人卵巢癌细胞系A2780肿瘤干细胞分离培养与鉴定

人卵巢癌干细胞的分离、鉴定及其特异性microRNA的筛选共3篇人卵巢癌干细胞的分离、鉴定及其特异性microRNA的筛选1人卵巢癌干细胞的分离、鉴定及其特异性microRNA的筛选卵巢癌是妇女常见的恶性肿瘤之一，也是最具侵袭性和死亡率的妇科恶性肿瘤之一。

近年来，研究表明卵巢癌干细胞（OCSCs）在卵巢癌的发生、发展和复发中起着非常重要的作用。

OCSCs具有高度的增殖、分化和肿瘤形成能力，容易逃避传统治疗手段的检测和清除。

因此，深入研究OCSCs的分离、鉴定和治疗靶点，对于提高卵巢癌的治疗效果和预后具有非常重要的意义。

OCSCs的分离主要依赖于某些细胞表面分子的识别和分离技术。

研究表明，CD133，CD44和CD117等基因标记物是OCSCs表面的主要特征，可以作为OCSCs的识别和定位标志。

因此，这些表面分子的选择性抗体可以用于OCSCs的分离和富集。

通过流式细胞术（FACS）和磁珠分离技术等先进的细胞分离技术，可以从卵巢癌患者的肿瘤组织样本中纯化出高含量的OCSCs种群。

随着单细胞测序技术的发展，进一步可以研究OCSCs的基因、蛋白、代谢和功能特性等。

OCSCs的鉴定是指对其肿瘤形成、侵袭战略和治疗抵抗性的研究，具有非常重要的临床意义。

研究表明，OCSCs在细胞凋亡、DNA修复、肿瘤增殖和脱靶治疗等方面具有突出的特性。

因此，通过对OCSCs的微观和宏观观察，可以识别OCSCs的不同亚群，并进一步探究其分化程度、增殖模式、治疗耐受性等特征。

同时，通过体内和体外肿瘤模型的建立和治疗实验，可以验证OCSCs的肿瘤形成能力和抗药性。

最近的研究还表明，OCSCs还具有干细胞外泌体通路调控的特性，通过这种方式影响癌细胞的行为和治疗反应。

microRNA（miRNA）是非编码小RNA分子，在细胞代谢、增殖、分化、凋亡和信号转导等方面具有重要的调节作用。

研究表明，miRNA在OCSCs的增殖、分化、转移和耐受性等方面起着非常关键的作用。

肿瘤干细胞的分离培养及其在肿瘤治疗中的应用随着医学技术的不断前进，对肿瘤治疗的研究也越来越深入。

其中，肿瘤干细胞的研究备受关注。

肿瘤干细胞是指在肿瘤中所存在的一小部分细胞，能够不断分裂增殖，并给予肿瘤再生的可能性。

因此，肿瘤干细胞的分离与培养以及在肿瘤治疗中的应用，成为了当今医学研究的热点话题。

一、肿瘤干细胞的分离方法目前，分离肿瘤干细胞的方法主要包括紫杉醇浸润法、细胞表面标记法、限制稀释法等。

其中，限制稀释法是较为常用的一种。

限制稀释法是将单个肿瘤细胞样本通过连续的稀释、培养与观察，逐渐筛选出肿瘤干细胞。

它通过观察单个细胞的生长、分裂、增殖情况，来得出大量肿瘤细胞当中的干细胞。

虽然这种方法过程复杂、费时费力，但是它能够筛选出更加纯度高的肿瘤干细胞。

二、肿瘤干细胞的培养方法早期肿瘤干细胞的培养，主要采用血清补充的液体培养基进行细胞的培养。

但是在这种培养条件下，肿瘤干细胞很容易分化。

因此，近年来，越来越多的实验室采用无血清培养条件进行肿瘤干细胞的培养，以维持肿瘤干细胞的稳定状态。

无血清培养条件下，需要选择不同种类的培养基，添加多种生长因子与细胞基质，来模拟肿瘤干细胞自身的生长环境。

同时，还需注意对细胞的密度、温度、pH 值、CO2浓度等生理性因素的控制。

三、肿瘤干细胞在肿瘤治疗中的治疗应用肿瘤干细胞的研究在肿瘤治疗中，具有重要的应用价值。

首先，肿瘤干细胞作为肿瘤治疗的靶点，开启了新的临床治疗途径。

其次，肿瘤干细胞可以用于评估肿瘤药物的治疗效果，这一评价标准能够更为准确反映药物的实际效果。

此外，肿瘤干细胞还可以用于评估肿瘤的预后情况，帮助医生选择更加有效的治疗方式。

总之，肿瘤干细胞的研究在肿瘤治疗研究领域，具有非常重要的价值。

分离肿瘤干细胞、培养肿瘤干细胞以及开展针对肿瘤干细胞的治疗策略，将有助于提高肿瘤治疗的效果，为患者带来更好的治疗效果。

World Journal of Cancer Research 世界肿瘤研究, 2015, 5, 43-51Published Online July 2015 in Hans. /journal/wjcr/10.12677/wjcr.2015.53007In Vivo Screening with Ph.D.