【重医】临床检验免疫学
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重医临床医学学术型研究生考试科目重医临床医学学术型研究生考试主要分为两个科目:基础医学、临床医学。
这两个科目涵盖了医学领域的基础知识和临床实践技能,对于培养具备扎实医学基础和优秀临床实践能力的医学研究生至关重要。
一、基础医学考试科目1.医学细胞生物学:该科目主要考察研究生对医学细胞生物学的基础知识和研究方法的掌握。
包括细胞结构与功能、细胞信号传导、细胞周期与分化、细胞凋亡等内容。
2.医学分子生物学:考察研究生对医学分子生物学的基础知识和实验技术的掌握。
包括DNA的结构与复制、转录与翻译、基因调控、遗传变异等内容。
3.医学生物化学:重点考察研究生对医学生物化学基本原理的理解和应用能力。
包括碳水化合物代谢、脂质代谢、蛋白质代谢、酶学、能量代谢等内容。
4.医学生理学:考察研究生对人体组织、器官的结构与功能的理解。
包括神经生理学、心血管生理学、消化系统生理学、呼吸生理学等内容。
5.医学寄生虫学与病原生物学:主要考察研究生对医学寄生虫学与病原生物学的基础知识和实验技术的掌握。
包括寄生虫的分类和形态学特征、生活史和传播途径、寄生虫病的预防与治疗等内容。
二、临床医学考试科目1.基本临床技能:该科目考察研究生掌握基本的临床技能,如病患问诊、体格检查、医学记录和病例分析等。
这是医生临床实践的基础,对于研究生的临床实践能力培养至关重要。
2.医学影像学:考察研究生对常见医学影像学技术和解读方法的掌握。
包括X线、CT、MRI等影像学技术的原理和应用、常见疾病的影像学表现等内容。
3.临床诊断学:主要考察研究生对临床诊断学的理解和应用能力。
包括常见疾病的病因、发病机制、临床表现、实验室检查和诊断方法等内容。
4.内科学:该科目考察研究生对内科学的基础知识和临床实践能力的掌握。
包括呼吸内科学、心内科学、消化内科学、内分泌学等内容。
5.外科学:主要考察研究生对一些常见外科疾病的病因、临床表现、诊断和治疗方法的了解。
包括普外科、骨科、神经外科等内容。
重庆医科大学检验医学院实习科室:重医儿童医院临检中心免疫组实习时间:专业:年级:学号:姓名:实习报告2012.1.09~2011.02.05 2007级2007221349 潘俊希临床免疫组实习报告一、实习时间2012.1.09~2011.02.05二、实习科室重庆儿童医院临检中心免疫组三、实习目的(1)掌握免疫组的检测项目,以及检测项目的原理、目的和临床意义和参考范围。
(2)掌握免疫组所使用检测仪器的操作流程以及注意事项。
(3)掌握肥达、冷凝集实验等手工操作流程、结果判断以及加样枪的使用规则。
四、实习内容1. elisa 包括甲肝、乙肝、丙肝、丁肝、戊肝、庚肝、艾滋、梅毒、结核等的检测,分为两步法和一步法,一步法的步骤主要包括,加样——孵育——洗板——加酶标二抗——洗板——加显色液——终止反应——酶标仪比色。
艾滋、梅毒和乙肝的表面抗原均用两步法,两步法加试剂前多一步孵育的步骤;2. 金标法主要包括乙肝表面抗体、梅毒抗体、hiv抗体,乙肝两对半的检测,主要用于急诊标本,和elisa阳性标本的复检;3. 其他主要包括自身抗体谱、t细胞过敏原、抗体、补体定量等,项目较繁杂,由于时间短所以只是对常见项目进行了简单了解和学习五、实习中的不足和缺点刚到免疫组实习时,错误的认为免疫组检验项目的原理较简单,就一个抗原抗体反应,因此没有引起足够的重视,没有对每个检验项目进行认真的记录和学习,后来逐渐发现,每个elisa检验操作的方法很相似,但又有区别,需要区分的东西其实很多,但意识到这一些的时候才发现,自己根本就动不了手,帮不上忙,自己也感到纠结。
