总结总、直接胆红素的检测方法
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血清总胆红素和直接(结合)胆红素测定目前测定血清胆红素的方法主要有重氮试剂法(包括改良J-G法、二甲亚砜法、二氯苯重氮盐法和2,5二氯苯重氮四氟硼酸盐法等)、胆红素氧化酶法、钒酸盐氧化法、高效液相色谱法、导数分光光度法、经皮胆红素测定法以及直接分光光度法等。
改良咖啡因(J-G)法:一、实验原理血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应,生成紫色的偶氮胆红素;在同样条件下,未结合胆红素须有加速剂破坏胆红素氢键后才能与重氮试剂反应。
咖啡因、苯甲酸钠作为加速剂,醋酸钠缓冲液可维持反应的PH值同时兼有加速作用。
叠氮钠破坏剩余重氮试剂,终止结合胆红素测定管的偶氮反应。
最后加入碱性酒石酸钠,在碱性条件下,紫色偶氮胆红素转变为蓝色偶氮胆红素,使最大吸光度由530nm转移到598nm,此时,非胆红素的黄色色素及其它红色与棕色色素产生的吸光度可忽略不计,使测定的灵敏度和特异性增加。
最后形成的绿色是由蓝色的碱性偶氮胆红素和咖啡因与对氨基苯磺酸之间形成的黄色色素混合而成。
二、实验方法(一)器材试管,刻度吸管,分光光度计,37℃水浴箱。
(二)试剂1.咖啡因-苯甲酸钠试剂无水醋酸钠41g,苯甲酸钠37.5g,乙二胺四乙酸二钠EDTANa2 0.5g,溶于约500mL 的蒸馏水中,再加入咖啡因25g,搅拌至完全溶解(不可加热),然后加蒸馏水稀释至1000mL,混匀,过滤后放置棕色试剂瓶中,室温保存可稳定6个月。
2. 5g/L 亚硝酸钠溶液:亚硝酸钠5.0g,加蒸馏水溶解并稀释至100mL,若发现溶液呈淡黄色时,应丢弃重配。
3. 5g/L 对氨基苯磺酸溶液:对氨基苯磺酸(NH2C6H4SO3H·H20)5.0g,加于约800mL 蒸馏水中,加浓盐酸15mL,待完全溶解后,加蒸馏水至1000mL。
4. 重氮试剂临用前,取5g/L 亚硝酸钠溶液(试剂2)0.5mL 与5g/L 对氨基苯磺酸溶液(试剂3)20mL 混合。
5. 5g/L 叠氮钠溶液:叠氮钠0.5g,用蒸馏水溶解并稀释至100mL。
体检报告总结胆红素胆红素的概述胆红素是一种由红细胞分解而产生的黄色物质,它是血红蛋白代谢的产物。
正常情况下,胆红素会被肝脏捕获并转化为胆汁,通过肠道排出体外。
然而,当红细胞分解过快或者肝脏功能受损时,胆红素的水平可能会升高。
胆红素的测量方法胆红素通常通过血液检查来测量。
常见的胆红素检测方法包括总胆红素、直接胆红素和间接胆红素的测量。
总胆红素是直接胆红素和间接胆红素的总和。
胆红素水平的正常范围正常成年人的总胆红素水平通常在0.2-1.2毫克/分升之间。
直接胆红素的正常范围为0-0.3毫克/分升,间接胆红素的正常范围为0.1-1.2毫克/分升。
胆红素升高的可能原因1.肝脏疾病:肝炎、肝硬化和胆道梗阻等肝脏疾病可以导致胆红素水平升高。
2.贫血:慢性贫血和溶血性贫血等可导致红细胞分解加快,进而增加胆红素的产生。
3.药物:某些药物,如保泰松和抗生素等,可能会引起胆红素水平的升高。
4.遗传疾病:一些遗传性疾病,例如先天性胆红素转运障碍症和Gilbert综合征,也可以导致胆红素水平升高。
胆红素升高的临床表现胆红素水平升高可能导致黄疸的出现。
黄疸是由于胆红素在皮肤和黏膜组织中沉积所致,患者的皮肤和眼睛白眼球呈现黄色。
胆红素升高的处理方法如果发现胆红素水平升高,应及时寻求医生的帮助。
医生会根据患者的具体情况,进行进一步的检查和诊断。
针对不同原因导致的胆红素升高,治疗方法也有所不同。
例如,对于肝脏疾病引起的胆红素升高,可能需要进行药物治疗或手术治疗。