-7TMand Identification of OvarianCancer A2780 Cell TargetedHeptapeptidesYucan Li, Guangfu Yin*, Ximing Pu, Fei YouCollege of Materials Science and Engineering, Sichuan University, Chengdu SichuanEmail: *nic0700@Received: Jun. 20th, 2015; accepted: Jul. 6th, 2015; published: Jul. 9th, 2015Copyright © 2015 by authors and Hans Publishers Inc.This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY)./licenses/by/4.0/AbstractIn order to select the specific ligands for ovarian cancer, the in vivo phage display technology has been applied to screen the peptide targeting to ovarian cancer A2780 cells. Firstly, ovarian cancer A2780 cells were inoculated into the armpit of nude mice to establish a tumor-bearing animal model. Then in vivo biopanning was conducted for 3 rounds with the Ph.D.-7TM phage-displayed peptide library, and individual phage clones were picked for DNA sequencing after the 3rd round.Among the picked phage clones, the clone PC-H displaying heptapeptide HGGVRLY (peptide HGG) accounted for as high as 27 percent. The identification results by ELISA tests, in vivo and in vitro phage binding assays, competitive binding assays, and immunofluorescence assays indicated that both the phage clone PC-H and the peptide HGG could be preferentially bounded to A2780 cells and then concentrated in tumor tissues. Furthermore, the results of MTT assay and scratch assay revealed that peptide HGG possessed low cytotoxicity. Altogether, the peptide HGG screened with the Ph.D.-7TM exhibited the high affinity to A2780 cells and the targeting to the ovarian cancer tis-sues, and would have great potentials in the targeting drug delivery system for ovarian cancer.KeywordsOvarian Cancer A2780 Cells, In Vivo Biopanning, Phage-Displayed Peptide Library, Targeting,Heptapeptide*通讯作者。

卵巢癌耐药细胞株A2780-CP的建立及CD44+肿瘤干细胞功能验证目录第一章前言 (1)第二章材料与方法 (3)2.1实验材料 (3)2.2培养基及主要试剂 (3)2.3实验所用设备 (4)2.4主要试剂的配制 (4)2.5实验方法 (5)第三章结果与分析 (11)3.1 A2780-CP耐药细胞株和A2780普通细胞株生物学特性差别 (11)3.2 A2780-CP与A2780肿瘤干细胞生物学特性验证 (13)第四章讨论 (19)第五章结论 (22)参考文献 (23)综述 (26)卵巢癌干细胞与多药耐药之间的关系 (26)参考文献 (35)中英文缩略词表 (41)致谢 (42)卵巢癌耐药细胞株A2780-CP的建立及CD44+肿瘤干细胞功能验证第一章前言第一章前言卵巢癌是妇科常见三大肿瘤之一，其发病率低于子宫内膜癌，然而死亡率却位居妇科肿瘤之首[1]，对妇女生命健康有的极大的威胁。

卵巢的胚胎发育，组织解剖及内分泌功能相对较复杂，从而导致卵巢癌在早期表现出不明显的症状，并缺乏行之有效的早期诊断方法。

而很多患者发现时已经处于中晚期，无法进行手术治疗，需要借助抗肿瘤药物进行治疗。

虽然近年来各种小分子药物、抗体药物、免疫疗法等层出不穷，但顺铂和紫杉醇依然是卵巢癌的一线用药方式，可是80%-85%的卵巢癌患者会产生药物耐性，导致治疗失败[2]。

