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流感嗜血杆菌鉴定依据流感嗜血杆菌，这个名字听起来就让人觉得有点吓人，仿佛是从实验室里逃出来的怪物。
它就是一种会让人感冒的细菌，名字听起来特别高大上，但实质上就是我们生活中常见的“小麻烦”。
这家伙经常出现在寒冷的季节，尤其是冬天，像个不速之客，突然闯入我们的生活，让人感到不舒服。
说到这个，咱们先来聊聊它的“身份识别”吧，毕竟要识别一个家伙，得了解它的特征。
流感嗜血杆菌可不是随便谁都能随便说出名字的。
要想准确识别它，首先得看样子。
它长得细细长长，有点像细长的棒棒糖。
别小看这家伙，表面光滑，里面却藏着不少“秘密”。
用显微镜一看，哎呀，真是让人心惊胆战。
咱们通常会通过培养的方法来找它的“踪迹”。
把样本放在培养基上，看它能不能长出来。
长出来了，那就基本上可以说它来了，没长出来？嗯，可能是你运气好，暂时躲过一劫。
咱们还得用到一些化学试剂，听起来有点专业，其实就是给这个家伙做个“体检”。
这些试剂能帮助我们判断它的“脾气”。
比如，流感嗜血杆菌对某些抗生素特别敏感，那咱们就知道用什么药了。
就像你去医院，医生要给你做检查，结果一看，哎呀，你这个感冒得治治啊。
细菌的“脾气”可大可小，真是让人捉摸不定。
说到这里，不得不提的是流感嗜血杆菌的传播途径。
它可不是个安分守己的家伙，特别喜欢跟人打交道。
通过飞沫传播，像是个不请自来的小朋友，随时随地都想跟你玩。
要是你不小心被感染了，身体就会发出警报。
咳嗽、发烧、喉咙痛，哎哟，真是让人感觉糟糕透了。
每当这个时候，大家都会感慨：真希望它能安分点，别来骚扰我！说到预防，咱们得提高警惕。
这种细菌最喜欢在人多的地方滋生，尤其是学校、办公室，简直就是它的“乐园”。
保持良好的卫生习惯，勤洗手、戴口罩，可是最基本的“防护措施”。
就像打仗一样，先筑好防线，再打敌人，才能避免被打得满头是包。
平常多锻炼身体，增强免疫力，才能让这些家伙望而却步，毕竟强大的防线是最好的保护。
流感嗜血杆菌还会给我们带来一些不必要的麻烦。
流感嗜血杆菌的生化鉴定流感嗜血杆菌（Hib）是一种革兰阴性菌，可引起多种严重的感染，包括脑膜炎、肺炎和败血症。
流感嗜血杆菌的生化鉴定是鉴定和表征该菌种的关键步骤，对于选择适当的抗菌治疗和预防措施至关重要。
血平板培养流感嗜血杆菌在血平板上形成圆形、扁平、灰色菌落。
菌落周围通常会出现溶血环，这表明菌株具有产生溶血素的能力。
氧化酶试验流感嗜血杆菌是氧化酶阳性的，这表明它能够利用氧气作为终末电子受体。
将菌株悬浮液滴在滤纸上，然后加入氧化酶试剂（如四甲基对苯二胺）。
如果菌株是氧化酶阳性的，滤纸会变为紫色。
过氧化氢酶试验流感嗜血杆菌是过氧化氢酶阴性的，这表明它无法分解过氧化氢。
将菌株悬浮液滴在滴定管中，然后加入过氧化氢溶液。
如果菌株是过氧化氢酶阳性的，将产生气泡。
尿素酶试验流感嗜血杆菌是尿素酶阳性的，这表明它能够分解尿素。
将菌株悬浮液滴在尿素琼脂平板上。
如果菌株是尿素酶阳性的，平板的颜色会变为粉红色。
β-半乳糖苷酶试验流感嗜血杆菌是β-半乳糖苷酶阴性的，这表明它无法分解β-半乳糖苷。
将菌株悬浮液滴在含有β-半乳糖苷的琼脂平板上。
如果菌株是β-半乳糖苷酶阳性的，平板的颜色会变为黄色。
磷酸盐酶试验流感嗜血杆菌通常是磷酸盐酶阳性的，这表明它能够分解磷酸盐。
将菌株悬浮液滴在磷酸盐琼脂平板上。
如果菌株是磷酸盐酶阳性的，平板的颜色会变为黄色。
