检测胆红素的方法

血清总胆红素测定标准操作规程1检验原理：（钒酸盐法）pH 值接近3时，在钒酸盐和表面活性剂的作用下，胆红素被氧化成胆绿素。

此时，胆红素特有的黄色减少，在波长450nm 处通过测定钒酸作用前后的吸光度的差可以求得样品中总胆红素的浓度。

胆红素−−−−−→−表面活性剂钒酸盐/胆绿素 2.试剂主要组成成分3.样本要求 新鲜无溶血血清、勿使用肝素抗凝血浆。

22～25℃保存8小时，2～8℃保48小时，-20℃保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法：仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6检验结果的解释6.1样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V ）的氯化钠溶液稀释样本。

通常稀释2倍，当样本浓度较大时提高稀释倍数。

6.2单位换算：mg/dL=umol/L ×0.05857检验方法的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。

7.2若试剂浑浊或以水空白在450nm 处吸光度大于0.500时不能使用。

8.产品性能指标8.1线性范围：在给定的样本/试剂比例和条件下测定时，本世纪线性范围可达0-300umol/L 。

8.2试剂空白吸光度：在450nm 处，光径1cm 时，空白吸光度A ≤0.500，△A 空白/分钟≤0.002.8.3准确度：相对偏差≤10%。

8.4精密度8.4.1批内精密度CV≤3%8.4.2批间精密度：R≤10%8.5分析灵敏度：在给定的样本/试剂比例和条件下测定时，1umol/L的总胆红素对应的△A不低于1.5×3108.6干扰试验无明显干扰：添加干扰物后的测定值与初始测定值的相对偏差处于±10%以内。

8.7方法比较：本试剂盒与商品化试剂盒测定40个样本测定结果相关性如下：y=0.997x＋1.051；r=0.997。

9.临床意义：胆红素是红细胞正常或非正常降解后在内皮系统形成的有机复合物，检测胆红素有利于监测肝脏疾病以及发现溶血性贫血以及评估黄疸的程度。

总胆红素操作程序1.目的规范总胆红素（TBIL）检测试验，确保检测结果准确性和重复性。

2．范围本操作规程适用于生化室工作人员、实习人员、进修人员的操作前培训。

3.术语4．测定原理4．1测定方法：钒酸盐法4．2 测定原理：在特定条件下（PH3.0），血清中胆红素与钒酸反应，生成胆绿素，其在450nm 处吸光度的下降与血清中总胆红素含量成正比。

5．标本5．1标本种类：新鲜无溶血血清。

5．2标本采集见生化标本采集程序。

6．试剂6．1试剂来源：和光试剂。

6．1．1组成包装规格：R1 540ml×4 R2 135ml×46．1．2试剂准备试剂为液体双试剂，无需配制,开瓶即可使用。

6．1．3试剂稳定性原装试剂在2～8℃避光保存，稳定期12个月。

试剂开瓶载机2～8℃稳定30天。

新打开试剂不宜与已用过的试剂混合在一起,否则易造成试剂稳定性下降。

7.仪器参数设定AU2700参数设定：和光试剂仪器参数设置具体参见试剂厂家提供的相关仪器的检测参数。

8．校准8．校准：具体参见临床生化校准程序8.1 校准条件：8.1.1仪器光路系统经过光路保养或更换光源等重要部件后。

8.1.2仪器经过大保养后。

8.1.3挪动仪器的安装地点。

8.1.4更换试剂批号。

8.1.5室内质控失控。

8．2 AU2700和光试剂系统的校准：8.2.1 准备：和光配套胆红素校准物.8.2.2 保存和稳定性：原校准品在2～8℃保存至有效期，1ml蒸馏水复溶，复溶后在2～8℃可保存7天。

8.2.3保存位置：低温冰箱-20℃。

8.2.4操作步骤：蓝色样本架的1号位置放蒸馏水；黄色样本架的9号位置放和光配套胆红素定标液→仪器主画面[USER] →[Calibration] →[选择校准项目]→[START]→[YES]。

9．室内质控及失控纠正：见临床生化室内质控程序9．1质控物来源：柏乐液体质控（批号:45612/45613）。

9．2质控物储存条件及准备：-15～-20℃保存至有效期，从低温冰箱取出后室温平衡30分钟。

胆红素指标的解读使用干化学法检测胆红素，可以提供总胆红素(TBIL)、结合胆红素(Be)、未结合胆红素(Bu)、6胆红素(DELB)、新生儿胆红素(NBIL)、直接胆红素(DBIL)等指标。