结论胆红素是血红蛋白代谢的产物,通过血液检查可以测量其水平。
胆红素水平升高可能是肝脏疾病、贫血、药物使用或遗传疾病等因素导致的。
胆红素水平的升高可能会出现黄疸的症状。
对于胆红素升高的处理,需要根据具体原因进行个体化的治疗。
重要的是及时咨询医生,并按照医生的建议进行治疗。
*注意:以上信息仅供参考,请在医生的指导下进行治疗。
直接胆红素测定SOP_DBIL临床意义_检验科生化项目SOP一、直接胆红素测定的临床意义直接胆红素(Direct Bilirubin, DBIL)是从红细胞和其他组织中释放的胆红素的成分之一、正常情况下,直接胆红素的浓度较低,只占总胆红素(Total Bilirubin, TBIL)的一小部分。
然而,当胆红素代谢障碍时,直接胆红素的水平会升高,显示出一些特定的临床意义:1.肝功能评估:直接胆红素测定是评估肝功能的重要指标之一、肝脏是胆红素的代谢和排泄主要器官,当肝脏受损或胆道阻塞时,直接胆红素的水平会升高。
2.胆道疾病诊断:直接胆红素水平的升高可能是由于胆道梗阻、胆管炎、胆上皮细胞损伤或其他胆道疾病引起的。
通过测定直接胆红素的水平,可以协助医生确定疾病的类型和程度,并指导治疗方案的选择。
3.血红蛋白病变:一些血红蛋白病变如溶血性贫血、遗传性球形红细胞性贫血等,会导致血红蛋白不正常分解,使得直接胆红素的水平升高。
通过测定直接胆红素的水平可以帮助医生确定贫血的类型和严重程度,并制定相应的治疗方案。
以下是直接胆红素测定的检验科生化项目SOP的详细步骤:1.标本采集:采集患者血清标本,禁食时间要超过8小时,以避免脂质和胆固醇的影响。
2.试剂准备:根据试剂包装上的说明书,将试剂准备好。
一般包括直接胆红素试剂、标准品和质控品。
3.样本处理:将采集到的血清标本放入试剂盒特定的反应池内,加入适量的试剂。
4.反应:将反应池放入试剂盒中的分光光度计中,按照光度计参数设定,启动反应。
5.数据分析:根据反应的结果,使用光度计测量直接胆红素的吸光度,并根据标准曲线将吸光度值转换为直接胆红素的浓度。
6.质控品检测:每天开始工作前,需对质控品进行检测,确认试剂盒的准确性和稳定性。
7.结果判读与报告:根据测量结果和参考范围,判断直接胆红素的浓度是否正常。
将结果报告给医生或病人。
8.仪器维护:定期对光度计进行检查和维护,保证仪器的准确性和稳定性。
胆红素指标的解读使用干化学法检测胆红素,可以提供总胆红素(TBIL)、结合胆红素(Be)、未结合胆红素(Bu)、6胆红素(DELB)、新生儿胆红素(NBIL)、直接胆红素(DBIL)等指标。
以下是对胆红素指标的解读。
TBIL:血液中总的胆红素,包含胆红素的所有组分,TBTL的升高表明黄疸的存在,但单凭TBTL不能了解黄疸的形成原因。
Bu:可认为是肝前性的胆红素,是尚未被肝细胞摄取进行葡萄糖醛酸化的胆红素,导致Bu的升高原因有肝前性(胆红素生成增多,如溶血等)和肝细胞性(肝细胞摄取Bu障碍或胆红素葡萄糖醛酸化过程受阻等)的原因。
Be:可认为是肝细胞性或肝后性胆红素,是被肝细胞摄取并完成葡萄糖醛酸化的胆红素,生理情况下,Be形成后,即通过肝胆系统排泌。
生理状态下,Be不应出现在血液中,只有在Be排泌受阻的情况下,Be才可能出现在血液中。
所以,通常情况下,Be结果为0, Be升高意味着肝细胞功能受损或胆汁排泌受阻。
6胆红素(DELB):生理状态下,血液中不存在6胆红素,如果Be排泌受阻,导致血液中Be升高,Be浸泡在白蛋白的环境中发生酶促反应,白蛋白置换Be所结合的葡萄糖醛酸,最终生成6胆红素,其半衰期与白蛋白的半衰期相同。
5胆红素的作用在于指示梗阻的治疗效果,当梗阻排除后,Be迅速下降,TBIL也随之下降,而6胆红素浓度则在一定时间内保持不变,所以DELB与TBIL的比值表现为上升。
