基因工程名词解释

基因工程名词解释1、基因工程：对不同的遗传物质在体外进行剪切、组合和拼接，使遗传物质重新组合，然后通过载体转入微生物、植物和动物细胞内，进行无性繁殖，并使所需的基因在细胞中表达，产生人类所需的产物或新生物类型。

2、重组DNA技术：是指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后再转入另一个生物体（受体）内，按照人们的意愿稳定遗传并表达新产物或新性状的DNA体外操作程序，也称为分子克隆技术。

3、基因克隆：经无性繁殖获得基因许多相同拷贝的过程。

通常是将单个基因导入宿主细胞中复制而成。

（包括把来自不同生物的基因同有自主复制能力的载体DNA在体外人工连接，构建成新的重组的DNA，然后送入受体生物中去表达。

从而产生遗传物质和状态的转移和重新组合。

）4、限制性内切核酸酶：一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的核酸水解酶。

5、修饰酶：体内有些酶可在其他酶的作用下，将酶的结构进行共价修饰，使该酶活性发生改变，这种调节称为共价修饰调节(covalent modification regulation)，这类酶称为修饰酶(prosessing enzyme)。

6、同裂酶：识别相同序列的限制酶称同裂酶，但它们的切割位点可能不同。

（同序同切酶、同序异切酶、“同功多位”等）7、同尾酶：切割不同的DNA片段但产生相同的粘性末端的一类限制性内切酶。

8、位点偏爱：某些限制酶对同一底物中的有些位点表现出偏爱性切割，即对不同位置的同一个识别序列表现出不同切割效率。

9、星星活性：极端非标准反应条件下，限制酶能够切割与识别序列相似的序列，这个改变的特殊性称星星活性。

10、甲基化酶：原核生物甲基化酶是作为限制与修饰系统中的一员，用于保护宿主 DNA 不被相应的限制酶所切割。

11、DNA聚合酶：以DNA为复制模板，从将DNA由5'端点开始复制到3'端的酶。

DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成（在具备模板、引物、dNTP等的情况下）及其相辅的活性。

12、反转录酶：是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA（cDNA）的酶。

13、末端转移酶：是一种无需模板的DNA聚合酶，催化脱氧核苷酸结合到DNA 分子的3'羟基端。

14、连接酶：催化双链DNA切口处的5'—磷酸根或3'—羟基生成磷酸二酯键。

15、T4多核苷酸激酶：是一种磷酸化酶，可将ATP的λ—磷酸基团转移至DNA 或RNA的5'端。

16、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase)：能去除DNA/RNA 5'端的磷酸根的一种酶。

制备载体时，用碱性磷酸酶处理后，可防止载体自身连接，提高重组效率。

17、溶菌酶：一类水解细菌细胞壁中肽聚糖的酶。

18、载体：将外源DNA或基因携带进入宿主细胞进行扩增或表达的工具。

19、质粒：是细胞染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子。

20、质粒的不相容性：两种质粒在同一宿主细胞中不能共存的现象。

21、琥珀突变：在基因编码区中，若某个密码子发生突变后变成终止密码子，也称这样的突变为赭石突变（UAA），或琥珀突变（UAG），或乳白突变（UGA）。

22、α—互补：是指是指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β-半乳糖苷酶（β -galactosidase ，由 1024 个氨基酸组成）阴性的突变体之间实现互补。

α-互补是基于在两个不同的缺陷β-半乳糖苷酶之间可实现功能互补而建立的。

23、蓝白斑筛选（Blue/White Cloning）：当宿主菌受到噬菌体的感染后，两者通过α-互补作用，可以产生有活性的β-半乳糖苷酶，在诱导剂IPTG和人工底物X-gal存在时，产生蓝色噬菌斑。

如果噬菌体载体上插入了外源DNA片段，破坏了lac基因的结构，不能与宿主菌中的β-半乳糖苷酶互补，在IPTG 和X-gal存在时，则产生白色菌落。

由于这种颜色标志，重组克隆和非重组克隆的区分一目了然，这种筛选方法称为蓝白斑筛选。

24、Spi筛选：野生型λ噬菌体在带有P2原噬菌体的溶原性E.coli中的生长会受到限制的表型，称作Spi+，即对P2噬菌体的干扰敏感(sensitive to P2 interference)。

如果A噬菌体缺少两个参与重组的基因red和gam，同时带有chi位点，并且宿主菌为rec+，则可以在P2溶原性E.coli中生长良好，人噬菌体的这种表型称作Spi－。

因此，通过人噬菌体载体DNA上的red和/或gam基因的缺失或替换，可在P2噬菌体溶原性细菌中鉴别重组和非重组人噬菌体。

25、噬菌粒：噬菌粒实际上是带有丝状噬菌体大间隔区的质粒载体，是集质粒和丝状噬菌体的有利特征于一身的载体，具有CoIE1复制起点及抗生素抗性选择标记，以及丝状体噬菌体的间隔区。