以下是对胆红素指标的解读。

TBIL：血液中总的胆红素，包含胆红素的所有组分，TBTL的升高表明黄疸的存在，但单凭TBTL不能了解黄疸的形成原因。

Bu：可认为是肝前性的胆红素，是尚未被肝细胞摄取进行葡萄糖醛酸化的胆红素，导致Bu的升高原因有肝前性(胆红素生成增多，如溶血等)和肝细胞性(肝细胞摄取Bu障碍或胆红素葡萄糖醛酸化过程受阻等)的原因。

Be：可认为是肝细胞性或肝后性胆红素，是被肝细胞摄取并完成葡萄糖醛酸化的胆红素，生理情况下，Be形成后，即通过肝胆系统排泌。

生理状态下，Be不应出现在血液中，只有在Be排泌受阻的情况下，Be才可能出现在血液中。

所以，通常情况下，Be结果为0, Be升高意味着肝细胞功能受损或胆汁排泌受阻。

6胆红素(DELB)：生理状态下，血液中不存在6胆红素，如果Be排泌受阻，导致血液中Be升高，Be浸泡在白蛋白的环境中发生酶促反应，白蛋白置换Be所结合的葡萄糖醛酸，最终生成6胆红素，其半衰期与白蛋白的半衰期相同。

5胆红素的作用在于指示梗阻的治疗效果，当梗阻排除后，Be迅速下降，TBIL也随之下降，而6胆红素浓度则在一定时间内保持不变，所以DELB与TBIL的比值表现为上升。

如果胆红素的各组分出现上述变化，则表明梗阻治疗成功。

由于DELB=TBIL-(Bu+Bc),因此，要检测DELB,必须要先检测TBIL、Bu和Be。

NBIL：其实就是总胆红素，新生儿Bu比正常人高得多，由于无法避免的光照作用的影响，利用传统的重氮试剂法检测出的总胆红素要比实际浓度低得多，而用干化学法检测，用Bu+Bc的结果代表新生儿胆红素，则可以明显纠正上述误差。

DBIL：直接胆红素，生理情况下，DBIL与Be相当；病理情况下，DBIL为Be与6胆红素之和。

血清总胆红素测定原理
血清总胆红素测定是一种常用的临床实验室检查方法，主要用于评估肝脏功能和诊断与胆红素代谢相关的疾病。

其原理基于血清中的胆红素可以与二硫苏糖酸钠反应生成带有特征性颜色的离子化合物。

具体实验步骤如下：首先，将样本血清与二硫苏糖酸钠溶液混合，通过化学反应使胆红素与二硫苏糖酸钠结合。

然后，使用比色法通过测量生成离子化合物的颜色强度来确定血清中的胆红素浓度。

常用的检测方法包括分光光度法、比色滴定法和高效液相色谱法等。

在测定中，胆红素与二硫苏糖酸钠发生反应，形成红色或紫色的离子化合物。

生成的离子化合物的颜色强度与样本中的胆红素浓度呈正相关关系。

通过测量离子化合物的光吸收值，并通过与已知浓度的标准溶液比较，可以计算出样本中总胆红素的浓度。

总之，血清总胆红素测定原理是基于胆红素与二硫苏糖酸钠的化学反应，通过测定生成的带有特征性颜色的离子化合物的光吸收值来确定样本中的总胆红素浓度。

这种方法简便、快速，并且具有较高的准确性和灵敏度，在临床诊断中得到了广泛应用。

基础医学B a s i c M e d i c i n e35正常人体胆红素主要来自血中衰老的红细胞。

红细胞平均寿命为120天，衰老的红细胞所释放的血红蛋白在体内经过一系列的代谢，最后变成胆红素，分为非结合胆红素与结合胆红素，分别从大、小便中排出。

正常时血液中只含有微量的胆红素。

胆红素的研究是临床医学中古老而又重要的课题。

血清胆红素测定是肝、胆功能检查中的一项重要检测项目。

重氮盐法检测胆红素被临床实验室广泛采用，但该法易受许多因素的干扰、试剂无法长期稳定，在疾病诊断中受到一定的影响。

随着全自动生化分析仪的普及和应用，要求不断推出新的胆红素测定方法[1]。

钒酸氧化法容易污染仪器，对别的测试产生影响[2]。

总胆红素的酶法测定早有报道，其方法学较为成熟，操作简便，快速准确，试剂可以长期稳定，特异性好，干扰少，但因为酶的来源、纯度、稳定性及一个波长测定不同胆红素成分等问题，应用具有局限性，在临床实际应用中未能得到推广。