后来在老师的耐心指导下,自己沉下心来,找到记忆和区分没和项目的方法,才逐渐的上了手。
免疫组涉及到很多手工操作的环节,也是最容易出错的环节,每一步都要加倍的细心,而我们最容易犯的错误也在这些最简单的环节上。
六、实习感想不管在那一个组实习,如果想要真正学到东西,关键还得靠自己主动,实习的同学多了,那就更应该自己主动找机会多承担一些任务,否则你永远都是一个见习的。
填空1.免疫防御功能异常可导致(感染、免疫缺陷)疾病。
2.抗原抗体反应的特点有(特异性、比例性、可逆性、阶段性)3•抗原抗体反应的温度一般以(15〜40 C)为宜,最适温度为(37 C)4•影响抗原抗体反应的环境因素主要有(电解质、pH、温度)5•某些特殊的抗原抗体反应对温度有一些特殊的要求,如冷凝集素在(4C)左右与红细胞结合最好,(20 C)以上反而解离。
6•抗原抗体的结合分子间的引力包括(静电引力、范德华引力、氢键引力和疏水作用力),其中作用最强的是(疏水作用力)1•间接凝集反应的类型包括(正向间接凝集、反向间接凝集反应、间接凝集抑制反应和协同凝集反应)四种类型。
2•参与凝集反应中的抗原称为(凝集原),抗体称为(凝集素),常用的直接凝集试验有(玻片法、试管法、玻片法)3•在间接凝集反应中正向凝集反应是用(抗原)致敏载体以检测标本中相应的(抗体),而反向间接凝集反应是用(抗体)致敏载体以检测标本中相应(抗原)4•间接抗球蛋白试验可用已知抗原型红细胞检测血清中的(不完全抗体),可用于输血前的(交叉配血)试验。
1.免疫沉淀反应是(可溶性抗原)与(相应抗体)的特异性结合2.棋盘格法(抗原)和(抗体)同时稀释,可一次完成(抗原)和(抗体)的滴定3.单向琼脂扩散是待测抗原从含有定量(抗体)的(凝胶)内自由向周围扩散,抗原抗体特异性结合,在两者比例合适的部位,形成(沉淀环)。
4.Maneini 曲线适用于(大分子抗原)的测定,在一定范围内,沉淀环随时间延长而扩大,抗原浓度与(扩散环直径的平方)呈线性关系,常用(普通)坐标纸作图。
5.Fahey 曲线适用于(小分子抗原)的测定,在一定范围内,沉淀环随时间延长而扩大,沉淀环直径与(抗原浓度的对数)呈线性关系,常用(半对数)坐标纸作图。
6.双向琼脂扩散试验可对抗原或抗体的存在、含量和相对分子量进行分析,沉淀线靠近抗原孔指示(抗体含量较高);靠近抗体孔则指示(抗原含量较高);不出现沉淀线则表明(无对应的抗原和抗体)。
▲1比较TD-Ag 和TI-AgTD-Ag :胸腺依赖性抗原,刺激B 细胞产生抗体时依赖于T 细胞的辅助TI-Ag :胸腺非依赖性抗原,刺激机体产生抗体▲2以IgG 为例,简述Ig 的基本结构和功能Ig 是由两条相同的重链和两条相同的轻链,借链间二硫键组成的四肽结构。
多肽链N 端重链的1/4,轻链的1/2氨基酸序列多变,为可变区,由HVR 和FR 组成;多肽链C 端重链的3/4和轻链的1/2氨基酸序列相对保守,为恒定区1.与抗原特异性结合,在体内发挥抗菌、抗病毒、中和毒素等免疫效应;体外表现为抗原抗体的结合反应2.激活补体,IgG (IgM )的恒定区有补体的结合位点,与抗原结合后通过经典途径激活补体,发挥相应的免疫作用3.与FcR 结合,Ig 经Fc 段与多种细胞表面的FcR 结合,发挥调理促吞噬作用(IgG )、ADCC(IgG )、介导I 型超敏反应作用(IgE )作用4.