丙酮酸羧化酶(PC)活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法

组织乙酰辅酶A羧化酶（ACETYL-COA CARBOXYLASE）活性光度法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途组织乙酰辅酶A羧化酶（ACETYL-COA CARBOXYLASE）活性光度法定量检测试剂是一种旨在通过底物乙酰辅酶A和碳酸氢盐受到乙酰辅酶A羧化酶的催化反应后，进而由丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶连续循环法反应系统，测定产生ADP过程中，伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）的氧化反应，即采用光度法测定其氧化后峰值的变化，以分析组织裂解样品中乙酰辅酶A羧化酶活性的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

其适用于各种组织裂解萃取液样品（动物、人体）、部分或完全纯化酶样品中乙酰辅酶A羧化酶活性的定量检测，以及抑制剂和激活剂的筛选。

产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，高度敏感。

技术背景乙酰辅酶A羧化酶（Acetyl CoA Carboxylase；ACC；EC6.4.1.2），又称为乙酰辅酶A碳酸氢盐连接酶（Acetyl CoA：bicarbonate ligase-ATP），是ATP依赖性含生物素酶，参与脂肪酸生物合成。

哺乳动物乙酰辅酶A羧化酶单体分子量为225－250Kd，含有许多磷酸化位点，以及1个生物素辅基位点、2个催化位点和1个异构（allosteric）位点。

乙酰辅酶A羧化酶催化生物素辅基（prosthetic group）的羧基化反应，然后将生物素上的羧基转移到辅酶A上，产生丙二酰辅酶A（malonyl CoA），成为长链脂肪酸合成前的关键步骤。

AMP活化蛋白激酶（AMP-Activated Kinase；AMPK）调节该酶的活性，而十四烷基氧糠酸（5-(tetradecyloxy)-2-furoic acid；TOFA）抑制该酶的活性。

基于底物乙酰辅酶A（acetyl CoA）和碳酸氢盐，在ATP的存在下，受到乙酰辅酶A羧化酶的催化，获得产物丙二酰辅酶A和ADP，进而通过丙酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase；LDH）反应系统中，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（oxidized nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），其吸光峰值的变化（340nm），来定量分析乙酰辅酶A羧化酶的活性。

2. 实验试剂：50mM ATP溶液，50mM磷酸肌酸溶液，0.2mM NaHCO3溶液，160U/ml 磷酸肌酸激酶溶液，160U/ml磷酸甘油酸激酶溶液，160U/ml磷酸甘油醛脱氢酶溶液（U为酶活力单位），25mM RuBP溶液，5mM NADH，Rubisco提取介质（40mM Tris-HCl缓冲液，pH7.6，内含10mM MgCl2溶液，0.25mM EDTA，5mM谷胱甘肽），反应介质（0.1M Tris-HCl缓冲液，pH7.8，内含12mM MgCl2溶液，0.4mM EDTA）。

3实验步骤3.1 酶粗提液的准备取新鲜洗干净的条斑紫菜的丝状体和条斑紫菜的叶状体各1克，加入预冷的提取介质1ml，冰浴研磨10min，将样品在40C，10,000×g离心10min，弃沉淀；上清夜即是酶粗提液，置于00C备用（王维光，1985；张志良等，2003）。

3.3.2 Rubisco酶活力的测定按下表配制反应体系：试剂加入量ml5mM NADH 0.250mM ATP 0.2酶提取液0.150mM磷酸肌酸0.20.2mM NaHCO30.2反应介质1.4160U/ml磷酸肌酸激酶0.1160U/ml磷酸甘油酸激酶0.1160U/ml磷酸甘油醛脱氢酶0.1双蒸水0.3将配制好的反应体系混匀，倒入比色杯内，以蒸馏水为空白，在紫外分光光度计计上测量340nm处反应体系的OD值，作为零点值。

将0.1mlRuBp加入比色杯内，立即计时，每隔20s测一次OD值，共测3min。

以零点到第1min 的OD值下降的绝对值计算酶活力。

由于酶提取液中可能存在3-磷酸甘油酸（PGA），会使酶活力的测定产生误差，因此除上述测定外还需做一个不加RuBp的对照。

对照的反应体系与上述酶的反应体系完全一样，所不同的仅仅是把酶提取液放在最后加，加入后马上测定此反应体系340nm处的OD值，并记录前1min内OD值的变化量。

丙酮酸激酶检测试剂盒测定原理一、概述在生命科学研究中，分子生物学领域的检测试剂盒广泛应用于疾病诊断、基因表达分析和药物筛选等方面。

丙酮酸激酶检测试剂盒是一种用来测定丙酮酸激酶（Pyruvate Kinase，简称PK）活性的试剂盒。

本文将从以下几个方面介绍丙酮酸激酶检测试剂盒的测定原理：•丙酮酸激酶简介•丙酮酸激酶检测试剂盒组成•丙酮酸激酶检测试剂盒测定原理二、丙酮酸激酶简介丙酮酸激酶是一种在糖酵解过程中起关键作用的酶，它能够催化丙酮酸与磷酸化物（如ADP）反应生成磷酸丙酮酸和ATP。

