基础医学]免疫学实验技术

免疫学实验方法免疫学实验方法是免疫学研究的重要部分，它通过一系列的技术手段来识别、分析免疫系统中的各种生物分子、细胞和组织，以及它们之间的相互作用。

这些方法在免疫学领域广泛应用于疾病诊断、药物研发、疫苗研究等方面，对促进免疫学的发展和应用发挥了重要作用。

下面将介绍一些常用的免疫学实验方法。

一、ELISA法ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种用于检测抗体或抗原的免疫学实验方法。

该方法通过将待测抗体或抗原与固相物质结合，再加入酶标记的二抗来进行标记，最后通过酶底物的底物变色反应或荧光底物的发光反应来检测待测抗体或抗原的存在量。

二、流式细胞仪流式细胞仪是一种用于分析和计数悬浮细胞的仪器，它利用激光照射细胞，通过细胞膜上的特异性抗体标记来检测细胞的表面标记物和内部细胞器的性质和分布，对免疫细胞的表型和功能进行高效的分析。

三、免疫印迹法免疫印迹法是一种用于检测蛋白质的免疫学实验方法，通过电泳将待测蛋白分离，再将其转移到膜上，最后使用特异性抗体和标记的二抗来检测待测蛋白的存在量和大小。

四、免疫组化法免疫组化法是一种用于检测组织中特定蛋白的免疫学实验方法，通过将组织切片后进行脱水、脱脂和脱水处理，再使用特异性的抗体来标记待测蛋白，并观察标记物的颜色变化或发光情况来确定蛋白的位置和表达量。

五、免疫沉淀法免疫沉淀法是一种用于检测蛋白相互作用的免疫学实验方法，通过将待测抗体与蛋白结合，再使用蛋白A/G琼脂糖或磁珠等材料将蛋白抗原免疫沉淀下来，最后使用核酸酶或质谱技术来分析蛋白的互作关系。

以上介绍的是一些常用的免疫学实验方法，它们在免疫学研究中起着举足轻重的作用，不仅在科研领域有重要应用，同时在临床诊断和治疗中也有着广泛的运用。

希望以上内容能够对您有所帮助。

荧光免疫技术 化学发光免疫技术 细胞免疫功能测定 流式细胞测定技术及HLA分型技术 请同学们参看免疫实验视听教材和 CAI课件
三种试剂：
①固相抗原或抗体 即把抗原或抗体用合适的方法连接到固相载体表 面，同时保留它们的免疫活性； ②酶标抗原或抗体 即把某些酶用合适的方法连接到抗原或抗体表面， 同时保留它们的免疫活性以及酶的催化活性。常 用的酶是辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶 (AP)； ③酶作用的底物 常用的底物是邻苯二胺
（1）单向扩散试验 （Single redial diffusion test）
预先混有抗 体
（2）双向扩散试验 （Double diffusion test）
（3）对流免疫电泳
_
Ag Ab
+
作用及特点：
抗体球蛋白移向阴极，抗原分子移向阳极，当两 者在适当比例处相遇，即形成灰白色沉淀线。 检查乙型肝炎抗原及甲胎蛋白，敏感度比双向扩 散法高约10倍，只需1～2小时即可获得检验结果。 不能定量测定。
三、 免疫标记技术
原理： 利用酶、荧光素、胶体金、发光物 质以及放射性核素等标记物来标记抗原或 抗体，再与标本中的抗体或抗原反应，最 后测定复合物中的标记物。 优点：特异、敏感、快速，可作定性、定 量或定位测定。
依据检测物分两类： 1.免疫组化技术(immunohistochemical technique)，用于组织/细胞中抗原或抗体的定位； 2.免疫测定(immunoassay)，用于液体标本中抗原 或抗体的检测。 依据标记物的不同，可分为： 酶免疫技术、荧光免疫技术、金免疫技术、 化学发光免疫技术和放射免疫技术。
免疫学实验技术
浙江大学医学院 陈玮琳
利用免疫学原理来检测抗原、多种免疫 分子(抗体、补体、细胞因子和粘附分 子等)及免疫细胞的实验过程。 有助于疾病的辅助诊断、治疗及预后判 断 。