穿过胎盘和黏膜,建立新生儿抗感染(IgG ),黏膜局部抗感染(sIgA )5.免疫损伤作用:如超敏反应,自身免疫病等 ▲3简述各类Ig 的生物学特性1血清含量最高,半衰期最长,分布最广2唯一能通过胎盘的Ig ,建立新生儿抗感染免疫3具有激活补体、调理促吞噬、ADCC 等功能4亲和力高,是抗感染的主要抗体 5引起II 、III 型超敏反应1五聚体,分子量最大,无铰链区,有CH 42天然血型抗体3个体发育的免疫应答时产生最早,是早期抗感染的主要抗体4很强的结合抗原、调理促吞噬、激活补体的作用5单体IgM 表达于B 细胞表面,构成BCR 1血清型多为单体,分泌型为双体,且带有分泌。
2婴儿可从母亲初乳中获得sIgA ,为婴儿提供胃肠道保护3sIgA 存在于多种分泌液中,在粘膜局部抗感染中起重要作用mIgD 是BCR 的重要组成成分,是B 细胞成熟的标志1血清含量最低,单体,无铰链区2为亲细胞抗体,参与I 型超敏反应 3参与抗寄生虫感染 ▲4补体的生物学活性1.溶菌、溶解病毒和细胞毒作用2.调理作用:补体C3b 、C4b 片段与细菌或其他颗粒结合,促进吞噬细胞的吞噬功能3.免疫黏附: 清除免疫复合物4.炎症介质作用:C3a 、C5a 通过过敏毒素作用和趋化作用引起局部的炎症反应。
医学检验免疫出科小结免疫学检验是临床医学中常用的一种检测手段,通过分析患者血液、尿液、脑脊液等样本中的免疫相关指标,可以帮助医生判断患者是否存在免疫性疾病以及疾病的病情程度。
在这次免疫学检验中,我对患者的血液样本进行了多项免疫相关指标的检测,并进行了分析和判断。
下面是我的小结。
1. 总白细胞计数和分类。
根据免疫学检验的结果,该患者的血液样本中白细胞总数正常,且分类比例也正常。
这说明该患者的免疫系统整体功能较正常,并且没有明显的炎症反应。
2. 免疫球蛋白测定。
通过测定该患者血液中的免疫球蛋白浓度,发现该患者的免疫球蛋白G、免疫球蛋白A和免疫球蛋白M的浓度均在正常范围内。
这表示该患者的机体对各种外界抗原有较好的应答能力,免疫球蛋白的合成功能正常。
3. 淋巴细胞亚群测定。
通过测定患者血液中不同类型淋巴细胞的比例,发现该患者CD4+T细胞正常,而CD8+T细胞比例偏高。
这可能表明该患者体内存在免疫功能的异常,免疫调节失衡,需要进一步观察和分析其相关病史。
4. 免疫组化检测。
由于患者存在可能的自身免疫性疾病病史,我进行了免疫组化检测,检测结果显示该患者存在免疫系统中的抗自身抗体,提示患者可能存在自身免疫性疾病的可能性更大。
需要联合其他病史、检查结果进行综合分析和判断。
5. 其他指标。
除了上述重要指标的检测,我还进行了其他一些免疫相关指标的检测,如补体水平、细胞毒性指标等,在对比正常范围后发现没有明显异常。
综上所述,通过本次免疫学检验,发现该患者可能存在免疫功能异常和自身免疫性疾病的可能性更大。
但是需要进一步综合分析患者的病史和其他检查结果,以确定患者是否需要进一步的治疗和干预措施。
同时,还需要更多的免疫学检验结果的支持和补充,以进一步明确诊断,并制定相应的临床治疗方案。
核左移外周血中杆状核粒细胞增多并出现晚幼粒、中幼粒甚至早幼粒细胞,常伴中毒颗粒、空泡、核变性等毒性变化,最常见于急性化脓性感染,急性中毒、急性溶血。
核右移外周血中5叶核以上的中性粒细胞>3%,常伴有白细胞总数的减少,属造血功能衰退的表现,是因缺乏造血物质、DNA合成减少或骨髓造血功能减退所致,见于营养性巨幼细胞性贫血及恶性贫血。
血细胞比容hemotocrit(HCT,PCV)红细胞在全血中所占体积的比值。
影响因素:RBC数量,大小,用于贫血、真性红细胞增多症和红细胞增多的诊断等。