如果胆红素的各组分出现上述变化,则表明梗阻治疗成功。
由于DELB=TBIL-(Bu+Bc),因此,要检测DELB,必须要先检测TBIL、Bu和Be。
NBIL:其实就是总胆红素,新生儿Bu比正常人高得多,由于无法避免的光照作用的影响,利用传统的重氮试剂法检测出的总胆红素要比实际浓度低得多,而用干化学法检测,用Bu+Bc的结果代表新生儿胆红素,则可以明显纠正上述误差。
DBIL:直接胆红素,生理情况下,DBIL与Be相当;病理情况下,DBIL为Be与6胆红素之和。
胆红素的测定方法操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成,希望大家下载以后,能够帮助大家解决实际的问题。
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胆红素分类、检测办法及直接胆红素与结合
胆红素区别和应用
胆红素包括直接胆红素、间接胆红素、结合胆红素、非结合胆红素、3胆红素等等。
检测胆红素方法包括湿化学法,干化学法、其他。
比较常用是重氮反应法和干化学法。
直接胆红素:在检测中可以与重氮磺胺酸直接反应的胆红素。
间接胆红素:需要加入加速剂(苯丙酸钠、甲醇、安息香酸钠)等破坏其氢键再与重氮磺胺酸反应的胆红素。
结合胆红素:是指胆红素经肝脏极性转化后与葡萄糖醛酸结合的水溶性胆红素(Be)oBC又分为单葡萄糖醛酸结合胆红素(mBc)和双葡萄糖醛酸结合胆红素(dBc)o
非结合胆红素(Bu):是以白蛋白为载体的脂溶性游离胆红素。
6胆红素(DE1B):8胆红素是一种与白蛋白以酰胺键共价结合不可分解的胆红素,具有良好稳定性,半衰期在17-23天。
直接胆红素可以溶于水的胆红素,但少量游离胆红素也可以参加直接反应,少量游离胆红素的氢键被破坏也会参加重氮反应。
重氮反应中:直接胆红素=结合胆红素(Bc)+大部分8胆红素
(DE1B)+少量非结合胆红素(Bu)
结合胆红素(Be)=mBc+dBc
间接胆红素=非结合胆红素。
胆红素怎么检查你知道胆红素怎么检查吗?胆红素是判断肝病的指标之一,胆红素对肝脏具有一定的保护作用,一旦胆红素过高,就意味着疾病,那么你知道胆红素怎么检查吗?我们一起来看看。
文章目录胆红素怎么检查1、胆红素怎么检查1.1、湿化学法:反应均在液体试剂中进行,重氮法、氧化酶法、化学氧化(如钒酸盐氧化法)法等。
1.2、重氮法:在强酸(pH1-2)条件下,胆红素和重氮离子偶联,形成有颜色的偶氮化合物,重氮胆红素显色的强度与胆红素浓度呈比例,光电比色测定。
优点:可直接比色,手续简单、易于自动化。
缺点:重氮试剂不稳定,须由亚硝酸钠和氨基苯磺酸临时生成;易受溶血、脂血等因素干扰,胆红素浓度过高时影响准确度。
1.3、氧化酶法:胆红素氧化酶催化样品中的胆红素氧化,生成胆绿素引起450nm处吸光值下降。
1.4、化学氧化法:胆红素的四吡咯结构具有还原性,因此各种低分子的武技氧化剂和在一定条件下具有氧化性的各种镀金属元素都可以氧化胆红素。
1.5、钒酸法:在pH=3的条件下,血清胆红素可经钒酸氧化成胆绿素,从而使胆红素特有的黄色减少,可根据加入钒酸前后450nm处吸光度的下降与血清胆红素呈正比。
2、胆红素正常参考值直接胆红素的正常参考值范围为:0~0.4mg/dl。
总胆红素(直接胆红素与间接胆红素之和)正常值参考范围:约胆红素0.2~1.2mg/dl(一些实验室数值参考范围高达1.9mg/dl)。