此间隔区含噬菌体DNA合成的起始与终止及噬菌体颗粒形态发生所必需的全部顺式作用元件。

含噬菌粒的细菌被噬菌体感染后，基因Ⅱ蛋白可作习习于噬菌粒的间隔区，启动滚环复制产生单链DNA(ssDNA)并进行包装。

26、人工染色体载体：利用染色体的复制元件来驱动外源DNA片段复制的载体称为人工染色体载体。

27、黏粒载体：黏粒(cosmid)实际是质粒的衍生物，是带有cos序列(也称cos 位点)的质粒。

cos序列是λ噬菌体DNA中将DNA包装到噬菌体颗粒中所需的DNA 序列。

黏粒的组成包括质粒复制起点(Co1E1)、抗性标记(amp r)、cos位点，因而能像质粒一样转化和增殖。

它的大小一般5～7kb左右，用来克隆大片段DNA,克隆的最大DNA片段可达45 kb。

有的黏粒载体含有两个cos位点，在某种程度上可提高使用效率。

28、酵母人工染色体载体：酵母人工染色体载体是利用酿酒酵母染色体的复制元件构建的载体，其工作环境也是在酿酒酵母中。

酿酒酵母细胞形态为扁圆形和卵形，生长代时为90min；含16条染色体，其大小为225～1 900 kb，总计有1.4× 107bp；具真核mRNA的加工活性。

29、表达载体：表达载体（Expression vectors）就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件（如启动子、RBS、终止子等），使目的基因能够表达的载体。

如表达载体pKK223-3是一个具有典型表达结构的大肠杆菌表达载体。

其基本骨架为来自pBR322和pUC的质粒复制起点和氨苄青霉素抗性基因。

（表达载体四部分：目的基因、启动子、终止子、标记基因）30、融合蛋白：真核蛋白的基因与外源基因连接，同时表达翻译出的原基因蛋白与外源蛋白结合在一起所组成的蛋白质。

31、穿梭载体：简单来说，穿梭载体能够在两类不同宿主中复制、增值和选择的载体，如有些载体既能够在原核细胞中复制又能在真核细胞中复制，或能在大肠杆菌中复制又能在革兰氏阳性细菌中复制。

31、整合载体：在生物学研究和基因工程应用中，会涉及将某个基因或某些基因插入到染色体中去的工作，承担这部分工作的载体，可称为整合载体(integration vector)。

根据整合方式的不同可分为定点整合和随机整合，按其作用来分可归为目标基因的插入或敲除以及随机突变体库的构建。

32、电转化法：亦称电穿孔法或电激法，是一种将极性分子穿过细胞膜导入细胞的一种物理方法，在这个过程中一个较大的电脉冲短暂破坏细胞膜的脂质双分子层从而允许DNA等分子进入细胞。

33、耐热DNA聚合酶：耐热DNA聚合酶是一种可抗高温的蛋白质，5'-3'聚合酶活性，有Taq DNA 聚合酶、.Tth DNA 聚合酶、Bca Best DNA 聚合酶、Sac DNA 聚合酶几种类型。

34、多重PCR：在一个反应体系中使用一对以上引物的PCR就称为多重PCR，其结果产生多个PCR产物。

35、随即扩增多态性DNA（RAPD）：是通过分析DNA的PCR产物的多态性来推测生物体内基因排布与外在性状表现的规律的技术。

RAPD技术是以8-lObp的随机寡核苷酸片段作为引物，对基因组进行PCR扩增，扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳或PAGE电泳检测，研究DNA的多态性。

36、扩增片段长度多态性（AFLP）：扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)分析是针对基因组D対A的限制性酶切片段进行选择性pcR扩增而建立DNA指纹的技术。

首先将基因组DNA以两种限制性内切酶完全切割，之后再将合成的并与这两个限制酶产生的末端相对应的接头(adapter)与酶切DNA片段的两端连接。

然后以含有接头序列和酶切位点序列的引物对连接产物作PCR扩增。

最后利用聚丙烯胺凝胶电泳对PCR产物进行分离，从而DNA 指纹。

37、反义RNA：反义RNA是指与mRNA互补的RNA分子，也包括与其它RNA互补的RNA分子。

由于核糖体不能翻译双链的RNA，所以反义RNA与mRNA特异性的互补结合, 即抑制了该mRNA的翻译。

38、阈值和Ct值：在PCR扩增的前期循环中，荧光信号的强度呈现平缓的波动状态，经过一定数量的扩增循环后荧光信号的强度由本底进入指数增长阶段。

将荧光信号由本底进入指数增长阶段的拐点所对应的荧光强度设定为阈值，荧光信号达到阈值所对应的循环次数称为Ct值。

39、基线范围：基线范围是指从第三个循环起到Ct值前三个循环止，其终点要根据每次实验的具体数据调整，一般取第三到第十五个循环之间。

40、引物步移：一种长链DNA测序的策略。

根据已测出的序列结构设计测序引物，按第一轮测序得出的新序列，再设计引物进行第二轮测序，如此重复，直至获得全序列。

41、体外随机诱变：是指随机地在克隆化DNA中引入碱基置换突变，特点是不需要有序列针对性的合理设计，引入突变的位置及其性质是随机的；结果是在目的DNA片段中引入大量的序列多样性，得到的具体突变体可以是单点突变也可能是多点突变。

42、错误掺入诱变：错误掺入诱变指在体外DNA扩增中，使用具有错配倾向的DNA聚合酶以及反应条件，使碱基错误掺入到新合成的基因中。

43、DNA洗牌法：DNA洗牌是一种通过将DNA随机打碎和PCR重新组装（reassembly），使一组突变基因进行体外同源重组的方法。

44、定点突变：使已知克隆基因或DNA片段中的任何一个特定碱基发生取代、插入或缺失突变的过程称为基因的定点突变。

45、基因组DNA文库（cDNA文库）：基因组DNA文库是指将生物体的全部基因组DNA用限制性内切酶或机械力量切割成一定长度范围的DNA片段，再与合适载体在体外重组并转化相应的宿主细胞获得的所有阳性菌落。

46、cDNA文库：cDNA是由生物的某一特定器官或特定发育时期细胞内的mRNA 经体外反转录后形成的。