网织红细胞Ret reticulocyte未完全成熟的RBC,较大,含嗜碱性物质,可被活体染成蓝色网状货颗粒状结构。
红细胞沉降率ESR红细胞在一定条件下沉降速度,简称血沉。
红细胞体积分布宽度RDW反应外周血红细胞体积大小异质性的参数,用红细胞体积的变异系数来表示(CV)染色质小体Howell-Jolly body紫红色圆形小体,成熟或晚幼红细胞胞质中的核残留物。
常见于溶贫、巨贫Cabot环红细胞出现一种紫红色圆形或8字型环状结构,脂蛋白变性而来。
与染色质小体同时出现。
网织红细胞成熟指数(RMI)RMI=(MFR+HFR)/LFR×100,为全自动网织红细胞分析仪提供的新参数,是反映幼稚网织红细胞变化较敏感的指标。
对贫血的诊断、骨髓移植术和白血病疗效观察有非常重要意义。
活化部分凝血活酶时间(APTT)在受检血浆中加入接触因子激活剂(如白陶土)和部分凝血活酶(如脑磷脂),在Ca2+的参与下,观察血浆所凝固的时间,是内源性凝血系统常用的筛选试验。
血浆凝血酶原时间(PT)在受检血浆中加入过量的组织凝血活酶和Ca2+,观测血浆的凝固时间,即为血浆凝血酶原时间。
PT的长短反映了血浆中凝血酶原、纤维蛋白原和因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的水平,是外源性凝血系统常用的筛选试验。
出血时间(BT)在特定条件下,皮肤小血管被刺破后,血液自行流出到停止的时间称出血时间,BT的长短主要反映血小板的数量和质量以及血管壁的完整性。
临床免疫学检验教案一、教学目标1.知识目标:掌握临床免疫学基本概念、检验方法和临床应用;2.能力目标:能够正确选择和操作免疫学检验方法,解读免疫学检验结果;3.情感目标:培养学生对临床免疫学工作的重要性的认识,增强其对医学检验工作的热情。
二、教学内容1.临床免疫学基本概念的介绍;2.常用的免疫学检验方法和原理;3.免疫学检验在临床诊断中的应用。
三、教学过程1.知识讲解(约30分钟)(1)临床免疫学基本概念的介绍:讲解免疫学的基本概念和研究对象,介绍免疫系统的组成和功能,以及免疫学在临床医学中的重要性。
(2)常用的免疫学检验方法和原理:讲解常见的免疫学检验方法,如免疫荧光、酶联免疫吸附试验等,以及其原理和应用范围。
(3)免疫学检验在临床诊断中的应用:介绍免疫学检验在临床诊断工作中的应用场景和价值,例如在感染性疾病、自身免疫性疾病等方面的应用。
2.实验操作(约60分钟)(1)实验前准备:准备免疫学检验所需的试剂和标本,例如抗体、抗原、试剂盒等。
(2)实验操作:根据教师的示范,学生进行实验操作,学习不同免疫学检验方法的具体步骤和操作要点。
(3)结果解读:根据实验结果,教师进行结果解读,讲解如何根据免疫学检验结果进行临床诊断。
3.案例分析(约30分钟)(1)选择典型案例:选择一些典型的临床案例,根据病史和检验结果,教师指导学生进行分析和判断。
(2)讨论案例:学生分组讨论案例,交流各自的分析和判断结果,教师进行点评和总结。
四、教学评价1.实验报告:学生按照实验要求完成实验报告,对实验过程和结果进行描述和分析。
2.案例分析报告:学生根据教师提供的案例进行分析和判断,并撰写案例分析报告。
3.考试:组织一次闭卷考试,测试学生对临床免疫学知识的掌握程度。
五、教学资源1.教材:选择一本与临床免疫学相关的教材作为参考;2.实验设备和试剂:免疫学实验室所需的设备和试剂;3.案例资料:收集一些典型的临床免疫学案例,作为学生分析和讨论的材料。