吲哚试验流感嗜血杆菌是吲哚阴性的，这表明它无法将色氨酸转化为吲哚。
将菌株悬浮液滴在含有色氨酸的琼脂平板上。
如果菌株是吲哚阳性的，平板的颜色会变为红色。
Voges-Proskauer试验流感嗜血杆菌是 Voges-Proskauer 阴性的，这表明它无法将丙酮酸转化为丁二酮。
将菌株悬浮液接种在 MR-VP 培养基中。
如果菌株是 Voges-Proskauer 阳性的，培养基的颜色会变为红色。
抗生素敏感性试验抗生素敏感性试验对于确定流感嗜血杆菌对特定抗生素的敏感性至关重要。
这有助于指导抗菌治疗的选择。
流感嗜血杆菌知识点总结流感嗜血杆菌的发现1892年，德国科学家Pfeiffer首次在流感患者的呼吸道分离出嗜血杆菌，因此命名为Streptococcus influenzae。
之后，人们发现流感嗜血杆菌分为六种血清型（a-f），其中a 型是最具致病性的类型。
在过去几十年中，随着疫苗的广泛接种，流感嗜血杆菌感染的发病率有所下降，但仍然是严重的人类病原体。
流感嗜血杆菌特征流感嗜血杆菌是革兰氏阴性杆菌，不发酵葡萄糖，通常呈半透明、呈圆形、需氧性。
其表面有多种抗原，能引起机体免疫反应。
流感嗜血杆菌也具有多种毒素，包括内毒素、外毒素和胞间毒素，这些毒素会对宿主细胞产生危害。
此外，流感嗜血杆菌的细胞壁也含有内毒素和其他病原性因子。
流感嗜血杆菌的感染途径流感嗜血杆菌主要通过呼吸道传播，包括飞沫传播、空气传播和密切接触传播。
它可以在喉部、鼻部和上呼吸道黏膜上引起感染。
此外，也有报道显示，它可能通过性接触传播。
流感嗜血杆菌的致病机制流感嗜血杆菌的致病性主要表现为多种毒素的作用和其侵袭性。
它主要通过以下途径产生致病作用：1. 毒素作用：流感嗜血杆菌产生的毒素包括内毒素（LPS）、外毒素（如肺炎球菌蛋白）和胞内毒素等。
这些毒素对宿主的细胞和组织会产生直接的伤害，导致炎症和组织损伤。
2. 细菌侵袭性：流感嗜血杆菌的菌体结构和分泌的一些酶也能使其更具有侵袭性。
3. 抗药物性：流感嗜血杆菌容易产生耐药性，这使得治疗变得更加困难。
流感嗜血杆菌感染的疾病流感嗜血杆菌感染可以导致多种疾病，主要包括：1. 中耳炎：流感嗜血杆菌是导致儿童中耳炎的最常见细菌感染病原体之一。
它可以引起剧烈的耳痛和发热。
2. 哮喘：有研究表明，流感嗜血杆菌感染可以诱发哮喘发作。
3. 脑膜炎：流感嗜血杆菌是造成脑膜炎的重要细菌。
严重的脑膜炎可以导致生命威胁。
4. 肺炎：在免疫系统受损或有基础疾病的人群中，流感嗜血杆菌感染可导致肺炎。
5. 整个呼吸道感染：流感嗜血杆菌也可以导致上呼吸道感染，甚至是严重的全身性感染。
流感嗜血杆菌保存方法引言流感嗜血杆菌（Streptococcus pyogenes）是一种革兰氏阳性球菌，是导致流感的主要病原菌之一。
这种细菌具有高度的传染性，可以通过空气飞沫传播，引起各种疾病，包括感冒、喉炎、中耳炎、肺炎等。
为了研究该菌株的性质和防治策略，科学家们需要进行该菌株的保存和传播。
本文将介绍流感嗜血杆菌的保存方法，帮助科研工作者更好地保存和利用这种重要的微生物资源。
流感嗜血杆菌的保存方式制备液氮冻存物1. 培养基准备：选择适合流感嗜血杆菌生长的培养基，如大肠杆菌培养基（LB 培养基）、血琼脂培养基等。
2. 处理培养基：将培养基煮沸灭菌，待其冷却至接种温度（通常为40-45C）。
3. 增菌：将流感嗜血杆菌菌株接种于制备好的培养基中，并在合适的温度下孵育（通常为37C，静置24小时）。