3、胆红素的间接胆红素:说明可能是溶血性黄疸造成的,直接胆红素升高也可能会有输血时血型不合,贫血等原因分类3.1、总胆红素:间接胆红素偏高,直接胆红素偏高,说明肝细胞性黄疸,肝细胞受到损害,肝功能减退,肝脏不能完全将间接胆红素转化为直接胆红素,同时肝内胆管受压引起了排泄障碍,直接胆红也不能完全排到胆道,同时有可能伴有急性黄疸型肝炎,慢性活动性肝炎,肝硬化,肝癌等疾病。
3.2、直接胆红素:说明是由阻塞性黄疸造成的。
3.3、间接胆红素:说明可能是溶血性黄疸造成的,直接胆红素升高也可能会有输血时血型不合,贫血等原因。
血清总胆红素和直接(结合)胆红素测定
目前测定血清胆红素的方法主要有重氮试剂法(包括改良J-G法、二甲亚砜法、二氯苯重氮盐法和2,5二氯苯重氮四氟硼酸盐法等)、胆红素氧化酶法、钒酸盐氧化法、高效液相色谱法、导数分光光度法、经皮胆红素测定法以及直接分光光度法等。
改良咖啡因(J-G)法:
一、实验原理
血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应,生成紫色的偶氮胆红素;在同样条件下,未结合胆红素须有加速剂破坏胆红素氢键后才能与重氮试剂反应。
咖啡因、苯甲酸钠作为加速剂,醋酸钠缓冲液可维持反应的PH值同时兼有加速作用。
叠氮钠破坏剩余重氮试剂,终止结合胆红素测定管的偶氮反应。
最后加入碱性酒石酸钠,在碱性条件下,紫色偶氮胆红素转变为蓝色偶氮胆红素,使最大吸光度由530nm转移到598nm,此时,非胆红素的黄色色素及其它红色与棕色色素产生的吸光度可忽略不计,使测定的灵敏度和特异性增加。
最后形成的绿色是由蓝色的碱性偶氮胆红素和咖啡因与对氨基苯磺酸之间形成的黄色色素混合而成。
二、实验方法
(一)器材
试管,刻度吸管,分光光度计,37℃水浴箱。
(二)试剂
1.咖啡因-苯甲酸钠试剂无水醋酸钠41g,苯甲酸钠37.5g,乙二胺四乙酸二钠EDTANa2 0.5g,溶于约500mL 的蒸馏水中,再加入咖啡因25g,搅拌至完全溶解(不可加热),然后加蒸馏水稀释至1000mL,混匀,过滤后放置棕色试剂瓶中,室温保存可稳定6个月。
2. 5g/L 亚硝酸钠溶液:亚硝酸钠5.0g,加蒸馏水溶解并稀释至100mL,若发现溶液呈淡黄色时,应丢弃重配。
3. 5g/L 对氨基苯磺酸溶液:对氨基苯磺酸(NH2C6H4SO3H·H20)5.0g,加于约800mL 蒸馏水中,加浓盐酸15mL,待完全溶解后,加蒸馏水至1000mL。
4. 重氮试剂临用前,取5g/L 亚硝酸钠溶液(试剂2)0.5mL 与5g/L 对氨基苯磺酸溶液(试剂3)20mL 混合。
5. 5g/L 叠氮钠溶液:叠氮钠0.5g,用蒸馏水溶解并稀释至100mL。
6. 碱性酒石酸钠溶液:氢氧化钠75g,酒石酸钠(Na2C4H4O6·2H2O)263g,加蒸馏水溶解并稀释至1000mL,混匀,置塑料瓶中,室温保存可稳定6个月。
7.胆红素标准液可购买,也可按以下方法配制:
(1)稀释血清:收集不溶血、无黄疽、清晰的血清过滤作为混合血清稀释剂。
取过滤血清1.0ml,加生理盐水24ml,混匀。
在分光光度计中,以比色杯光径1cm,波长414nm,用生理盐水调零,读取的吸光度应小于0.100,波长460nm 处读取的吸光度应小于0.040。
(2)171umol/L胆红素标准液:称取符合标准的胆红素(MW:584.68)10mg,加入二甲基亚砜1ml,玻棒搅匀,加入0.05mol/LNa2CO3溶液2ml,使胆红素完全溶解。
移入100ml 容量瓶,用稀释血清洗涤数次并移入容量瓶中,缓慢加入0.1mol/LHCl溶液2ml(边加边缓慢摇动,切勿产生气泡),最后用稀释血清稀释至100ml。
避光,4℃保存,三天内有效,最好当天绘制标准曲线。
(三)步骤
1. 取试管3支,标明总胆红素管、结合胆红素管和空白管,然后按下表操作:
试剂(ml) 总胆红素管结合胆红素管空白管
