食用菌菌种保藏的基本方法

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菌种保藏方法及复壮技术菌种保藏的原理是通过干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养等方法，使菌种的代谢水平降低，乃至完全停止，达到半休眠或完全休眠的状态，而在一定时间内得到保存。

需要时再通过提供适宜的生长条件使保藏物恢复活力，使菌种在较长期的保藏之后仍然保持着原有的生命力、典型的形态特征、优良生产性能。

目前常用的菌种保藏方法有以下几种。

1菌种保藏方法1.1斜面低温保藏法将需要保藏的菌种，接种在适宜的斜面培养基上，菌丝长满斜面时，用硫酸纸包扎棉塞，旋转在4℃的冰箱保藏。

由于微生物的新陈代谢活动未停止，试管内培养基易失水变干，因此，保藏时间较短，转管次数多，不适于长期保藏。

每隔六个月转管一次。

草菇菌种不耐低温，需保藏在10~12℃，或在草菇菌落上灌注3~4毫升的防冻剂（10%的甘油）。

如菌丝长满斜面后，在无菌条件下，用无菌橡皮塞代替棉塞，并用石蜡密封，即可在室温或冰箱中保藏。

这种方法可防止杂菌污染，隔绝氧气，避免培养基干燥，使用方便。

1.2液体石蜡保藏法石蜡防止培养基水分蒸发，隔绝斜面菌丝与空气接触，降低微生物代谢活性，使其处于休眠状态，因此能延长微生物的生命，保持菌种优良的种性。

一般可保藏3~5年，是一种中长期的菌种保藏方法。

液体石蜡选用化学纯的，在121℃下高温灭菌30分钟，再将液体石蜡在160℃烘箱中保温1~2小时，蒸发掉液体石蜡中的水，或将高压灭菌后的液体石蜡放置在40~60℃温箱中，使灭菌后的液体石蜡层由乳白色变成无色透明。

在无菌条件下，将灭菌除水的液体石蜡用无菌吸管罐到长满菌丝的斜面试管中，液体石蜡要高出斜面尖端1厘米左右，然后用无毒泡沫试管塞塞好，直立地放在试管架上或罐头瓶中，置于冰箱或室温中保藏。

液体石蜡灌注过多，移种时不方便；过少，时间长容易干涸。

如将棉塞齐试管中剪平，用石蜡溶封，或用无菌橡皮塞代替棉塞，可延长保藏时间。

几种食用菌菌种保藏方法食用菌菌种是指用于食用或驯化培养的真菌种类。

在保藏食用菌菌种时，主要有以下几种方法：1.冷冻保藏：将菌种置于-80℃的低温环境中。

首先，将菌种种植在琼脂平板上的单独菌落。

然后，将单独的菌落切下并置于含有30%甘油的琼脂平板上。

最后将含有菌落的琼脂平板置于-80℃的低温冷冻库中进行保存。

这种方法适合于长时间保存，但对设备和电力有一定需求。

2.雪贮法：将菌种置于冷藏室的冷湿源物质上。

首先，将菌种培养在含有菌落的琼脂平板上。

然后，将菌落保留在琼脂平板上并将其置于冷藏室中。

这种方法适用于一般食用菌的保存，在适宜的湿度和温度下，可以保存数月至一年。

3.干燥保藏：将菌种置于干燥环境中。

首先，将菌种培养在含有菌落的琼脂平板上。

然后将菌落切下并置于无菌的滤纸或多孔塑料袋中。

最后将菌种放置于干燥通风良好的地方，等待其自然干燥。

这种方法适用于一些干货类食用菌种，如香菇、平菇等。

4.培养罐保藏：将菌种保藏于培养罐中。

首先，将菌种培养在含有菌落的琼脂平板上。

然后将菌落切下并置于无菌培养罐中，加入适宜的培养基，并密封培养罐。

最后将培养罐保存在适宜的温度和湿度下。

这种方法适用于菌种的短期保藏。

5.低温干燥保藏：将菌种保藏于低温干燥器中。

首先，将菌种培养在含有菌落的琼脂平板上。

然后将菌落切下并置于低温干燥器中，通过低温干燥将其保存起来。

这种方法适用于一些低温耐受性较强的食用菌。

总结起来，以上是几种食用菌菌种保藏的方法。

选择合适的方法可根据菌种的特性、用途和预期保藏时间来确定。

在进行菌种保藏时，要注意无菌操作，避免菌种的污染或变异，并在适宜的环境条件下保存。

这将有助于保持菌种的营养价值和生物特性，以及保证其在后续使用中的质量。

食用菌菌种贮藏八法1.低温定期移植贮藏法将需要贮藏的菌种接种在适宜的斜面培养基上，适温培养，当菌丝健壮地长满斜面时取出，放在3℃-5℃低温干燥处或4℃冰箱、冰柜中贮藏，每隔4-6个月时间移植转管一次，具体应根据菌种特性决定。