丙酮酸激酶广泛存在于真核生物和原核生物的细胞质中，是细胞能量代谢的重要调控因子。

三、丙酮酸激酶检测试剂盒组成一般来说，丙酮酸激酶检测试剂盒由以下几个组分组成： 1. 丙酮酸激酶底物：一种特定的丙酮酸底物。

2. 辅酶：用于促进丙酮酸激酶的催化活性。

3. PK反应缓冲液：用于维持反应环境的稳定性。

4. 酶标试剂：用于测定反应终点的标记试剂。

5. 正样品：已知浓度的丙酮酸激酶样品，用于构建标准曲线。

四、丙酮酸激酶检测试剂盒测定原理丙酮酸激酶检测试剂盒测定原理基于丙酮酸激酶催化丙酮酸与磷酸化物反应的特性。

具体步骤如下：1. 样品制备将需要测定丙酮酸激酶活性的样品收集，并通过离心等方法，将样品从细胞或组织中提取出来，得到纯化的丙酮酸激酶。

2. 反应体系配置按照试剂盒说明书中的配方，将丙酮酸底物、辅酶和PK反应缓冲液按一定比例混合，制备反应底物液。

3. 样品处理将制备好的样品与反应底物液按照一定比例混合，使得反应体系达到相应的浓度。

4. 反应过程将混合好的反应物置于适当的温度下孵育一段时间，使丙酮酸激酶催化底物发生反应，生成磷酸丙酮酸和ATP。

5. 酶标反应将反应终止或稀释后的样品取出，加入酶标试剂，进行酶标反应。

酶标试剂中的特定物质与ATP反应，产生荧光或颜色信号。

6. 信号测定使用合适的光谱仪或读板仪器，测定酶标反应后的荧光或颜色信号的强度。

紫外分光光度法测定丙酮酸
紫外分光光度法是一种常用的分析方法，可以用于测定丙酮酸的浓度。

测定步骤如下：
1. 准备样品：将待测溶液中的丙酮酸转移至紫外光度计量筒中。

如果样品浓度较高，可以适当稀释。

2. 设置仪器：将紫外光度计设置在适当的波长，通常在190-400nm 之间选择一个合适的波长。

同时进行零点校准，即不加入样品的情况下记录光吸收。

3. 测量样品：将样品加入光度计量筒中，记录下吸光度值。

4. 计算浓度：根据比尔定律，计算出丙酮酸的浓度。

比尔定律表示吸光度与浓度之间呈线性关系。

需要注意的是，测定时要避免其他物质的干扰，确保样品中只含有丙酮酸。

同时，还需要注意选择适当的波长和合适的光程，以确保准确测量。

根据具体测定要求和样品特性，可能需要进行样品预处理、稀释或其他操作。

具体操作步骤应根据仪器和试剂的说明进行。

丙酮酸（PYR）测定试剂盒（乳酸脱氢酶法）适用范围：用于体外定量测定人体血清或血浆中丙酮酸的含量。

1.1 试剂盒包装规格试剂1：1×15mL，试剂2：1×5mL；试剂1：2×30mL，试剂2：2×10mL。

试剂1：2×54mL，试剂2：2×18mL；试剂1：3×45mL，试剂2：3×15mL；试剂1：4×54mL，试剂2：4×18mL；试剂1：2×300mL，试剂2：1×200mL；试剂1：1×9L，试剂2：1×3L。

校准品（选配）：2×0.5mL，2×1mL（2水平）。

质控品（选配）：2×0.5mL，2×1mL（2水平）。

1.2 试剂盒主要组成成分注：校准品和质控品存在批特异性，具体浓度见对应批次产品标签。

2.1 外观试剂1：无色澄清液体；试剂2：无色澄清液体。

校准品：无色至淡黄色澄清液体。

质控品：无色至淡黄色澄清液体。

2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。

2.3 试剂空白吸光度在37℃、340nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应不小于0.5。