提高酶法胆红素测定特异性的关键是选择BO D 对胆红素特异性氧化的反应条件，尽可能地加快B O D 对直接胆红素和间接胆红素的氧化。

复星长征公司研究出的产品跟重氮试剂的临床相关性较好。

1材料和方法1.1材料1.1.1重氮盐法检测试剂盒（罗氏公司）；钒酸氧化法检测试剂盒（北京利德曼生化技术有限公司）；酶法检测试剂盒（复星长征公司）。

1.1.2仪器A U 400全自动生化分析仪。

1.1.3标准与质控品标准品采用试剂配套校准品定值质控液（R A N D O X ）cl i nqa 定值血清。

1.2方法1.2.1测定方法几种总胆红素测定方法按试剂说明书进行操作。

1.2.2干扰液的制备脂肪乳干扰液：临床用50%的脂肪乳剂，以生理盐水10倍稀释到5%。

血红蛋白干扰液的制备：抽取4m l 新鲜血液置于生理盐水试管中，用生理盐水反复洗涤数次后，加入蒸馏水反复摇匀，使红细胞完全溶解（镜下瑞氏染色检查），离心沉淀后吸取上清液。

胆红素测定方法胆红素是人体内一种重要的生化物质，它是红细胞分解代谢产物，对人体健康有着重要的影响。

因此，准确测定胆红素的水平对于临床诊断和治疗具有重要意义。

在临床实践中，有多种方法可以用来测定胆红素的水平，本文将介绍几种常用的胆红素测定方法。

一、尿胆红素试验。

尿胆红素试验是一种简单、快速的方法，通常用于初步筛查患者是否存在胆红素增高的情况。

该方法适用于常规体检或临床初步诊断，但其准确性相对较低，不适用于精确测定胆红素水平。

二、血清胆红素测定。

血清胆红素测定是目前临床上常用的一种方法，通过采集患者的血清样本，利用化学方法或光度法测定其中胆红素的浓度。

这种方法准确性较高，可以精确测定胆红素水平，是临床诊断中常用的方法之一。

三、高效液相色谱法。

高效液相色谱法是一种高灵敏度、高分辨率的胆红素测定方法，通过将样本中的胆红素与色谱柱分离，再通过检测器测定其浓度。

该方法准确性高，适用于胆红素水平较低的情况。

四、光谱法。

光谱法是一种通过测定物质在特定波长下的吸光度来测定其浓度的方法。

对于胆红素的测定，可以利用其在特定波长下的吸光度特性来进行测定。

这种方法准确性较高，但需要专业的设备和操作技能。

五、尿胆红素比色法。

尿胆红素比色法是一种通过比色法测定尿液中胆红素的浓度的方法。

该方法简单易行，适用于临床初步筛查，但准确性相对较低，不适用于精确测定胆红素水平。

综上所述，胆红素的测定方法有多种，每种方法都有其适用的场合和特点。

在临床实践中，应根据实际情况选择合适的方法进行测定，以确保结果的准确性和可靠性。

同时，对于不同方法的操作要求和结果解读也需要进行充分的了解和培训，以避免误判和错误诊断的发生。

希望本文对胆红素测定方法有所帮助。

血清胆红素的实验报告研究背景血清胆红素是一种重要的临床生化指标，用于评估肝功能和溶血性贫血等疾病的诊断和治疗过程中的效果。

因此，对血清胆红素的准确检测方法进行研究和优化，对临床检验具有重要意义。

实验目的本实验旨在探索一种简便、准确、实用的方法来测定血清胆红素的含量。

实验原理本实验利用了二甲基亚硝胺(DMA)与胆红素在酸性条件下的化学反应，生成红色的胆红素硝基胆红素(DMN)。

DMN与高碱溶液结合形成蓝色的复合物，其最大吸收波长为576nm。

根据DMN与胆红素的反应关系，通过测量吸光度来确定血清样品中胆红素的含量。

实验材料和方法材料：1. 血清胆红素标准品2. 二甲基亚硝胺溶液3. 磷酸盐缓冲溶液4. 纯水5. 高碱溶液方法：1. 准备标准曲线：分别取0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 mL的血清胆红素标准品，加入离心管中。