贮藏时要注意环境温度不能太高，以防霉菌通过棉塞进入管内。

因此，若用棉塞，可用干净的硫酸纸或牛皮纸包扎棉塞，即可减少污染的机会，也可防止培养基干燥。

除草菇菌种外，其他食用菌菌种都能采用此法贮藏。

2.液体石蜡贮藏法取化学纯液体石蜡(要求不含水分、不霉变)装于三角瓶中加棉塞并包纸，在1公斤/平方厘米压力下灭菌1小时，再放入40℃恒温箱中数天，以蒸发其中水分，至石蜡油完全透明为止。

将处理好的石蜡油移接在空白斜面上，在28℃-30℃温度下培养2-3天，确定无杂菌生长方可使用。

然后用无菌操作的方法把液体石蜡注入待贮藏的斜面试管中。

注入量以高出培养基斜面1-1.5厘米为宜，塞上橡皮塞，用固体石蜡封口，直立于低温干燥处贮藏。

贮藏时间在1年以上，在低温下，保藏时间还可延长。

3.沙土管贮藏法取河沙用水浸泡洗涤数次，过60目筛除去粗粒，再用10%盐酸浸泡2-4小时，除去其中有机物质，再用水冲洗至pH值达到中性，烘干备用。

同时取贫脊土或菜园土用水浸泡，使其呈中性，沉淀后除去上清液，烘干碾细，用100目筛子过筛，将处理好的沙与土以(2-4)：1比例混匀，用磁铁吸出其中的铁质，然后分装小试管或安瓿内，每管装量0.5-2克，塞棉塞，用纸包扎灭菌(1.5公斤/平方厘米，1小时)，再干热灭菌(160℃，2-3小时)1-2次，进行无菌检验，合格后使用。

将已形成孢子的斜面菌种，在无菌条件下注入无菌水3-5毫升，刮菌薹，制成菌悬液，再用无菌吸管吸取菌液滴入沙土管中，以浸透沙土为止。

将接种后的沙土管放入盛有干燥剂的真空干燥器内，接上真空泵抽气数小时，至沙土干燥为止。

真空干燥操作需在孢子接入后48小时内完成，以免孢子发芽。

食用菌菌种保藏的方法保藏食用菌菌种的方法很多，常采用控制温度、水活度、氧气和营养等因素的方法，最大限度降低或抑制食用菌菌丝体的生长从而达到菌种保藏的目的。

首先要挑选优良的纯菌种，包括菌丝体和孢子；其次，根据其生理、生化特点，人为的创造低温、干燥或缺氧等条件，抑制菌丝体的代谢作用，使其生命活动降低或处于休眠状态，从而延长菌种生命以及使菌种保持原有的性状，防止变异。

1 利用菌丝体保存的方法① 琼脂斜面低温保藏将要保藏的菌种接种在PDA斜面培养基上培养，在28～32℃下培养，待菌丝体长满斜面时，把试管的棉塞换成无菌橡皮塞，并用石蜡封口，置于4℃的冰箱低温保藏，每隔2～4个月转管1次。

该种方法保藏的菌种不易老化，生命力强，接种后萌发快，能保持优良性状，但转接周期短，污染风险大，且菌株易变异，易造成菌株衰退。

② 液体石蜡常温保藏法此法亦称矿物油保藏法。

先将化学纯石蜡油（无色、透明的黏稠液体）装于三角瓶中，塞上棉塞并用牛皮纸包裹，放入高压锅中灭菌30min，然后置于40℃的恒温箱中，让水分蒸发至完全透明后备用，使用前先将石蜡油做无菌检查。

在无菌条件下，用无菌吸管将无菌石蜡油注入已长好的斜面试管中，用量以高出斜面顶端1cm为宜，目的是使菌种与空气隔绝，阻止水分蒸发，降低细胞的生长代谢活动，然后用蜡封口后，直立放入室内干燥处。

15～25℃，可以保藏菌种5年。

该方法的优点是成本较低，保藏时间较长，长达数年甚至几十年；缺点是转接培养较慢，往往需要转接培养2～3次，才能除去菌丝体上的液体石蜡，使菌种恢复正常生长。

③ 蒸馏水保藏法蒸馏水保藏方法适用于绝大多数食用菌菌种保藏。

该法是用无菌蒸馏水保存食用菌菌丝体，过程为：用移液器吸取4mL 无菌蒸馏水注入无菌安瓶中，将发育成熟的菌落用无菌接种针挑取数块放入安瓶中，加盖密封，室温保存。

据报道，真菌用蒸馏水保藏可保存1～20年，而且菌株污染少。

④ 盐水保藏法食盐溶液具有高渗透性，对杂菌孢子的萌发具有较强的抑制和杀灭作用，从而减少或避免保藏期间菌种的污染；同时，食盐中含有食用菌生长所必需的钠、镁、钙等金属离子，对菌丝的生长有促进作用，转管后，由于水势差，接种菌株吸水能力强，易恢复，成活率较高。