医学检验免疫个人总结引言医学检验免疫学是研究机体与抗原之间相互作用及其在人群中的变异情况的科学,它对于疾病的诊断、预防和治疗具有重要意义。
我在学习医学检验免疫学的过程中,深刻理解到了免疫学的原理和应用,掌握了多种免疫检验方法,提高了实验操作技术及数据分析能力。
在此将我这段时间的学习心得与大家分享。
免疫学基础知识在学习医学检验免疫学的过程中,首先需要掌握免疫学的基础知识,如抗原抗体系统、免疫应答、免疫记忆等概念。
免疫学作为医学检验的基础,为我们理解检验原理以及检验结果的解读提供了坚实的理论基础。
免疫检验方法医学检验免疫学涵盖了许多不同的检测方法,包括血清学检测、细胞学检测、分子生物学检测等。
在学习过程中,我通过实际操作,掌握了常见的免疫检验方法,如酶联免疫吸附试验(ELISA)、流式细胞术和聚合酶链式反应(PCR)等。
这些方法在医学诊断中具有重要的应用价值,能够帮助我们发现和诊断潜在的疾病。
数据分析与质量控制在医学检验中,数据分析和质量控制至关重要。
合理、准确地分析实验数据能够帮助我们判断检验结果是否可靠,并对结果进行合理的解释。
同时,合理的质量控制措施能够确保实验的可重复性和准确性。
我在学习过程中,学会了运用统计学方法对数据进行分析,同时了解了实验室质量管理的相关规范和要求。
临床应用医学检验免疫学在临床中有着广泛的应用。
通过检验免疫学,我们能够及早发现疾病的早期征兆,帮助医生制定个体化的治疗方案,并通过免疫学检验监测治疗效果。
这些检验方法在临床诊断和随访中起到了重要的作用。
结语通过学习医学检验免疫学,我深入了解了免疫学的基础知识,掌握了常见的免疫检验方法和数据分析技术。
这些知识和技能为我未来的临床工作打下了坚实的基础。
我相信在不断的学习和实践中,我会进一步提高自己的技能和水平,为患者提供更好的医学服务。
基金项目: 吉首大学独立实验课程建设基金资助项目(JDDL2018003);大学生校外实践教育基地开放基金资助项目(2017JSUJD052)作者简介: 郭靖,女,1979-06生,博士,讲师,E mail:alicegj@163.com收稿日期: 2020-08-01临床免疫学检验教学实践与反思郭 靖,王晓红,罗开军 (吉首大学医学院免疫学教研室, 吉首 416000)摘要: 临床免疫学检验是医学检验专业最重要的课程之一,该学科近年来在临床上的地位也越来越高。
随着社会的进步,对人才的要求也越来越严苛。
因此,学生培养过程中遇到的问题应引起高度重视。
教师要有丰富的理论及临床知识;培养的学生不仅要掌握理论知识,还需要与临床紧密联系,重视实验教学及考核,全面提高动手能力。
文章结合笔者实际教学经历对临床免疫学检验的教学提出几点想法。
关键词: 临床免疫学检验; 实验教学; 教学考核中图分类号: R392 文献标志码: A 文章编号: 2095-1450(2020)11-0809-03 DOI:10.13754/j.issn2095-1450.2020.11.08 医学检验专业是建立在科学实验基础上的临床医学专业学科,又称为实验室医学,是实验室科学技术与临床医学相结合的一门专业[1,2]。
临床免疫学检验是医学检验专业重要的专业课之一。
检验专业的特点之一就是技术日新月异,因此,临床免疫学检验的理论教学和实验教学也需要与时俱进,传递新技术的理论与专业实践。
我国医学检验本科学制从5年减为4年,以突出该专业的应用型医学检验专业人才的培养目标[3,4]。
我校自2015年开始招收临床检验技术专业学生,2017年春季开设医学免疫学,秋季开设临床免疫学检验技术。