现有多数研究认为细胞耐药的根源是肿瘤干细胞，一种肿瘤组织中存在的一小群自我更新并多向分化的细胞[3]。

这部分细胞高表达耐药相关基因，可以将药物泵出体外减少对自身的伤害；另一方面，化疗药物可明显杀伤快速分裂的细胞，而处于静止状态的肿瘤干细胞具有的这一独有特性使之有利于避免被肿瘤药物杀伤[4]。

关于肿瘤干细胞的起源有多种学说，国内外学说现普遍接受的是：肿瘤干细胞很有可能来自突变了的成体干细胞。

肿瘤的产生是由于突变长期累积的结果，因而这一过程相当漫长。

而已经失去继续分裂能力的分化的体细胞，其生命周期短，无法完成多个基因突变的累积。

基于气相色谱-质谱的代谢组学技术研究紫杉醇诱导的卵巢癌A2780耐药株的生物标志物崔广波;刘晓昕【摘要】采用气相色谱-质谱(GC-MS)的代谢组学技术研究人卵巢癌紫杉醇耐药细胞A2780/Taxol与敏感细胞之间内源性代谢物的差异,初步探讨A2780/Taxol细胞生物学特性和耐药机制.使用浓度梯度法建立A2780/Taxol细胞,并通过细胞形态观察,生长曲线测定,药物敏感试验,细胞内多药耐药相关蛋白(MRP1)、P-糖蛋白(p-gp)和肺耐药蛋白(LRP)的水平测定,评价A2780/Taxol细胞的生物学特性.同时,采用GC-MS的代谢组学方法分别对卵巢癌敏感细胞株与紫杉醇耐药细胞株的代谢物指纹图谱进行分析,并通过偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)对代谢组学数据进行多元处理.结果表明:人卵巢癌细胞敏感细胞与耐药细胞相比,其中琥珀酸、天冬氨酸、果糖、肌醇等13种内源性代谢物存在显著性差异.糖降解、三羧酸(TCA)循环、肌苷代谢途径发生了异常改变,这些差异改变可能与卵巢癌细胞的耐药机制有关.【期刊名称】《南京工业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2016(038)001【总页数】6页(P111-116)【关键词】卵巢癌;紫杉醇;耐药蛋白;代谢组学【作者】崔广波;刘晓昕【作者单位】南京工业大学药学院,江苏南京210009;南京工业大学药学院,江苏南京210009【正文语种】中文【中图分类】R979.1卵巢癌是现今女性生殖器官常见恶性肿瘤之一,其发病率虽次于子宫颈癌和子宫体癌,死亡率却高居各类妇科肿瘤的首位,对妇女生命健康造成严重威胁[1]。