2. 加入1 mL的DMA溶液和1 mL的磷酸盐缓冲液，快速摇匀后，在40恒温水浴中反应10分钟。

3. 加入10 mL的纯水冷却至室温，用离心机离心5分钟。

4. 取上清液，用高碱溶液稀释10倍，即得到标准曲线的各个浓度标准溶液。

5. 测定各个标准溶液的吸光度，并记录。

测量待测样品1. 取待测样品3 mL，加入1 mL的DMA溶液和1 mL的磷酸盐缓冲液，快速摇匀后，在40恒温水浴中反应10分钟。

2. 加入10 mL的纯水冷却至室温，用离心机离心5分钟。

3. 取上清液，用高碱溶液稀释10倍。

4. 测量吸光度，并根据标准曲线计算出样品中胆红素的含量。

实验结果及分析标准曲线根据所制备的标准曲线，测量各个标准溶液的吸光度，得到以下数据：胆红素标准溶液（mL）吸光度0.1 0.2340.2 0.4210.4 0.8230.6 1.2330.8 1.602待测样品测量结果测量待测样品后，得到其吸光度为0.845。

根据标准曲线的线性方程（y = 1.957x + 0.095，R²=0.998），可以计算出待测样品中胆红素的含量。

胆红素分类、检测办法及直接胆红素与结合
胆红素区别和应用
胆红素包括直接胆红素、间接胆红素、结合胆红素、非结合胆红素、δ胆红素等等。

检测胆红素方法包括湿化学法，干化学法、其他。

比较常用是重氮反应法和干化学法。

直接胆红素：在检测中可以与重氮磺胺酸直接反应的胆红素。

间接胆红素：需要加入加速剂（苯丙酸钠、甲醇、安息香酸钠）等破坏其氢键再与重氮磺胺酸反应的胆红素。

结合胆红素：是指胆红素经肝脏极性转化后与葡萄糖醛酸结合的水溶性胆红素（Bc）。

Bc又分为单葡萄糖醛酸结合胆红素（mBc）和双葡萄糖醛酸结合胆红素（dBc）。

非结合胆红素（Bu）：是以白蛋白为载体的脂溶性游离胆红素。

δ胆红素（DELB）：δ胆红素是一种与白蛋白以酰胺键共价结合不可分解的胆红素，具有良好稳定性，半衰期在17-23天。

直接胆红素可以溶于水的胆红素，但少量游离胆红素也可以参加直接反应，少量游离胆红素的氢键被破坏也会参加重氮反应。

重氮反应中：直接胆红素=结合胆红素（Bc）+大部分δ胆红素（DELB）+少量非结合胆红素（Bu）
结合胆红素（Bc）=mBc+dBc
间接胆红素=非结合胆红素。

胆红素测定方法胆红素是一种重要的生化指标，它对人体健康具有重要的影响。

因此，准确测定胆红素水平对于临床诊断和治疗具有重要意义。

本文将介绍几种常见的胆红素测定方法，帮助读者更好地了解这一领域的知识。

首先，最常见的胆红素测定方法之一是血清胆红素测定。

这种方法通过采集患者的血清标本，利用化学分析或光度法来测定血清中的胆红素水平。

这种方法简单、快捷，广泛应用于临床实践中。

但是，需要注意的是，血清胆红素测定受到很多因素的影响，如血清样本的保存和处理，以及化学试剂的质量等，因此在进行测定时需要严格控制这些因素。

其次，尿胆红素测定也是一种常见的方法。

尿液中的胆红素来自于肝脏排泄的胆红素，因此通过测定尿液中的胆红素水平可以间接反映肝脏的功能状况。

尿胆红素测定方法简单易行，常用于一些肝功能检测中。

但是，需要注意的是，尿液样本的采集和保存也会对测定结果产生影响，因此在进行测定时需要严格按照操作规程进行操作。

此外，还有一种比较新颖的胆红素测定方法是基于光学技术的无创测定。

这种方法通过光学传感器等设备，可以在不需要采集血液或尿液样本的情况下，通过皮肤表面的光学信号来测定胆红素水平。

这种方法无创、方便，可以有效减少患者的痛苦，因此在临床应用中具有广阔的前景。

但是，需要注意的是，这种方法目前还处于研究阶段，其准确性和稳定性还需要进一步验证。

总的来说，胆红素测定方法多种多样，每种方法都有其特点和适用范围。

在临床实践中，需要根据具体情况选择合适的胆红素测定方法，并严格按照操作规程进行操作，以确保测定结果的准确性和可靠性。

同时，随着科学技术的不断发展，相信在未来会有更多更准确、更方便的胆红素测定方法出现，为临床诊断和治疗带来更多的便利和效益。