4. 收集菌液：从培养基中采集流感嗜血杆菌菌液，将其转移到离心管中。
5. 离心：以1000-4000g的速度离心，将流感嗜血杆菌沉淀到底部。
6. 去除上清：去除底部混浊液体中的上清，并保留流感嗜血杆菌沉淀。
7. 冻存：将流感嗜血杆菌沉淀使用10%甘油溶液处理后，存储于-80C的液氮中。
使用液氮冻存物1. 取出冻存物：从液氮储藏罐中取出冻存物。
2. 解冻：将冻存物快速解冻于37C水浴中，或将其在器械上恢复活性。
3. 接种：将解冻的流感嗜血杆菌传入新的培养基中，如LB培养基。
4. 孵育：在适当的温度下（通常为37C）静置孵育。
5. 观察：观察细菌生长情况，进行必要的分析和实验。
注意事项1. 实验操作：进行流感嗜血杆菌的保存和使用时，应遵循严格的无菌操作规程，以防止外部微生物的污染。
2. 容器选择：在保存和传播过程中，选择适合流感嗜血杆菌生长的培养基和容器，如离心管、冻存管等。
3. 标签标注：在培养基和容器上标注流感嗜血杆菌的信息，包括菌株编号、保存日期等，以便后续使用。
4. 储存条件：流感嗜血杆菌的冻存物应储存于-80C的液氮中，以确保其长期保存。
流感嗜血杆菌考试题一、单选题（每题5分，共40分）1. 流感嗜血杆菌是一种（）。
A. 革兰氏阳性菌B. 革兰氏阴性菌C. 真菌D. 病毒答案：B。
解析：流感嗜血杆菌是革兰氏阴性菌，这是它的基本生物学特性哦。
2. 流感嗜血杆菌主要感染（）。
A. 呼吸道B. 消化道C. 泌尿道D. 神经系统答案：A。
解析：它常常在呼吸道兴风作浪，引起呼吸道感染呢。
3. 流感嗜血杆菌的名字中“流感”是因为（）。
A. 它引起流感B. 它最初被认为与流感有关C. 它和流感病毒共生D. 它能抵抗流感答案：B。
解析：其实它并不引起流感，只是最初被误认和流感有关系，就有了这个名字啦。
4. 预防流感嗜血杆菌感染的有效方法不包括（）。
A. 接种疫苗B. 勤洗手C. 多吃甜食D. 避免接触患者答案：C。
解析：多吃甜食可不能预防它呢，接种疫苗、注意卫生、避免接触患者才是正确的做法。
5. 流感嗜血杆菌在显微镜下的形态通常是（）。
A. 球形B. 杆状C. 螺旋形D. 不规则形答案：B。
解析：从名字就能猜到一点啦，它是杆状的细菌呢。
6. 流感嗜血杆菌感染后可能出现的症状不包括（）。
A. 咳嗽B. 发热C. 皮肤瘙痒D. 呼吸急促答案：C。
解析：皮肤瘙痒一般不是它感染后的症状，咳嗽、发热、呼吸急促比较常见。
7. 以下哪种环境不利于流感嗜血杆菌生存（）。
A. 温暖潮湿B. 干燥高温C. 阴暗潮湿D. 低温潮湿答案：B。
解析：干燥高温的环境会让它很不舒服，难以生存哦。
8. 流感嗜血杆菌的传播途径主要是（）。
A. 空气飞沫B. 血液传播C. 母婴传播D. 接触传播答案：A。
解析：它主要通过空气飞沫在人与人之间传播呢。
二、多选题（每题8分，共40分）1. 以下哪些人群容易感染流感嗜血杆菌（）。
A. 儿童B. 老年人C. 免疫力低下者D. 健康成年人答案：ABC。
解析：儿童、老年人和免疫力低下者抵抗力差，容易被它盯上，健康成年人相对没那么容易感染。
2. 流感嗜血杆菌感染可能引发的疾病有（）。
嗜血杆菌（学名Haemophilus influenzae）是流感嗜血杆菌的简称，前称费佛氏杆菌（或译拜菲尔氏菌）或流感杆菌，属孤菌科嗜血杆菌属。
是一种没有运动力的革兰氏阴性杆菌。
嗜血杆菌是1892年由费佛博士在流行性感冒的瘟疫中发现。
嗜血杆菌一般都是好氧生物，但可以成长为兼性厌氧生物。