2.4 分析灵敏度测定浓度在200µmol/L附近的样本时，吸光度变化值（ΔA）应不小于0.02。

2.5 线性在（30，1200）µmol/L线性范围内，线性相关系数r不小于0.990。

在(150，1200）µmol/L范围内的线性相对偏差不大于±10%；测定结果（30，150]µmol/L时线性绝对偏差不大于±15µmol/L。

2.6 重复性重复测试高低浓度的样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于8%。

2.7 批间差不同批号试剂测试同一份样本，测定结果的批间相对极差应不大于10%。

2.8 准确度与已上市产品进行比对试验，在（30，1200）µmol/L范围内，与比对系统的相关系数r不小于0.975；在（100，1200）µmol/L区间内与比对系统的相对偏差应不大于±15%，（30，100] µmol/L区间内与比对系统的绝对偏差应不大于±15µmol/L。

二氧化碳(CO2)测定试剂盒（PEPC酶法）说明书【产品名称】二氧化碳(CO2)测定试剂盒（PEPC酶法）【包装规格】a)单一试剂：1×15mLb)单一试剂：2×40mLc)单一试剂：5×60mLd)单一试剂：2×100mL【预期用途】用于体外定量测定人血清中二氧化碳的含量。

血液中CO2含量对人体内酸碱平衡的调节起着重要的作用。

增高：代谢性碱中毒，如幽门梗阻、柯兴综合征等。

呼吸性酸中毒，如呼吸中枢抑制、呼吸机麻痹等。

降低：代谢性酸中毒，如严重腹泻、肾功能衰竭等。

慢性呼吸碱中毒[1]。

临床上测定二氧化碳代谢性与呼吸性酸、碱中毒的辅助诊断，通常与pH值同时进行。

【检验原理】样本中的碳酸氢根在磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）催化下，与磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）反应，生成草酰乙酸和磷酸；草酰乙酸在苹果酸脱氢酶（MDH）催化下，生成苹果酸，同时NADH被氧化成NAD+，NADH被氧化的程度与碳酸氢根的含量成正相关。

【主要组成成分】试剂主要组分三羟甲基氨基甲烷缓冲液250mmol/L磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）10g/L磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）10KU/L苹果酸脱氢酶（MDH）8KU/L还原型辅酶I（NADH） 2.2g/L表面活性剂及稳定剂适量注：不同批号试剂盒中各组分未经试验不可互换。

【储存条件及有效期】1.试剂原包装在2～8℃储存，有效期为12个月，生产日期、有效期见标签。

2.开口后的试剂在仪器仓中（2～8℃）可稳定30天。

【适用仪器】艾威德AS-420/AS-660/AS-1200；日立HITACHI7020型/7060型/7180型/7600型/LABOSPECT008AS型；贝克曼AU400/AU480/AU640/AU680/ AU2700/AU5400/AU5800/AU5811/AU5821；佳能TBA-FX8/TBA-120FR/ TBA-2000FR；罗氏cobas8000c702/cobas8000c701/cobas8000c502；西门子SIEMENS ADVIA1800/ADVIA2400；雅培ABBOTT ARCHITECT c8000/ARCHITECT c16000/ARCHITECT ci8200；西森美康SYSMEX BM6010/C；科华KHB卓越310/卓越330/卓越400/卓越450/ZY-1200/ ZY-1280；迪瑞CS-240/CS-T300/CS-300B/CS-380/CS-400A/CS-400B/ CS-600A/CS-600B/CS-800A/CS-800B/CS-1200/CS-1200ISE/CS-1300B/CS-14 00；迈瑞MINDRAY BS-220/BS-330/BS-350E/BS-380/BS-390/BS-400/BS-430/ BS-600/BS-800/BS-2000M；颐兰贝ES-200/ES-380/ES-480；赛诺迈德SUNMATIK-9050型；雷杜Chemray420；英诺华D280；特康TC6010L；锦瑞GS400；普康6066。

2013/05/13紫外分光光度法测蛋白酶酶活1、原理蛋白酶在一定的温度与pH条件下，水解酪素底物，然后加入三氯乙酸终止酶反应，并使未水解的酪素沉淀除去，滤液对紫外光有吸收，可用紫外分光光度法测定。

根据吸光度计算其酶活力。

酶活单位的定义：每1mL粗酶液，在一定温度和pH值条件下，1min水解酪素产生1ug酪氨酸为一个酶活力单位，以（u/mL）表示。

2、试剂和溶液三氯乙酸、氢氧化钠、盐酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、乳酸、乳酸钠、硼酸钠（硼砂）均为分析纯，酪素、酪氨酸为生化试剂。