的物质
人类医学 各 级 医 院 , 血 传染病（乙肝五项,HIV, SARS等）
站,CDC,防疫站,诊 标志物（AFP、肌钙蛋白、粪便血红蛋
断中心；家庭自检；白等）
商检系统；边检口 岸；公安系统.
女性妊娠
HCG(早孕)
毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒）
农牧业
畜牧兽医站, 商检 传染病（禽流感,链球菌等） 系统,边检口岸,农 病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等） 牧类院系和研究所
阳性 阳性
阴性
临床意义：
1、孕妇妊娠1周后，尿中可出现较多HCG，均可 呈阳性（+）反应，达到妊娠早期诊断的目的
2、绒毛膜上皮癌、水泡状胎块和睾丸畸胎瘤患者 的尿中HCG可明显增高，故也可呈阳性（+）反应， 但结合临床可予以鉴别。
注意事项
1. 强阳性尿液中 HCG 含量较多 , 因此质控线可能不出现 或极浅淡 , 而仅在反应区显示淡紫色条带。 2. 应避免试纸条一端插入尿液过深或过浅 , 插入时间过长 或过短也会影响试验结果。
胶体金（Colloidal gold）是氯金酸（HAuCl4） 的水溶胶，氯金酸在还原剂的作用下，聚合
成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为
一种稳定的胶体状态。
胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带 负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电 吸引而形成牢固结合。
胶 体 金 标 记 技 术 （ Immunogold labeling technique） 是 以 胶 体 金 作 为 示 踪 标 记 物 应 用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
实验一
胶体金试纸条检测技术
胶体金试纸条检测技术
【实验目的】
掌握双抗体夹心法测定尿 HCG 的原理、操作方法及结果判定方法。

占30% 。如果给小鼠腹腔注射某种刺激物 ，可使巨噬 细胞渗出增加，易于分离更多的巨噬细胞。
常用于刺激腹腔细胞渗出的物质
刺激物 浓度 注射剂量 细胞采取时间 获得细胞数量 (ml) （注射后天数） （×106） 0.5-1 1-1.5 0.1-0.5 1-1.5 2-3 3-5 4-6 3-5 1-5 3-7 10-20 2-5
高级免疫学实验技术
2014级硕士研究生
吉林大学基础医学院
免疫学系
小鼠腹腔巨噬细胞分离培养 及吞噬功能测定
原理

单核巨噬细胞存在与外周血液中，巨噬细胞广泛分布 在各种组织中，可以从腹腔渗出细胞、骨髓、脾脏、
淋巴结、胸腺、肝脏以及肺等组织中分离获得。正常
小鼠每只可收集腹腔渗出细胞约10
6
，其中巨噬细胞
1ml 加样器（头）器 5ml 注射器 小试管 24孔培养板 盖玻片 37度孵箱 显微镜 1只/组 若干 2块/室
5％印度墨汁
5%NCS-RPMI1640培养液
实验步骤
腹腔巨噬细胞的分离培养：
1. 小鼠腹腔注射6%淀粉，轻揉腹部，使淀粉分布均匀； 2. 注射淀粉三天后，颈椎脱臼法处死小鼠，用酒精棉球消毒， 用5ml注射器腹腔注射3ml 培养液，冲洗腹腔。 3. 剪开腹部皮肤，用镊子提起腹膜，剪刀将腹膜剪开一小口，
血清 肉胨汤 矿物油 淀粉
原浓度 10% 原浓度 2%-10%
明胶
2%-4%
0.5-1
3-5Biblioteka 3-7实验分组、试剂与器材

4人一组

试剂：
6 ％
器材：
小鼠 载玻片 1只/组 1张/组 1套/组
淀粉 PBS
1ml 20ml 100ml 2ml/室