流感嗜血杆菌最初被误认为是流行性感冒的病因，但直至1933年，当发现流行性感冒的病毒性病原后，才消除了这种误解。
不过，流感嗜血杆菌仍是会导致其他不同种类的病症。
因其稀少的基因体，流感嗜血杆菌是第一种排列全数基因体，而又能自由生存的生物。
它的基因体包含了1,830,140的DNA碱基对及1740个基因。
流感嗜血杆菌的基因排序计划由基因组研究所策划，于1995年完成及刊登于《科学》杂志上。
流感嗜血杆菌生长所需的V因子为NADH，X因子为血红素，凝血因子V和X均为肝脏产生的球蛋白。
流感嗜血杆菌需要Х、Ⅴ两种因子，Ⅹ因子是高铁血红素，Ⅴ因子是辅酶Ⅰ或辅酶Ⅱ，两者为细菌呼吸所必需.比较常见的需要V因子和X因子的细菌是嗜血杆菌属的细菌，如流感嗜血杆菌、杜克雷嗜血杆菌（软下疳的病原体)、副流感嗜血杆菌、溶血嗜血杆菌、副溶血嗜血杆菌、嗜泡沫嗜血杆菌、副嗜泡沫嗜血杆菌、埃及嗜血杆菌等.我们一直在用英国Oxoid公司的V因子、X因子、V+X因子纸片，还有Optochin纸片，质量很好的。
Chocolate II Agar 第二巧克力琼脂生长因子(growthfactor)是一类对微生物正常代谢必不可少且不能用简单的碳源或氮源自行合成的有机物。
它的需要量一般很少。
广义的生长因子除了维生素外，还包括碱基、卟啉及其衍生物、甾醇、胺类、C4～C6的分枝或直链脂肪酸，以及需要量较大的氨基酸；而狭义的生长因子一般仅指维生素。
生长因子虽是一种重要的营养要素，但它与碳源、氮源和能源不同，并非任何一种微生物都须从外界吸收的。
各种微生物与生长因子的关系可分以下几类：(1)生长因子自养型微生物(auxoautotrophs)多数真菌、放线菌和不少细菌，如E．coli(大肠杆菌)等都是不需要外界提供生长因子的生长因子自养型微生物。
(2)生长因子异养型微生物(auxoheterotrophs) 它们需要多种生长因子，如乳酸细菌、各种动物致病菌、原生动物和支原体等(表5-5)。
例如，一般的乳酸菌都需要多种维生素；许多微生物及其营养缺陷型(突变株)都需要不同的嘌呤、嘧啶碱基；Haemophilusinfluenzae(流感嗜血杆菌)需要卟啉及其衍生物作为其生长因子；支原体常需要甾醇；Haemophilusparahaemolyti-cus(副溶血嗜血菌)需要胺类；一些瘤胃微生物需要C4～C6分枝或直链脂肪酸；某些厌氧菌如Bacteroidesmelaninogenicus(产黑素拟杆菌)需要维生素K和氯高铁血红素，等等。
生长因子异养型的微生物可用作维生素等生长因子生物测定时的试验菌。
(3)生长因子过量合成微生物有些微生物在其代谢活动中，会分泌出大量的维生素等生长因子，因此，它们可以作为维生素等的生产菌。
最突出的例子是生产维生素B2的Eremothe-ciumashbya(阿舒假囊酵母，其B2产量可达2.5g/L发酵液)和Ashbyagossypii(棉阿舒囊霉)；生产维生素B12的Propionibacteriumshermanii(谢氏丙酸杆菌)、一些链霉菌(如Streptomycesolivaceus[橄榄色链霉菌，3.3mg/L]，S．griseus[灰色链霉菌，0.3mg/L])和产甲烷菌等。