2.1 三氯乙酸c（CCL3·COOH）=0.4mol/L称取三氯乙酸65.4g，用水溶解并定容至1000 mL。

2.2 氢氧化钠溶液c（NaOH）=0.5mol/L按GB601配制。

2.3 盐酸溶液c（HCL）＝1 mol/L及0.1 mol/L1 mol/L HＣＬ:取90mL浓盐酸溶解于去离子水中，定容至1000mL。

0.1 mol/L HＣＬ：取9mL浓盐酸溶解于去离子水中，定容至1000mL。

2.4 缓冲溶液a、磷酸缓冲液（pH＝7.5）适用于中性蛋白酶称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）6.02g和磷酸二氢钠（NaH2PO4·12H2O）0.5g，加水溶解并定容至1000mL。

b、乳酸缓冲液（pH＝3.0）适用于酸性蛋白酶甲液称取乳酸（80％～90％）10.6g，加水溶解并定容至1000 mL。

乙液称取乳酸钠（70％）16g，加水溶解并定容至1000 mL。

使用溶液取甲液8 mL，加乙液1 mL，混匀，稀释一倍，即成0.05moi/L乳酸缓冲溶液。

c、硼酸缓冲溶液（pH＝10.5）适用于碱性蛋白酶甲液称取硼酸钠（硼砂）19.08g，加水溶解并定容至1000 mL。

乙液称取氢氧化钠4.0g，加水溶解并定容至1000 mL。

使用溶液取甲液500 mL、乙液400 mL混匀，用水稀释至1000mL。

丙酮酸羧化酶丙酮酸羧化酶是一种重要的酶类，它在细胞代谢中起着关键的作用。

本文将对丙酮酸羧化酶的基本特征、功能和应用进行详细介绍。

丙酮酸羧化酶，也被称为丙酮酸脱羧酶，是催化丙酮酸羧化的酶类。

它属于脱羧酶家族，参与了多种重要的生物化学反应。

丙酮酸羧化酶可催化丙酮酸脱羧为二氧化碳和乙醛，是三羧酸循环（柠檬酸循环）中的关键酶之一。

该循环在生物体的细胞呼吸中起到重要的能量供给的作用。

丙酮酸羧化酶在细胞质和线粒体中都有分布，其催化活性和分布位置在不同的细胞类型和条件下会发生变化。

该酶的主要结构特点为四个次级结构域：一个核心由β折叠构成的大片层，两个α螺旋交替分布的反平行丝带和一个单螺旋位于中心的小片段。

在酶的活性中心，存在关键的催化残基，包括酪氨酸、赖氨酸和精氨酸等。

丙酮酸羧化酶对细胞内丙酮酸的代谢具有重要的调控作用。

一方面，它通过催化丙酮酸脱羧产生二氧化碳和乙醛，为细胞提供能量。

另一方面，丙酮酸羧化酶还参与了胆固醇合成、脂肪酸合成等重要生物合成通路。

此外，该酶还参与了细胞中的氮代谢和某些非氧化型代谢途径。

丙酮酸羧化酶的功能异常与多种疾病和代谢异常有关。

丙酮酸羧化酶缺乏或活性降低可导致某些遗传性疾病，如多源性肌炎、亨廷顿病等。

此外，丙酮酸羧化酶在某些肿瘤中表达异常，与肿瘤的恶性程度和预后相关。

目前，丙酮酸羧化酶的研究在医学和生物学领域具有重要意义。

在肿瘤治疗中，丙酮酸羧化酶成为新的靶向治疗对象。

研究人员正在开发丙酮酸羧化酶抑制剂，以抑制肿瘤细胞的生长和增殖。

此外，丙酮酸羧化酶的结构特点和催化机制的研究，为开发新的酶抑制剂和催化剂提供了重要的理论基础。

总之，丙酮酸羧化酶作为重要的酶类，在细胞代谢中发挥着关键的作用。

它参与了多种重要的生物化学反应，对细胞内丙酮酸的代谢具有调控作用。

丙酮酸羧化酶的功能异常与多种疾病和代谢异常有关，因此对其进行深入研究具有重要的临床和科学价值。

牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定牛血清，血浆及相关液体样本中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)的含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)水平。

用纯化的牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)，再与HRP标记的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)浓度。

试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：2700ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

迪信泰检测平台
丙酮酸脱羧酶检测
丙酮酸脱羧酶（Pyruvate decarboxylase, PDC），又称为α-羧化酶，是作用于
α-酮酸的羧化酶的一种。

丙酮酸脱羧酶是乙醇发酵途径的关键酶之一，存在于酵母和植物体中，以硫胺素焦磷酸为辅基，催化丙酮酸脱羧生成乙醛。

迪信泰检测平台采用生化的方法检测辅酶类物质，使用相应的酶类的试剂盒可以高效、精准的检测丙酮酸脱羧酶。

此外，我们还提供其他辅酶类的检测服务，以满足您的不同需求。

生化法测定丙酮酸脱羧酶样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。

周期：2~3周。

项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。

2. 相关参数（中英文）。

3. 图片。

4. 原始数据。

5. 丙酮酸脱羧酶活性信息。

迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。