这两门课程均由免疫学教研室教师承担。
由于免疫学检验专业方向师资力量薄弱,在理论教学和实验教学过程中存在诸多问题。
针对存在的问题,教研室教学团队积极学习先进院校的教学经验,努力优化课程内容,加强检验实践技能考核。
临床检验免疫学一.绪论免疫学教学内容1.基础免疫学(Basic immunology)相关内容:抗原、抗体、补体、细胞因子、HLA、免疫系统、免疫应答。
以免疫应答为中心。
2.临床免疫学(Clinical immunology)1)抗感染免疫(Infection immunology)2)超敏反应(Hypersensitivity)3)自身免疫(Autoimmunity)4)肿瘤免疫(Tumor immunology)5)移植免疫(Transplantation immunology)3.免疫学实验技术(immunological techniques) 即:免疫学检验,根据免疫学基本理论建立起来的试验方法二.抗原抗体反应抗原抗体反应是抗原和相应抗体之间所发生的特异性结合反应,这种结合具有高度特异性,它既可以发生在体内,也可以发生在体外。
发生在体内的抗原抗体反应,是机体体液免疫效应的表现方式,具有溶菌、杀菌、中和毒素及调理吞噬的作用。
发生在体外的抗原抗体反应,根据抗原的物理性状(可溶性Ag或颗粒性Ag)及参加反应的物质不同,可分为:沉淀反应、凝集反应、中和试验及补体参与的反应等由于抗体都来自于血清,因此,我们将体外的抗原抗体反应又称为血清学反应。
本章讲的抗原抗体反应就是指发生在体外的抗原抗体反应抗原抗体反应原理1.Ag、Ab能特异性结合(内因):Ag、Ab能特异性结合,是由于Ag表位(抗原决定簇)和Ab V区之间的特异性结合,二者在空间结构上是严格互补的。
2.Ag、Ab结合的动力(外因):静电引力(又称库仑引力):它是指抗原和抗体分子上带有相反电荷-NH3+或-COO¯之间的相互吸引力。
例如Ab分子上赖氨酸离解层中含有-NH3+,Ag分子上天门冬氨酸离后含有-COO¯,这两者之间就可相互吸引而产生静电引力。
该力的大小与两个电荷间距离的平方成反比。
距离越近,静电引力就越强。
范得华力(又称电子云力):该力是原子与原子、分子与分子间所具有的一种吸引力。
当Ag、Ab两分子外层轨道上的电子相互作用时,电子云由于偶极摆动而产生吸引力,从而促使Ag、Ab的结合。
该力大小小于静电引力。
氢键:该力是由于分子中的H原子和电负性较大的O、N、S原子间的相互吸引而形成的。
Ag(-NH2、-COOH 、-OH 、-SH)、Ab (-NH2、-COOH 、-OH 、-SH)可形成氢键桥梁,促使Ag、Ab的结合。
氢键对于维持生物大分子(AgAb)的形态和结构有重要作用。
它的大小大于范得华力。
疏水作用力:Ab是蛋白质,Ag少数是多糖,多数也是蛋白质,那么它们就是胶体物质,在水溶液中就带有-NH3+或-COO¯极性基团,从而带上正电或负电,成为亲水胶体。
当Ag表位和Ab Fab段相互靠近时,亲水层消失,排斥掉两者间的H2O分子,促进Ag、Ab的结合。
疏水作用力在整个Ag、Ab反应中提供的作用最大。
在高浓度电解质(如NaCl等)存在的条件下,NaCl可先与Ab分子结合(在Ab未与Ag相遇时),排斥H2O分子,从而使Ab蛋白质优先沉降,称为盐析现象由于抗原抗体反应不含有共价键,因此抗原抗体反应不为化学反应,不产生新的物质。
Ag+Ab →AgAb抗原抗体反应特点1.特异性:Ag、Ab的结合实质上是抗原表位和抗体可变区之间的结合。