在配制微生物培养基时，如果配制的是天然培养基(详后)，则可加入富含生长因子的原料——酵母膏(yeastextract)、玉米浆(cornsteepliquor)、肝浸液(liverinfusion)、麦芽汁(maltextract)或其他新鲜的动植物组织浸液(表5-6，5-7)；如果配制的是组合培养基，则可加入复合维生素溶液The stored isolates were grown overnight on chocolate agar plates (BD Diagnostics, Sparks,MD) at37 C with 5%CO2 in a humid environment.H.influenzae isolates, maintained with Minimal passaging, were stored in skim milk at 80°C and were cultured for testing on chocolate II agar (BD Diagnostics) at 37°C in the presence of 5% CO2.卫星现象:当流感嗜血杆菌和金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上共同培养时由于金黄色葡萄球菌能合成较多的V因子，能促进流感嗜血杆菌生长，故在金黄色葡萄球菌菌落周围生长的流感嗜血杆菌菌落较大，距离金黄色葡萄球菌菌落较远的流感嗜血杆菌菌落越小，此为“卫星现象”。
X因子、V因子生长试验：在以酵母浸出粉、牛肉浸出粉、酪蛋白水解物为基础培养基上，未加X因子和V因子时，流感嗜血杆菌不生长，将分别浸有X因子V因子的纸片贴于该基础培养基上，单贴有X因子或单贴有V因子纸片的平碟流感嗜血杆菌不生长，同时贴有X 因子和V因子纸片的平碟，流感嗜血杆菌可生长，在两纸片中线附近菌落较大。
此两项试验均为证实培养基中需含有X、V因子，流感嗜血杆菌才能生长，本质上没有区别。
卫星现象（satellite phenomenon）概念：当将金黄色葡萄球菌与流感嗜血杆菌在同一血琼脂平板上共同培养时，由于前者能合成较多的V因子，促进后者生长，故在金黄色葡萄球菌菌落周围生长的流感嗜血杆菌菌落较大，距离越远的菌落越小，此现象称为“卫星现象”（satellite phenomenon）方法：挑取可疑菌落密涂划种于血平板上和M-H平板上，再将金黄色葡萄球菌点种或划种于其上，35℃孵育24 h结果：如葡萄球菌菌落邻近处被检菌的菌落较大，远离葡萄球菌落邻近处被检菌的菌落较大，远离葡萄球菌菌落处的菌落小或不生长，即卫星试验阳性注意点：在血平板上点种葡萄球菌时，X、V因子都具备；在M-H平板上接种葡萄球菌时，只具备V因子；流感嗜血杆菌生长需要X和V因子；副流感嗜血杆菌生长只需要V因子；意义：能在M-H平板上呈卫星生长的菌为副流感嗜血杆菌不能在M-H平板上呈卫星生长的菌为流感嗜血杆菌苛养菌是一大类对生长环境、营养要求较苛刻的细菌，在普通环境中不能或难以生长。
体外培养需需添加特殊因子或其他营养成分。
常见苛养菌有嗜血杆菌属、鲍特菌属、肺炎链球菌、淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、卡他莫拉菌等。
2 主要苛养菌介绍嗜血杆菌属（1）分类与人类密切相关的嗜血杆菌有8种，比较常见的是流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌。
（2）细菌特性嗜血杆菌培养时必须供给X、V因子，新鲜血液含X、V因子，但V因子处于抑制状态，必须将其加热80℃～90℃才能释放出来，故巧克力琼脂适合于嗜血杆菌生长。
不同的嗜血杆菌对X、V因子需求有所不同。