血清0.2 0.2 0.2
咖啡因-苯甲酸钠试剂 1.6 - 1.6
氨基苯磺酸溶液- - 0.4
重氮试剂0.4 0.4 -
混匀,总胆红素管置室温10min,结合胆红素管置37℃水浴准确放置1min,按下表继续操作:
叠氮钠溶液- 0.05 -
咖啡因-苯甲酸钠试剂- 1.55 -
碱性酒石酸钠溶液 1.2 1.2 1.2
充分混匀后,用空白管调零,于波长600nm,读取总胆红素管和结合胆红素管吸光度,在标准曲线上查出相应的胆红素浓度。
胆红素氧化酶法
一、实验原理
胆红素呈黄色,在450nm附近有最大吸收峰。
胆红素氧化酶(BOD)催化胆红素氧化,随着胆红素被氧化,A450nm下降,下降程度与胆红素被氧化的量相关。
在pH8.0条件下,未结合胆红素及结合胆红素均被氧化,因而检测450nm吸光度的下降值可反映总胆红素含量;加入SDS及胆酸钠等阴离子表面活性剂可促进其氧化。
在pH3.7~4.5缓冲液中,BOD催化单葡萄糖醛酸胆红素(mBc)、双葡萄糖醛酸胆红素(dBc)及大部分δ胆红素氧化,非结合胆红素(Bu)在此pH条件下不被氧化。
用配制于人血清中的二牛磺酸胆红素(ditaurobilirubin,DTB)作标准品,检测此条件下450nm吸光度的下降值可反映结合胆红素的含量。
二、实验方法
1.0.1mol/LTris-HCl缓冲液(pH8.2) 称取三羟甲基氨基甲烷(Tris)1.211g,胆酸钠172.3mg,十二烷基硫酸钠(SDS)432.6mg,溶于去离子水90ml中,在室温(25~30℃)用1mol/L盐酸调节pH至8.2(约用6ml),再加蒸馏水至100ml,置冰箱保存,此液含4mmol/L胆酸钠、15mmol/L SDS。
2.0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH4.5)。
3.BOD溶液如系冻干品,按说明书要求复溶,但复溶后冰箱保存不宜过长(约可保存1周),如系液体(可能含有甘油),置4℃冰箱可保存较长时间,BOD贮存溶液的酶活性一般在数千至1万~2万U/L,BOD工作液酶活性可按反应液中BOD终浓度达0.3~1.0U/ml计算。
4.总胆红素标准液(342μmol/L) 按胆红素测定J-G法中方法配制,或市售合乎要求的标准液。
5.结合胆红素标准液将DTB配于胆红素浓度可忽略不计的人血清中,或用冻干品按说明书要求重建。
配制后分装于聚丙烯管内,-70℃保存,可稳定6个月。
冻干品未重建前置低温中,至少稳定1年。
加入BOD工作液后立即混匀,置37C水浴5min,用分光光度计,在450nm波长,去离子水调零,读取各管吸光度(A)。
用于对照管的比色杯与非对照管的比色杯不得混用。
钒酸盐氧化法(试剂盒)
一、原理
在PH=3左右,有表面活性剂和间接反应胆红素抑制剂的条件下,样品中的直接胆红素被氧化剂钒酸钠氧化为胆绿素。
胆红素的黄色特异性吸光度下降,通过测定钒酸盐氧化前后吸光度的变化,计算样品中直接胆红素的含量。
二、实验方法
试剂:柠檬酸缓冲液100mM
表面活性剂2mmol/L
磷酸缓冲液10mM
偏钒酸钠4mmol/L
适用于半/全自动生化分析仪,两周内用完。
样本/标准/水sample volume μ114
试剂1(R1)Reagent 1 μl280
样本+R1 在37℃保温60秒,记录吸光度值A1
试剂2(R2)Reagent 2 μl70
在加入R2 保温300 秒后,记录吸光度值A2。
主波长main wavelength nm 450
副波长sub wavelength nm 546
反应类型reaction type 两点终点法反应方向reaction direction 降反应(-)。