为独立品种。
动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂，这四种方法都是定量检测内毒素的。
这几种定量法鲎试剂统称光度法鲎试剂。
根据检测原理，终点浊度法和动态浊度法都属于浊度法。
浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。
终点浊度法未见商品化产品。
动态浊度法(又称动态比浊法)是检测反应混合物的浊度上升某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。
动态浊度法的特点为:1. 能准确定量。
2.检测范围宽，可达4个数量级。
3.灵敏度高达0.005EU/ml。
4. 操作简便，系统自动检测分析，一步即成。
5. 经济实用，试剂样品需要量少，可降至50μL。
6. 和微生物检测系统Elx808(配套IU)及专用软件TALgent使用，一次可同时检测多达96个样品。
凝胶限量法和终点显色基质法测定细菌内毒素的比较摘要：目的用凝胶限量法和终点显色基质法对医疗器械骨水泥杯的细菌内毒素含量进行检测，比较两种方法建立时的优缺点。
方法采用USP 41 <85> Bacterial Endotoxins Test，对供试品进行细菌内毒素检测试验。
关键词：医疗器械；细菌内毒素；方法；比较随着科技发展的不断进步，医疗水平的不断提升，涌现出越来越多的医疗器械及其生产企业，尤其是骨科植入类，作为三类高风险医疗器械，产品相关的生物学检测的技术和方法，需要尽可能的反映器械真实的某物质含量水平。
本文就骨水泥杯，笔者采用凝胶限量法和终点显色基质法对其细菌内毒素检测进行比较。
1材料与试剂1.1显色基质鲎试剂细菌内毒素工作品Control Standard Endotoxin（CSE）（批号：249029，规格：10ng/vial），鲎试剂Pyrochrome? Limulus Amebocyte Lysate（LAL）（批号：2041707，规格：3.2ml/vial），细菌内毒素检查用水LAL Reagent Water（LRW）（批号：AD16729285，规格：100ml/vial），β葡聚糖抑制缓冲液Beta Glucan Inhibiting Buffer（批号：1207057，规格：5.5ml/vial），以上由Associates of CAPE COD Incorporated公司生产。
冰醋酸（批号：20130503，规格：500ml/瓶），由国药集团化学试剂有限公司生产。
1.2凝胶法鲎试剂细菌内毒素工作品Control Standard Endotoxin（CSE）（批号：161，规格：0.5ug/vial），鲎试剂Pyrotell LAL（LAL）（批号：218-02-861，规格：0.125EU/ml；2ml/vial），细菌内毒素检查用水LAL Reagent Water（LRW）（批号：AD16729285，规格：100ml/vial），β葡聚糖抑制缓冲液Beta Glucan Inhibiting Buffer（批号：1207057，规格：5.5ml/vial），以上由Associates of CAPE COD Incorporated公司生产。
内毒素检测方法一、内毒素的检测方法常用的检测内毒素的方法有以下几种：1.凝胶法：通过鲎试剂（鲎试剂中含有C因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等）与内毒素发生凝集反应产生凝固蛋白（凝胶）的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。
凝胶法是通过观察有无凝胶形成作为反应的终点。
此法操作比较简单，经济，不需要专用测定设备，可以进行定性或半定量测定。
2.动态浊度法；浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。
内毒素与鲎试剂中的凝固酶原激活呈凝固酶，凝固酶可使凝固蛋白原变成凝固蛋白（即产生凝胶），使液体的浊度发生变化，通过动态观察浊度变化速率检测。
3.终点显色法:通过由于细菌内毒素激活鲎试剂（鲎试剂中含有C 因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等）C因子，引起一系列酶促反应，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的显色基质（含N-α-苯甲酰-DL-精氨酰-4-硝基苯胺盐酸盐），使其分解为多肽和黄色的对硝基苯胺（pNA，λmax = 405nm）。
同时，对硝基苯胺（pNA）也可用偶氮化试剂染成玫瑰红色（λmax = 545nm），避免了供试品本身的颜色对405nm处吸收峰的干扰。
根据产物颜色判断内毒素浓度，又称为比色法。
4.动态显色法:内毒素可激活鲎试剂引起一系列酶促反应，产生黄色的对硝基苯胺（pNA，λmax = 405nm），在一定时间内，动态观察对硝基苯胺（pNA）的生成量，与细菌内毒素浓度成正相关。
但此方法需要带温育系统的动态光度测定仪器及配套软件。
5.其他检测方法：还有一些直接测定内毒素定量的方法如酶联免疫吸附测定法(ELISA)、免疫学方法（如火箭免疫电泳试验法、L-聚赖氨酸法、双抗体夹心法、荧光偏振法等）等，这些方法的特点是特异性、准确性高，但其应用尚待大量临床实践的验证，操作尚待进一步简化；还有一些间接测定的方法，如生物学方法利用LPS刺激免疫细胞产生IL-1、TNF，通过间接测定IL-1、TNF等细胞因子含量，推算出待检样本中的LPS含量；化学发光法：应用CR1和CR3受体诱导中性粒细胞的氧化反应作为一个反应平台，通过测定内毒素对中性粒细胞的生物学作用来检测内毒素的含量；流式细胞术：应用针对内毒素表面抗原决定簇的单克隆抗体对内毒素进行荧光标定而后应用流式细胞仪进行检测。