Ab 可变区可形成一个平穴槽,Ag则楔状嵌入,由于两者在化学结构和空间结构上的互补,使得它们的结合具有特异性。
这种结合如同钥匙与锁的关系,一把钥匙只能开相应的一把锁.交叉反应(cross-reaction)----抗体对具有相同或相似抗原表位的不同抗原的反应称为交叉反应。
交叉反应并没有违背Ag、Ab特异性结合的原则,其产生的先决条件是不同抗原之间存在共同Ag表位。
交叉反应的意义:1. 帮助免疫学诊断:eg 外斐氏反应等:用变形杆菌OX19、OX2、OXk作抗原查血清抗体,诊断斑疹伤寒(立克次氏体感染所致)2.可造成免疫病理损害:eg 链球菌感染后易导致肾小球肾炎,其原因为链球菌与人体肾小球基底膜有共同Ag表位所致。
2.比例性:Ag、Ab的结合并不是在任何比例下都进行得充分、完全的。
要形成我们肉眼可见的反应(如沉淀、凝集现象等),就涉及到最适比例问题。
以沉淀反应为例:在一排试管中加入等量的Ab,然后依次向各管加入递增量的可溶性Ag,根据形成的沉淀物及抗原抗体比例可见:(图)①:Ab过剩区,又称前带,此时,上清液中Ab过剩,大多出现的是可溶性抗原抗体复合物。
②:Ag过剩区,又称后带,此时,上清液中Ag过剩,大多出现的也是可溶性抗原抗体复合物。
③:是Ag、Ab合适比例范围,又称等价带。
在这一带中,Ag、Ab反应充分,形成的沉淀物快而多;其中有一管Ag、Ab反应速度最快、形成的沉淀物最多,上清液中几乎没有游离的Ag或Ab存在。
这时候,抗原抗体之间的比例称为最适比(顶点处)。
利用沉淀反应对不同来源的抗血清比较后,发现抗体根据等价带范围不同可分为两种类型:①R型抗体:它以家兔免疫血清为代表,具有较宽的抗原抗体合适比例范围,只有在Ag过剩时,才出现可溶性抗原抗体复合物。
大多数小动物的免疫血清属于该类型。
②H型抗体:它以马免疫血清为代表,抗原抗体合适比例范围较窄,在Ag、Ab过剩时,都可出现可溶性抗原抗体复合物。
人和多数大动物的免疫血清属于该类型。
3.可逆性:Ag、Ab结合形成抗原抗体复合物,这一过程是一个动态平衡,在一定的条件下,反应是可逆的:Ag+Ab →AgAb,其主要原因为Ag、Ab结合是非共价键结合,不为化学反应。
抗原抗体反应的影响因素自身因素:1.Ag:与Ag的理化性质、抗原表位的数目及种类有关;2. Ab:与Ab的来源有关:是R型抗体或H型抗体;与Ab的特异性、亲合性有关;与Ab的浓度有关。
外界环境条件:1.电解质:一般实验室所用电解质都是生理盐水(0.9% NaCl),浓度不能过高。
浓度过高,会使Ab蛋白质优先沉淀而出现盐析现象。
2.PH:一般为PH 6-8,当PH<3时,可出现颗粒性的非特异性凝集,称酸凝集;当PH过高,可造成碱变性。
3.温度:抗原抗体反应的常用温度为37°C。
抗原抗体反应的类型分5大类型:沉淀反应;凝集反应;补体参与的溶血反应、补体结合试验;中和试验;免疫标记技术。
思考题:1.抗原抗体反应的原理2.抗原抗体反应的特点3.影响抗原抗体反应的主要因素4.抗原抗体反应分哪些种类?5.什么是交叉反应,有无特异性,为什么?在临床工作中有何意义?三.沉淀反应(precipitation reaction)概念:可溶性抗原与相应抗体结合,在电解质存在,两者比例恰当时,可出现肉眼可见的沉淀现象。
Ag 沉淀原Ab 沉淀素(precipitin)实验中为使抗原抗体比例(数量)恰当,应稀释Ag颗粒性抗原:光镜下可见,肉眼观呈浑浊悬液,如细菌、RBC等。
---凝集反应可溶性抗原:光镜无形态,肉眼观呈澄清透明,如血清蛋白溶液、多糖抗原等。