将流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌共同培养后，后者合成较多V因子，可促进流感嗜血杆菌生长，靠近金黄色葡萄球菌的流感嗜血杆菌菌落较大，反之，菌落较小，称之为卫星现象。
（3）临床意义嗜血杆菌常寄居于正常人上呼吸道，可引起上呼吸道、泌尿生殖道感染、脑膜炎、中耳炎、心内膜炎、菌血症。
流感嗜血杆菌主要引起原发性化脓感染和继发性感染，其荚膜b型株毒力最强。
杜克雷嗜血杆菌为软下疳病原菌。
（4）微生物检验采集脑脊液、血液、脓液、痰液、咽拭子等标本进行检查，因苛养菌不易存活，标本宜保持湿润，及时送检血平板（1）成分：普通营养琼脂（或哥伦比亚琼脂），脱纤维羊血（2）制法：取所需要量的普通营养琼脂（或哥伦比亚琼脂），加蒸馏水溶解后，高压灭菌。
冷却至50℃，加入一定量（5%）的羊血，倾注平板。
（3）用途：适于各类细菌的生长。
巧克力平板（1）成份：普通营养琼脂（或哥伦比亚琼脂），氯化血红素，万古霉素，辅酶A（2）制法：取所需要量的普通营养琼脂（或哥伦比亚琼脂），加蒸馏水溶解后，高压灭菌。
冷却至60℃左右加入一定量的羊血，置85℃水浴中摇动10-15分钟，冷却到50℃左右后加入相应量的万古霉素和辅酶A，摇匀后倾注平板。
（3）用途：除可以分离奈瑟菌，嗜血杆菌外，由于加入了万古霉素，可抑制绝大多数的革兰阳性菌的生长，在分离培养上具有重要意义，而非楼主所说的可用血平板来替代。
血液中有V，X因子是位于红细胞中的，一般细菌不能利用，轻微的加热使红细胞破坏释放到细胞外方可利用。
一般来说，临床上分离细菌用血平板可满足大多数细菌的营养要求，因此一般首选血平板分离培养临床标本，但是由于需要X因子和V因子的流感嗜血杆菌在血平板上不能生长。
因此要分离到流感嗜血杆菌或其他嗜血杆菌，必须接种巧克力平板。
这也就是说，在巧克力平板上生长的细菌比血平板要多，因此巧克力平板当然可以替代血平板作为分离培养用，其营养价值比血平板要高些。
有谁遇到过在血平板上卫星试验阴性，而在琼脂平板上卫星试验阳性？bjyy老师：这个有可能！嗜血杆菌须在含有新鲜血液（因其含有X因子和V因子）的培养基（血平板，实际上主要是巧克力平板）才能生长，在普通琼脂平板中是不能生长的（除非加入上述两因子）。
在血平板和普通琼脂平板（已加入X因子和V因子）上进行卫星试验出现两种不同的结果，我想：血平板所产生的V因子需要经金黄色葡萄球菌的合成。
而普通琼脂平板中的V因子是现成的，不需要经金黄色葡萄球菌合成的这一个步骤，违背了卫星试验的原理。
所以在琼脂平板上进行的实际上并不是卫星试验。
在普通琼脂平板上（已加入X因子和V因子），为了生长发育，两种细菌展开了竞争培养基营养的过程，在金黄色葡萄球菌菌落附近，由于金黄色葡萄球菌势力强大，竞争力强，所以嗜血杆菌生长受到抑制，菌落细小，越远离金黄色葡萄球菌菌落其菌落（嗜血杆菌）越大。
形成了假的卫星试验现象．请指教．谢谢！普通巧克力平板与血平板的区别是：巧克力平板配制时在加入血液后再次加温至80度15分钟，血红素及辅酶释放出来，RBC 破裂，此平板适合一些需特殊生长因子细菌生长；但在此过程中同样破坏血液中的某些成分，也许会影响某些细菌的生长，所以应该有在血平板生长良好的，而在巧克力平板生长不好的细菌；现在一些专用淋球菌平板，加入万古、多粘菌素等抗生素，抑制了大量杂菌生长，此平板与血平板相差远矣！1892 年，费佛博士在流行性感冒的瘟疫中发现了流感嗜血菌，这种微生物是一种没有运动力的革兰氏阴性杆菌。