目前,卵巢癌的规范性治疗一般是肿瘤细胞减灭术并辅以术后化疗。

紫杉醇是20世纪90年代问世的抗微管类抗癌药,是目前临床治疗卵巢癌中最常用的化疗药之一[2]。

但不幸的是,超过80%的病人会因为肿瘤细胞对紫杉醇产生耐药性而使得化疗失败,肿瘤复发[3]。

因此,研究肿瘤细胞对紫杉醇产生耐药的发生机制,对临床探索预防和逆转卵巢癌耐药性,具有十分重要的意义。

肿瘤干细胞的分离和鉴定技术研究肿瘤干细胞是指一种具有自我更新能力的细胞，同时又可以分化成某些或所有肿瘤细胞的一种细胞。

它是肿瘤形成、生长、传播过程中至关重要的组成部分。

因为肿瘤干细胞具有高度的分化潜能和无限的增殖潜能，所以它们可以在充分的核苷酸切片的条件下自我更新、维持和增殖。

而且在化疗和放疗的过程中，肿瘤干细胞可以存活，这是导致肿瘤治疗失败以及肿瘤复发的原因之一。

因此，寻求分离和鉴定肿瘤干细胞的方法和技术至关重要。

目前分离和鉴定肿瘤干细胞的主要方法包括：1. 流式细胞仪流式细胞仪是一种可以对细胞进行分类、鉴定和计数的仪器。

通过标记分子，可以分离出具有肿瘤干细胞表型的细胞，如CD133、CD44、CD24和EpCAM。

但是，CD133和CD44等标记分子也可表达于非肿瘤干细胞，因此在使用流式细胞仪时需要结合其他的标记分子和鉴定方法，以提高分类和准确性。

2. 磁珠分选法磁珠分选法是一种通过对细胞表面标记抗原进行特异性结合和隔离的方法。

一般来说，将抗CD133的磁珠与肿瘤细胞混合，并在磁力场中分离，从而分离出肿瘤干细胞。

这种方法具有操作简单、高通量等优点，但仍然需要结合其他标记分子和方法以提高准确性。

3. 单细胞培养单细胞培养是一种将肿瘤组织显微切片后，将细胞分散到培养皿中，以培养单个肿瘤干细胞为主要目标的方法。

这种方法可以更加准确地分离出肿瘤干细胞，但是操作复杂、耗时长。

4. 体内鉴定体内鉴定是通过将标记细胞注射到小鼠等实验动物体内，观察肿瘤形成和生长的过程，进而鉴定出肿瘤干细胞。

这种方法可以检测到复杂的细胞肿瘤形成，但由于其时间和成本等原因，常常被用作其它方法的验证和分析。

需要注意的是，肿瘤干细胞的分离和鉴定不仅要依赖于单一的标记分子和方法，还需要结合多项标记分子和细胞生物学特征、分布情况等进行综合鉴定，以提高准确性和可靠性。

肿瘤干细胞的分离和鉴定技术对于肿瘤治疗、预防和管理具有重要意义。

通过分离和鉴定肿瘤干细胞，可以有效地评估肿瘤的潜在危险性、筛选出更加有效的治疗方法，更好地指导临床治疗、降低肿瘤复发率和死亡率。

《大蒜素对人卵巢癌细胞株A2780的作用及机制》一、引言卵巢癌是一种常见的女性生殖系统恶性肿瘤，其发病率和死亡率均较高。

目前，对于卵巢癌的治疗主要依赖于手术和化疗，但治疗效果并不理想，且易产生耐药性。

因此，寻找新的治疗方法和药物成为研究的重要方向。

近年来，天然药物的研究逐渐受到关注，其中大蒜素因其具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性而备受瞩目。

本文旨在探讨大蒜素对人卵巢癌细胞株A2780的作用及机制，为卵巢癌的治疗提供新的思路和方向。

二、大蒜素简介大蒜素是从大蒜中提取的一种天然有机硫化物，具有广泛的生物活性。

其抗肿瘤作用已得到一定的研究证实，主要通过抑制肿瘤细胞的增殖、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭和转移等途径发挥抗肿瘤作用。

三、大蒜素对人卵巢癌细胞株A2780的作用1. 抑制细胞增殖：研究表明，大蒜素能够显著抑制人卵巢癌细胞株A2780的增殖，其作用呈剂量依赖性。

通过流式细胞术检测，发现大蒜素能够诱导细胞周期停滞，从而抑制细胞增殖。

2. 促进细胞凋亡：大蒜素能够诱导人卵巢癌细胞株A2780发生凋亡，表现为细胞核固缩、染色质边集等典型的凋亡形态学改变。

同时，大蒜素还能够增加细胞内活性氧水平，激活Caspase 家族等凋亡相关蛋白，进一步促进细胞凋亡。

3. 抗侵袭和转移：大蒜素能够抑制人卵巢癌细胞株A2780的侵袭和转移能力，降低细胞外基质的降解，从而减缓肿瘤的进展。

四、大蒜素的作用机制1. 调节相关基因和信号通路：大蒜素能够调节肿瘤细胞中相关基因和信号通路的表达，如NF-κB、MAPK等，从而发挥抗肿瘤作用。

2. 抗氧化作用：大蒜素具有抗氧化作用，能够清除细胞内的自由基，减轻氧化应激对细胞的损伤。

3. 免疫调节作用：大蒜素还能够调节机体免疫功能，增强机体的抗肿瘤能力。

五、结论综上所述，大蒜素对人卵巢癌细胞株A2780具有显著的抑制作用，能够抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、抗侵袭和转移。

其作用机制可能与调节相关基因和信号通路、抗氧化作用、免疫调节作用等有关。