---沉淀反应分类:液相沉淀:絮状沉淀试验、环状沉淀试验、免疫比浊测定法凝胶扩散:双向琼脂扩散试验、单向琼脂扩散试验等凝胶免疫电泳:免疫电泳、对流免疫电泳、火箭免疫电泳等一.液相沉淀反应(一)絮状沉淀试验(flocculation):抗原抗体结合,在电解质存在的情况下出现絮状/块状沉淀。
既可在试管内进行,也可在玻片上进行。
用于:玻片法常用于定性测定试管法:半定量测定在沉淀反应前,应测试抗原、抗体最佳稀释度,一般采用方阵滴定法。
(二)环状沉淀反应方法:在环沉管(0.2³3cm)中进行。
先加抗体,后加抗原。
静置30分钟后观察在Ag、Ab交界处是否有白色沉淀环,若有,为阳性)。
用途:多用于测抗原(法医学上血迹鉴定等)(三)免疫浊度法(immunoturbidimetry)原理:免疫比浊实验是在一定量的Ab中加入递增量的Ag ,反应一段时间后,形成可溶性AgAb复合物,此复合物在PEG作用下,自液相析出,形成微粒,使检测浊度发生改变,用浊度计检测相应浊度,浊度高低与复合物含量成正比。
绘制标准曲线,根据浊度推算样品中Ag含量。
1. 免疫透射浊度测定法原理:缓冲液中,先加入已知过量Ab,然后加入待测Ag,AgAb复合物的量随Ag量的增加而增加,反应液的浊度亦随之增加,与一系列标准品对照,即可算出未知Ag含量。
优点:该法操作方便、检测快速。
临床上多用于检测IgG、IgA、IgM、C3、C反应蛋白(CRP)等。
缺点:反应时间长,加促聚剂PEG。
所需Ag /Ab量大。
2. 免疫胶乳浊度测定法原理:将已知Ab吸附在大小适中、均匀一致的胶乳颗粒上,当遇到相应Ag时,使胶乳颗粒发生凝集,减少透光度。
透光度减少程度与胶乳凝聚成正比,当然也与Ag量成正比。
本法不易选择适用的乳胶,同时Ab与胶乳结合也困难。
二.凝胶扩散(agar immunodiffusion)在凝胶中进行的沉淀反应凝胶扩散试验:可溶性抗原与相应抗体在电解质存在下,在琼脂基质中扩散,当两者相遇,比例恰当时结合,可出现肉眼可见的沉淀线。
(一)双向琼脂扩散试验(简称双扩double immunodiffusion)方法:制琼脂板(3ml 1.5%NS琼脂)打孔(双孔型/三角孔型/梅花孔型)加样(平孔沿加满)扩散(37C、24 h观察结果)优点:简单、易行,用途广用途:1.已知Ag或Ab测未知Ab或Ag:双孔型2.抗原性质分析:三角孔型3.测Ag有效稀释度:梅花孔型缺点:敏感性低、出结果慢、只定性,不能定量(二)单向琼脂扩散试验(简称单扩single immunodiffusion)方法:已知Ab+琼脂制板、打孔------在琼脂板小孔中加梯度Ag------Ag向四周扩散形成沉淀环------Ag浓度与沉淀环直径呈线性关系,绘制标准曲线------从标准曲线上查出并计算出待测标本含量用途:定量测定,如测IgG、IgA、IgM、C3等含量三. 凝胶免疫电泳(agar gel immunoelectrophoresis)在电场作用下的凝胶扩散电泳技术:带电胶体颗粒在电场中向相反电极泳动,利用电泳现象研究某些化学组分的分离技术。
免疫电泳技术的优点:1.加快反应速度2.规定了抗原、抗体扩散方向,提高反应敏感性3.可将某些带电性不同的组分分开,再进行抗原抗体反应影响电泳的因素:1.与溶液的pH有关:常用pH8~9,蛋白质带负电2.与溶液离子强度有关:愈高,泳动慢,一般0.02~0.2M3.与电场强度有关:愈高,愈快,一般4~6v/cm(琼脂长),约40v左右4.电渗作用的影响电渗作用:电场中液体对于一固体的固定相对移动的现象。
电渗方向与电泳方向相反。